TEM操作步骤及注意事项
透射电镜生物样本制备流程及注意事项
透射电镜生物样本制备流程及注意事项透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种使用电子束而不是光束进行成像的显微镜。
它可以提供高分辨率的图像，因此被广泛应用于生物样本的观察和研究。
然而，由于其特殊的工作原理和生物样本的复杂性，透射电镜生物样本的制备过程需要注意一些关键的步骤和细节。
下面将逐步介绍透射电镜生物样本制备流程及注意事项。
一、样品固定1.选择合适的固定剂：固定剂的选择应根据所研究的样本类型和要观察的细胞结构而定。
常用的固定剂包括戊二醛（glutaraldehyde）、乙酰化亚胺（acrolein）、纤维蛋白素（formaldehyde）等。
2.采取合适的固定时间和固定温度：固定时间和温度应根据固定剂的要求和样本的特性进行优化。
通常情况下，固定时间为数小时至数天，温度在4℃至25℃之间。
3.注意透射电镜样品的固定深度：样品应保持较小的厚度以便透射电子束的穿透。
二、样品剖解1.剖解细胞膜：通常采用超声波振荡或冷冻断裂等方法来剖解细胞膜。
超声波振荡可用于含有细胞膜的细胞或组织，而冷冻断裂则适用于脆弱细胞和膜脂体系。
2.剖解细胞核：利用离心裂解法可以将细胞核分离出来。
离心裂解可分为机械法和渗透法两种，机械法利用高速离心的作用将细胞核分离，而渗透法则是通过渗透剂将细胞核溶胀并破碎。
三、样品固化1.脱水：样品在固定后需要进行脱水处理，以便在后续的步骤中更好地渗透和浸透。
常用的脱水剂有乙醇、丙酮和乙醚等，脱水过程往往需要进行多次重复。
2.浸透：在脱水后，样品需要在树脂中进行浸透，使其固化为坚硬的样品。
通常采用环氧树脂或比较稳定的丙烯酸树脂来进行浸透。
这一步骤通常需要较长时间，如数小时甚至数天。
3.树脂填充：浸透后的样品需要在模具中进行树脂填充，并在适当的温度下进行固化。
树脂填充的过程需要注意排除气泡和避免过度填充。
四、样品切片1.选择合适的切割工具和方法：样品通常使用切片机和切片刀进行切割。
透射电子显微镜的使用注意事项与维护技巧
透射电子显微镜的使用注意事项与维护技巧透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种先进的科学仪器，广泛应用于材料科学、生物学、纳米科学等领域。
其较高的分辨率和强大的放大能力使其成为研究微观世界的重要工具。
然而，在使用TEM时，我们需要注意一些问题并掌握一些维护技巧，以确保其正常运行和延长使用寿命。
首先，使用TEM时我们需要注意的是操作步骤的正确性。
在进行样品准备和导入过程中，需要避免给样品带入任何有损于照射电子束的杂质。
此外，在样品的切割、制备和导入过程中，温度和湿度的控制也非常重要。
过高或过低的温度和湿度都可能对样品的结构产生影响，并导致实验结果的不稳定性。
因此，在操作过程中需掌握适宜的温湿度条件，确保样品的最佳状态。
其次，对于透射电子显微镜的使用，我们需要注意仪器的保养和维护。
TEM的内部部件非常精密，如透射电子源、物镜、投影镜片等，需要保持干净和良好的工作状态。
定期清洁这些部件，移除上面的灰尘和污垢，可以提高显微镜的分辨率和成像质量。
同时，对于TEM的真空系统也需要定期检查和维护。
保持真空度的稳定对于电子束的传输以及样品的分析非常重要，因此，我们需要定期清理真空系统，修复或更换损坏的密封件等。
此外，透射电子显微镜的使用过程中，也需要关注电子束对样品的辐射损伤。
当电子束经过样品时，会产生一定的散射和轰击效应，如果能量过高或时间过长，可能会对样品造成永久性损伤，影响后续的研究分析。
因此，在使用TEM时，我们需要合理控制电子束的照射能量和时间，并选择适宜的显微镜参数，以减少对样品的辐射损伤。
此外，TEM的使用也需要注意样品的选择和准备。
不同样品有不同的特点和要求，我们需要根据不同的研究目标选择适宜的样品和样品制备方法。
在样品的制备过程中，需要遵循一些基本原则，如保持样品的超薄和均匀性，避免产生凝胶、裂痕和杂质等。
只有准确选择和制备好样品，我们才能得到可靠的成像和分析结果。
透射电镜制样步骤以及注意事项
透射电镜制样步骤以及注意事项透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是目前最常用的高分辨率电子显微镜，可以用于观察物质的微观结构。
制备TEM样品的过程非常重要，下面将详细介绍TEM制样的步骤以及需要注意的事项。
制备TEM样品的步骤一般包括样品的选择、固定与固化、切片、薄化、网格制备和贴膜等。
第一步是样品的选择，样品应具有研究价值且适合观察。
例如，生物样品可以是细胞、组织或器官的薄片，金属样品可以是扁平的块状、粉末或薄膜等。
第二步是固定与固化。
