苏丹Ⅳ染色液
千教网-《检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质》教案 一、实验原理 (1)鉴定 114865
《检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质》教案一、实验原理（1）鉴定实验设计的理念：某些化学试剂 + 生物组织中有关有机化合物产生特定的颜色反应。
（2）具体原理：①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。
②脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。
③蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色反应。
二、目标要求初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
三、重点、难点1.重点①初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
②通过实验的操作和设计培养学生的动手能力，掌握探索实验设计技巧，从而培养创新思维能力。
2.难点根据此实验方法、原理，设计实验来鉴定常见食物的成分。
四、实验材料1.可溶性还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。
2.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。
3.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白)。
五、仪器、试剂1.仪器:剪刀,解剖刀,双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,研钵,石英砂,纱布,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜。
2.试剂:①斐林试剂(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO溶液)；②苏丹4Ⅲ染液；③双缩脲试剂；④体积分数为50%的酒精溶液；⑤蒸馏水。
六、方法步骤(演示教学课件)1.制备试剂。
2.可溶性还原糖的鉴定、方法、步骤。
3.脂肪的鉴定、方法、步骤。
4.蛋白质的鉴定、方法、步骤。
七、教学过程新课引入：我们在化学中学习过物质的鉴定，其原理是被鉴定的物质与所用的化学试剂要么发生颜色反应，要么产生沉淀，我们生物学上也采用此原理，在生物学中物质鉴定的理念是：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。
新课教学：（具体原理）①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。
高中生物实验必知的试剂
图2
6.溴麝香草酚蓝水溶液：检测 CO2。CO2 可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄，根据溴 麝香草酚蓝水溶液变成黄色的时间长短，可以检测 CO2 的产生情况。 7.酸性重铬酸钾溶液：鉴定酒精。橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与乙醇（俗称酒精） 发生化学反应，变成灰绿色。 8.碘液：检测淀粉，淀粉遇碘变蓝。 9.龙胆紫溶液（或醋酸洋红液）：碱性染料。使染色体着色，用于观察细胞的有丝分裂、减 数分裂等。 注意：醋酸洋红液是以醋酸作为溶剂配制的染液，但它是碱性染料（碱性染料是指利用阳离 子着色的染料）。
如果实验过程中需要维持细胞活性，就一定要考虑细胞所处环境的渗透压。如果实验材料为 动物细胞，则需要使其处在细胞的等渗溶液中。如用健那绿染液使人口腔上皮细胞中线粒体 着色的原理是正常活性状态下的线粒体中细胞色素氧化酶能够维持健那绿染液的氧化状态， 从而使线粒体呈蓝绿色，所以用生理盐水配制健那绿染液，以保证细胞有活性。 （2）试剂替代性质相似 如叶绿素提取液为有机溶剂，所以不能用水制剂来替代。观察根尖分生组织细胞有丝分裂的 实验原理是染色体易被碱性染料染色，所以该实验中可选用颜色较深的碱性染料染色。 （3）试剂浓度 重点试剂的浓度需要准确识记，如斐林试剂乙液为 0.05 g/mL 的 CuSO4 溶液，而双缩脲试剂 B 液为 0.01 g/mL 的 CuSO4 溶液；观察植物细胞质壁分离实验选用的蔗糖溶液质量浓度为 0.3 g/mL 等。 四、提取和分离 教材中与“提取”或“分离”有关的实验有“体验制备细胞膜的方法”与“绿叶中色素的提 取和分离”，相关试题易错的原因主要是“相似”内容的干扰，分析如表所示：
五、冲洗和漂洗 1.酒精在高中生物实验中的作用
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red)2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
常见细胞染色试剂简介
常见细胞染色试剂简介1、酸性品红（Acid fuchsin）酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。
