分子生物学思考题
分子生物学复习思考题附答案二
分子生物学复习思考题二1．写出分子生物学广义的与狭义的定义，现代分子生物学研究的主要内容，以及5个分子生物学发展的主要大事纪（年代、发明者、简要内容）。
广义上:分子生物学包括对蛋白质和核酸等生物大分子结构与功能的研究、以及从分子水平上阐明生命的现象和生物学规律。
狭义概念:既将分子生物学的范畴偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA结构与功能、复制、转录、表达和调节控制等过程。
其中也涉及到与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。
现代分子生物学研究的主要内容有：基因与基因组的结构与功能，DNA的复制、转录和翻译，基因表达调控的研究，DNA重组技术，结构分子生物学等。
5个分子生物学发展的主要大事纪（年代、发明者、简要内容）:1.1944年,著名微生物学家Avery 等人在对肺炎双球菌的转化实验中证实了DNA是生物的遗传物质。
这一重大发现打破了长期以来，许多生物学家认为的只有象蛋白质那样的大分子才能作为细胞遗传物质的观点，在遗传学上树立了DNA是遗传信息载体的理论。
2. 2.1953年，是开创生命科学新时代具有里程碑意义的一年，Watson和Crick发表了“脱氧核糖核酸的结构”的著名论文，他们在Franklin和Wilkins X-射线衍射研究结果的基础上，推导出DNA双螺旋结构模型，为人类充分揭示遗传信息的传递规律奠定了坚实的理论基础。
同年，Sanger历经8年，完成了第一个蛋白质——胰岛素的氨基酸全序列分析。
3. 1954年Gamnow从理论上研究了遗传密码的编码规律, Crick在前人研究工作基础上，提出了中心法则理论，对正在兴起的分子生物学研究起了重要的推动作用。
4. 1956年Volkin和Astrachan发现了mRNA(当时尚未用此名)。
5. 1985年,Saiki等发明了聚合酶链式反应(PCR)；Sinsheimer首先提出人类基因组图谱制作计划设想；Smith等报导了DNA测序中应用荧光标记取代同位素标记的方法；Miller等发现DNA结合蛋白的锌指结构。
分子生物学思考题01
名词解释：1.反义RNA：反义RNA：碱基序列正好与有意义的mRNA互补的RNA称为反义RNA。
可以作为一种调控特定基因表达的手段。
2.生物芯片：3.基因诊断：是以DNA和RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。
4.增强子：顺式作用元件，增强邻近基因的转录。
5.基因表达：指基因转录及翻译的过程，基因表达的最终产物是蛋白质或者rRNA、tRNA 等。
管家基因是组成性表达，而可调节基因的表达具有时空特异性。
6.核酸探针：7.反式作用因子: 指能直接或间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，其主要特点包括三个功能结构域（DNA识别结合域、转录活性域、结合其它蛋白的结合域）、能识别并结合上游调控区的顺式作用元件、对基因表达有正性和负性调控作用。
其活性调节方式：表达式调节，共价修饰，配体结合及蛋白质-蛋白质相互作用。
作用方式:成环、扭曲、滑动、Oozing。
DNA结构域包括：锌指、螺旋—转角—螺旋、亮氨酸拉链和螺旋—环—螺旋。
转录激活域富含：酸性氨基酸、脯氨酸和谷氨酰胺8.粘粒:9. YAC10.转基因动物：是细菌细胞内携带的染色体外的DNA分子，是共价闭合的环状DNA分子，能独立进行复制。
质粒只有在宿主细胞内才能够完成自己的复制。
11.蛋白激酶：12.基因敲除13.基因诊断，是以DNA和RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。
14.G蛋白，15.克隆：是指把一个生物体的遗传信息（基因片段）转入另一个生物体内进行无性繁殖，得到一群完全相同的基因片段，又称DNA克隆16.基因组：细胞或生物体中，一套完整单倍体的遗传物质的总和。
17.开放阅读框，18.质粒：细菌细胞内的、染色体外的DNA分子，是共价闭合的环状DNA分子，能够独立于细胞的染色质DNA而进行复制。
19.RNA干涉，20.蛋白质组学，21.生物信息学，22.顺式调控元件，是指那些与结构基因表达调控相关，能被基因调控蛋白异性识别和结合的DNA序列,抱括启动子.上游启动子元件.增强子.加尾信号和一些反应元件23.端粒：是位于真核生物染色体末端的、由DNA和蛋白质组成的一膨出结构。
医学分子生物学复习思考题及答案
医学分子生物学复习思考题及答案第十三章真核基因及基因组1、什么是基因组？答：基因组（genome）是指一个生物体内所有遗传信息的总和。
人类基因组包含了细胞核染色体DNA（常染色体和性染色体）及线粒体DNA所携带的所有遗传信息。
不同生物的基因及基因组的大小及复杂程度各不相同，所贮存的信息的量和质存在着巨大的差异。
2、真核基因的基本结构包括哪些？试述之。
答：真核基因的基本结构包括编码序列及非编码序列编码序列（coding seguence）：包括编码蛋白质及功能RNA（mRNA、rRNA、tRNA、特定小分子RNA）的核苷酸序列。
真核基因的编码序列由外显子及内含子组成，外显子及内含子相间排列，称断裂基因。
内含子数目较外显子数少一个，组蛋白编码基因例外，不含有内含子。
外显子决定表达蛋白多肽及RNA的一级结构。
因此，外显子序列结构通常比较保守，一个碱基的突变常致基因功能的改变，而内含子序列相对变异较大。
每个内含子5’末端与外显子相接处，常为GT，3’末端与外显子相接处常为AG，这一共有序列是mRNA剪接加工时的剪接识别信号。
非编码序列（non-coding sequence）：包括编码序列两侧（上游及下游）的对基因表达具有调控作用的一些调控序列：如启动子、增强子等外显子（exon）；在基因序列中，出现在成熟mRNA分子上的序列。
内含子（intron）：外显子之间、与mRNA剪接过程中被删除部分相对应的间隔序列。
3、什么事顺式作用元件？其化学本质是什么？顺式作用元件主要有哪些？答：非编码序列对基因表达起调控作用，又称调控序列。
位于结构基因（编码序列）的上游及下游，称它们为顺式作用元件（cis-acting element），包括启动子、增强子、沉默子、上游调控元件、加尾信号等。
4、真核基因启动子的功用是什么？其位置如何？答：DNA分子上能介导RNApol与DNA结合并形成转录起始复合物的序列，称之为启动子。
现代分子生物学（第4版）课后思考题答案
第一章绪论1．染色体具有哪些作为遗传物质的特征？答：①分子结构相对稳定；②能够自我复制，使亲子代之间保持连续性；③能够指导蛋白质的合成，从而控制整个生命过程；④能够产生可遗传的变异。
2.什么是核小体？简述其形成过程。
