益母草的提取工艺研究
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益母草的提取工艺研究
摘要】目的: 对益母草中的总黄酮进行提取工艺研究。方法: 通过正交实验确定
提取益母草中的总黄酮的优化提取工艺条件。以提取溶剂水和益母草的重量倍数比,提取煎煮时间和提取煎煮的次数作为正交实验设计的三个考察因素,以益母
草提取物中的总黄酮含量为考察指标,每个因素选用三个水平进行实验。结果:提
取溶剂水和益母草的重量倍数比为10,提取煎煮时间为三小时,提取煎煮3次。
结论: 该方法操作简单、方便,可作为对益母草中总黄酮物质提取的方法,为益
母草总黄酮提取工艺的进一步深入研究提供了依据。
【关键词】益母草总黄酮提取工艺正交试验
【中图分类号】R284 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2013)12-0030-02
益母草为唇形科益母草植物Leonurus japonicus Houtt.的新鲜或干燥地上部分[1]。其味辛、微苦,性微寒,入心包肝经。具有活血调经,利尿消肿之功效。用
于治疗月经不调、痛经、水肿尿少、急性肾炎水肿等疾病。益母草全草含生物碱、黄酮、酚类、氨基酸、有机酸、糖类。其中,黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、
抗氧化、降糖等多种生理活性。药理研究证明其具有调经止血,保护心肌缺血再
灌注损伤抗血小板聚集,降低血液粘度等作用。在临床上可用来治疗痛经、流产
后出血、冠心病、心肌缺血、高黏血症、肾炎水肿、风湿关节疼痛等疾病,具有
广泛的药理活性[2]。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇,其他包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等[3]。黄酮类化合
物具有抗肿瘤、抗心脑血管疾病、消炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[4]。益母草分布广泛,益母草中含
有较为丰富的黄酮[5]~[8]。因此,益母草具有广泛开发和利用价值,值得综合利用,加强资源开发。
1 仪器与材料
1.1仪器
UV-755B紫外线分光光度计(上海分析仪器总厂);DZF-150小型真空恒温干燥
箱(郑州长城科工贸易有限公司);80-2离心沉淀器(上海分析器械厂);旋转蒸发器(上海申生科技公司);KDM型控温电热套(耶城华鲁电热仪器有限公司)。
1.2材料
益母草(经鉴定为唇形科益母草植物Leonurus japonicus Houtt. 的干燥地上部分)。95%乙醇AR;亚硝酸钠CP;硝酸铝CP;正丁醇CP;氢氧化钠CP;芦丁标
准品(中国生物制品检定所)。
2 实验方法和结果
2.1 工艺的设计
根据预试验的考察结果,我们对水提取益母草药材中有效成分的影响因素进
行了评估,从而确定以提取溶剂水和益母草的重量倍数比,提取煎煮时间和提取
煎煮的次数作为正交实验设计的三个考察因素,以益母草提取物中的总黄酮含量
为考察指标,每个因素选用三个水平(见表1),按照正交实验设计表L9(34)
的安排进行实验。
表1 因素水平表
A B C D
水平料液比(倍)煎煮时间(h)煎煮次数空白
1 6 1 1
2 8 2 2
3 10 3 3
2.2 操作步骤
2.2.1 样品的制备
依据正交设计实验安排表,取益母草药材适当粉碎,取益母草粗粉约10g,称定,放人
已编号的圆底烧瓶中,加水适量,回流,再冷却、过滤,滤液旋转真空浓缩(80℃,68.0rpm)
至一定体积。待滤液冷却后,加入等体积95%乙醇,再放入冰箱内冷藏,过滤得滤液,弃去
滤渣。滤液旋转真空浓缩(80℃,68.0rpm)至乙醇蒸发完全,将流浸膏置于真空干燥箱中干燥
成疏松固体,粉碎得终产物。
2.2.2 总黄酮的含量测定
对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品200mg,置于100ml容量瓶中,加入95%乙醇溶
液并稀释至刻度,摇匀。精密称取10ml置于100ml容量瓶中,加入95%乙醇使成100ml,摇匀即得(每1ml含有无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0ml分置于50ml容量瓶中,各加95% 乙醇12m l,加10%亚硝酸钠溶液2.0ml,混匀,放置6分钟,加10%硝酸铝2.0 ml,放置6分钟加5%氢氧化钠试液20ml,最后用95%乙醇稀释至刻度,摇匀,以第一瓶
为空白溶液,用紫外分光光度计,在500nm处测定吸光度。得一回归方程:A=10.33C-0.0116,r=0.9996(n=6)。
2.2.3 提取物中总黄酮含量的测定
精密称定提取物,置索氏提取器中,加95%乙醇回流至无色,将提取液置于烧杯中,沸
水浴加热浓缩至干,再用热水洗涤3次。将洗液滤至分液漏斗中,并加入饱和正丁醇液萃取
3次。合并萃取液于小烧杯中,沸水浴蒸干,再加95%乙醇至使之溶解,并移于50ml容量瓶中,再加95%乙醇至刻度,摇匀。精密取10ml于50ml容量瓶中加95%乙醇至刻度摇匀,按
标准曲线的制备操作测定吸光度,计算样品中总黄酮的含量。
2.3 结果
试验安排及结果见表2,方差分析见表3。通过正交实验设计及结果分析,可以看出,本
实验提取益母草中的总黄酮的优化提取工艺条件为:A3>C3>B3,即提取溶剂水和益母草的
重量倍数比为10,提取煎煮时间为三小时,提取煎煮3次。
表2 试验安排和结果
3 讨论
从本文实验结果看出提取益母草中的总黄酮的优化提取工艺条件中,提取溶剂水与益母
草的重量倍数比和提取次数较关键,可能是因为水提取过程中药材的浸润过程需要耗费大量
的溶剂,这样才可以使得药材中的水溶性成分充分的被溶剂浸润、溶解、置换出来;提取次
数的要求说明药材在提取过程中浓度梯度的作用是很明显的;而充分的煎煮时间也是水提取
药材有效成分的不可忽略的条件。
益母草是一种常见的活血化瘀药,《本草纲目》中称之为“血家之圣药”, 被视为治疗妇科疾病的良药。现代药理学研究表明它有着广泛的生物学活性, 能够治疗多种疾病, 有广阔的应用
前景。
4 结论
本文实验结果表明,利用本文所提供的提取方法操作简单方便,是提取黄酮类物质的便
捷途径,对益母草的工艺研究和生产应用具有一定的参考价值。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(1部)[M].北京:化学工业出版社,2005.
[2] 阮金兰,杜俊蓉,曾庆忠,等.益母草的化学、药理和临床研究进展[J].中草药,2003,
34(11):15-19.
[3] 韩公羽,沈企华.植物药有效成分的研究与开发[M].杭州:杭州大学出版社,1991.
[4] 姚小敏,覃成箭,羊金梅,等.茶叶中总黄酮的提取、鉴别及其含量测定[J].右江民族医学