乙肝疫苗生产发展简介PPT课件
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乙肝疫苗生产发展简介 ppt课件
低于20%
新乡华兰 少
高于20%
乙肝疫苗生产发展简介
乙肝疫苗生产发展简介
•甲基营养型酵母：以甲醇为唯一能源和
炭源的酵母。
1,多个HBsAg基因拷贝被整合到染色体中，遗 传稳定性好。
2,发酵过程中不产生乙醇，黏度小，可实现高 密度培养。
乙肝疫苗生产发展简介
乙肝疫苗生产发展简介
菌种 小三角瓶 大三角瓶 种子发酵罐 生产发酵罐 细胞破碎
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
乙肝疫苗生产发展简介
• 北京天坛的 弱项和不足：表达水平低，
抗原数量少，每剂疫苗只含5微克或 10微克的抗原，比华兰疫苗抗原含量 少一倍，所以抗体滴度低和抗体持续 时间较短。
乙肝疫苗生产发展简介
特异性乙肝免疫球蛋白（HBIG）
特异性乙肝免疫球蛋白是将anti-HBs 阳性供血者的血液经低温乙醇分段法而 制成，其中anti—HBs的含量是确定的， 所以对乙肝病毒暴露后的预防作用也是 确定的。经低温乙醇分段法而制备的特 异性乙肝免疫球蛋白是安全的，没有证 据表明它会传播AIDS。
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
厂家
疫苗
美国默克公司 Merck
重组酿酒酵 kline
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
法国巴斯德研究所 重组CHO细胞乙肝 Pasteur Merieux 疫苗
2,5 (ug) 0,5 10,0 (ug) 0,5
乙肝疫苗生产发展简介PPT
基因工程技术
01
利用基因工程技术，提高疫苗的产量和纯度。
新型佐剂的研发
02
开发新型佐剂，增强疫苗的免疫原性。
细胞培养技术
03
利用细胞培养技术，实现疫苗的连续生产。
疫苗生产的国际化合作与交流
国际合作项目
参与国际合作项目，共 同研发和推广乙肝疫苗 。
技术交流与转让
加强技术交流与转让， 促进疫苗生产的国际合 作。
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
新疫苗的研发方向
1 2
新型疫苗的研发
针对乙肝病毒变异株，研发更有效、更安全的疫 苗。
联合疫苗的研发
将乙肝疫苗与其他疫苗结合，减少接种次数，提 高接种率。
3
免疫策略的优化
研究更合理的免疫接种程序，提高疫苗的保护效 果。
疫苗生产技术的创新与突破
乙肝疫苗的重要性
控制乙肝传播
乙肝疫苗是预防HBV感染的最有 效方法，通过接种疫苗可以降低 感染风险，控制乙肝的传播。
预防慢性肝炎
接种乙肝疫苗可以预防慢性肝炎 的发生，避免因感染HBV而导致 的长期健康问题。
提高人口素质
乙肝疫苗的接种可以保护广大人 群，特别是儿童和青少年，提高 人口素质和健康水平。
乙肝疫苗生产发展简介
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
汇报人：可编辑 2024-01-11
• 乙肝疫苗的起源与背景 • 乙肝疫苗的生产技术 • 乙肝疫苗的生产现状 • 乙肝疫苗的未来发展 • 乙肝疫苗的安全性与监管
目录
CONTENTS
01
乙肝疫苗的起源与背景
中国疫苗生产现状
生物技术制药乙肝疫苗制备ppt课件
发酵过程中，可采用分批补料或连续流加补料以保证最优生长和维持细 胞浓度、生长速度和营养供应之间的适当平衡。 可添加诱导剂如乳糖到发酵液中去以诱导可调节启动子的表达。
10
分离纯化
无菌过滤
离子交换层析
氢氧化铝共沉淀
凝胶层析
无菌过滤
超滤
硫氰酸盐处理
微滤
疏水层析
细胞破碎
微滤
超滤
硅胶吸附
பைடு நூலகம்
11
细胞破碎 微滤 超滤
乙肝疫苗的制备
1
2
乙型病毒性肝炎
乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒 （HBV）引起的、以肝脏炎性病变 为主，并可引起多器官损害的一种 疾病。乙肝广泛流行于世界各国， 主要侵犯儿童及青壮年，少数患者 可转化为肝硬化或肝癌。因此，它
3
乙肝疫苗的概念
乙肝疫苗是用于预防乙肝的特 殊药物。疫苗接种后，可刺激 免疫系统产生保护性抗体，这 种抗体存在于人的体液之中， 乙肝病毒一旦出现，抗体会立
18
无菌过滤
氢氧化铝共沉淀
纯化后的抗原再与氢氧化铝共 沉淀，在共沉淀时，抗原吸附 在氢氧化铝上。
分装
19
疫苗纯度的测定
乙肝疫苗是通过肌肉注射的方式进 入人体系统，为了降低疫苗内杂质 含量对人体产生的不良影响，必须 进行疫苗的纯度检测。
对重组酵母乙肝疫苗，现有的 HPLC检测系统DTT应结构式用0.1mol/L DTT （DTT即DL-Dithiothreitol，中文名
母细胞，以扩DNA 增
重组分子。
筛选和鉴定经转化处理
的酵母细胞，获得外源
检 基检因测高正效确表表达达的基目因的工产物 检
程菌 的酵母（检）
0.0
9
10
分离纯化
无菌过滤
离子交换层析
氢氧化铝共沉淀
凝胶层析
无菌过滤
超滤
硫氰酸盐处理
微滤
疏水层析
细胞破碎
微滤
超滤
硅胶吸附
பைடு நூலகம்
11
细胞破碎 微滤 超滤
乙肝疫苗的制备
1
2
乙型病毒性肝炎
乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒 （HBV）引起的、以肝脏炎性病变 为主，并可引起多器官损害的一种 疾病。乙肝广泛流行于世界各国， 主要侵犯儿童及青壮年，少数患者 可转化为肝硬化或肝癌。因此，它
3
乙肝疫苗的概念
乙肝疫苗是用于预防乙肝的特 殊药物。疫苗接种后，可刺激 免疫系统产生保护性抗体，这 种抗体存在于人的体液之中， 乙肝病毒一旦出现，抗体会立
18
无菌过滤
氢氧化铝共沉淀
纯化后的抗原再与氢氧化铝共 沉淀，在共沉淀时，抗原吸附 在氢氧化铝上。
分装
19
疫苗纯度的测定
乙肝疫苗是通过肌肉注射的方式进 入人体系统，为了降低疫苗内杂质 含量对人体产生的不良影响，必须 进行疫苗的纯度检测。
对重组酵母乙肝疫苗，现有的 HPLC检测系统DTT应结构式用0.1mol/L DTT （DTT即DL-Dithiothreitol，中文名
母细胞，以扩DNA 增
重组分子。
筛选和鉴定经转化处理
的酵母细胞，获得外源
检 基检因测高正效确表表达达的基目因的工产物 检
程菌 的酵母（检）
0.0
9
疫苗工程PPT课件
疫苗的安全性评价
01
02
03
临床试验
在疫苗研发阶段，需要进 行严格的临床试验，以评 估疫苗的安全性和有效性。
长期安全性监测
疫苗上市后，需要对其长 期安全性进行监测，以确 保疫苗的安全性。
不良反应监测
疫苗接种后，需要密切监 测不良反应的发生情况， 并及时采取相应的措施。
疫苗的有效性评价
免疫原性
评价疫苗是否能够诱导机 体产生有效的免疫应答， 产生足够的抗体。
03 疫苗的种类与作用机制
传统疫苗
减毒活疫苗
利用减毒或无毒的病原体制成的疫苗，如脊 髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗等。
蛋白亚单位疫苗
利用病原体的特定蛋白亚单位制成的疫苗， 如乙肝疫苗等。
灭活疫苗
利用灭活的病原体制成的疫苗，如流感疫苗、 甲肝疫苗等。
类毒素疫苗
利用经过脱毒处理的类毒素制成的疫苗，如 白喉类毒素疫苗等。
涉及领域
免疫学、微生物学、生物化学、分 子生物学、基因工程、蛋白质工程 等。
疫苗工程的历史与发展
历史背景
发展趋势
疫苗的研发和应用已有近两个世纪的 历史，随着科学技术的发展，疫苗工 程逐渐形成一门独立的学科。
个性化疫苗、治疗性疫苗、多联多价 疫苗等新型疫苗的研发和应用成为未 来发展的重点。
发展历程
从传统疫苗到现代基因工程和蛋白质 工程疫苗，疫苗工程在不断发展和创 新。
体的作用。
疫苗的生产工艺
01
02
03
04
细胞培养技术
利用生物反应器进行大规模细 胞培养，生产病毒或细菌类疫
苗。
基因工程方法
利用基因工程技术，表达目标 病原的抗原基因，制备基因工