答：由DNA 和组蛋白组成的染色质纤维细丝是许多核小体连成的念珠状结构。
核小体是由H2A,H2B,H3,H4各两个分子生成的八聚体和由大约200bp 的DNA 组成的。
八聚体在中间，组成的。
八聚体在中间，DNA DNA 分子盘绕在外，而H1则在核小体外面核小体的形成是染色体中DNA 压缩的第一阶段。
在核小体中DNA 盘绕组蛋白八聚体核心，从而使分子收缩至原尺寸的1/71/7。
200bpDNA 完全舒展时长约68nm,68nm,却被压缩在却被压缩在10nm 的核小体中。
核小体只是DNA 压缩的第一步。
核小体长链200bp 200bp→核酸酶初步处理→核小体单体→核酸酶初步处理→核小体单体200bp 200bp→核酸酶继续处理→核心颗粒→核酸酶继续处理→核心颗粒146bp3简述真核生物染色体的组成及组装过程答：组成：蛋白质答：组成：蛋白质++核酸。
组装过程：组装过程：11，首先组蛋白组成盘装八聚体，，首先组蛋白组成盘装八聚体，DNA DNA 缠绕其上，成为核小体颗粒，两个颗粒之间经过DNA 连接，形成外径10nm 的纤维状串珠，称为核小体串珠纤维；的纤维状串珠，称为核小体串珠纤维；22，核小体串珠纤维在酶的作用下形成每圈6个核小体，外径30nm 的螺线管结构；的螺线管结构；33，螺线管结构再次螺旋化，形成超螺旋结构；，螺线管结构再次螺旋化，形成超螺旋结构；44，超螺线管，形成绊环，即线性的螺线管形成的放射状环。
绊环在非组蛋白上缠绕即形成了显微镜下可见的染色体结构。
4. 简述DNA 的一,二,三级结构的特征答：答：DNA DNA 一级结构：一级结构：44种核苷酸的的连接及排列顺序，表示了该DNA 分子的化学结构DNA 二级结构：指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构DNA 三级结构：指DNA 双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构6简述DNA 双螺旋结构及其在现代分子生物学发展中的意义(1)DNA 双螺旋是由两条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成的双螺旋是由两条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成的,,多核苷酸的方向由核苷酸间的磷酸二酯键的走向决定，一条是5---35---3，另一条是，另一条是3-----53-----5。
分子生物学思考题汇总版
分子生物学思考题一、总论：人类基因与基因组学1、人类基因组计划的精髓是什么？答案一：人类基因组计划的精髓是人类基因组图谱，包括遗传图谱、物理图谱、序列图谱、转录图谱。
1)遗传图谱：又称连锁图谱，是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。
遗传图谱的建立为基因识别和完成基因定位创造了条件。
2)物理图谱：指有关构成基因组的全部基因的排列和间距的信息。
绘制物理图谱的目的是把有关基因的遗传信息及其在每条染色体上的相对位置线性而系统地排列出来。
3)序列图谱：指测定每条染色体的DNA序列，通过DNA序列可以直接推出基因结构、定位已知基因、研究基因起源。
4)转录图谱：指在识别基因组所包含的蛋白质编码序列的基础上绘制的结合有关基因序列、位置及表达模式等信息的图谱。
通过这张图可以了解某一基因在不同时间不同组织、不同水平的表达；也可以了解一种组织中不同时间、不同基因中不同水平的表达，还可以了解某一特定时间、不同组织中的不同基因不同水平的表达。
答案二：人类基因组计划（Human Genome Project, HGP）是一项规模宏大，跨国跨学科的科学探索工程。
其宗旨在于测定组成人类染色体（指单倍体）中所包含的30亿个碱基对组成的核苷酸序列，从而绘制人类基因组图谱（包括遗传图谱、物理图谱、序列图谱、转录图谱），并且辨识其载有的基因及其序列，达到破译人类遗传信息的最终目的。
基因组计划精髓在于让人类解码生命、了解生命的起源、了解生命体生长发育的规律、认识种属之间和个体之间存在差异的起因、认识疾病产生的机制以及长寿与衰老等生命现象、为疾病的诊治提供科学依据。
1)草图，许多疾病相关的基因被识别；2)SNP（人与人之间的区别），草图提供了一个理解遗传基础和人类特征进化的框架。
3)草图后，研究人员有了新的工具来研究调节区和基因网络。
4)比较其它基因组可以揭示共同的调控元件，和其他物种共享的基因的环境也许提供在个体水平之上的关于功能和调节的信息。
分子生物学PPT思考题
分子生物学课堂思考题1、何谓中心法则？如何基于该法则来解释生物形状的遗传和变异？（10分）2、什么是遗传学中心法则?为什么说阮病毒的发现是对此法则提出了挑战?(5分)3、Phage P1 has a double-stranded DNA with 91.5kb1 how many turns does it contain?2 molecular mass? Dalton4、大肠杆菌染色体的分子量大约是2.5x109Da，核苷酸的平均分子量是330Da。
邻近核苦酸对之间的距离是0.34nm；双螺旋每一转的高度(即螺距)是0.34nm，(1) 该分子有多长(2) 该DNA有多少转?解答：1碱基＝330Da，1碱基对＝660Da碱基对数＝2.5×10000000000/660＝3.8×1000000 ＝3800kb 每个碱基对相距0.34nm，这样：染色体DNA分子的长度＝3.8×1000000×0.34nm ＝1.3×1000000 nm ＝1.3mm该DNA双螺旋中的转数＝3.8×1000000×0.34/3.4＝3.8×1000005、曾经有一段时间认为，DNA无论来源如何，都是4个核苷酸的规则重复排列（如ATCG．ATCG，ATCG，ATCG…)，所以DNA缺乏作为遗传物质的特异性。
你有什么想法来辨别这个观点的正误？6、是否只有DNA适合作为遗传物质?7、证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是：肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2噬菌体感染大肠杆菌。
这两个实验中主要的论点证据是：( )(a)从被感染的生物体内重新分离得到DNA,作为疾病的致病剂(b)DNA突变导致毒性丧失(c)生物体吸收的外源DNA(而并非蛋白质)改变了其遗传潜能(d)DNA是不能在生物体间转移的，因此它一定是一种非常保守的分子(e)真核生物、原核生物、病毒的DNA能相互混合并彼此替代8、DNA的变性：( )(a)包括双螺旋的解链(b)可以由低温产生(c)是可逆的(d)是磷酸二酯键的断裂(e)包括氢键的断裂9、病毒的遗传因子可包括1到300个基因。
分子生物学思考题
