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重组汉逊酵母乙肝疫苗的生产。
乙肝疫苗生产发展简介
9
乙肝疫苗的发展历史
• 第一代乙肝疫苗；血源性乙肝疫苗。
• 第二代乙肝疫苗；基因工程乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
10
基因工程乙肝疫苗
• 1，CHO细胞乙肝疫苗。 • 2，重组酿酒酵母乙肝疫苗。
(第一代重组酵母乙肝疫苗）
• 3，重组汉逊酵母乙肝疫苗。
汉逊 酵母
发酵 细胞 粗纯 破碎
四级 发酵 四级 流加
高压 破碎 球磨wenku.baidu.com破碎
硅胶 吸附
PEG 硅胶 吸附
四级 流加
高压 破碎
硫酸 铵沉 淀
乙肝疫苗生产发展简介
精纯 吸附
疏水 原位 层析 吸附 DEAE 普通 分子筛 吸附 区带 疏水 普通 DEAE 吸附 分子筛
15
公司 菌种的表达水平 纯化的 收率
北京 50mg/L 深圳
20%
大连 150-200mg/L 15% 汉信
华兰 200-300mg/L 20%
生物
乙肝疫苗生产发展简介
16
新乡华兰，大连汉信，北京天坛
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
乙肝疫苗生产发展简介
17
• 北京生物制品研究所(天坛生物)生产
6
• 4, 1971年Krugman发现加热处理
的急性期乙肝患者的血清能部分预 防乙肝感染。
• 5, 1981年Merck公司在世界上首
次研制成功第一代乙肝疫苗——血 源性乙肝疫苗。
• 6, 1985年北京生物制品研究所在
国内首次研制成功血源性乙肝疫苗.
• 7, 1986年Merck公司在世界上首
繁殖，病毒要在细胞中繁殖，比如，流感 病毒在鸡胚细胞中生长，狂犬病毒要在地 鼠肾细胞中生生长，乙脑病毒要在vero细 胞中生长。可是乙肝病毒在所有实验过的 细胞中都不能生长。乙肝疫苗的研究受到 了严重的困难。人们不得不寻求其他的途 径去生产乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
4
乙肝抗原的来源
• 1，乙肝患者的血液：血源性乙肝
疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
深圳康泰生物制品 重组酿酒酵母乙肝疫
公司
苗
华北药厂和长春生 重组CHO细胞乙肝 物制品研究所等 疫苗
大连高新(汉信）公 重组汉逊酵母乙肝疫
司 和华兰生物疫苗 苗
乙肝疫苗生产发展简介
14
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
厂家
北京 深圳 大连 汉信
华兰 生物
种菌
啤酒 酵母 汉逊 酵母
的乙肝疫苗的基本情况：
• 生产技术：从美国MERCK公司引进。 • 年产量：1000万人份，3000万支。 • 生产设备：从美国购进。
重组酵母乙肝疫苗
Hepatitis B Vaccine
基因工程产品的成功例证 生物技术应用的典范 甲基营养型酵母 -----汉逊酵母
乙肝疫苗生产发展简介
1
疫苗的 生产 1，灭活死疫苗
• 患者---分离出致病微生物（细菌或者
病毒）-----通过培养细菌（培养基） 或者病毒（细胞），获得大量的致病 微生物---用甲醛灭活（杀死）致病微 生物---纯化---铝吸附-----灭活死疫苗。
次研制成功第二代乙肝疫苗-----重 组酵母乙肝。
乙肝疫苗生产发展简介
7
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
Merck公司签订合同，引进重组酵母 乙肝疫苗工业化生产技术。1993年5 月开始试生产。
• 9, 90年代德国莱茵生物技术公司发展
了一种甲基营养型酵母---汉逊酵母表 达系统,其乙肝表面抗原表达水平可达 到 500-1000mg/L. 南 韩 绿 十 字 疫 苗 公司应用该表达系统实现了重组汉逊 酵母乙肝疫苗的大规模工业化生产。
乙肝疫苗生产发展简介
8
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
• 11 ,华兰生物在2009年也将开始