乙肝疫苗的生产工艺
市场需求与前景展望
01
随着人们对乙型肝炎认识的不断提高，乙肝疫苗的市场需求不 断增加。
02
同时，随着全球卫生事业的发展，乙肝疫苗的市场前景广阔，
具有巨大的发展潜力。
未来，乙肝疫苗将继续发挥重要作用，为人类健康事业做出更
03
大贡献。
02 生产工艺流程概述
原料选择与预处理
原料种类
选用高纯度、高效价的乙肝病毒表 面抗原（HBsAg）基因工程细胞株 或酵母菌作为生产原料。
数据统计与分析
对稳定性研究过程中产生的数据进行统计和分析， 评估成品的稳定性表现，为制定成品的储存和运 输方案提供依据。
05 设备选型和操作优化建议
关键设备选型依据和建议
疫苗生产工艺需求
根据乙肝疫苗的生产工艺流程，选 择能够满足工艺需求的设备，如发
酵罐、离心机、纯化设备等。
设备性能参数
考虑设备的生产能力、处理效率、 操作便捷性、自动化程度等性能参 数，确保设备能够满足生产要求。
开展资源回收利用
对生产过程中产生的可再生资源进行回收利 用，提高资源利用效率。
法规符合性检查清单
遵守国家法律法规和标准
确保乙肝疫苗生产过程符合国家相关法律法规和标准要求。
定期开展法规符合性检查
对生产过程进行全面检查，确保各项法规要求得到有效执行 。
及时整改不符合项
针对检查中发现的不符合项，制定整改措施并及时进行整改 ，确保生产过程的法规符合性。
原材料检验
对每批次的原材料进行检验，包括外观、纯度、微生物限度等指标， 确保原材料符合生产要求。
储存条件控制
对原材料的储存条件进行严格控制，避免潮湿、高温等不利因素对 原材料质量的影响。
生产过程监控指标设置
乙肝卡介苗ppt课件
机体免疫系统， 产生特异性抗体和细胞免疫反应，提高对乙肝病 毒的抵抗力。
乙肝卡介苗的安全性和有效性
大量临床数据表明，乙肝卡介苗具有良好的安全 性和有效性，不良反应轻微，接种后保护效果持 久。
乙肝卡介苗的未来研究方向与挑战
改进疫苗接种策略
进一步研究不同年龄段、不同免疫背 景下的接种策略，以提高疫苗接种覆 盖率和预防效果。
乙肝卡介苗在全球范围内的推广与应用
随着研究的深入和技术的进步，乙肝卡介苗有望在全球范围内得到更 广泛的推广与应用，为预防和控制乙肝病毒感染作出更大贡献。
联合疫苗的研究与开发
未来可探索将乙肝卡介苗与其他疫苗联合接种，以提高免疫效果和便 利性，满足多方面的预防需求。
免疫策略的优化与创新
进一步优化乙肝卡介苗的免疫策略，包括接种剂量、接种间隔、接种 年龄等，以提高预防效果和覆盖率。
通过联合接种，可以减少接种次数， 方便家长和医务人员，提高接种率。
联合接种方案的设计与实施
01
02
03
04
疫苗选择
选择质量可靠、安全有效的乙 肝疫苗和卡介苗进行联合接种
。
接种程序
根据不同年龄段和疫苗接种要 求，制定合理的联合接种程序
。
接种方式
采用肌肉注射或皮下注射方式 进行接种，确保疫苗的有效性
。
乙肝疫苗接种的重要性
01
02
03
预防感染
通过接种乙肝疫苗，可以 有效地预防乙肝病毒感染 ，从而降低乙肝的发病率 。
保护易感人群
对于没有感染过乙肝病毒 的人群，接种疫苗是预防 感染的最佳方法。
控制传播
通过广泛接种疫苗，可以 有效地控制乙肝的传播， 从而降低社会负担。
03
卡介苗的预防与控制
乙肝卡介苗的安全性和有效性
大量临床数据表明，乙肝卡介苗具有良好的安全 性和有效性，不良反应轻微，接种后保护效果持 久。
乙肝卡介苗的未来研究方向与挑战
改进疫苗接种策略
进一步研究不同年龄段、不同免疫背 景下的接种策略，以提高疫苗接种覆 盖率和预防效果。
乙肝卡介苗在全球范围内的推广与应用
随着研究的深入和技术的进步，乙肝卡介苗有望在全球范围内得到更 广泛的推广与应用，为预防和控制乙肝病毒感染作出更大贡献。
联合疫苗的研究与开发
未来可探索将乙肝卡介苗与其他疫苗联合接种，以提高免疫效果和便 利性，满足多方面的预防需求。
免疫策略的优化与创新
进一步优化乙肝卡介苗的免疫策略，包括接种剂量、接种间隔、接种 年龄等，以提高预防效果和覆盖率。
通过联合接种，可以减少接种次数， 方便家长和医务人员，提高接种率。