对于生物样品，常用的固定方法包括浸泡法、灌注法和切片冷冻法；对于无机样品，可以使用固定剂将样品固定在固定剂中。
第三步是切片。
将固定好的样品切割成薄片，一般要求薄片的厚度在100 nm以下，通常使用超薄切片机来进行切割。
第四步是薄化。
将切割好的样品进行薄化处理，使其达到TEM观察所需的薄度。
常见的薄化方法有机械薄化、电化学薄化和离子薄化等。
第五步是网格制备。
将薄化好的样品放置在铜网格上，网格的选取应该根据所研究样品的性质和需要进行选择。
最后一步是贴膜。
将组织切片或带有样品的网格进行贴膜，以保护样品并提高图像的对比度。
在以上步骤中，需要注意的事项有：1.样品在制备过程中要避免受到污染或氧化，尽量在纯净无尘的环境中进行操作。
2.固定剂的选择要合理，不同的样品可能需要使用不同的固定剂，应根据需要进行选择。
3.切片时要注意刀片的尖锐度和切割角度，以免对样品造成损伤或变形。
4.薄化过程中要控制好加工参数，以保证样品的均匀薄化。
5.制作网格时应选择合适的网格尺寸和类型，以适应观察需求。
6.贴膜时要使薄膜均匀平整，并避免出现气泡或杂质。
总之，TEM制样是一项复杂而关键的过程，要保证样品的质量和可观察性，需要仔细选择方法、控制操作参数、注意样品的保护与处理。
合理的样品制备能够获得高质量的TEM图像，并提供准确的实验数据和结论。
TEM-操作规范(DOC)
TEM 操作程序 （笔记）1. 检查仪器是否运行正常① 查看仪器控制面板上的指示灯（正常情况为On 灯灭，Off 、Vac 和HT 灯亮）。
②查看样品台的指示灯（正常情况指示灯不亮）。
③检查空调、冷却水机、空气压缩机、不间断电源及其他相关设备仪表的工作状况，确保其正常运行。
④检查实验器材（样品杆、镊子、杜瓦瓶、投影室视窗）是否有损坏。
⑤ 检查仪器使用日志。
二、登陆用户界面（User Interface ）1.在登陆界面输入用户名和密码（直接进入，现在没设）。
2.启动主程序Tecnai User Interface （一般是开启状态）。
3.再次检查仪器是否处于正常状况。
①确认Column Valves Closed 按钮处于关闭状态（黄色）。
② 查看真空和高压值是否正常：真空：在Tecnai User Interface 软件中，在Setup→Vacuum 控制面板中：Gun(1), Column(6), Camera(30-32)的压力指示条都应该是绿色的才为正常。
高压：在TecnaiUser Interface 软件中，在Setup→HighTension 控制面板中：在正常情况下，High Tension 指示条为黄色，高压指示值为200kV （高压平时一直加到200kV ）。
FEG Control 控制面板中，Operate 是黄色的（灯丝开启状态）。
③ 查看样品台位置是否正常。
<注意事项>62001.Vacuum中，Status显示为COL.V ALVES，Gun的真空值必须为1，Column值必须为6，camera值小于40。
2.如果出现红色，数值为99，说明仪器真空破坏，不得进行实验。
3.High Tention必须为黄色，数值为200kV。
4.FEG中Operate必须为黄色。
5.无报警符号出现。
6.若样品位置X，Y，Z，A，B不为0，需要进行归零。
三、装液氮1.将投影室视窗用挡板挡住。
透射电镜(TEM)讲义
05
TEM操作与注意事项
操作步骤与技巧
01
02
03
04
准备样品
选择适当的样品，进行适当的 处理和固定，以确保观察效果 最佳。
调整仪器参数
根据观察需求，调整透射电镜 的加速电压、放大倍数等参数 ，以达到最佳观察效果。
操作步骤
按照仪器操作手册的步骤进行 操作，包括安装样品、调整焦 距、观察记录等。
技巧
定量分析方法
颗粒统计
对图像中颗粒的数量、大 小和分布进行统计，计算 颗粒的平均尺寸和粒度分 布。
电子衍射分析
利用电子衍射技术分析晶 体结构和相组成，确定晶 格常数和晶面间距。
能谱分析
通过能谱仪测定图像中各 点的元素组成和相对含量， 进行定性和定量分析。
04
TEM图像解析实例
晶体结构分析
利用高分辨的TEM图像，可以观察到晶体内部的原 子排列和晶体结构，如面心立方、体心立方或六方 密排结构等。
掌握操作技巧，如正确使用操 作杆、合理利用观察窗口等， 以提高观察效果和效率。
仪器维护与保养
定期清洁
定期对透射电镜进行清 洁，保持仪器内部和外
部的清洁度。
检查部件
更换消耗品
定期检查透射电镜的部 件，如电子枪、镜筒等，
确保其正常工作。
根据需要，及时更换透射 电镜的消耗品，如真空泵
油、电子枪灯丝等。
保养计划
在操作透射电镜时，应严格遵守操作规程， 确保仪器和人身安全。
THANK YOU
感谢聆听
80%
观察模式
根据观察目的选择不同的观察模 式，如明场、暗场、相位对比和 微分干涉等。
图像解析与解读
01