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
比利时史克公司 Smith kline
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
法国巴斯德研究所 重组CHO细胞乙肝 Pasteur Merieux 疫苗
德国莱茵公司下属的 重组汉逊酵母乙肝疫 韩国绿十字疫苗公司 苗
Green Cross
乙肝疫苗生产发展简介
13
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家
北京天坛生物制品 股份有限公司(北京 生物制品研究所）
乙肝疫苗生产发展简介
2
2，减毒活疫苗
• 患者---分离出致病微生物（细菌或者
病毒）-----通过改变培养条件，获得 不再致病微生物---培养不再致病微生 物，获得大量的不再致病微生物---铝 吸附-----减毒活疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
3
乙肝病毒的体外培养至今没有成功
• 前面，我们已经讲过，细菌要在培养基中
• 2, 1968年Prince在血清型肝炎（乙型肝炎）
患者血清中发现抗原性与澳大利亚抗原相同 的病毒样颗粒，进而初步认定澳大利亚抗原 就是乙肝表面抗原。
• 3, 1970年Dane用电子显微镜在乙肝患者血
清中发现直径为42nm完整乙肝病毒颗粒及直 径为22nm的球形和杆形的乙肝表面抗原。
乙肝疫苗生产发展简介
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
12
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家
疫苗
美国默克公司 Merck
(第二代重组酵母乙肝疫苗）
乙肝疫苗生产发展简介
11
• 乙肝疫苗的发展历程： n80年代初期-----血源性乙肝疫苗（第一代乙肝疫
苗）。1995年停产。
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
疫苗。
• 2，利用DNA重组技术构建重组微
生物（酵母）表达（合成）乙肝抗 原：基因工程乙肝疫苗
乙肝疫苗生产发展简介
5
乙肝疫苗发展历史
• 1, 1963年Blumberg发现在血友病患者的血
清中存在一种抗体，这种抗体能与澳大利亚 土著人血液中的一种抗原起交叉反应，这种 抗原被命名为“澳大利亚”抗原。
乙肝疫苗生产发展简介
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乙肝疫苗的发展历史
• 第一代乙肝疫苗；血源性乙肝疫苗。
• 第二代乙肝疫苗；基因工程乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
10
基因工程乙肝疫苗
• 1，CHO细胞乙肝疫苗。 • 2，重组酿酒酵母乙肝疫苗。
(第一代重组酵母乙肝疫苗）
• 3，重组汉逊酵母乙肝疫苗。
汉逊 酵母
发酵 细胞 粗纯 破碎
四级 发酵 四级 流加
高压 破碎 球磨wenku.baidu.com破碎
硅胶 吸附
PEG 硅胶 吸附
四级 流加
高压 破碎
硫酸 铵沉 淀
乙肝疫苗生产发展简介
精纯 吸附
疏水 原位 层析 吸附 DEAE 普通 分子筛 吸附 区带 疏水 普通 DEAE 吸附 分子筛
15
公司 菌种的表达水平 纯化的 收率
北京 50mg/L 深圳
20%
大连 150-200mg/L 15% 汉信
华兰 200-300mg/L 20%
生物
乙肝疫苗生产发展简介
16
新乡华兰，大连汉信，北京天坛
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
乙肝疫苗生产发展简介
17
• 北京生物制品研究所(天坛生物)生产
6
• 4, 1971年Krugman发现加热处理
的急性期乙肝患者的血清能部分预 防乙肝感染。
• 5, 1981年Merck公司在世界上首
次研制成功第一代乙肝疫苗——血 源性乙肝疫苗。
• 6, 1985年北京生物制品研究所在
国内首次研制成功血源性乙肝疫苗.