是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。
它跟甲基绿同染，能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。
酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。
2、刚果红（Congo red）刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。
它能作染料，也用作指示剂。
它在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。
用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。
在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。
刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于它能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速3、甲基蓝（Methyl blue）甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。
甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。
它跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。
它的水溶液是原生动物的活体染色剂。
甲基蓝极易氧化，因此用它染色后不能长久保存。
4、固绿（Fast green）固绿是酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。
固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。
它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。
它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。
5．苯胺蓝（Aniline blue）是一种混合酸性染料，平常所用很难有一定的标准。
此染料一般很难溶于水，也不易溶于酒精（1.5％）。
植物制片中可与番红合用，作为组织染色；也可作藻类植物染色。
因为这种染料的成分很不一致，染色效果不易掌握。
6、苏丹Ⅲ（Sudan Ⅲ）苏丹Ⅲ是弱酸性染料，不溶解于水，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%）。
常用70％酒精中的饱和溶液。
高中生物实验总结(超级详细)
基础课程教学资料高中生物实验总结实验一观察DNA和RNA在细胞中的分布（必修一P26）一、实验原理：1、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA大部分存在于细胞质中。
2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。
利用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
3、盐酸的作用①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞；②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合4、0.9%的NaCl溶液作用：保持口腔上皮细胞的正常的形态二、目的要求：初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法三、材料用具：人的口腔上皮细胞（也可用其他动物或植物细胞代替，如洋葱鳞片叶表皮细胞）大烧杯、小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，吡罗红甲基绿染色剂（取A 液20mL，B液80mL配成染色剂，使用时现配。
A液：取吡罗红甲基绿粉1g，加入100mL蒸馏水中溶解，放入棕色瓶中备用。
B液：取乙酸钠16.4g，用蒸馏水溶解至1000mL。
取乙酸12mL，用蒸馏水稀释至1000mL。
取稀释的乙酸钠溶液30mL和乙酸20mL，加蒸馏水50mL，配成pH为4.8的溶液），蒸馏水五、方法步骤：1、取口腔上皮细胞制片①在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液。
②用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下，把牙签上附有碎屑的一端，放在上述载玻片上的液滴中涂抹几下。
点燃酒精灯，将涂有口腔上皮细胞的载玻片烘干。
（固定细胞）2、水解①在小烧杯中加入30mL质量分数为8%的盐酸，将烘干的载玻片放入小烧杯中。
②在大烧杯中加入30℃温水。
③将盛有盐酸和载玻片的小烧杯放在大烧杯中保温5min。
常用染色液的配方
一、常用染色液的配制⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。
配方：碘化钾2g；蒸馏水300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。