分子生物学思考题第二章基因的概念名词解释●Cistron顺反子：Cistron 是基因的同义词,基因是一个具有特定功能的，完整的，不可分割的最小的遗传单位 .基因是DNA分子的片段，是染色体上的一个区段●（recon）交换子：在一个顺反子内，有若干个交换单位，最小的交换单位称为交换子●(muton)突变子：在一个顺反子内，有若干个突变单位，最小的交换单位称为突变子●melting temperature(Tm值）：DNA分子变性一半时对应的温度／OD增加值的中点温度／DNA分子变性曲线中，增色效应达到最大值一半是的温度●Kinetic complexity（复性动力学的复杂性）：将最长的没有重复序列的核苷酸序列数定义为复性动力学的复杂性（简称K．Ｃ）●(Maximum C value)最大C值：单倍体基因组DNA 的核苷酸数●(Minimum c value)最小c值：编码结构基因的DNA的核苷酸数●Heterogeneous nuclear RNA (HnRNA)核内不均一RNA：间隔基因的转录产物ｍＲＮＡ是一条具有外显子和内含子的前体ｍＲＮＡ，也称核内不均一RNA，必须将内含子切除并将外显子连接才能成为成熟mRNA●Transposon 转座子：是基因组中可以移动的一段DNA序列，一个转座子从基因组的一个位置转移到另一个位置的过程称为转座。
可以转座的遗传单位称为转座子。
●retro-transposon 反转录转座子：反转座是由RNA介导的转座过程，转座子从DNA到RNA再到DNA的转移过程定义为反转座。
这类转座子也被称为反转座子★cis action element 顺式作用元件：真核生物基因组中含有可以调控自身基因表达的一段特异DNA序列。
顺式作用元件能够被各种转录调节蛋白特异识别和结合，从而影响基因表达活性。
包括启动子、增强子、沉默子等★transcriptional factor 转录因子（考过）：就是反式作用因子★trans action factor 反式作用因子能直接或间接与顺式作用元件的核心序列相互识别或结合，进而调控靶基因转录效率的一类调节蛋白，统称为反式（作用）因子，按其功能不同，可分为基本转录因子、转录调节因子、共调节因子★DNA denaturation DNA变性DNA的两条核苷酸链是由碱基对之间的氢键连接的，当天然DNA溶液被加热或受极端PH溶剂、尿素、酰胺等某些有机溶剂处理后，碱基对之间的氢键发生断裂或氢键形成关系发生改变，或碱基之间的对堆积力受到破坏，两条核苷酸链逐渐被彼此分离，形成无规则的线团，这一过程称之为变性，也称溶解（melting)★renaturation DNA(DNA复性)已发生变形的DNA分子溶液在逐渐降温的条件下，两条核苷酸链的配对碱基又重新形成氢键，恢复到天然DNA双螺旋结构，这一过程称之为复性，也称重退火（reannealing)★Exon/外显子真核生物结构基因中的编码区，非间隔区★Intron内含子真核生物结构基因中的非编码区，间隔区★overlapping gene 重叠基因不同基因共用一段相同的DNA序列★Repetitive gene重复基因：染色体上存在的多次拷贝的基因，是生命活动基本的功能相关的基因●Splitting Gene /interrupted gene间隔基因：真核生物的结构基因是由若干外显子和内含子相间隔排列组成的间隔基因★Jumping gene 跳跃基因能发生转座的独立遗传结构单位★pseudo gene假基因具有与功能基因相似的序列，但不能翻译有功能蛋白质的无功能基因，多存在与真核生物中。
分子生物学思考题
第一章1.基因：指表达一种蛋白质或功能RNA的遗传物质的基本单位，基因是遗传物质的最小功能单位。
2.分子生物学：是在分子水平研究生命现象的科学，是现代生命科学的共同语言。
它的核心内容是通过生物的物质基础-核酸--蛋白质--酶等生物大分子的结构-功能及其相互作用等的研究来阐明生命分子基础，从而探索生命的奥秘。
3.简述遗传学三大基本规律：一.孟德尔遗传定律：包括分离定律和自由组合定律分离定律：遗传性状是由遗传因子所控制，遗传因子在体细胞中成对存在，每对遗传因子中，一个来自母方，一个来自父方。
一个单位性状由一对遗传因子控制。
遗传因子之间存在显隐性关系。
形成配子时，两个遗传因子彼此分开，分别随机进入到不同的配子中，配子只含有成对遗传因子中的一个。
自由组合定律：当具有两对或多对相对性状的亲本进行杂交，在子一代产生配子时，在等位基因分离的同时，非同源染色体上的基因表现为自由组合。
连锁互换定律：原来为同一亲本所具有的两个性状，在F2中常常有连系在一起遗传的倾向。
4.列出一种证明DNA是遗传物质的实验证据：肺炎双球菌实验中，在加热杀死的S型菌中存在一种使活的R型菌转变成S型菌的因子，用一系列的化学和酶学方法把提取液中的蛋白质，类脂，多糖，RNA去掉并不影响转化，最后发现只要把纯化的S型菌的DNA加入到R型菌培养液中就足以导致转化的发生，证明DNA 是遗传物质。
第二章1.熟悉DNA的双螺旋结构。
2.什么是DNA的变性和复性，复性的条件是什么？变性：在高温，酸碱，某些化学试剂的作用下，双螺旋结构区的氢键断裂，成为单链的过程。
复性：变性单链DNA在适当的条件下，使彼此分开的链自发的重新结合，成为双螺旋结构的过程。
复性的条件：1.盐浓度必须高，足以使两链之间磷酸基团上负电荷的排斥力消失，通常用0.15~0.5mol/L的Nacl; 2.温度必须适当高，足以防止链内随即形成氢键，复性的最适温度比熔炼温度低20~25度。
3.了解加减法测定DNA序列的原理。
(完整word版)分子生物学思考题
第3章核酸的结构和功能DNA结构域：组蛋白：是真核生物体细胞染色质中的碱性蛋白质，富含精氨酸和赖氨酸等碱性氨基酸：H1、H2A、H2B、H3和H4。
核小体：是构成真核生物染色质的基本结构单位。
核基质：为真核细胞核内的网架结构。
30nm纤丝：核小体进行高度有序的组装，形成左手螺旋的螺线管。
每个螺旋约6个核小体。
H1组蛋白的功能：ⅰ稳定作用；ⅱ保护DNA免受核酸酶降解。
1、DNA双螺旋结构有哪些形式？说明其主要特点和区别。
A型、B型及Z型螺旋；A型螺旋比较粗短，碱基倾角大，大沟深度明显超过小沟；B型比较适中；Z型细长，大沟平坦，核苷酸构象顺反相间，螺旋骨架呈Z字形。
2、什么是DNA的拓扑异构体，它们之间的相互转变依赖于什么？一级结构相同（序列相同）而L值不同的环形DNA分子称为拓扑异构体，它们之间的相互转变依赖于DNA 的拓扑异构酶。
3、简述真核生物染色体的组成，它们是如何组装的？细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构。
DNA--核小体--30nm纤丝--核基质固定--压缩--染色体4、简述细胞内RNA的结构特点以及与DNA的区别。
P575、引起DNA变性的主要因素有哪些？核酸变性后分子结构和性质发生了哪些变化？1）加热；2）极端pH值；3）有机溶剂、尿素和酰胺等。