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tem 衍射斑 标定 标尺
tem 衍射斑标定标尺
【引言】
作为透射电子显微镜（TEM）的重要操作之一，衍射斑标定标尺对于保证TEM分析结果的准确性和可靠性具有至关重要的作用。
标定过程看似复杂，但只需掌握基本原理和方法，即可轻松完成。
本文将详细介绍TEM衍射斑标定的相关知识。
【二、tem衍射斑标定的原理】
要了解TEM衍射斑标定，首先需要了解衍射斑的形成原理。
当电子束照射到晶体上时，晶体中的原子会对其产生衍射，形成衍射斑。
标定的目的就是为了确定电子束与样品之间的距离关系，从而实现对样品的高分辨率成像。
【三、标定过程及注意事项】
在进行TEM衍射斑标定时，首先需要准备标定样品，通常选择具有高度规律性的样品，如多晶硅或金属网格。
接着选择适当的标定模式，如点阵标定、球差标定等。
在标定过程中，需要关注标定结果的准确性和可靠性，避免因操作不当导致的误差。
【四、标尺的选择和使用】
标尺是标定过程中的重要工具，选择合适的标尺对于获得准确的标定结果至关重要。
标尺的种类繁多，有单晶标尺、多晶标尺、薄膜标尺等。
在使用标尺时，需要根据实际需求选择合适的标尺，并确保其干净、无划痕，以便正确测量衍射斑的位置。
【五、标定在tem分析中的应用】
在TEM分析中，影响成像质量的因素众多，如电子束的聚焦、散焦、球差等。
通过衍射斑标定，可以有效校正这些因素，提高成像质量。
同时，标定结果也会对TEM分析结果产生影响，如晶格参数的测量、薄膜厚度的计算等。
【六、总结】
总之，TEM衍射斑标定在TEM分析中具有重要意义。
只有掌握了标定的原理和方法，才能保证TEM分析结果的准确性和可靠性。
《TEM操作培训》课件
04 TEM操作注意事项
CHAPTER
安全注意事项
确保操作区域安全
01
在操作TEM（透射电子显微镜）时，应确保操作区域没有障碍
物，避免人员和物品与设备发生碰撞。
遵守安全操作规程
02
在进行TEM操作前，应仔细阅读并遵守设备的安全操作规程，
确保正确使用设备。
避免高电压和高电流
03
在操作过程中，应避免高电压和高电流对人员和设备造成伤害
数据存储与备份
及时存储数据
在观察和记录TEM图像时，应及时将数据存储在稳定的存储介 质上，如硬盘或云端存储。
定期备份数据
为防止数据丢失，应定期备份存储的数据，并确保备份数据的可 读性和可用性。
加密存储和备份数据
为了保护数据的机密性和完整性，应对存储和备份的数据进行加 密处理，以确保数据的安全性。
05 实践操作与案例分析
，特别是在调节电压和电流时。
设备维护与保养
定期检查设备状态
在使用TEM后，应定期检查设备 的状态，包括电子显微镜的镜头
、真空系统和照明系统等。
清洁设备表面
应定期清洁设备的表面，保持设备 的清洁度，避免灰尘和污垢对设备 造成损害。
定期更换消耗品
在操作过程中，某些部件会逐渐磨 损或消耗，如灯丝和真空过滤器等 ，应定期更换以确保设备的正常运 行。
样品制备方法
总结词
样品的制备是TEM操作中的关键步骤，直接影响观察结果的准确性和可靠性。
详细描述
样品制备是TEM操作中的重要环节，需要采用一系列精细的制样技术。这包括将样品切成薄片、进行 减薄处理、以及在特定环境中进行保护和固定等步骤。制备良好的样品能够提供更清晰、更准确的观 察结果，并有助于提高实验的可重复性。
TEM-2010操作步骤总结,可借鉴
透射电镜培训‐操作步骤总结先看冷却水水箱温度。
设定值是18℃。
正常在27℃以下都可以，高于27℃的时候，最好灭灯丝关lens，等一段时间，等到水箱温度降低之后，再接着做，以免电镜过热停机。
记录初始真空值以及各种附件。
上样品准备工作：样品杆分为单倾和双倾。
使用V栅样品时，要保证在电镜中V栅正面朝上。
单倾台上V栅的时候，正面朝上；双倾台上V栅的时候，反面朝上。
V栅反面边缘是亮的。
操作步骤：先用洗耳球将工作台面吹干净，将电镜纸摊开，放在合适的位置（离桌面边缘15厘米左右），左手按住纸的中心下部边缘，用洗耳球吹净。
将样品盒拿到合适的位置，打开，左手拿出样品杆，右手将支架取出，注意支架放的位置，支架右端位于电镜纸偏右3/4处，下边缘压住电镜纸的上边缘。
然后将样品杆放在支架上。
注意密封圈要在右边支架外面。
左手拿样品杆尾部，右手抬着样品杆中部，左手放手之后，攀到右手右边，左手抬着样品杆，然后右手扶住托盘，调整位置。
注意事项：样品杆上的帽要拔，不要转，拔的时候右手虎口冲向样品杆，以免拔掉帽之后手碰到样品杆，造成污染。
样品杆放在架子上的时候，不要碰到密封圈。
样品杆的盒子要锁好，移动之前先检查是否锁上。
上下样品的时候要坐着，坐稳。
每做一步都要将用完的东西整理好再做下一步。
怎么稳当怎么做，不要怕麻烦。
样品杆的帽拔掉之后，手不要再从样品杆上面过，要从旁边绕。