用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。
⒉苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。
配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml；过滤后再加入10ml甘油（2）先将苏丹II I或IV溶解在50m l丙酮中，再加入70%酒精50ml。
（3）苏丹III70%乙醇的饱和溶液。
⒊1％醋酸洋红（acetocarmin e）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。
配方：洋红1g ；45％醋酸100m l煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀），放入棕色瓶中备用。
⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsi ne）核染色剂。
配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。
原液A：3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原液A10ml加入到90ml5％石炭酸水溶液中。
原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6m l福尔马林（38％的甲醛）。
（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1~，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著（若立即用，则着色能力差）。
适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。
颜色反应
1、二苯胺：用于DNA的鉴定（沸水浴，蓝色）
2、甲基绿：检测DNA，呈绿色
3、吡罗红：检测RNA，呈红色
4、苔黑酚乙醇溶液：用于RNA的鉴定
5、斐林试剂（甲液0.1g/mL NaOH、乙液0.05g/mLCuSO4）/班氏试剂：鉴定可溶性还原性糖（沸水浴，砖红色沉淀）
6、双缩脲试剂：用于蛋白质的鉴定（紫色）
7、苏丹Ⅲ染液(橘黄色）和苏丹Ⅳ染液(红色）：用于脂肪鉴定
8、碘液：用于鉴定淀粉（变蓝色）
9、龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈紫色，后者呈红色
10、改良苯酚品红染液：检测染色体，红色（改良苯酚品红染色液对果蝇唾液腺染色体的染色效果与醋酸染洋红染色液的染色效果是相同的。
而且用改良苯酚品红染色液还能提高工效，简易节约的优点。
）
11、健那绿B：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色
12、重铬酸钾溶液：检测酒精，呈灰绿色
13、溴麝香酚蓝水溶液：检测CO2，由蓝变绿再变黄
14、吲哚酚试剂：用于维生素C的鉴定 15、伊红美蓝：鉴定有无大肠杆菌的存在
16、亚甲基蓝：用于活体染色或检测污水中的耗氧性细菌（细菌的氧化
可使之褪色）。
苏丹红染色
苏丹Ⅳ染色
1.新鲜组织低温切片，一般-20~-25℃，脂肪瘤应
调节至-30℃。
2.冰冻切片6-8μm，贴于载玻片上。
3.70%乙醇稍微浸洗一下。
4.入苏丹Ⅳ染色液1-2min。
5.70%乙醇吸去多余染液。
6.蒸馏水浸洗1min。
7.入Mayer苏木素染色液，淡然细胞核2-3min。
8.如染色过深，可用苏丹Ⅳ分化液分化数秒。
9.自来水水洗10min，蒸馏水稍洗。
10.滤纸吸干水分，切片稍微干燥。
11.甘油明胶封片。
注意事项：
a.标本不宜用含有乙醇的固定液，需用冰冻切
片。
b.切片入染色液时要密封，勿与空气相接处，一
面燃料发生沉淀。
c.冰冻切片易着色，Mayer苏木素复染时应避免
过染。
d.苏丹燃料容易褪色，应密封保存。
e.甘油明胶封片的样本保存时间不长，如需长时
间保存，可在盖玻片边缘用中性树胶封闭。
脂类染色
脂类染色脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。
它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。
在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。
脂类的主要功能是氧化供能。
脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。
在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。
脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O等。
脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。
经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。
根据这一原理，适当提高温度（37℃-60℃）对组织切片染色效果是有好处的。
脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油明胶和阿拉伯糖胶等。
一、苏丹Ⅲ(Sudan Ⅲ)染色法：操作方法：（1）固定于10%甲醛的组织。
（2）水洗后采用冰冻或石蜡切片。
（3）经蒸馏水后，浸染于Harris苏木素或明矾苏木素中淡染1-2分钟。
（4）自来水冲洗。
（5）水洗后，移入70%酒精5秒钟。
（6）投入苏丹Ⅲ染液中约30分钟或更长时间，置于56℃温箱中。
（7）在70%酒精中洗涤5-10秒钟。
（8）洗于蒸馏水中，然后将切片移于载玻片上。
（9）切片移于玻片上，将切片周围的水分小心擦掉。
（10）甘油明胶封固。
结果：脂肪呈橙红色或鲜红色或黑色，胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。
试剂配制：1. 苏丹Ⅲ染液配法：将0.15克苏丹Ⅲ溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中（各50ml），临用时过滤，所得滤液即为饱和浓度。
注：浸染时，容器必须盖好，否则酒精或丙酮挥发，染料沉淀。
2.甘油明胶配制：明胶 40g蒸馏水 210ml甘油 250ml石碳酸结晶 5ml先将明胶浸入蒸馏水中2小时或更长时间，然后加甘油和石碳酸，加热15分钟，摇搅直至混合液均匀为止。
二、苏丹Ⅳ(Sudan Ⅳ)染色法：苏丹Ⅳ又名猩红，是苏丹Ⅲ的衍生物，作为脂肪染剂，经各地实验证明，其结果优于苏丹Ⅲ。
有机物的检测与鉴定
有机物的检测与鉴定真题回放1．(全国卷Ⅰ)某油料植物的种子中脂肪含量为种子干重的70%。
为探究该植物种子萌发过程中干重及脂肪含量的变化，某研究小组将种子置于温度、水分(蒸馏水)、通气等条件适宜的黑暗环境中培养，定期检测萌发种子(含幼苗)的脂肪含量和干重。
结果表明：脂肪含量逐渐减少，到第11 d时减少了90%，干重变化如图所示。
回答下列问题：(1)为了观察胚乳中的脂肪，常用_苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)__染液对种子胚乳切片染色，然后在显微镜下观察，可见_橘黄(或红)__色的脂肪颗粒。
(2)实验过程中，导致萌发种子干重增加的主要元素是_O__(填“C”“N”或“O”)。
(3)实验第11 d后，如果要使萌发种子(含幼苗)的干重增加，必须提供的条件是_光照__和_所需的矿质元素离子__。
[解析]回顾教材中脂肪的检测实验作答(1)；种子干重增加主要是种子吸水所致，再结合空后说明作答(2)；使萌发种子(含幼苗)的干重增加也就是有机物增加，必须依靠光合作用来制造，C、H、O以外的元素还需要萌发种子(幼苗)从溶液中吸收。
核心拓展常考必记的几种化合物和细胞结构的显色反应物质或结构鉴定试剂颜色反应反应条件蛋白质_双缩脲试剂__ 紫色常温脂肪苏丹Ⅲ染液(苏丹Ⅳ染液) 橘黄色(红色) 切片，显微镜观察还原糖斐林试剂砖红色_水浴加热__淀粉碘液蓝色常温下DNA 二苯胺试剂蓝色沸水浴DNA、RNA 甲基绿＋吡罗红染液前者绿色，后者红色常温酒精重铬酸钾溶液(酸性条件下)_灰绿色__ —CO2澄清石灰水石灰水变混浊—(溴麝香草酚蓝水溶液) (由蓝变绿再变黄)线粒体健那绿染液(活体染色剂) _蓝绿色__ —染色体龙胆紫溶液或醋酸洋红液紫色或红色—题型突破1．(2019·山东师大附中一模)在生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质的鉴定实验中，对实验材料的选择，叙述错误的是(D)A．可用斐林试剂甲液和乙液、蒸馏水来鉴定葡萄糖和尿液中的蛋白质B．花生种子含脂肪多且子叶肥厚，是用于脂肪鉴定的理想材料C．食用花生油最好选用苏丹Ⅳ染液来鉴定，而一般不选用苏丹Ⅲ染液来鉴定D．甘蔗茎的薄壁组织都含有较多糖且近于白色，因此可以用于进行还原糖的鉴定[解析]斐林试剂由0.1 g/mL NaOH和0.05 g/mL CuSO4组成，双缩脲试剂由0.1 g/mL NaOH和0.01g/mL CuSO4组成，若把斐林试剂中的CuSO4稀释后，就可用于检测蛋白质，A正确；花生种子含脂肪多且子叶肥厚，是用于脂肪鉴定的理想材料，B正确；苏丹Ⅲ染液可将脂肪染成橘黄色，苏丹Ⅳ染液可将脂肪染成红色，而食用花生油的颜色接近橘黄色，如果用苏丹Ⅲ染液鉴定，则不易观察实验结果，因此最好用苏丹Ⅳ染液鉴定食用花生油，C正确；甘蔗茎的薄壁组织含有较多的蔗糖，但蔗糖属于非还原糖，不可用于进行还原糖的鉴定，D错误。
生物实验中涉及的染色剂
生物实验中涉及的染色剂1 斐林试剂检测可溶性还原糖原理：还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用,而且是现用现配,条件需要水浴加热.应用：检验和检测某糖是否为还原糖；不同生物组织中含糖量高低的测定；在医学上进行疾病的诊断,如糖尿病、肾炎.2 苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪原理：苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色；苏丹Ⅳ+脂肪→红色注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察.应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪.3 双缩脲试剂检测蛋白质原理：蛋白质+双缩脲试剂→紫色注意：双缩脲试剂在使用时,先加A液再加B液,反应条件为常温（不需要加热）.