DNA双螺旋解链。
性质变化：DNA溶液的黏度大大下降、沉降速度增加、浮力密度上升、紫外吸收光谱升高、酸碱滴定曲线改变、生物活性丧失。
6、检测核酸变性的定性和定量方法是什么？具体参数如何？紫外吸收光谱的变化。
以50μg/ml DNA溶液在A260下测定，三者的A260数值为：双链DNA A260=1.00；单链DNA=1.37；游离碱基、核苷酸=1.6。
（结构越有序，吸收光越少）7、DNA的T m值一般与什么因素有关？Tm=4（G+C）+2（A+T）1）DNA的均一性（均质较小）；2）G-C碱基对的含量；3）介质中离子强度。
分子生物学思考题
分子生物学思考题：一、名词解释：（1）Molecular biology（2）基因座位（Gene locus）：（3）纯合子（homozygous）：（4）杂合子（heteroxygous ）：（5）野生型（wild type）:（6）突变型（mutant）:（7）写出四种脱氧核糖核酸的结构式（ATP，TTP，GTP，CTP）（8）转录(Transcription)（9）翻译（translation）（10）蛋白质一级、二级、三级、四级结构（11）载体（vector）（12）限制性内切酶（13）基因克隆（14）质粒（plasmid）（15）α-互补（16）DNA文库二、简答题：1.1944年， Oswald Avery 和他的同事证实了遗传物质是核酸，而非蛋白质，请简述Avery实验的原理及方法。
2.Francois Jacob非特异性核糖体假说实验验证的原理及实验方法。
3.DNA半保留复制的密度梯度实验的原理及方法。
4.原核生物启动子五个保守区域的特点？5.真核生物mRNA转录后加工过程？6.PCR引物设计的原则？7.锚定PCR的原理及方法？8.比较RFLP，RAPD，AFLP， SSR四种分子标记技术的优缺点。
9.作为载体的DNA分子需要具备哪4个条件？10.简述Ti质粒的特点及其衍生载体。
11.简述简并引物设计步骤。
三、论述题：1结合自已的研究领域，举例说明分子生物学知识在研究中的应用2简述PCR反应的五要素，并说明PCR实验中该五要素如何选择3简述荧光定量PCR的原理及方法，并举一实例说明其应用。
4 论述你对“后基因组时代”的理解。
分子生物学思考题答案
1.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？真核生物：①真核基因组庞大.②存在大量的重复序列.③大部分为非编码序列(>90％>.④转录产物为单顺反子.⑤是断裂基因，有内含子结构.⑥存在大量的顺式作用元件(启动子、增强子、沉默子>.⑦存在大量的DNA多态性.⑧具有端粒(telomere>结构原核生物：①基因组很小，大多只有一条染色体，且DNA含量少.②主要是单拷贝基因，只有很少数基因〔如rRNA基因〕以多拷贝形式存在.③整个染色体DNA几乎全部由功能基因与调控序列所组成；④几乎每个基因序列都与它所编码的蛋白质序列呈线性对应状态1.试述基因克隆载体进化过程.①pSC101质粒载体，第一个基因克隆载体②ColE1质粒载体，松弛型复制控制的多拷贝质粒③pBR322质粒载体，具有较小的分子量<4363 bp）.能携带6-8 kb 的外源DNA片段，操作较为便利b5E2RGbCAP④pUC质粒载体，具有更小的分子量和更高的拷贝数⑤pGEM-3Z质粒，编码有一个氨苄青霉素抗性基因和一个lacZ'基因⑥穿梭质粒载体，由人工构建的具有原核和真核两种不同复制起点和选择标记，可在不同的寄主细胞内存活和复制的质粒载体p1EanqFDPw⑦pBluescript噬菌粒载体，一类从pUC载体派生而来的噬菌粒载体2.试述PCR扩增的原理和步骤.对比DNA体内复制的差异.原理：首先将双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子，DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸、合适的Mg2+浓度和实验中提供的引物序列合成新生的DNA分子.DXDiTa9E3d步骤：①将含有待扩增DNA样品的反应混合物放置在高温<>94℃）环境下加热1分钟，使双链DNA变性，形成单链模板DNARTCrpUDGiT②降低反应温度<退火，约50℃），约1分钟，使寡核苷酸引物与两条单链模板DNA结合在靶DNA区段两端的互补序列位置上5PCzVD7HxA③将反应混合物的温度上升到72℃左右保温1-数分钟，在DNA聚合酶的作用下，从引物的3'-端加入脱氧核苷三磷酸，并沿着模板分子按5'→3'方向延伸，合成新生DNA互补链jLBHrnAILg与体内复制的差别：①PCR不产生冈崎片段②在高温条件下反应，不需要DNA解旋酶③PCR可经过多个循环④在体外进行，可调控xHAQX74J0X第六章1.基因敲除原理：又称基因打靶，通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点LDAYtRyKfE方法：高等动物基因敲除技术，植物基因敲除技术2.完全基因敲除和条件型基因敲除完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除细胞或者动植物个体中的靶基因活性，条件型基因敲除是指通过定位重组系统实现特定时间和空间的基因敲除Zzz6ZB2Ltk3.基因定点突变原理：通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列，用于研究某个<些）氨基酸残基对蛋白质的结构、催化活性以及结合配体能力的影响，也可用于改造DNA调控元件特征序列、修饰表达载体、引入新的酶切位点等dvzfvkwMI1方法：重叠延伸技术和大引物诱变法第七章1.乳糖操纵子的正负调控<—）阻遏蛋白的负调控①当细胞内有诱导物时，诱导物结合阻遏蛋白，此刻聚合酶与启动子形成开放式启动子复合物转录乳糖操纵子结构基因.②当无诱导物时，阻遏蛋白结合与启动子与蛋白质部分重叠不转录.rqyn14ZNXI<=）CAP正调控①当细胞内缺少葡萄糖时ATP→CAMP结合，CRP生成CAP与CAP位点结合，增前RNA聚合酶转录活性.②当有葡萄糖存在时CAMP分解多合成少，CAP不与启动子上的CAP位点结合RNA聚合酶不与操纵区结合无法起始转录结构基因表达下降EmxvxOtOco2.色氨酸可阻遏、可诱导操纵子3.真核与原核生物基因转录有哪些差异？<1）只有一种RNA聚合酶参与所有类型的原核生物基因转录，而真核生物有3种以上的RNA聚合酶来负责不同类型的基因转录，合成不同类型的、在细胞核内有不同定位的RNASixE2yXPq5<2）转录产物有差别.