联合接种方案的设计与实施
01
02
03
04
疫苗选择
选择质量可靠、安全有效的乙 肝疫苗和卡介苗进行联合接种
。
接种程序
根据不同年龄段和疫苗接种要 求，制定合理的联合接种程序
。
接种方式
采用肌肉注射或皮下注射方式 进行接种，确保疫苗的有效性
。
乙肝疫苗接种的重要性
01
02
03
预防感染
通过接种乙肝疫苗，可以 有效地预防乙肝病毒感染 ，从而降低乙肝的发病率 。
保护易感人群
对于没有感染过乙肝病毒 的人群，接种疫苗是预防 感染的最佳方法。
控制传播
通过广泛接种疫苗，可以 有效地控制乙肝的传播， 从而降低社会负担。
03
卡介苗的预防与控制
疫苗和乙肝疫苗相关知识简介ppt课件
乙肝小常识
1、3、5三项 同时是阳 性，就叫 “大三阳”； 1、4、5三项 同时是阳 性，就叫 “小三阳”。
5.核心抗原
4.e抗体
3.e抗原 2.表面抗体 1.表面抗原
7.乙肝疫苗注射注意事项
肝炎患者以及发热、急性传染病者，严重慢 性病患者，有免疫缺陷的人、严重过敏体质者和
正在使用免疫抑制剂的人不可接种乙肝疫苗。
谢 谢 ！
一般安全可靠，很少有不良反应。极个别人 可能有中、低度发热，或注射部位微痛，这种疼 痛与疫苗中含有的吸附剂有关。这些轻微反应一 般在24小时内消失。 注射疫苗侧上臂避免剧烈运动。
8.乙肝疫苗发展前景
我国已将乙肝疫苗纳入计划免疫中，新生儿均 应在出生后24小时内接种乙肝疫苗。 乙肝疫苗的趋势是由预防性疫苗向治疗性疫苗 发展。 每年我国在乙肝治疗方面的医疗支出是300 亿—500亿，目前我国有乙肝病毒携带者1.2亿多， 患者超过3000万，而仅有19%的患者接受以抗病 毒为主的方法进行治疗，因而治疗性乙肝疫苗一 旦研制成功并应用，面对的将是个庞大的市场。
2.我国乙肝现状
4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 3.8
乙肝携带者统计
1.2
乙肝携带者
全世界
中国
3.正确对待乙肝患者和携带者
乙肝病毒携带者 相同点 携带乙肝病毒 乙肝患者 携带乙肝病毒
肝病症状
肝功能 是不是病人 如何应对
没有
正常 不是；一般难以发病，保持良好心 态，80%-90%可平安一生。 健康生活，注意肝脏保护；定期检 查肝功能，不需要治疗。
无保护的性行为传播：乙肝病毒可以通过精液和阴道 分泌物进行传播。
5.乙肝疫苗
切断乙肝病毒传播的有效途径 2.10%
河北医科大学免疫课题乙肝疫苗PPT
增殖分化
活化T细胞 表达多种细胞因子及受体 T细胞克隆增殖
分化为Th0
分化成Th1 (介导细胞免疫） 分化成Th2 （介导体液免疫）
T细胞介导的适应性免疫应答--免疫效应，转归
免疫效应 一、Th细胞的免疫效应
Th1细胞主要通过释放细胞因子诱导细胞免疫反应
Th2细胞主要辅助体液免疫应答
转归 活化T细胞发生凋亡，及时终止免疫应答。
体液中的抗菌物质：补体、防御素、炎性介质
启动适应性免疫应答
T细胞介导的适应性免疫应答---识别
T细胞与APC的非特异性结合: 黏附分子,短暂,ห้องสมุดไป่ตู้逆性结合 T细胞与APC特异性稳定结合: TCR识别特异性HBsAg -MHC复合物
T细胞介导的适应性免疫应答 ---活化，增殖分化
• 由于HBsAg对于 机体为外源性抗原， 所以主要激活CD4+T细胞
免疫应答过程
• 固有免疫应答
• T细胞介导的适应性免疫应答 识别 活化，增殖分化 免疫效应，转归 B细胞介导的适应性免疫应答 HBsAg 是TD抗原
固有免疫应答
体表屏障：物理、化学、生物屏障
屏障结构
内部屏障：血脑屏障、血胎屏障
固有免疫 固有免疫细胞：吞噬细胞：中性粒细胞、单核/巨噬
细胞、NK、T、NKT、 B-1、肥大细胞等
• 三、CD4+Th 细胞表面的共刺激分子基因
CD3 分子 Pan 等 报告 CD3Z 的 rs12133337和 rs10918706 SNPs 与中国汉族人群乙肝疫苗弱 应答有关联， 而且更低的 BMI 指数可以增加 SNPs 对乙肝疫苗应答的影响。