应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质；用于劣质奶粉的鉴定.4 碘液检测淀粉原理：淀粉+碘液→蓝色注意：这里的碘是单质碘,而不是离子碘.应用：检测食品中营养成分是否含有淀粉5 DNA的染色与鉴定染色原理：DNA+甲基绿→绿色应用：可以显示DNA在细胞中的分布.鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色应用：用于DNA粗提取实验的鉴定试剂.6 吡罗红使RNA呈现红色原理：RNA+吡罗红→红色应用：可以显示RNA在细胞中的分布.注意：在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂,而不是单独染色.7 台盼蓝使死细胞染成蓝色原理：正常的活细胞,细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内；死细胞或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色.应用：区分活细胞和死细胞；检测细胞膜的完整性.8 线粒体的染色原理：健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料,可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色.应用：可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在.9 酒精的检测原理：橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应,变成灰绿色.应用：探究酵母菌细胞呼吸的方式；制作果酒时检验是否产生了酒精；检查司机是否酒后驾驶.10 CO2的检测原理：CO2可以使澄清的石灰水变混浊,也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿在变黄.应用：根据石灰水混浊程度或溴麝香草酚蓝水溶液变黄的时间长短,可以检测酵母菌培养液中CO2的产生情况.11 染色体（或染色质）的染色原理：染色体容易被碱性染料（如龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液）染成深色.应用：用高倍镜观察细胞的有丝分裂.12 吲哚酚试剂与维生素C溶液呈褪色反应原理：吲哚酚即2,6-二氯酚靛酚钠,其水溶液为蓝紫色,维生素C具有还原性,能将其褪色.应用：可用于检测食品营养成分中是否含有维生素C.13 亚硝酸盐的检测出现玫瑰红原理：在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1-萘基乙胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料.应用：将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较,可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量. 14 脲酶的检测原理：细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨,氨会使培养基的碱性增强,使PH升高,从而使酚红指示剂变红. 应用：在以尿素为唯一氮源的培养基加入酚红指示剂,培养某种细菌后,看指示剂变红与否可以鉴定这种细菌能否分解尿素.15 伊红美蓝检测大肠杆菌原理：在伊红美蓝培养基上,大肠杆菌的代谢产物（有机酸）与伊红美蓝结合使菌落呈现黑色.应用：用滤膜法测定水中大肠杆菌的含量.16 刚果红检测纤维素分解菌原理：刚果红是一种染料,它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应.当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时,刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物.当纤维素被纤维素分解菌分解后,刚果红-纤维素的复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈.应用：筛选纤维素分解菌.。
苏丹Ⅳ染色液使用说明
苏丹Ⅳ染色液使用说明货号：G1520规格：3×50ml保存：有效期12个月。
产品组成：名称3×50ml Storage试剂(A):苏丹Ⅳ染色液50ml RT避光试剂(B):Mayer苏木素染色液50ml4℃避光试剂(C):苏丹Ⅳ分化液50ml RT产品说明：脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。
人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。
2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。
中性脂肪(Neutralfat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。
中性脂肪是储存能量的方式之一，在氧化时释放出能量。