原核生物的初级转录产物大多数是编码序列，与蛋白质的氨基酸序列呈线性关系；而真核生物的初级转录产物很大，含有内含子序列，成熟的mRNA只占初级转录产物的一小部分6ewMyirQFL<3）原核生物的初级转录产物几乎不需要剪接加工，就可直接作为成熟的mRNA进一步行使翻译模板的功能；真核生物转录产物需要经过剪接、修饰等转录后加工成熟过程才能成为成熟的mRNAkavU42VRUs<4）在原核生物细胞中，转录和翻译不仅发生在同一个细胞空间里，而且这两个过程几乎是同步进行的，蛋白质合成往往在mRNA刚开始转录时就被引发了.真核生物mRNA的合成和蛋白质的合成则发生在不同的空间和时间范畴内y6v3ALoS897.蛋白质有哪些翻译后的加工修饰？其作用机制和生物学功能是什么？①N端fMet或Met的切除细菌蛋白质氨基端的甲酰基能被脱甲酰化酶水解，不管是原核生物还是真核生物，N端的甲硫氨酸往往在多肽链合成完毕之前就被切除.M2ub6vSTnP②二硫键的形成mRNA中没有胱氨酸的密码子，而不少蛋白质都含有二硫键，这是蛋白质合成后通过两个半胱氨酸的氧化作用生成的.二硫键的正确形成对稳定蛋白的天然构象具有重要的作用.0YujCfmUCw③特定氨基酸的修饰氨基酸侧链的修饰作用包括磷酸化、糖基化、甲基化、乙酰化、泛素化、羟基化和羧基化等.④切除新生肽链中的非功能片段eUts8ZQVRd由多个肽链及其他辅助成分构成的蛋白质，在多肽链合成后还需经过多肽链之间以及多肽链与辅基之间的聚合过程，才能成为有活性的蛋白质sQsAEJkW5T简述大肠杆菌基因组和真核生物基因组的主要区别答：1、真核生物基因组指一个物种的单倍体染色体组(1n>所含有的一整套基因.还包括叶绿体、线粒体的基因组. 原核生物一般只有一个环状的DNA分子，其上所含有的基因为一个基因组.2、原核生物的染色体分子量较小，基因组含有大量单一顺序<unique-sequences），DNA仅有少量的重复顺序和基因.真核生物基因组存在大量的非编码序列.包括：.内含子和外显子、.基因家族和假基因、重复DNA序列.真核生物的基因组的重复顺序不但大量，而且存在复杂谱系.3、原核生物的细胞中除了主染色体以外，还含有各种质粒和转座因子.质粒常为双链环状DNA，可独立复制，有的既可以游离于细胞质中，也可以整合到染色体上.转座因子一般都是整合在基因组中.真核生物除了核染色体以外，还存在细胞器DNA，如线粒体和叶绿体的DNA，为双链环状，可自主复制.有的真核细胞中也存在质粒，如酵母和植物.4、原核生物的DNA位于细胞的中央，称为类核<nucleoid）.真核生物有细胞核，DNA序列压缩为染色体存在于细胞核中.5、真核基因组都是由DNA序列组成，原核基因组还有可能由RNA组成，如RNA病毒.GMsIasNXkA第七章1.简述代谢物对基因表达调控的两种方式.答：①转录水平上的调控；②转录水平上的调控，包括mRNA加工成熟水平上的调控和翻译水平上的调控3.简述乳糖操纵子的调控模型.答：A、乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A 三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O，一个启动子P 和一个调节基因I. TIrRGchYzgB、阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I 基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O 处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶.所以，乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控. 7EqZcWLZNXC、CAP 的正性调节：在启动子上游有CAP 结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP 浓度升高，与CAP 结合，使CAP 发生变构，CAP 结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP 结合位点，激活RNA 聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶.D、协调调节：乳糖操纵子中的I 基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP 的正调控两种机制，互相协调、互相制约.lzq7IGf02E 5.什么是弱化作用？答：1.当培养基中色氨酸的浓度很低时，负载有色氨酸的tRNATrp 也就少，这样翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会很慢，当4区被转录完成时，核糖体才进行到1区<或停留在两个相邻的trp 密码子处），这时的前导区结构是2-3配对，不形成3-4配对的终止结构，所以转录可继续进行，直到将trp操纵子中的结构基因全部转录. zvpgeqJ1hk2.当培养基中色氨酸浓度较高时，核糖体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在4区被转录之前就到达2区，使2-3区不能配对，3-4区自由配对形成基一环终止子结构，转录被终止，trp操纵子被关闭.NrpoJac3v1怎么去掉模板呢？再简单的方法就是用DpnI酶，DpnI能够识别甲基化位点并将其酶切，我们用的模板一般都是双链超螺旋质粒，从大肠杆菌里提出来的质粒一般都被甲基化保护起来<除非你用的是甲基化缺陷型的菌株），而PCR产物都是没有甲基化的，所以DpnI酶能够特异性地切割模板<质粒）而不会影响PCR产物，从而去掉模板留下PCR产物，所以提质粒时那些菌株一定不能是甲基化缺陷株，不会那么凑巧吧，哈哈.关于第三个问题：直接把通过DpnI处理的PCR产物拿去做转化就行了，呵呵，然后再筛选出阳性克隆，并提出质粒，拿去测序<这个就不用我多说了吧），验证突变结果，一般都没问题的啦，我做了几十个突变了，到目前为止还没有做不出来的，呵呵，不要砸我啊.1nowfTG4KI要使动物中编码激素的基因在大肠杆菌中表达，通常遇到的问题有：(1>细菌的RNA聚合酶不能识别真核生物的启动子.(2>大多数真核基因有内含子，这些内含子在转录后从前体mRNA 中被切除而形成成熟mRNA.细菌细胞没有这样的机制来去除内含子.(3>有些真核生物的蛋白质是通过前体分子加工而来的，例如胰岛素就是通过加工去除前体分子内部的33个氨基酸残基而来，剩下的两段肽链分别形成胰岛素的a、b链.(4>产生的真核生物的蛋白质产物可以被细菌的蛋白酶所识别和降解.针对上述可能出现的问题，建议在克隆的过程中采取以下措施：①应将激素的编码序列置于含有核糖体结合位点和起始密码子ATG的细菌强启动子的附近(含有这种序列的载体称表达载体>.②可以以激素的mRNA为模板用反转录酶合成激素的基因.