细菌感染实验室诊断共73页文档
细菌感染的实验室检查
通过检测患者血清中的抗体以确定患者是 否感染某种细菌。
通过病理学方法对感染部位的组织进行观 察和诊断。
实验室检查的流程
样本处理
将采集的样本进行处理,如离 心、过滤等,以提取样本中的 细菌。
药敏试验
对分离鉴定的细菌进行药敏试 验,以确定患者对哪种抗生素 敏感。
采集样本
根据患者的症状和医生的诊断 ,采集患者的血液、尿液、粪 便、分泌物等样本。
推进实验室检查的标准化和规范化
制定行业标准
组织制定实验室检查相关的国际和国内标准,规范实验室检查的 操作流程和质量标准。
培训和教育
加强实验室检查人员的培训和教育,提高他们的专业素养和技术水 平。
质量控制
建立实验室检查的质量控制体系,定期对实验室进行检查评估,确 保实验室检查数据的准确性和可靠性。
THANKS
04
分子生物学检查
分子生物学检查方法
聚合酶链反应(PCR)
是一种常用的分子生物学检查方法, 通过复制目标DNA片段来增加其数量 ,从而进行快速、灵敏的检测。
基因测序
生物芯片技术
利用芯片上的微小点阵列进行多重检 测,可同时检测多种病原菌。
对细菌的基因组进行测序,以识别和 鉴定细菌的种类和亚种。
分子生物学检查结果解读
培养与鉴定
将提取的细菌进行培养、分离 和鉴定,以确定感染的细菌种 类和数量。
结果报告
将实验室检查结果报告给医生 ,以便医生根据结果制定合适 的治疗方案。
02
细菌培养与鉴定
细菌培养方法
01
02
03
常规培养
将样本接种在培养基上, 通过培养观察细菌的生长 情况、形态、染色等特征 ,以确定细菌种类。
细菌感染的检查方法与防治原则演示文稿
当前第1页\共有41页\编于星期四\10点
优选细菌感染的检查方法与防 治原则
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检查方法
微生物学(细菌的形态学检查、分离培养和鉴定) 免疫学(查Ag或Ab)
分子生物学(查核酸)
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第一节 细菌感染的实验室诊断
4、动物试验
用于:①分离鉴定病原菌;
②测定细菌的毒力及产毒性
选用高度易感、健康等条件的动物。
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如:毒素-抗毒素中和试验---小白鼠; 钩端螺旋体---幼龄豚鼠、金地鼠。
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5、药物敏感试验
指导临床选择用药,及时治疗和控制感 染有重要意义。
5’
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检测PCR产物
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三、细菌感染的血清学诊断(serological diagnosis)
查Ab:检测病人血液中由于细菌感染而产生的特异性
抗体,辅助临床诊断。
广泛用于多种病原体的微生物诊断和流行病学 调查。
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核酸杂交、PCR、16S rRNA基因测序、基因芯片等 技术。
更特异、敏感、快速
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PCR
5’
5’ 3’
5’
3’
3’
5’
3’ 5’ 3’
5’
3’ 5’
3’
5’
3’ 3’
5’
3’
5’ 3’
细菌感染的实验室诊断(一)
细菌感染的实验室诊断(一)实验室诊断主要包括以检测致病菌及其抗原、产物或核酸为目的的细菌学诊断,以及检测患者血清中特异性抗体为目的的血清学诊断。
一、细菌学诊断(一)标本采集细菌感染性疾病的实验室检查结果主要取决于临床标本的质量、采集时间及方法、实验人员的技术熟练程度及经验。
临床医生应该知道何时和怎样采取标本,需作哪些实验室检查,以及如何解释结果。
为提高致病菌检出率,避免诊断错误或漏检,标本采集与送检过程应遵循下列原则:1.严格执行无菌操作,尽量避免患者正常菌群或外界环境中杂菌污染标本。
采取局部病变标本处,不可用消毒剂,必要时宜以无菌生理盐水冲洗,拭干后再取材。
从呼吸道、消化道、泌尿生殖道、伤口或体表分离可疑致病菌时,应与其特定部位的正常菌群及临床表现一并加以考虑,因为目前内源性感染呈不断上升趋势。
2.根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位,采集不同的标本(表7-1)。
例如流行性脑膜炎患者取脑脊液、血液或出血瘀斑;伤寒患者在病程第1~2周内取血液,第2~3周时可取粪便。
尽可能采集病变明显部位的材料。
3.应在疾病早期和使用抗菌药物之前采集标本,否则可能需停药数天后采集,或者在分离培养时加入药物拮抗剂。
4.标本必须新鲜,采集后尽快送检,尤其是检测抵抗力弱的细菌。
若不能立即送检,应将标本置于特殊的转运培养基中,低温保存,以减缓致病菌的死亡,阻止杂菌的过度生长。
送检过程中,除不耐寒冷的脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等要保温外,多数菌可冷藏送运。