上样品杆：条件：1.看零；2.6灯OK；3.各个皮拉尼规的示数位于平衡值；4.离子泵运行指示灯亮。
动作即相应变化：第1步：将测角台上的开关置于pump，真空表置于SPEC 位置，准备好倒计时。
将样品杆上的销与测角台上的槽对好位，缓慢将样品杆送入预抽室，等销进去之后，用右手手掌将样品杆推进去，推到黄灯指示灯亮。
然后等到听到机械泵工作的响声之后，放手。
这时看真空表读数，指针从右向左移动，开始计时20分钟，看绿色指示灯是否亮，这两个条件都满足后，进行下一步。
这一步阀门变化：首先是机械泵抽预抽室，V2,V5B,V13关闭，V14,V12,V21开，之后扩散泵抽预抽室，V14，V12关，V8，V13开。
TEM操作步骤及注意事项
精品文档FEI TECNAI20透射电镜目录电镜操作面板................. - 2 - 使用步骤：................... - 4 -一.放置样品................ - 4 -二.合轴.................... - 4 -三.拍形貌.................. - 5 -四.踩带轴.................. - 6 -五、拍衍射................. - 6 -六、能谱分析............... - 7 -七、高分辨................. - 7 -八、拔样品杆及关机......... - 8 -电镜操作面板镜筒注意事项1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：一.放置样品1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
旋入样品杆时，要一手拿着，一手托着，放置进入过快。
然后点Tube on。
然后点Col Values Closed。
检查4．关灯，取下蒙皮。
5.点击→Search，即可看到样品所在位置。
开始找样品中心空洞。
二.合轴1.在Spot size为1，低倍（6200X或8700X）下找到薄区（朝着光亮处找）。
然后调焦。
选择最佳物镜电流值92.5854（按Eucentric focus）。
TEM-操作规范
查看仪器控制面板上的指示灯（正常情况为On 灯灭，Of 、Vac 和 HT 灯亮）。
A 口口查看样品台的指示灯（正常情况指示灯不亮）检查空调、冷却水机、空气压缩机、不间断电源及其他相关设备仪表的工作状况，确保 其正常运行。
检查实验器材（样品杆、镊子、杜瓦瓶、投影室视窗）是否有损坏。
检查仪器使用日志。
二、登陆用户界面（User In terface ）在登陆界面输入用户名和密码（直接进入，现在没设）。
启动主程序 Tec nai User In terface （一般是开启状态）。
再次检查仪器是否处于正常状况。
确认Column Valves Closed 按钮处于关闭状态（黄色）。
查看真空和高压值是否正常：真空：在Tec nai User In terface 软件中，在 Setup Vacuum 控制面板中：Gun ⑴，Column （6）, Camera （30-32）的压力指示条都应该是绿色的才为正常。
高压：在 TecnaiUser In terface 软件中，在 Setup HighTe nsio n 控制面板中：在正常情况 下，High Tension 指示条为黄色，高压指示值为 200kV （高压平时一直加到 200kV ）。
FEG Control 控制面板中，Op erate 是黄色的（灯丝开启状态）。
查看样品台位置是否正常。
＜注意事项＞1. TEM 操作程序（笔记）检查仪器是否运行正常1. 2. 3.① ② ③d I --I T和 心 1代 ■■ Vrm ■上二^—-3*5 1 石.I I -J 1 I I . r1 绘I I ・■■* . ■■ ▼JnT£M Bn^nt AridSA 逊B[ it 宙.a 二a. 皿*曲 _1. 2. 3. 4. 5. 6. Vacuum 中，Status 显示为COL.V ALVES , Gun 的真空值必须为 1, Column 值必须为6, camera值小于40。
TEM操作步骤及注意事项