这种DNA不含内含子可插入到载体中进行克隆.此外，如果蛋白质序列短则可通过化学合成得到该基因.合成的基因应含起始密码ATG、通过该激素蛋白的氨基酸序列推测而来的编码序列，以及1~2个终止密码：ATG——————编码序列————————TGA TAG 现在，这个合成基因可被插入载体中.③有时加工过程可以在离体条件下进行.如果加工有困难，可以用合成基因，从而免除加工过程.④选用合适的突变型宿主从而防止蛋白酶水解.如果用酵母作为宿主上述许多问题都可以较容易地解决，尤其是现在有既能在大肠杆菌中又能在酵母中复制的穿梭质粒载体.说明：1>ATG,TAG和TGA是对应mRNA中的转录起始信号AUG和终止信号UAG,UGA的DNA序列.2>克隆生长素释放抑制因子基因时采用化学合成基因的方法.生长索释放抑制因子是一种由下丘脑分泌的激素，长14个氨基酸残基，因此人工合成的基因，包括在宿主菌中表达所需的转录的起始和终止信号，仅51bp长.fjnFLDa5Zo申明：所有资料为本人收集整理，仅限个人学习使用，勿做商业用途。
分子生物学思考题
分子生物学思考题绪论1.简述孟德尔、摩尔根和Wstson等人对分子生物学发展的主要贡献。
2.写出DNA、mRNA和siRNA的英文全名。
3.试述“有其父必有其子”的生物学本质。
4.早期主要有哪些实验证实DNA是遗传物质？写出这些实验的主要步骤。
5.定义重组DNA技术。
6.说出分子生物学的主要研究内容。
7.你认为本世纪初叶分子生物学将在哪些领域取得进展？第2章（染色体与DNA）1.染色体具备哪些作为遗传物质的特征？2.简述真核细胞内核小体的结构特点。
3.请列举3项实验证据来说明为什么染色质中DNA与蛋白质分子是相互作用的。
4.简述DNA的一、二、三级结构。
5.简述组蛋白都有哪些类型的修饰，其功能分别是什么？6.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？7.DNA双螺旋结构模型是有谁提出的？简述其发现的主要实验依据及其在分子生物学发展中的重要意义。
8.DNA以何种方式进行复制？如何保证DNA复制的准确性？9.简述原核生物DNA的复制特点。
10.什么是DNA的Tm值？它受哪些因素的影响？11.DNA复制时为什么前导链是连续复制，而后随链是以不连续的方式复制？请以大肠杆菌为例简述后随链复制的各个步骤。
12.真核生物DNA的复制在哪些水平上受到调控？13.细胞通过哪几种修复系统对DNA损伤进行修复？14.什么是转座子？可分为哪些种类？15.什么是SNP？SNP作为第三代遗传标记的优点。
第三章（生物信息的传递——从DNA到RNA）1.什么是编码链和模板链？2.简述RNA的种类及其生物学作用。
3.RNA的结构特点。
4.简述RNA转录的概念及其基本过程。
5.请比较复制与转录的异同点。
6.大肠杆菌的RNA聚合酶由哪些组成成分？各个亚基的作用？7.什么是闭合复合物、开链复合物及三元复合物？8.简述o因子的作用。
9.什么是Pribnow box？它的保守序列是什么？10.什么是上升突变？什么是下降突变？11.简述原核生物和真核生物mRNA的区别。
分子生物学思考题
2DNA从结构上来说是由脱氧核糖核苷单磷酸通过3'，5'磷酸二酯键连接而成的高聚物，从同一个磷酸基的3'酯键到5'酯键的方向定为链的方向。
在大多数天然DNA分子长链的两端，总是有一个核糖带有自由的5'—磷酸，而另一端的核糖带有自由的3'—羟基，前者称为5'—端，后者称为3'—端。
DNA链的方向就是从5'端到3'端。
34DNA的熔解温度即通过加热由双链变为单链这一系列温度的位于中部的那点)5自发突变是由于自然界的影响而发生，其产生原因是由于DNA复制发生错误或是由于环境的损伤6转换是一种突变，即指一种嘧啶被另一种嘧啶代替，一种嘌呤被另一种嘌呤代替，G-C对被A-T对替换，或者相反。
颠换是一种突变，即嘌呤被嘧啶代替或者相反，因此A-T对变成了T-A或C-G。
7突变热点是突变发生频率高的位点或重组频率高的那些位点8修饰碱基是除了那些在DNA(T、C、A、G)、RNA(U、C、A、G) 合成时的四种通用碱基之外的一些碱基，由核酸合成后修饰产生9DNA或RNA的变性描述它们从双链转变为单链的状态；链分开的过程经常伴随着加热过程10RNA和DNA链互补配对形成RNA-DNA杂合链的过程称为杂交11DNA双螺旋分子变性后的互补单链再结合成双链的过程称为复性3朊病毒是一种蛋白质样感染因子，虽然不含核酸但表现出可遗传的特性。
例如PrPSC，羊骚痒病和牛海绵体脑病。
PrPC - prion related protein,朊病毒相关蛋白—它是28kDa的疏水性球状蛋白。
正常脑组织中产物，并可被蛋白酶完全水解PrPSC - 被感染脑组织中的产物，不能被蛋白酶水解4羊瘙痒病是由蛋白质组成的感染剂5等位基因：是指位于染色体同一位置分别控制两种不同性状的基因。
eg：现有一基因型Aa，A和a就互为等位基因。
7功能获得型突变表示使蛋白质获得新的活性(或功能)，这种性质显性的。
分子生物学思考题答案
分子生物学思考题答案【篇一：现代分子生物学课后答案】=txt>第一章绪论1. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。
狭义：偏重于核酸的分子生物学，主要研究基因或dna的复制、转录、表达和调节控制等过程，其中也涉及与这些过程有关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。
分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。
所谓在分子水平上研究生命的本质主要是指对遗传、生殖、生长和发育等生命基本特征的分子机理的阐明，从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新的手段。
这里的分子水平指的是那些携带遗传信息的核酸和在遗传信息传递及细胞内、细胞间通讯过程中发挥着重要作用的蛋白质等生物大分子。
这些生物大分子均具有较大的分子量，由简单的小分子核苷酸或氨基酸排列组合以蕴藏各种信息，并且具有复杂的空间结构以形成精确的相互作用系统，由此构成生物的多样化和生物个体精确的生长发育和代谢调节控制系统。
阐明这些复杂的结构及结构与功能的关系是分子生物学的主要任务。
2. 分子生物学发展前景如何？21世纪是生命科学世纪，生物经济时代，分子生物学将取得突飞猛进的发展，结构基因组学、功能基因组学、蛋白质组学、生物信息学、信号跨膜转导成为新的热门领域，将在农业、工业、医药卫生领域带来新的变革。
3. 人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？社会意义：人类基因组计划与曼哈顿原子计划、阿波罗登月计划并称为人类科学史上的三大工程，具有重大科学意义、经济效益和社会效益。