• （BMI：即身体质量指数，简称体质指数又称体重，英文为Body Mass Index，简称BMI是目前国际上常用的衡量人体胖瘦程度以及是 否健康的一个标准。）
重组乙型肝炎疫苗ppt课件
• 乙肝病毒属DNA病毒科，有三种外壳的基因编码。
乙肝病毒具有五种抗原抗体系统：即表面抗原抗 体(HBsAg与抗-HBs)、e抗原抗体(HBeAg与抗HBe)、核心抗原抗体(HBcAg与抗-HBc)、x抗原抗 体(HBxAg与抗-HBx)和HBv-DNA。有临床意义的 主要有HBsAg与抗-HBs、HBeAg与抗-HBe和抗HBc，简称“两对半”。 临床主要表现为食欲减退、恶心、厌油、乏 力、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。
重组乙型肝炎疫苗
背景
• 乙型肝炎是由病毒引起的，约占所有病毒性
肝炎的40﹪，它可以急性发病，也可以形成 慢性肝炎，并进而引发肝硬化，肝癌，而其 中很大一部分人可以是健康的病毒携带者， 不出现症状，但表面抗原（HbsAg）阳性， 或者同e抗原（HbeAg）阳性，常常是重要 的传染源。在我国，人口众多，而这样的慢 性病毒携带者约有一亿人，是对公共卫生的 一个重要威胁。
乙肝疫苗的发展
• （一）联合疫苗： • 联合疫苗具有减少注射针次、接种副反应及
提高接种覆盖率的优点。已上市的联合疫苗如SB 公司的百白破-乙肝四联疫苗、甲-乙肝联合疫苗， MSD公司的流感嗜血杆菌乙型肝炎偶联疫苗等。 我国全细胞百白破-乙肝四联疫苗和无细胞百白破 -乙肝四联疫苗已完成临床前研究，甲-乙肝联合 疫苗的开发研究制也在进行。
（三） CHO疫苗
• 本疫苗系用基因工程技术将乙型肝炎表面
抗原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)内，通过对细胞培养增殖，增殖分泌 乙肝表面抗原(HBsAg)于培养液中，经纯化 加佐剂氢氧化铝后制成。疫苗外观有轻微 乳白色沉淀。
国产酵母乙肝疫苗的效果
• 研究证明：国产血源乙肝疫苗的保护效果至少维
• 对应用0、1、2月程序免疫的400名小学生进行了
乙肝疫苗生产发展简介 PPT
苗）。1995年停产。
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
9
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
母总蛋白）
• 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量：
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
9
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
母总蛋白）
• 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量：
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
乙肝疫苗
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家 美国默克公司 Merck 比利时史克公司 Smith kline 法国巴斯德研究所 Pasteur Merieux 德国莱茵公司下属的 韩国绿十字疫苗公司 Green Cross 疫苗 重组酿酒酵母乙肝疫 苗 重组酿酒酵母乙肝疫 苗 重组CHO细胞乙肝疫 苗 重组汉逊酵母乙肝疫 苗
• 北京天坛的 弱项和不足：表达水平低，
抗原数量少，每剂疫苗只含5微克或 10微克的抗原，比华兰疫苗抗原含量 少一倍，所以抗体滴度低和抗体持续 时间较短。
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
表达水平
北京天坛 新乡华兰 50微克 300微克
抗原产量
低 高
北京天坛和新乡华兰疫苗 抗原含量和抗体反应的比较