FEI TECNAI 20透射电镜目录电镜操作面板...................................... - 2 - 使用步骤：.......................................... - 4 -一.放置样品 ..................................... - 4 -二.合轴 ............................................. - 4 -三.拍形貌 ......................................... - 5 -四.踩带轴 ......................................... - 6 -五、拍衍射 ...................................... - 6 -六、能谱分析 .................................. - 7 -七、高分辨 ...................................... - 7 -八、拔样品杆及关机 ...................... - 8 -电镜操作面板镜筒注意事项1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：一.放置样品1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview ，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close ，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
扫描电镜操作注意事项
4. 样品脱水干燥贴牢后，需放置玻璃密封真空（加干 燥剂）干燥器皿内。样品喷镀后，最好当天观察， 照相,如看不完，还需放干燥器中密封真空保存，防 灰尘潮气进入。最好勿超过3个月。 5. 因条件有限，无临界点干燥仪，我们采用六甲基二 胺烷（HMDS）代替临界点干燥仪，优点是快速经 济，不受仪器限制，看普通标本，组织细胞支架材 料，与常规临界点干燥处理效果基本一致；看精细 材料（ECM）的分辨率还是有差距。 6. 胶原纤维样品梯度脱水前的漂洗液我们采用无菌的 三蒸水洗2次，防止盐结晶沉积在样品表面，影响 与超微纳米胶原的混淆。
扫描电镜样品的制做与观察
解放军总医院骨科研究所 黄靖香
目的
随着组织工程技术的发展兴起，如支架材料 的制作后，需观察样品中的孔径大小 ，与细 胞的相融性，生长形态变化等。用扫描电镜 观察获得清晰图像，是重要的检测手段之一。
电子显微镜分透射和扫描电镜两种，透射电 镜（TEM）是观察样品中的内部结构：如细 胞器等；扫描电镜（SEM）可观察样品中的 表面形态结构。
1. 材料准备、液体配制： 1）玻璃器皿需泡酸、蒸溜水清冼后灭菌备用。 2）磷酸缓冲液（PBS-0.1M PH-7.4）配制：磷 酸二氢钠2.964g , 磷酸氢二钠29.011g加三蒸水 1000ml，也可用不加酚红无菌Dhankes液代替。 3）固定液的配制：用PBS缓冲液配成2.5%戍 二醛和1%的四氧化锇。
二. 比较不同干燥方法的优缺点
材料分类 A 单纯支架材料：看孔隙率和孔径大小分布，用普通冷冻 干燥机冷冻干燥法干燥48h的支架→粘贴后→喷金上机观 看
干燥喷镀上机观察
B.活细胞不处理环镜扫描直观看细胞
活细胞环镜扫描图
C. 细胞常规梯度脱水：用冷冻干燥机处理 细 胞收缩，断裂，立体感差。
TEM操作步骤及注意事项教学提纲
精品文档FEI TECNAI 20透射电镜目录电镜操作面板...................................... - 2 - 使用步骤：.......................................... - 4 -一.放置样品 ..................................... - 4 -二.合轴 ............................................. - 4 -三.拍形貌 ......................................... - 5 -四.踩带轴 ......................................... - 6 -五、拍衍射 ...................................... - 6 -六、能谱分析 .................................. - 7 -七、高分辨 ...................................... - 7 -八、拔样品杆及关机 ...................... - 8 -电镜操作面板镜筒注意事项1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：一.放置样品1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview ，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close ，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