在正常情况下，除脂肪细胞外，其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴，如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性，常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。
中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。
苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。
苏丹类染料由于在脂质中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度，所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去，使脂质呈现出染液的颜色。
苏丹Ⅳ脂肪染色液主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着，常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性，细胞内出现多数中性脂肪滴；鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。
标本不采用含有乙醇的固定液(如需要固定可采用10%福尔马林)、也不采用石蜡切片，需用冰冻切片或碳蜡切片。
自备产品：1、载玻片2、70%乙醇3、蒸馏水4、显微镜5、甘油明胶封固液操作步骤（注意事项）：1、新鲜组织低温切片。
如样本为脂肪瘤，应调节温度，应调节至-30℃。
2、冰冻切片5～10μm(6～8μm为佳)，贴于载玻片上。
3、70%乙醇稍微浸洗一下。
4、入苏丹Ⅳ染色液，浸染1-2min。
新课标高考生物实验技能一、细胞内有机物的鉴定方法汇总
一、细胞内有机物的鉴定1．通过颜色反应对化学物质或结构进行检测2.(1)还原糖的检测选材→制备组织样液→加斐林试剂→水浴加热→出现砖红色沉淀。
(2)脂肪的检测选材→制片→加苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)染液染色→漂洗→镜检呈橘黄色(或红色)。
(3)生物组织中蛋白质的鉴定制备样液(豆浆或蛋清稀释液)→鉴定样液(样液加A液1～2 mL振荡摇匀，再加B液3～4滴，摇匀)→呈紫色。
(4)观察DNA和RNA在细胞中的分布制片→用质量分数为8%的盐酸水解5 min→用蒸馏水缓慢冲洗掉盐酸→用吡罗红甲基绿染色剂染色5 min→观察→结果细胞核被染成了绿色，细胞质被染成了红色→结论：DNA主要分布在细胞核中，RNA主要分布在细胞质中。
3．物质鉴定类试题的3个易错点一是不清楚实验试剂的作用对象，如将甲基绿与吡罗红的作用混淆等。
二是不清楚鉴定试剂的使用方法，如还原糖与斐林试剂反应需要水浴加热，但双缩脲试剂、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、碘液的使用条件则为常温。
三是不清楚斐林试剂和双缩脲试剂的相关使用方法，前者是将甲液、乙液混合均匀后再加入样液，使用时需水浴加热，而双缩脲试剂是先加入A液，形成碱性环境后再滴加B液，使用时无需加热。
1．(2018·青海西宁模拟)下列关于“可溶性还原糖、蛋白质和脂肪鉴定”实验的叙述，正确的是()A.常用番茄、苹果等组织样液作为鉴定植物组织内还原糖的实验材料B.脂肪鉴定中观察花生子叶切片细胞间不可能出现橘黄色小颗粒C.脂肪鉴定中50%的酒精是为了溶解组织中的油脂D.蛋白质鉴定中加入的0.1 g/mL NaOH溶液可为反应提供碱性环境解析：斐林试剂可用于鉴定还原糖，在水浴加热的条件下，溶液的颜色变化为砖红色(沉淀)，番茄的红色会影响实验结果，A错误；切片时，被破坏的子叶细胞会释放出少量脂肪，细胞间会出现橘黄色小颗粒，B错误；脂肪鉴定中50%的酒精主要作用是洗去浮色，C错误；蛋白质在碱性环境中和铜离子反应产生紫色络合物，蛋白质鉴定中加入的0.1 g/mL NaOH溶液可为反应提供碱性环境，D正确。
生物学--生物染色剂
生物染色剂斐林试剂：检测可溶性还原糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖），沸水浴加热，出现砖红色沉淀。
苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ：检测脂肪，苏丹Ⅲ遇到脂肪出现橘黄色，苏丹Ⅳ遇到脂肪出现红色。
双缩脲试剂：检测蛋白质，出现紫色甲基绿：检测DNA在细胞中分布，遇到DNA出现绿色。
吡罗红：检测RNA在细胞中分布，遇到RNA出现红色。
二苯胺：检测DNA的存在，DNA遇到二苯胺，水浴加热出现蓝色。
健那绿：检测细胞中的线粒体，线粒体遇到健那绿呈现蓝绿色。
碘液：检测淀粉，淀粉遇到碘液出现蓝色。
澄清石灰水：检测CO2，二氧化碳可以使澄清的石灰水变浑浊。
溴麝香草酚蓝水溶液：检测二氧化碳，二氧化碳可以使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝色变成绿色再变成黄色。
重铬酸钾溶液：检测酒精，可以在酸性条件下与酒精发生反应出现灰绿色。
龙胆紫或者醋酸洋红：检测细胞核中的染色质，可以将染色质染成深色。