每剂疫苗 抗原含量 抗体滴度 抗体持续时间
北京 天坛
华兰 公司
5微克（儿童） 低 10微克（成人）
10微克（儿童） 高 20微克（成人）
短
长
大连汉信和新乡华兰 纯化步骤和纯化收率的比较
纯化步骤
大连汉信 新乡华兰 多 少
纯化收率
低于20% 高于20%
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
的乙肝疫苗的基本情况： • 生产技术：从美国MERCK公司引进。 • 年产量：1000万人份，3000万支。 • 生产设备：从美国购进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
母总蛋白） • 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量： 50mg/Lх500L=25g • 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量 5,000,000/5=1,000,000支
疫苗生产技术简介.PPT优秀版
受精卵应来自SPF鸡群，至少源于未用抗生素药物的非免疫鸡群，以免受母源抗体的干扰和残留抗生素的影响。
选择一定日龄、发育正常的胚用于接毒培养。
•二、细菌性活疫苗的制造 按规定收获的胚液、胎儿和绒毛尿囊膜乳剂经无菌检验合格后即可进行配苗。
卵黄囊接种
5~8日龄胚
培养病毒的细胞：细胞若有潜在的致癌性病毒或慢病毒，以及有支原体污染均不能用作疫苗生产。
流程图
流
•受精卵
•毒 株
程 图
•接
•培育 •鉴定
•禽 胚
种
•种 子 •扩增 •种 毒
•收获
•
——
病
•含病毒尿囊液或禽胚组织
毒
性
禽
•含病毒悬液
胚
疫 •原 料
•灭活
苗 制
•纯化病毒悬液 •配制
•灭活病毒液
•原 料
配 制
造 •保护剂
•配 苗
•配苗、乳化
•佐 剂
工
艺 流 程
•分装、冻干 •检验
冻干毒种需按规定要求在鸡胚继代复壮，通 常继代3代以上，经检定符合标准后方可作力生 产疫苗的毒种，毒种检定内容包括无菌检验、 毒价测定和其他项目的检定等。
（三）接毒与收获
•1.接毒
• 鸡胚接毒涉及接毒途径和接毒量两方面。根据不同的病毒与不同疫
苗生产程序，选择最佳接种途径和接种量。
• 接种途径：绒毛尿囊膜接种 11~12日龄胚
从受精卵入孵开始至培养全过程都 应保持无菌，要求一定的温度和湿度， 且需不断翻动，然后选择。选择一定日 龄、发育正常的胚用于接毒培养。
（二）种毒与毒种继代
目前适应于鸡胚的种毒多系弱毒，包括自 然弱毒与人工培育的弱毒两类。各种制苗用的 种毒多数由国家菌毒种保藏部门或指定单位保 存，保存的种毒多为冻干毒。
选择一定日龄、发育正常的胚用于接毒培养。
•二、细菌性活疫苗的制造 按规定收获的胚液、胎儿和绒毛尿囊膜乳剂经无菌检验合格后即可进行配苗。
卵黄囊接种
5~8日龄胚
培养病毒的细胞：细胞若有潜在的致癌性病毒或慢病毒，以及有支原体污染均不能用作疫苗生产。
流程图
流
•受精卵
•毒 株
程 图
•接
•培育 •鉴定
•禽 胚
种
•种 子 •扩增 •种 毒
•收获
•
——
病
•含病毒尿囊液或禽胚组织
毒
性
禽
•含病毒悬液
胚
疫 •原 料
•灭活
苗 制
•纯化病毒悬液 •配制
•灭活病毒液
•原 料
配 制
造 •保护剂
•配 苗
•配苗、乳化
•佐 剂
工
艺 流 程
•分装、冻干 •检验
冻干毒种需按规定要求在鸡胚继代复壮，通 常继代3代以上，经检定符合标准后方可作力生 产疫苗的毒种，毒种检定内容包括无菌检验、 毒价测定和其他项目的检定等。
（三）接毒与收获
•1.接毒
• 鸡胚接毒涉及接毒途径和接毒量两方面。根据不同的病毒与不同疫
苗生产程序，选择最佳接种途径和接种量。
• 接种途径：绒毛尿囊膜接种 11~12日龄胚
从受精卵入孵开始至培养全过程都 应保持无菌，要求一定的温度和湿度， 且需不断翻动，然后选择。选择一定日 龄、发育正常的胚用于接毒培养。
（二）种毒与毒种继代