(二)致病菌的检验程序主要有直接涂片染色镜检、分离培养、生化试验、血清学试验等,有的尚需作动物试验等。
细菌学快速诊断新技术主要有核酸杂交(nucleic acid hybridization)和聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)等。
敏感性、特异性和检测效率是影响临床诊断程序选择的重要因素。
1.直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检法可在显微镜下直接观察致病菌的形态、大小、排列方式和染色特点。
Mic06微生物感染的实验室诊断
详细描述
分子生物学诊断是一种高灵敏度、高特异性的诊断方法,利用分子生物学技术,如PCR、 基因测序等,检测病原体特异性基因片段,进行快速、准确的诊断。该方法可以检测出
极低浓度的病原体,并且可以在早期感染时进行诊断,为临床治疗提供及时的指导。
MIC06微生物需要在特定的培养 基上培养,如需氧或厌氧培养, 并需要适宜的温度和酸碱度。
MIC06微生物具有特定的抗原结 构,可以用于血清学诊断和分型。
流行病学特性
传播方式
MIC06微生物主要通过直接接触 传播,如接触患者或污染物,也 可通过空气飞沫、水或食物传播。
流行地区与季节
MIC06微生物感染的流行地区和 季节分布与特定微生物的特性有 关,可能存在地区性和季节性差 异。
MIC06微生物感染的重要性
MIC06微生物感染可导致严重的临床 后果,包括死亡和长期并发症。
早期诊断和治疗有助于减少传播、减 轻疾病负担并提高治愈率。
02 MIC06微生物的基本特性
生物学特性
01
形态与染色
培养特性
02
03
抗原结构
MIC06微生物通常呈球形或杆状, 具有特定的染色特性,如革兰氏 染色阳性或阴性。
环境卫生
加强环境卫生管理,保持室内 通风、清洁,定期消毒公共场 所和物品。
食品卫生
严格执行食品安全标准,确保 食品的卫生和质量。
控制策略
监测与预警
建立传染病监测系统,及时发现和报告病例, 采取有效措施控制疫情。
公共卫生干预
采取必要的公共卫生干预措施,如限制人群 聚集、关闭公共场所等。
隔离与治疗
微生物感染的实验室诊断
墨汁负染色
42
FITC染色 Legionella
2020/8/28 43
临床标本 Clinical specimen
分离培养接种
纯培养
挑取单菌落
2020/8/28 鉴定
44
分离培养
生长条件 菌落大小 菌落形状 菌落颜色 表面特征 透明 溶血
Ⅳ级
个体和群体的危险均高;严重疾病,可水平传播,无有效预防措施
注:与我国卫生部制定的《人间传染的病原微生物名录》分类等级相反。
微生物危害度等级
Ⅰ级 Ⅱ级 Ⅲ级 Ⅳ级
实验室的“生物安全水平”(biosafety levels, BSL)
BSL-1 BSL-2 BSL-3 BSL-4
注:2级以上实验室内必须安装有生物安全柜 SOP(standard operating procedure)文件
微生物感染的实验室诊断
Laboratory diagnosis of microorganism infection
准确的诊断是对疾病进行正确、有效治疗的前提
下去了上来了,下去了又上 来了,又下去了上不来了 查体 诊断:腹股沟疝
实验室化验---为手术做准备
准确的诊断是对疾病进行正确、有效治疗的前提
根据我国国家食品药品监督管理局(SFDA)的《医疗器械分类目录》标准, I. IVD设备属于临床检验分析仪器类,遵从医疗器械标准体系 II. 试剂需遵守两套标准: 医疗器械标准 专门针对试剂的标准。
目前我国的IVD标准体系: 建立了238个全国专业标准化技术委员会; 22个医疗器械专业标准化(分)技术委员会; 9个国家医疗器械检测中心。
✓ 500万~1000万感染者
Reuse of medical experiments, 56 cases, Hailin
微生物学 微生物感染的实验室诊断
标本直接检查
形态、染色检查
细菌成分检测
抗原 核酸 细菌毒 检测 检测 素检测
分离培养 与鉴定
增菌、分离与 纯培养
革兰染色 抗酸染色 荧光染色 光学显微镜 电子显微镜
ELISA 核酸杂交 IF 基因测序
凝集实验 PCR
鲎实验 免疫学实验 动物实验
形态学 培养特性 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物实验
≤28
E.coli ≤11
S.a
≤3
-
≥29
12-14 ≥15
14-22 ≥23
22
细菌核酸检测试验
PCR 定量PCR 核酸杂交技术 16S rRNA基因序列分析 生物芯片技术
聚合酶链式反应是一种体外 DNA扩增技术,在DNA扩增 仪上进行。适用于难以培养的 细菌引起的疾病如结核、慢性 淋病、梅毒等。
凝集试验 沉淀试验 补体结合试验 免疫荧光试验 放射免疫试验 酶联免疫吸附试验 免疫印迹试验
下列情况需做血清学检测:
1. 采取标本分离病毒已晚;2. 目前尚无方法或难以分离的病毒; 3. 研究临床意义;4. 血清流行病学调查。
37
病毒抗体的检测(血清学诊断)
Serological identification
7. 50%组织细胞感染量(TCID50)
将待测病毒液作10倍系列稀释,分别接种单层细胞,培养后观察CPE等指标, 以能感染50%细胞的最高稀释度的病毒量为终点。统计学处理计算TCID50.