高中生物学重要的酶（部分）限制性核酸内切酶：将DNA分子的双链骨架切割，一种限制性核酸内切酶识别一种序列，而且从特定的位点切割。
限制性核酸内切酶破坏DNA分子的骨架上的磷酸二酯键。
DNA连接酶：将被限制酶切割的双链DNA片断连接起来。
DNA连接酶连接DNA分子的骨架上的磷酸二酯键。
DNA聚合酶：在DNA复制的时候需要，将单个脱氧核苷酸一个一个的连接起来，DNA聚合酶连接DNA骨架上的磷酸二酯键。
解旋酶：将DNA的双螺旋解开，解旋酶破坏的是氢键。
（也可以用高温解旋）RNA聚合酶：催化DNA转录为mRNA分子。
胰蛋白酶：将动物细胞间隙的蛋白质水解，使组织分散成游离细胞。
逆转录酶：催化RNA逆转录形成DNA分子。
生物染色剂高中几种染色剂的使用原理、使用方法归纳1。
甲基绿和吡罗红：实验原理:甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色.利用甲基绿,吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和RNA在细胞中的分布.试剂及配制方法（1）试剂质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，乙酸钠，乙酸，蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。
苏丹Ⅳ脂肪染色法的应用及体会
苏丹Ⅳ脂肪染色法的应用及体会作者：陈海燕来源：《健康必读·下旬刊》2011年第07期【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)07－0260－01【摘要】脂肪栓塞综合征（fat embolism syndrome,FES）是指创伤或骨折后脂肪栓子进入血流阻塞小血管，尤其是阻塞肺内毛细血管，使其发生一系列的病理改变和临床表现。
肺是脂肪栓子最先到达的部位，栓子堵塞肺的小动脉及毛细血管，造成肺的血液灌流障碍。
于是，肺的气体交换障碍，导致缺氧。
由于脂肪栓子分解出的游离脂肪酸的刺激，肺血浆渗出增加，形成肺水肿，进一步阻碍肺的气体弥散功能，加重低氧血症。
【关键词】苏丹Ⅳ染色肪栓栓塞1 染色过程1.1 溶液的配制与方法：(1)试剂配制:苏丹Ⅳ（上海试剂厂）2g,丙酮50ml.，70%乙醇50ml,先将70%乙醇和丙酮混合,再加入苏丹Ⅳ,摇动多次使之尽量溶解至饱和,过滤后用小口砂塞瓶密闭保存备用。
（2）防脱玻片：APEC(北京中杉金桥)与丙酮1：30稀释。
1.2 染色方法:(1)冰冻切片厚8-10um,,防脱玻片贴片，蒸馏水稍洗。
(2)Harris苏木素液淡染胞核1min,水洗返蓝。
(3)蒸馏水洗后70%乙醇浸洗2秒, 苏丹Ⅳ染液浸染15-20min,70%乙醇迅速分化3秒钟。
(4)用滤纸将切片周围的水分吸去，甘油明胶(已加热溶解)封片。
2 结果脂类物质呈橘红色,细胞核呈蓝色。
3 应用2010年9月3日，陈某（女，18岁，泉州泉港人）在一起交通事故致左侧股骨骨折，第二天在医院内死亡。
解剖见左肺重500g，右肺重550g，双肺密度增加，表面光滑未见絮状物附着，切面未见明显实变病灶，挤压见较多的粘性液体溢出。
HE染色见肺重度呈淤血、水肿，灶性肺气肿，灶性出血，血管腔内可见大小不等边缘光滑的空泡，在空泡周围有中性粒细胞反应（见附照1），高度怀疑系肺脂肪栓子，遂取部分固定后的肺组织经按照本方法进行染色，镜下见肺小动脉、肺泡壁毛细血管内见多量的染成橘红色的脂滴,肺动脉毛细血管内脂滴栓塞，使血管扩张（见附照2）。
苏丹Ⅳ染色液
苏丹Ⅳ染色液
简介： 脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是丌溶于水，
易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹 黑 B、油红 O 法等。苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。 苏丹Ⅳ脂肪染色液主要 用于显示组织器官 的脂肪变性和类 脂质的异常沉着 ，常发生于肝、 肾、心等实质脏器的脂 肪变性，细胞内出 现多数中性脂肪 滴；鉴别和诊断 脂肪组织中所发 生的肿瘤及其性质。
组成：
编号 名称 试剂(A): 苏丹Ⅳ染色液 试剂(B): Mayer 苏木素染色液 试剂(C): 苏丹Ⅳ分化液 使用说明书
DL00 01 3×50ml
Storage
50ml RT 避光
50ml 4℃ 避光
50ml RT
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 新鲜组织低温切片，一般-20℃～-25℃。如样本为脂肪瘤，应调节至-30℃。 2、 冰冻切片 5～10μm(6～8μm 为佳)，贴于载玻片上。 3、 70%乙醇稍微浸洗一下。 4、 入苏丹Ⅳ染色液浸染。 5、 70%乙醇洗去多余染液。 6、 蒸馏水浸洗 1min。 7、 入 Mayer 苏木素染色液淡染细胞核。 8、 (可选)镜下观察如染色过深，可用苏丹Ⅳ分化液分化数秒。 9、 自来水水洗 10min，蒸馏水稍洗。 10、 用滤纸将切片及周围的水分吸去，让其稍微中性脂肪 细胞核
猩红色 蓝色
注意事项：
1、 标本丌宜采用含有乙醇的固定液、也丌宜用石蜡切片，需用冰冻切片。
北京雷根生物技术有限公司 2、 在染色过程中必须防止染料发生沉淀。故切片入染液时应密封，勿不流动空气相接触，
常用染色液的配制.