• 7, 1986年Merck公司在世界上首
繁殖，病毒要在细胞中繁殖，比如，流感 病毒在鸡胚细胞中生长，狂犬病毒要在地 鼠肾细胞中生生长，乙脑病毒要在vero细 胞中生长。可是乙肝病毒在所有实验过的 细胞中都不能生长。乙肝疫苗的研究受到 了严重的困难。人们不得不寻求其他的途 径去生产乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
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乙肝抗原的来源
• 1，乙肝患者的血液：血源性乙肝
疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
深圳康泰生物制品 重组酿酒酵母乙肝疫
公司
苗
华北药厂和长春生 重组CHO细胞乙肝 物制品研究所等 疫苗
大连高新(汉信）公 重组汉逊酵母乙肝疫
司 和华兰生物疫苗 苗
乙肝疫苗生产发展简介
14
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
厂家
北京 深圳 大连 汉信
华兰 生物
种菌
啤酒 酵母 汉逊 酵母
的乙肝疫苗的基本情况：
• 生产技术：从美国MERCK公司引进。 • 年产量：1000万人份，3000万支。 • 生产设备：从美国购进。
重组酵母乙肝疫苗
Hepatitis B Vaccine
基因工程产品的成功例证 生物技术应用的典范 甲基营养型酵母 -----汉逊酵母
乙肝疫苗生产发展简介
1
疫苗的 生产 1，灭活死疫苗
• 患者---分离出致病微生物（细菌或者
病毒）-----通过培养细菌（培养基） 或者病毒（细胞），获得大量的致病 微生物---用甲醛灭活（杀死）致病微 生物---纯化---铝吸附-----灭活死疫苗。
次研制成功第二代乙肝疫苗-----重 组酵母乙肝。
乙肝疫苗生产发展简介
7
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
Merck公司签订合同，引进重组酵母 乙肝疫苗工业化生产技术。1993年5 月开始试生产。
• 9, 90年代德国莱茵生物技术公司发展
了一种甲基营养型酵母---汉逊酵母表 达系统,其乙肝表面抗原表达水平可达 到 500-1000mg/L. 南 韩 绿 十 字 疫 苗 公司应用该表达系统实现了重组汉逊 酵母乙肝疫苗的大规模工业化生产。
乙肝疫苗生产发展简介
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• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
• 11 ,华兰生物在2009年也将开始
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
比利时史克公司 Smith kline
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
法国巴斯德研究所 重组CHO细胞乙肝 Pasteur Merieux 疫苗
德国莱茵公司下属的 重组汉逊酵母乙肝疫 韩国绿十字疫苗公司 苗
Green Cross
乙肝疫苗生产发展简介
13
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家
北京天坛生物制品 股份有限公司(北京 生物制品研究所）
乙肝疫苗生产发展简介
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2，减毒活疫苗
• 患者---分离出致病微生物（细菌或者
病毒）-----通过改变培养条件，获得 不再致病微生物---培养不再致病微生 物，获得大量的不再致病微生物---铝 吸附-----减毒活疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
3
乙肝病毒的体外培养至今没有成功
• 前面，我们已经讲过，细菌要在培养基中
• 2, 1968年Prince在血清型肝炎（乙型肝炎）
患者血清中发现抗原性与澳大利亚抗原相同 的病毒样颗粒，进而初步认定澳大利亚抗原 就是乙肝表面抗原。
• 3, 1970年Dane用电子显微镜在乙肝患者血
清中发现直径为42nm完整乙肝病毒颗粒及直 径为22nm的球形和杆形的乙肝表面抗原。
乙肝疫苗生产发展简介
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
12
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家
疫苗
美国默克公司 Merck
(第二代重组酵母乙肝疫苗）
乙肝疫苗生产发展简介
11
• 乙肝疫苗的发展历程： n80年代初期-----血源性乙肝疫苗（第一代乙肝疫
苗）。1995年停产。
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
疫苗。
• 2，利用DNA重组技术构建重组微
生物（酵母）表达（合成）乙肝抗 原：基因工程乙肝疫苗
乙肝疫苗生产发展简介
5
乙肝疫苗发展历史
• 1, 1963年Blumberg发现在血友病患者的血
清中存在一种抗体，这种抗体能与澳大利亚 土著人血液中的一种抗原起交叉反应，这种 抗原被命名为“澳大利亚”抗原。