8. 感染复数(multiplicity of infection, MOI)
原指在一特异性实验中感染单一细菌细胞的噬菌体的平均数,现作为病毒感 染性的定量检测。
5.病原学检验对实验室的要求: Ⅰ、Ⅱ类细菌\病毒检测要在生物安全水平(biosafety
细菌病的实验室诊断
细菌性病料的保存和送检
低温保存
尽快送检
• 做好记录(畜主姓名、动物种类、地址、
发病情况、欲检部位及检验项目、采集时
间等)
返回
二、 ★病料中细菌的检查方法(六类)
1.防止污染
(5)焚烧或深埋: 剖检后动物尸体和 病料焚烧灭菌或消 毒深埋。
深埋(投入消毒药) 动物尸体焚烧炉
1.防止污染
直接洗刷
垃圾
处理不当会引起人 和动物疫病的散播
动物或人的传染病
2.无菌采样
目的
防止病料被污染
措施 —所用器械和器皿必须灭菌 —点燃酒精灯 —注意无菌操作
3.适时采样
➢ 细菌丰富增殖时期、病料应该新鲜:取濒
检
–不染色标本检查法(悬滴法、压滴法)
查
方 电子显微镜检查 方法:
A.压滴法
B.悬滴法
返回
2.染色标本检查法
❖ 单染色法 ❖ 复染色法 ❖ 特殊染色法
(一)形态学检查——1.光镜
(2)染色标本检查法
单
染 色
单染色法
复染色法
法
和
复
染 常用 美蓝染色法、复红染色法 革兰氏染色法、抗酸
返回
实质脏器的采集
• 剖开体腔后,立即采集,置于无菌容器内 • 污染或剖开过久的被检器官:先烧烙表面,然后在烧
烙的深部取一块实质脏器,放在灭菌容器内。
• 如有细菌检验条件,可在剖检后直接做病料的触片染
色和细菌的分离培养。
液体病料的采集
脓汁、胸水一般用灭菌的棉棒或吸管吸取放
8 细菌感染的实验室检查
细菌感染的诊断
细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 形态与结构的检查
抗酸染色(acid-fast stain) 方法:1、石炭酸复红初染:加热3~5min,水洗
2、3%~5%盐酸酒精脱色30s,水洗 3、碱性美蓝复染30s,水洗。 4、干后镜检
结果: 抗酸杆菌
红色
非抗酸杆菌
第一节
细菌感染的诊断
血清学诊断(serological diagnosis) 抗体的检测
常用方法: 凝集试验: 肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等 中和试验: 抗“O”试验等
补体结合试验: Q热柯克斯体抗体检测等
第二节 细菌感染的特异性预防
自然免疫
主要指机体感染病原体后建立的特异性免疫,也包括胎儿或
革兰染色法(Gram stain): 方法:初染 原理:
1、G+菌等电点低于G-菌,吸收带正电荷的碱性燃料多
2、G +菌细胞壁肽聚糖层多,G-菌细胞壁脂质含量高 3、G+菌含有多量核糖核酸镁盐与结晶紫、碘结合成大分子复合物
媒染
脱色
复染
医学意义:
1、鉴定细菌 2、与致病性有关 3、参考选择抗菌药物
第一节
血清学鉴定 动物试验
药物敏感试验
第一节
细菌感染的诊断
细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 抗原的检测
细菌感染的实验诊断
用于诊断感染性疾病
一.血清学鉴定
了解微生物的抗原结构 用已知抗体检测细菌的抗原组合 特异性较高 多在鉴定的最后进行
可用多种血清学方法,细菌多用凝集 反应,病毒多用中和试验
二.血清学诊断
查抗体: 用已知抗原 IgM: 感染的指标 IgG: 效价有4倍以上增高或 高于当地人群水平
倾注平板:少量细菌混于琼脂中倒板,计数, 分离纯种
四.细菌生长的表现
固体基: 菌落形成,注意其
大小, 形状 表面, 边缘 质地, 透明度 溶血情况
液体基: 浑浊,菌膜,沉淀
五.纯种的获得
纯种是细菌学工作的基础 获得方法: 划线分离法(倾注平
板法)获得大的单个菌落 斜面 纯培养物 纯培养物的外观表现应是一致的
细菌感染的实验诊断
鼠伤寒暴发
时间:1991年11月 地点:某婴儿室 发病:55名 死亡:23名 56件物品(被褥,尿布,奶瓶)中26件
检出鼠伤寒沙门菌
二.诊断试验的选择
有价值的 快速简便的 特异性和敏感性高的
可用的方法:
查病原体:直接涂片 分离,对纯培养物进行鉴定
查可溶性抗原: 用已知抗体 查DNA:分子生物学方法 查抗体: 用已知抗原
IgM IgG: 效价有4倍以上增高
三.细菌鉴定流程
双歧检索: 以某一试验分 表解: 用多种试验整体分析 数字编码: 将多种试验分别编码,
数字化后查表
革兰氏阴性杆菌 葡萄糖发酵
+ 氧化酶
+
-
弧
肠
菌
杆
菌
非发酵菌
A
B
甲+
+
乙+
+