（1）极大地促进生命科学领域一系列基础研究的发展，阐明基因的结构与功能关系、生命的起源和进化、细胞发育、生产、分化的分子机理，疾病发生的机理等，为人类自身疾病的诊断和治疗提供依据，为医药产业带来翻天覆地的变化（2）促进生命科学与信息科学、材料科学和与高新技术产业相结合，刺激相关学科与技术领域的发展，带动起一批新兴的高技术产业（3）基因组研究中发展起来的技术、数据库及生物学资源，还将推动对农业、畜牧业（转基因动、植物）、能源、环境等相关产业的发展，改变人类社会生产、生活和环境的面貌，把人类带入更佳的生存状态。
分子生物学思考题
分子生物学思考题第二章基因的概念1.名词解释（1）cistron：顺反子（2）cis action factor（3）trans action factor（4）DNA denaturation（6）melting temperature（7）Kinetic complexity（8）Maximum C value（9）Minimum c value（10）overlapping gene：重复基因（11）Repetitive gene：重叠基因（12）splitting gene：断裂基因（13）Exon（14）Intron（15）Heterogeneous nuclear RNA (HnRNA)（16）Jumping gene（17）pseudo gene：假基因（18）gene family（19）gene cluster：基因簇2.简答题（1）依据基因的可转录、翻译性对基因类型的划分，并举出适当的例子。
（2）DNA双螺旋结构的特点。
（3）影响双螺旋结构稳定性的因素。
（4）影响Tm值的因素（重点：盐浓度对Tm值的影响）。
（5）影响DNA复性过程的因素。
（6）举出三种不同的重叠基因的方式（7）根据不同组分所占基因组百分数（%）及C0t1/2的数值会计算不同组分的动力学复杂度、重复频率。
如：某种生物DNA的复性动力学显示存在三种组分，如下表所示：快速复性组分中速复性组分慢速复性组分占基因组百分数（%）25 30 45C0t1/2 0.0013 1.9 630 请计算每种组分的动力学复杂度（K.C），及快速复性组分和中速复性组分的重复频率（F）。
已知在此复性条件下，E.coli DNA的C0t1/2是12。
E.coli DNA的K.C=4.2×106。
（8）重复序列可分为哪几种类型？并举出适当的例子。
（9）是不是所有真核生物的基因都是间隔基因？请举出实例。
（10）插入序列的结构特点，及插入靶位点后靶位点序列的变化。
分子生物学思考题
分子生物学思考题医学细胞与分子生物学习题库一、名词解释3．基因组：细胞或生物体的整套(单倍体)遗传物质，称为基因组。
4．基因:合成有功能的蛋白质或RNA所必需的全部DNA序列（除部分病毒RNA），即一个基因不仅包括编码蛋白质或RNA的核酸序列，还应包括为保证转录所必需的调控序列。
5.微卫星DNA：6．基因文库:基因文库（genomic library）是指含有某种生物体（或组织、细胞）全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体。
9．基因表达的调控:机体的各种细胞中含有相同的遗传信息(相同的结构基因)，但并非在所有细胞中同时表达，而必须根据机体的不同发育阶段、不同的组织细胞及不同的功能状态，选择性、程序性地表达特定数量的特定基因，这就是基因表达的调控。
13．顺式作用元件: 指某些能影响基因表达但不编码新的蛋白质和RNA的DNA序列，按照功能分为启动子、增强子、终止子、沉默子和衰减子等。
14．SD序列:SD序列是与细菌16S rRNA 3，端互补的序列。
原核生物在起始密码AUG上游方向4-13个碱基之间有一段富含嘌呤的序列，其一致序列为AGGAGG，称为Shine-Dalgamo 序列（SD序列）。
15．分子克隆:同基因工程。
16．载体:载体是指能够将外源性DNA（目的DNA）片段引入宿主细胞并能在宿主细胞中进行自我复制或最终使外源性DNA表达的自主DNA。
17．反式作用因子:指能直接或间接地识别或结合在各顺式作用元件8-12bp核心序列上，参与调控靶基因转录效率的一组蛋白质，也称序列特异性DNA结合蛋白(sequence specific DNA binding protein，SDBP)，这是一类细胞核内蛋白质因子。
18．粘性末端:粘性末端，又称为粘端，是指双链DNA分子在RE 作用下，形成具有互补碱基的单链突出末端。
19．Cos位点:带有λ噬菌体粘性末端20．Cos质粒:粘粒（柯斯质粒）是人工构建的、具有质粒和λ噬菌体DNA载体双重性质的的杂种质粒。
分子生物学思考题
分子生物学思考题分子生物学考试重点（前四章+第七、八章）第一章一、DNA重组技术和基因工程技术（p12）答：DNA重组技术：将不同的DNA片段，按照人们的设计定向连接起来，于特定的受体细胞中和载体一起复制并得到表达，产生影响受体的新的遗传性状的技术。
基因工程技术：除DNA重组技术外还包括其他对生物细胞基因组结构进行改造的体系。
关键：工具酶的发现和应用前景：1、合成正常细胞中含量很低的多肽2、定向改造基因组结构3、进行基础研究二、请简述现代分子生物学的研究内容。
（第二版前言、p12标题）答：分子生物学：研究核酸等生物大分子的功能、形态、结构特征的重要性和规律性的科学，主要关心的是核酸在细胞生命过程中的作用，包括核酸的复制和保存、基因的表达和调控。
研究内容：DNA重组技术，基因的调控和表达，生物大分子的功能结构——结构分子生物学，基因组、功能基因组和生物信息学。
第二章一、核小体（P27）答：核小体：由H2A、H2B、H3、H4各两分子组成的八聚体和约200bp的DNA组成。
八聚体在内，DNA盘绕在外。
其是DNA压缩的第一步。
若用核酸酶降解核小体，只能得到约146bp的核心颗粒。
（另：H1在核小体的外面）核心颗粒：除去接头DNA的核小体单体，长度约146bp核小体单体：八聚体+200bpDNA组成，包括接头DNA二、DNA的半保留复制（p38）答：DNA在复制过程中，碱基间的氢键首先断裂，双螺旋解旋解链，每条单链分别作为模板合成新链。
新生成的DNA 分子与原DNA 分子的碱基顺序完全一样，这样每个子代分子的DNA一条单链来自模板链，另一条单链来自新合成的链，这种复制方式成为DNA的半保留复制。
三、转座子（p57）答：转座子是存在于DNA上的可以自主复制和移动的基本单位，其可以分为两大类：插入序列和复合型转座子，另外还有TnA家族。
四、DNA的一、二、三级结构特征。
（P32～p37）答：1、各级结构的定义：DNA的一级结构：指四种核苷酸的连接和排列顺序DNA的二级结构：指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构DNA的三级结构：在DNA双螺旋基础上进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构。