目前适应于鸡胚的种毒多系弱毒，包括自 然弱毒与人工培育的弱毒两类。各种制苗用的 种毒多数由国家菌毒种保藏部门或指定单位保 存，保存的种毒多为冻干毒。
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重组酵母乙肝疫苗
Hepatitis B Vaccine
基因工程产品的成功例证 生物技术应用的典范 甲基营养型酵母 -----汉逊酵母
乙肝疫苗生产发展简介
1
疫苗的 生产 1，灭活死疫苗
• 患者---分离出致病微生物（细菌或者
病毒）-----通过培养细菌（培养基） 或者病毒（细胞），获得大量的致病 微生物---用甲醛灭活（杀死）致病微 生物---纯化---铝吸附-----灭活死疫苗。
(第二代重组酵母乙肝疫苗）
乙肝疫苗生产发展简介
11
• 乙肝疫苗的发展历程： n80年代初期-----血源性乙肝疫苗（第一代乙肝疫
苗）。1995年停产。
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 2, 1968年Prince在血清型肝炎（乙型肝炎）
患者血清中发现抗原性与澳大利亚抗原相同 的病毒样颗粒，进而初步认定澳大利亚抗原 就是乙肝表面抗原。
• 3, 1970年Dane用电子显微镜在乙肝患者血
清中发现直径为42nm完整乙肝病毒颗粒及直 径为22nm的球形和杆形的乙肝表面抗原。
乙肝疫苗生产发展简介
北京 50mg/L 深圳
20%
大连 150-200mg/L 15% 汉信
华兰 200-300mg/L 20%
生物
乙肝疫苗生产发展简介
16
新乡华兰，大连汉信，北京天坛
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
乙肝疫苗生产发展简介
17
• 北京生物制品研究所(天坛生物)生产
疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
深圳康泰生物制品 重组酿酒酵母乙肝疫
公司
苗
华北药厂和长春生 重组CHO细胞乙肝 物制品研究所等 疫苗
大连高新(汉信）公 重组汉逊酵母乙肝疫
司 和华兰生物疫苗 苗
乙肝疫苗生产发展简介
14
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
厂家
北京 深圳 大连 汉信
华兰 生物
种菌
啤酒 酵母 汉逊 酵母
疫苗。
• 2，利用DNA重组技术构建重组微
生物（酵母）表达（合成）乙肝抗 原：基因工程乙肝疫苗
乙肝疫苗生产发展简介
5
乙肝疫苗发展历史
• 1, 1963年Blumberg发现在血友病患者的血
清中存在一种抗体，这种抗体能与澳大利亚 土著人血液中的一种抗原起交叉反应，这种 抗原被命名为“澳大利亚”抗原。
繁殖，病毒要在细胞中繁殖，比如，流感 病毒在鸡胚细胞中生长，狂犬病毒要在地 鼠肾细胞中生生长，乙脑病毒要在vero细 胞中生长。可是乙肝病毒在所有实验过的 细胞中都不能生长。乙肝疫苗的研究受到 了严重的困难。人们不得不寻求其他的途 径去生产乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
4
乙肝抗原的来源
• 1，乙肝患者的血液：血源性乙肝
乙肝疫苗生产发展简介
2
2，减毒活疫苗
• 患者---分离出致病微生物（细菌或者
病毒）-----通过改变培养条件，获得 不再致病微生物---培养不再致病微生 物，获得大量的不再致病微生物---铝 吸附-----减毒活疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
3
乙肝病毒的体外培养至今没有成功
• 前面，我们已经讲过，细菌要在培养基中
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
12
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家
疫苗
美国默克公司 Merck
重组汉逊酵母乙肝疫苗的生产。
乙肝疫苗生产发展简介
9
乙肝疫苗的发展历史