TEM操作培训
6
基础知识介绍
TEM原理：介绍TEM的工作原理 和基本结构
操作步骤：详细讲解TEM的操作 步骤和注意事项
样品制备：介绍样品制备的方法 和技巧
数据分析：讲解如何分析和解释 TEM的数据结果
操作流程讲解
开机操作：按照说明书操 作，启动仪器
测试操作：按照说明书操 作，进行测试
关机操作：按照说明书操 作，关闭仪器
14
培训后的反馈收集
收集学员对培训内容的反馈 收集学员对培训效果的反馈 收集学员对培训方式的反馈 收集学员对培训时间的反馈
培训效果的持续跟踪
定期检查操作员 的操作技能和理
论知识
收集操作员的反 馈和建议，对培 训内容进行改进
组织定期的考核 和评估，确保操 作员的技能水平
提供持续的支持 和指导，帮助操 作员解决在实际 操作中遇到的问
题
培训内容的更新与完善
定期更新培训资料，确保内 容的准确性和时效性
根据学员反馈，及时调整培 训内容
增加实操演练，提高学员的 动手能力
邀请行业专家进行分享，拓 宽学员的视野和知识面
YOUR LOGO
感谢您的观看
汇报人：XX
18
确保实验安全：培 训可以帮助员工了 解TEM的安全操作 规程，避免实验过 程中的安全隐患。
促进团队合作：通 过培训，员工可以 更好地了解TEM的 操作流程，促进团 队之间的合作与沟 通。
提高实验质量：通 过培训，员工可以 更好地掌握TEM的 操作技巧，提高实 验数据的准确性和 可靠性。
PRT 02
上级领导
实际操作演示
开机和关机步整 数据分析和报告生成
PRT 03
TEM操作培训的效果评 估
TEM简介
TEM简介1.操作事项（1）检查仪器是否运行正常。
（2）登录用户界面。
（3）装液氮。
①将投影室视窗用挡板挡住。
②戴上手套，将液氮小心地倒入杜瓦瓶中（不要装满），慢慢将铜辫伸入杜瓦瓶中，并将杜瓦瓶安置在支架上。
③将瓶中的液氮装满，并盖上盖子。
④往能谱罐中加满液氮（一般不用此操作）。
（4）装样品。
将待测样品装入样品杆，样品正面需朝下。
样品杆有两种类型：单倾：只能在A方向倾转；双倾：在A，B两个方向都能倾转，如不需倾转样品，请选择单倾样品杆。
①选择单倾样品杆，取下前端套筒。
②检查样品杆尖端以及夹具是清洁干燥的。
③保持一只手顶在样品杆的末端，确保它不会移出套管。
④将（套管支持架上其中一个孔中的）工具插入到夹子前面的孔中，然后提起夹子到最大可能的角度。
⑤将样品正面朝下，放在样品杆尖端圆形的凹槽处。
⑥用工具把夹子小心地降到样品之上，并确保样品保持在正确位置。
样品安全夹子必须小心地放低，否则，样品和夹子会被损伤，将样品杆旋转180o，轻敲套管，确保样品不会掉落。
双倾样品杆：①选择双倾样品杆，取下前端套筒。
②检查样品杆O圈是清洁干燥的。
③保持一只手顶在样品杆的末端，确保它不会移出套管。
④用六角棒将样品固定螺母旋下，并取出垫圈（垫圈可以不用）。
⑤将样品正面朝下，放在样品杆O。
（5）进样。
①再次确认样品的x，y，z，A，B五个坐标近似为零。
如果不为零，点击Holder进行归零。
②确认样品台的红灯熄灭（如果红灯是亮的，应点击Holder，这时红灯就会熄灭）。
③手拿样品杆，将限位突针对准标线，沿轴线平行将样品杆小心插入，向内滑动样品杆直到遇到阻挡。
样品预抽室开始预抽，样品台的红灯亮，预抽开始。
④此时，样品杆不能旋转。
若样品杆能够旋转，说明样品杆没有进到位，应慢慢把样品杆向左、右稍微转动直到完全进到位。
圈内，并确保样品保持在正确位置。
（6）启动场发射枪电流（一直是开启状态）。
（7）启动软件。
（8）开启阀门。
（9）设置共心高度。
TEM使用注意事项
TEM在预约系统使用中的注意事项：
1. TEM采用送样预约的方式，请需要测试的同学在本组固定机时前
务必要到网上提交送样预约申请，每周预约的安排会在各小组固定测试前一天下午完成，预约顺序按照大家提交申请的先后时间决定，未及时提交申请或者人员过多则自行安排到下一周的机时。
2. 每人每周在网上只可以预约1次，每次送样的数量不可以超过5
个。
3. 大家在网上填写预约申请时，务必在备注栏中填写好样品的类型、
大概的尺寸以及需要测试的项目(例如：形貌、高分辨、衍射、能谱,和导师姓名以及联系电话,必须注明否则不予安排测试),以方便估计测试所需要的大概时间。
4. 大家在网上成功提交送样预约申请后，请及时联系负责本组测试
的同学，防止因不熟悉而在安排测试时发生人员遗漏情况。
5. TEM坚决杜绝任何的磁性样品，如发现隐瞒而对透射电镜造成任
何损害的同学，则永久取消其测试资格。
透射电镜的使用流程
透射电镜的使用流程简介透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种能够使用电子束来观察物质的高分辨率显微镜。
它可以提供比光学显微镜更高的放大倍数和更高的分辨率，因此被广泛应用于材料科学、生物学和纳米技术等领域。
