蛹虫草固体一级菌种培养基及液体菌种培养基的制作

蛹虫草固体一级菌种培养基及液体菌种培养基的制作

一．实验目的

学习并掌握蛹虫草固体一级菌种培养基、液体菌种培养基的制作方法

二．实验原理

蛹虫草（Cordyceps militaris），又名北冬虫夏虫，属于子囊菌门中的大型真菌，自然界中生长于昆虫的蛹体上，为虫生真菌。20世纪30年代，有学者用昆虫蛹接种获得了具有成熟子囊壳的蛹虫草，之后人们用米饭培养基培养除了蛹虫草，用家蚕和柞蚕接种蛹虫草菌种培养出了批量的蛹虫草子实体。

蛹虫草作为一种食药用真菌，其生长所需要的营养物质包括碳源、氮源、维生素、矿物质元素等。其各种培养基质的配置原则都要包含以上几种营养物质。试验表明：适宜蛹虫草的碳源有蔗糖、葡萄糖、麦芽糖等；氮源有牛肉膏、蛋白胨、酵母浸出物、各种蚕蛹粉以及硝酸盐、铵盐等无机氮；维生素有维生素B1；矿物质盐有磷酸二氢钾、硫酸镁、磷酸氢二钠等。

三．仪器设备与实验材料

1.主要仪器设备：电子台秤，高压蒸汽灭菌锅、电热炉等。

2.实验材料与试剂：玻璃棒，、脱脂棉、纱布、烧杯，漏斗，漏斗架，去皮刀，牛皮纸，量筒，马铃薯，葡萄糖，琼脂，水，蛋白胨，维生素B1，磷酸二氢钾等。

四．实验方法与步骤

1.固体一级培养基的制作

（1）配方一：改良PDA培养基：1000ml培养基包括200g马铃薯、20g葡萄糖、15-20g琼脂，2g蛋白胨、1g磷酸二氢钾，0.5g硫酸镁

操作流程：

马铃薯去皮→切块（长宽高近1cm）→煮沸→过滤→加琼脂融化→加葡萄糖→加蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜面

（2）配方二：大米培养基

大米50g，磷酸二氢钾0.05g，葡萄糖10g，维生素B1 0.5g，水50ml

操作方法：

大米用清水浸泡5至6小时，沥水。

将0.05g磷酸二氢钾，10g葡萄糖，维生素B1 溶于50ml水中。

●将配置好的水溶液和大米共同装入罐头瓶中，瓶口用聚丙烯薄膜扎封。

❍高压灭菌1h

2.液体菌种培养基制作

培养基配方：1000ml液体培养基磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，葡萄糖30g，蛋白胨3g，维生素B1 50mg，马铃薯20g

操作流程：

马铃薯去皮→切块（长宽高近1cm）→煮沸→过滤→加葡萄糖→加蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、生素B1 50mg→分装→加棉塞→包扎→灭菌

注：250ml摇瓶中中加入液体培养基120ml

五．实验注意事项。

1.灭菌锅操作时务必先将高压锅内的冷空气排干净。

2.注意避免培养基黏附在试管塞上，造成污染。

六．思考题

1.如果高压锅内冷空气排放不彻底，会对灭菌效果有什么影响，为什么？

2.为什么摆斜面时试管上面盖纱布可以避免试管里面产生冷凝水？