常用染色液的配制1.番红水液番红0.1g溶入蒸馏水,定溶至100ml。
2. 番红酒液番红0.5g或1g溶入50%酒精,定溶至100ml3. 固绿染液固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml。
4. 碘-碘化钾染液碘化钾溶入100ml蒸馏水，再加入1g碘，溶解后即可使用。
5. 苏丹Ⅲ（或Ⅳ）染液将0.1g苏丹Ⅲ或Ⅳ溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。
6.改良苯酚品红染液原液A：将3g碱性品红溶入100ml 70%酒精，此液可长期保存。
原液B：将10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。
原液C：将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。
染色液：取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。
7. 间苯三酚染液将5g间苯三酚溶入100ml 95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。
8. 中性红染液将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。
9. 钌红染液将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。
10.龙胆紫染液将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。
现常用结晶紫代替。
必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。
11.铁醋酸洋红染液先将100ml 45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g 洋红粉末（切记不可一次倒入）。
待全部倒入后，再煮沸1~2min，并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。
静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。
12.苏木精染液苏木精的配方很多，常用的有如下3种：配方Ⅰ：苏木精水溶液0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。
配方Ⅱ：代氏苏木精（De larfield’s haematoxylin）甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml丙液：甘油25ml + 甲醇25ml分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。
高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项
高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项朱秋霖，马天兵兰州二中，兰州 730000 摘要：目的：探究高中生物试验中常见染色剂的使用方法及常见问题与注意事项方法：通过一些简单的实验验证与参考文献得出结论。
结果：验证与总结出生物试验中常见染色剂的染色原理及所遇到的染色问题的原因。
关键词：高中生物学实验染色剂显色原理注意事项The common dye staining principle and precautions in the highschool biology curriculumZhu Qiulin，Ma TianbingLanzhou NO.2 middle secondary school class8 grade2，lanzhou 730000Abstract:Objective: To explore the use of high school biology test stains and FAQs Notemethod: through some simple experiments verify references concluded.Results:Validation andsummed up a common biological test stain dyeing principle and coloring problem encountered byreason.Keywords:high school biology experiment stain color rendering principle Precautions1.常见染色剂常见的高中生物染色显色反应，其实质是化学反应或者物理反应，按照其反应本质，可分为下列几类[5]：1.1 氧化还原反应类染色剂通过氧化还原反应生成某些具有特殊颜色的物质，利用其与生物组织中某些具有还原性的物质或代谢产物进行化学反应，宏观上产生颜色变化，通过颜色变化,鉴别某些生物组织中的目标物质。
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苏丹Ⅳ染色液
简介：
脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。
人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。
2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。
中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。
中性脂肪是储存能量的方式之一，在氧化时释放出能量。
在正常情况下，除脂肪细胞外，其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴，如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性，常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。
中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B 、油红O 法等。
苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。
苏丹类染料由于在脂质中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度，所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去，使脂质呈现出染液的颜色。
Leagene 苏丹Ⅳ脂肪染色液主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着，常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性，细胞内出现多数中性脂肪滴；鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。
标本不采用含有乙醇的固定液(如需要固定可采用10%福尔马林)、也不采用石蜡切片，需用冰冻切片或碳蜡切片。
组成：
自备材料：
1、载玻片
2、70%乙醇
3、蒸馏水
4、显微镜
5、甘油明胶封固液
操作步骤(仅供参考)：
1、 新鲜组织低温切片。
如样本为脂肪瘤，应调节温度。
2、 冰冻切片，贴于载玻片上。
编号 名称 DL0001 3×50ml Storage 试剂(A): 苏丹Ⅳ染色液 50ml RT 避光 试剂(B): Mayer 苏木素染色液 50ml 4℃ 避光 试剂(C): 苏丹Ⅳ分化液 50ml RT 使用说明书 1份
3、乙醇稍微浸洗一下。
4、入苏丹Ⅳ染色液，浸染。
5、乙醇洗去多余染液。
6、蒸馏水浸洗。
7、入Mayer苏木素染色液，淡染细胞核。
8、(可选)镜下观察如染色过深，可用苏丹Ⅳ分化液分化数秒。
9、自来水水洗蒸馏水稍洗。
10、用滤纸将切片及周围的水分吸去，让其稍微干燥。
11、甘油明胶封固。
染色结果：
中性脂肪猩红色
细胞核蓝色
注意事项：
1、标本不宜采用含有乙醇的固定液、也不宜用石蜡切片，需用冰冻切片。
2、在染色过程中必须防止染料发生沉淀。
故切片入染液时应密封，勿与流动空气相接触，
避免溶液挥发时发生沉淀。
3、冰冻切片较易着色，Mayer苏木素复染时应避免过染。
4、苏丹染料容易褪色，应密闭保存。
5、甘油明胶封固的样本，保存时间不长。
如需长期保存，可以在盖玻片与载玻片交界的边
缘用中性树胶封闭。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 12个月有效。
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编号名称
DC0032 Masson三色染色液
DC0080 Russell改良Movat五色套染染色液
DF0111 中性福尔马林固定液(10%)
DG0005 糖原PAS染色液
PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。