本文将介绍透射电镜的使用流程。
使用流程1.准备工作–关掉手机等干扰设备，确保安静的实验环境。
–戴上护目镜和手套，确保实验操作的安全。
–确保透射电镜和相关设备处于正常工作状态，并联网（如果需要）。
2.打开透射电镜–打开透射电镜的主机，并等待系统启动。
–检查电子束的亮度和对比度，根据需要进行调整。
3.样品制备–准备样品，并将其切割成薄片，确保透射电镜的电子束可以穿透样品。
–使用显微镜或其他相关设备，将样品转移到透射电镜的样品台上。
4.调整透射电镜参数–使用透射电镜的控制台，调整电子束的聚焦和对准，以确保获得最佳的图像质量。
–根据样品的特点和需要，选择适当的电子束诸如干涉仪或投影仪。
5.开始观察–将透射电镜设置为所需的放大倍数，并将样品移动到电子束的路径上。
–通过电子感应器或激光系统，记录所观察到的图像，可以通过照相机或视频设备进行记录。
6.数据分析和保存–对所得到的图像进行分析和解释，可以使用透射电镜软件进行图像处理和测量。
–根据需要，将数据保存到计算机或其他存储设备中，以备后续分析和研究。
7.关闭透射电镜–使用透射电镜的控制台，将电子束设置为关机状态。
–关闭透射电镜的主机，并确保所有相关设备也被关闭。
注意事项•在操作透射电镜时，注意避免触摸样品或其中的部分，以免造成污染或损坏。
•当使用透射电镜时，要避免使用过高的电子束能量，以防止样品的热损伤。
•在整个使用流程中，保持实验环境干净和整洁，以确保获得高质量的图像结果。
•在存储和处理数据时，注意合理规划数据的文件结构和命名，以方便后续的管理和使用。
透射电镜是一项复杂而强大的工具，在使用过程中需要谨慎操作，并了解每个步骤的目的和要求。
透射电镜样品制备流程及注意事项
透射电镜样品制备流程及注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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FEI TECNAI 20透射电镜
目录
电镜操作面板...................................... - 2 - 使用步骤：.......................................... - 4 -
一.放置样品 ..................................... - 4 -
二.合轴 ............................................. - 4 -
三.拍形貌 ......................................... - 5 -
四.踩带轴 ......................................... - 6 -
五、拍衍射 ...................................... - 6 -
六、能谱分析 .................................. - 7 -
七、高分辨 ...................................... - 7 -
八、拔样品杆及关机 ...................... - 8 -
电镜操作面板
镜筒
注意事项
1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：
一.放置样品
1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）
2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview ，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close ，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
旋入样品杆时，要一手拿着，一手托着，放置进入过快。
然后点Tube on 。
然后点Col Values Closed 。
检查
4．关灯，取下蒙皮。
5.点击→Search ，即可看到样品所在位置。
开始找样品中心空洞。
二.合轴
1.在Spot size 为1，低倍（6200X 或8700X ）下找到薄区（朝着光亮处找）。
然后调焦。
选择最佳物镜电流值9
2.5854（按Eucentric focus ）。
2.放大倍数至86000X ，然后将光斑移至孔区域，开始合轴。
观察光斑是否为圆形，非圆形时要进行调圆→condenser ，调圆后点→
None
3.即2.6合轴。
在Tune菜单下进行操作。
（1）Spot size 2→Gun shift→光斑移至中间→Done
