浙科版选修1第一部分实验二微生物的培养和利用课件5

? 通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基 pH 的变化(脲酶催化的化学反应 )
? 统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生 物的数量
三、实验中涉及到的一些问题：
（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？ （选材的问题） 没硬化，腐殖质丰富的土壤
（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？
10-4 、 10-3,、 10-2
将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行 培养，作为空白 对照，以证明培养基是否受到污 染
四、实验用品和材料：
五、操作步骤：
１、制备无菌的ＬＢ固体培养基和尿素固体培养基
２、倒平板：倒３个ＬＢ培养基，９个尿素固体培养基
３、制备一定浓度梯度的细菌悬液：
１g土壤＋９９ ml无菌水，振荡，为１０ ２稀释液，依 次制备１０ ３、１０４、１０５的土壤稀释液。
你认为这两位的同学需要改进吗？如果需要，如何改进？
第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，但是，其中1个平板的计数结果与另 2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将 3
个平板的计数值用来求平均值 。在设计实验时，一定要涂布至 少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与 准确性
两位同学分别用稀释涂布法测定 同一土壤 样品中的 细菌数．Ａ同学筛选出大约１５０个菌落，但是， Ｂ同学在同样稀释度下只获得５０个菌落。
Ｂ同学认为Ａ的结果有问题。他认为Ａ的培养基 可能被杂菌污染了，或在培养基中混入了其他含氮 物质，导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中 生长。
你能帮Ａ解决这个问题吗？
涂布平板的所有操作都应在火焰附近 进行。结合平板划线与系列稀释的无菌 操作要求，想一想，第2步应如何进行无 菌操作？
应从操作的各个细节保证“无菌”。 例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、 吸管头不要接触任何其他物体、吸摞
恒温37℃培养
五、操作步骤：（学生做）
１、制备无菌的ＬＢ固体培养基和尿素固体培养基
２、倒平板：倒２个ＬＢ培养基，２个尿素固体培养基
３、制备一定浓度梯度的细菌悬液：
１g土壤＋９９ml无菌水，振荡，为１０ ２稀释液，依次 制备１０ ３、１０ ４（０.５＋４.５ml无菌水） 的土壤稀 释液。
４、稀释涂布分离法分离细菌
５、培养观察（倒置，３７度）
实验2 分离以尿素为氮 源的微生物
分离微生物的方法 :
平板划线分离法 稀释平板分离法 选择培养基培养法
尿素又称脲,是蛋白质的降解产物,哺乳动 物的尿液中含有,植物不能直接吸收尿素, 因此,大量尿素的存在对环境造成污染.有 些细菌可产生脲酶,以尿素为氮源,脲酶可 将尿素分解为氨,被植物吸收.
一、实验原理
４、稀释涂布分离法分离细菌（无菌， 0.1ml，玻璃刮刀） ５、培养观察（倒置，３７度）
配制培养基
实验组
? 尿素培养基（1L）
葡萄糖
10g
NaCl
4.8g
K2HPO4 4.8g
琼脂
20g
酚红
0.01g
尿素
80g
对照组
? LB培养基（1L） 蛋白胨： 10g 酵母粉： 5g NaCl： 10g 琼脂： 20g
用选择培养基可分离出以尿素为氮源的微生物， 这些微生物可产生脲酶，脲酶可将尿素分解 为能被植物吸收的氨，因此这类微生物具有 一定的生态学价值。稀释涂布平板法统计土 壤样品中含有的这种微生物的数目
细菌
尿素 中性
NH3 碱性
酚红颜色： 黄色
紫红色
二、实验目的:
? 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌 (有 脲酶)
选择培养基
倒平板
? 需要倒3个LB平板，9个尿素平板
LB(对照)
尿素
10-2
10-3
10-4
每个稀释度 1个LB对照平板
3个尿素平板(平行重复组)
配制菌悬液
得102,
103, 104的菌悬液
1g土壤
1个99ml无菌水
2个9ml无菌水
接种
? 取100ul菌悬液
涂布分离
涂布分离
涂布前后三角刮刀需要灼烧吗？
碳源、尿素、无机盐、水、酚红
（三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物 对尿素分解能力的高低？
培养基红色的深浅
（四）统计微生物的数量可用哪些方法？
稀释涂布平板法，显微镜直接记数法
三、实验中涉及到的一些问题：
（五）用稀释涂布平板法计数时，菌落数在 30-300 （20以内）计数。
做一系列浓度梯度实验，探究合适的稀释度
（六）实验设计要遵循的原则：
重复性原则 对照原则 （排除实验组中非测试因素对实验结果的
影响，提高实验的可信度）
两位同学分别用稀释涂布法测定同一土壤样品中的细菌数．在 对应稀释倍数为１０３的培养基中，得到以下两种统计结果．
第一个同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为 ２３０．
第二个同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分 别为２１、２１２和２５６。该同学以这三个平板上菌落数的 平均值作为统计结果。