分子生物学实验思考题答案
分子生物学实验思考题答案分子生物学实验思考题答案实验一、基因组dna的提取1、为什么构建dna文库时，一定要用大分子dna?请问、文库的大小(即为数目)依赖于基因组的大小和片段的大小，片段大则文库数目大一些也可以涵盖99%甚至以上的基因组。
而文库数目大则便利研究人员操作方式和文库的留存。
所以构筑文库必须用随身携带能力小的载体克隆尽量小的dna片段.2、如何检测和确保dna的质量？答、用凝胶电泳看，有没有质白质和rna等物质的污染，还可以测od，用od260/280来判断，当od260/od280<1.8，表示蛋白质含量较高当od260/od280>2.0，表示rna含量较高当od260/od280=1.8～2.0，表示dna较纯。
实验二、植物总rna的抽取1、rna酶的变性和失活剂有哪些？其中在总rna的抽提中主要可用哪几种？请问、存有depc,trizol，氧钒核糖核苷复合物，rna酶的蛋白抑制剂以及sds，尿素，硅藻土等；在总rna抽取中用pepc,trizol2、怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化。
答、、利用成熟的mrna的末端具有polya尾的特点合成一段oligo(dt)的引物，根据碱基互补配对原则，可将mrna从总rna中分离出来实验四、大肠杆菌感受态细胞的制取1、感受态细胞制备过程中应该注意什么？请问、a）细菌的生长状态：不要用经过多次桥接或储于4℃的培育菌，最出色从-80℃甘油保与存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。
细胞生长密度以刚进入对数生长期时为宜，可通过监测培养液的od600来控制。
dh5α菌株的od600为0.5时，细胞密度在5×107个/ml左右，这时比较合适。
密度过高或不足均会影响转化效率。
b）所有操作方式均应当在无菌条件和冰上展开；实验操作方式时必须格外小心，漂浮细胞时必须柔和，以免导致菌体断裂，影响转变。
c）经cacl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加，d）化合物及无机离子的影响：在ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如mn2+或co2+）、dmso或还原剂等物质处理细菌，可使转化效率大大提高（100-1000倍）；e）所使用的器皿必须干净。
现代分子生物学黑板思考题520
现代分子生物学黑板思考题520分子生物学思考题及参考答案第一章绪论1、什么是基因组？什么是蛋白质组？请具体分析两者的特点以及两者之间的关系。
答：基因组（Genome），一般的定义是单倍体细胞中的全套染色体为一个基因组，或是单倍体细胞中的全部基因为一个基因组。
可是基因组测序的结果发现基因编码序列只占整个基因组序列的很小一部分。
因此，基因组应该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA 分子。
具体讲，核基因组是单倍体细胞核内的全部DNA 分子；线粒体基因组则是一个线粒体所包含的全部DNA 分子；叶绿体基因组则是一个叶绿体所包含的全部DNA 分子。
蛋白质组(Proteome)提出，指由一个细胞或组织的基因组所表达的所有蛋白质. 蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别，它随着组织、甚至环境状态的不同而改变.在转录时，一个基因可以多种mRNA 形式剪接，并且同一蛋白可能以许多形式进行翻译后的修饰. 因此，一个蛋白质组不是一个基因组的直接产物，蛋白质组中蛋白质的数目有时可以超过基因组的数目。
第二章核酸的结构与功能1、维持或影响双螺旋结构的稳定因素。
P2①氢键作用，弱键加热解链②磷酸二酯键，强键，需要酶降解③静电斥力，在一定离子强度下可以削弱如0.2mol/l的氯化钠溶液④碱基堆积力包括范德华力，疏水作用力2、DNA结构多样性及原因。
2、DNA结构多样性及原因。
答：脱氧核苷酸的含氮碱基的不同,碱基对的排列顺序不同,碱基的数目不同。
DNA二级结构的多态性：除B型DNA外，还发现了A型DNA 和Z型DNA，这一现象称为DNA的多态性；产生的原因在于多核苷酸链的骨架含有许多可以转动的单链，从而可以使糖环采取不同的构象。
3、十字架结构形成的原因。
答：在双链DNA中，如果两条互补的链分开，每条链上的互补序列就有机会发生碱基互补配对形成发夹结构（对单练而言），两个相对的发夹结构形成了十字架构型（对双链而言）。
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思考题
名词解释
分子生物学医学分子生物学半保留复制转录翻译基因表达基因调控PCR 引物逆转录逆转录酶工具酶克隆载体基因文库cDNA文库YAC噬菌体文库分子杂交Southern印迹杂交 Northern印迹杂交 FISH 探针缺口平移基因芯片表达谱芯片诊断芯片检测芯片基因工程遗传工程 SD-序列启动子内含子外显子多克隆位点 RNA聚合酶基因诊断基因治疗反义RNA 核酶三链DNA转基因动物基因打靶基因敲出基因组基因组学 HGP 蛋白质组蛋白质组学
问答题
1.分子生物学与生物化学的有何联系和区别？
2.分子生物学研究的主要内容？
3.分子生物学在医学上有哪些应用？
4.21世纪分子生物学发展的趋势怎样？
5.试述DNA的复制过程。
6.试述原核生物RNA的生物合成
7.试述真核生物RNA的生物合成
8.试述原核生物蛋白质的生物合成
9.试述真核生物蛋白质的生物合成
10.简述原核生物基因表达的调控
11.试述真核生物基因表达的调控
12.试述PCR的概念及原理
13.怎样进行PCR的引物设计？
14.试述RT-PCR的原理
15.试述基因文库概念及其意义
16.基因文库构建的策略
17.基因文库构建的步骤
18.试述分子杂交的概念、原理
19.分子杂交的方法有哪几种？
20.试述原位杂交的原理
21.目前常用的探针有哪几种？
22.探针标记的方法有哪几种？
23.基因芯片的概念及其原理
24.DNA芯片的种类
25.基因芯片的应用
26.基因工程的概念与原理
27.基因工程的步骤
28.何谓融合表达和非融合表达？
29.试述外源基因表达的几种系统
30.转基因动物的基本原理和基本方法
31.转基因动物的意义
32.基因打靶的必备条件
33.基因敲除的基本程序
34.基因打靶在医学上的应用
35.基因诊断基本方法与技术
36.基因治疗研究的主要内容和策略
37.基因组学主要研究内容
38.人类基因组计划主要内容和意义
39.蛋白质组学主要研究内容
40.蛋白质组计划的意义。