（Spot size大小用R3和L3进行加减。
）
（2）Spot size6→Beam shift→光斑移至中间→Done
重复以上步骤，直至光斑在中间位置。
（3）然后将Spot size 降至1→光斑缩小并移至中心(确认光斑在顺时针放大逆时针缩小状态)→点击
Beam shift PPX→调动多功能钮至两个圆重合→Done
Beam shift PPY→调节多功能钮至两个圆重合→Done （4）移动样品杆，将样品边缘对准中间小黑点，然后抬起左侧的小镜子→Rotation Center→调节多功能钮至视野中样品上下跳动（不能左右晃动）→Done
三.拍形貌
1.找空洞
2．2、6合轴，散开光斑。
3.倍数在2250X—86000X下都可以进行拍摄。
套上物镜光阑，先用最大的光阑找区域，然后换成小号。
用物镜光阑套住感兴趣的区域。
4.然后将光斑散开，时刻注意右边的红绿条，要保证方框始终在绿色区域（其目的是为了保护相机）。
5.相机参数：Camera View 为0.5，Camera Acquire为1.0。
按钮
R1进行抬屏，然后点Start view，加载相机，调焦，然后点Acquire，进行拍照。
6.拍完后点击stop view R1放下屏幕。
在拍照期间禁止调节放大倍数。
四.踩带轴
1、2，6合轴，调焦。
2、86000X，找到薄区且带有特点易记的区域（踩带轴过程中样品会动，这样便于识别出自己感兴趣的区域）。
3、将光斑汇聚到一点。
4、按diffraction，寻找菊池线。
菊池线汇聚的焦点一般为一正带轴，菊池线汇聚数目越多，晶带指数越低。
再按diffraction，散开光斑。
用左键盘左上角四个按钮调节样品位置，不断按diffraction查看带轴是否踩正。
不断调节，直至踩正，踩正后的衍射斑点中心在屏幕小黑点处，并且周围斑点亮度应对称。
五、拍衍射
1.先调数值，Camera View为0.03，Camera Acquire为0.3.
2.踩正带轴，低指数。
3.加上选区光阑，亮斑套住要拍衍射区域。
4.调Spot size大于等于5，在底屏看不见，在抬起的小屏上可看
见。
5.点Start view加载相机→左手抬屏→Stop view→立即放下屏。
6.查看光强，Analysis→Statics→Mininum→min and max，观察最大值不超过50000，如过大应继续散开光斑或者继续调大spot size。
7.确认最大强度不超过50000时，即可进行拍照。
8.关闭选区光阑、关闭Diffication、降低Spot size到1（具体看下一步操作的要求）。
六、能谱分析
1.找感兴趣的点
2.把光斑缩小到一点，放大倍数86000倍，spotsize调到6以上。
Cps值小于20000（先RTEM Control in才能看CPS值）。
3.点击电脑屏幕下方RTEM Contor→in→Acquire(左上方，区别于拍形貌及衍射时的acquire)。
4.能谱中最高峰到2000时，点击Acquire停止。
5.若换别的区域做EDS，直接移样品杆移动到相关区域。
重复Acquire→最高峰到2000→Acquire。
若不再做EDS，点击out，降低spotsize到1，散开光斑。
七、高分辨
1、感兴趣的区域，踩正带轴吗，越正越好。
2、最佳物镜电流值。
3、用Z调焦（略欠焦）。
4、放大倍数在25万倍消象散（在44万倍以上拍高分辨像），采用一般的照相模式，相机常数0.5和1.0。
5.点击左下角MF X: image shift x（做完高分辨时记得调回Beam shift X）。
7.点击start view
8.点击Process→live→FFT
9.调焦距，用多功能钮将光斑移到样品边缘（不可用样品杆移动样品），一般样品边缘呈非晶态。
调到欠焦时的一个圆环的样式。
10.点击Tune中的objective，用多功能钮将非晶环调圆，欠焦过程是中心白圆不断扩大，过焦状态时白圆缩小。
11.用高分辨图片与FFT图片确定好正焦后，按左键盘L2使Defoucs归0，我们一般的最佳欠焦值是-70。
12.消象散后将放大倍数调到44万倍，拍高分辨像。
八、拔样品杆及关机
1、将倍数调至6200×
2、将光斑散开
3、Search—Holder
4、Setup—Col Valued Closed（若有事临时外出可暂时保留在此状态）。
5、盖上蒙皮，开灯。
6.拔样品杆：取下数据线→往外轻拔样品杆（此时有一个微弱的吸力）
→露出凹槽（与进入时看见的相同）→顺时针旋转，将小柱转到底（大概左上角螺丝）→轻轻彻底拔出样品杆（控制好力度，应一下拔出但
又不至于力过大使样品杆拔出时甩飞样品）→（当天电镜不再
使用时才倒液氮烘烤，烘烤会持续4小时左右）倒液氮→点击→cryo →cryo cycle（烘烤电镜）等大约5分钟colum真空度掉到99变红可离开。