• 第一代乙肝疫苗；血源性乙肝疫苗。
• 第二代乙肝疫苗；基因工程乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
10
基因工程乙肝疫苗
• 1，CHO细胞乙肝疫苗。 • 2，重组酿酒酵母乙肝疫苗。
(第一代重组酵母乙肝疫苗）
• 3，重组汉逊酵母乙肝疫苗。
次研制成功第二代乙肝疫苗-----重 组酵母乙肝。
乙肝疫苗生产发展简介
7
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
Merck公司签订合同，引进重组酵母 乙肝疫苗工业化生产技术。1993年5 月开始试生产。
• 9, 90年代德国莱茵生物技术公司发展
了一种甲基营养型酵母---汉逊酵母表 达系统,其乙肝表面抗原表达水平可达 到 500-1000mg/L. 南 韩 绿 十 字 疫 苗 公司应用该表达系统实现了重组汉逊 酵母乙肝疫苗的大规模工业化生产。
汉逊 酵母
发酵 细胞 粗纯 破碎
四级 发酵 四级 流加
高压 破碎 球磨 破碎
硅胶 吸附
PEG 硅胶 吸附
四级 流加
高压 破碎
硫酸 铵沉 淀
乙肝疫苗生产发展简介
精纯 吸附
疏水 原位 层析 吸附 DEAE 普通 分子筛 吸附 区带 疏水 普通 DEAE 吸附 分子筛
15
公司 菌种的表达水平 纯化的 收率
6
• 4, 1971年Krugman发现加热处理
的急性期乙肝患者的血清能部分预 防乙肝感染。
• 5, 1981年Merck公司在世界上首
次研制成功第一代乙肝疫苗——血 源性乙肝疫苗。
• 6, 1985年北京生物制品研究所在
国内首次研制成功血源性乙肝疫苗.
• 7, 1986年Merck公司在世界上首
乙肝疫苗生产发展简介
8
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
• 11 ,华兰生物在2009年也将开始
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
比利时史克公司 Smith kline
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
法国巴斯德研究所 重组CHO细胞乙肝 Pasteur Merieux 疫苗
德国莱茵公司下属的 重组汉逊酵母乙肝疫 韩国绿十字疫苗公司 苗
Green Cross
乙肝疫苗生产发展简介
13
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家
北京天坛生物制品 股份有限公司(北京 生物制品研究所）
的乙肝疫苗的基本情况：
• 生产技术：从美国MERCK公司引进。 • 年产量：1000万人份，3000万支。 • 生产设备：从美国购进。
Hepatitis B Vaccine
基因工程产品的成功例证 生物技术应用的典范 甲基营养型酵母 -----汉逊酵母
乙肝疫苗生产发展简介
1
疫苗的 生产 1，灭活死疫苗
• 患者---分离出致病微生物（细菌或者
病毒）-----通过培养细菌（培养基） 或者病毒（细胞），获得大量的致病 微生物---用甲醛灭活（杀死）致病微 生物---纯化---铝吸附-----灭活死疫苗。
(第二代重组酵母乙肝疫苗）
乙肝疫苗生产发展简介
11
• 乙肝疫苗的发展历程： n80年代初期-----血源性乙肝疫苗（第一代乙肝疫
苗）。1995年停产。
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 2, 1968年Prince在血清型肝炎（乙型肝炎）
患者血清中发现抗原性与澳大利亚抗原相同 的病毒样颗粒，进而初步认定澳大利亚抗原 就是乙肝表面抗原。
• 3, 1970年Dane用电子显微镜在乙肝患者血
清中发现直径为42nm完整乙肝病毒颗粒及直 径为22nm的球形和杆形的乙肝表面抗原。
乙肝疫苗生产发展简介
北京 50mg/L 深圳
20%
大连 150-200mg/L 15% 汉信
华兰 200-300mg/L 20%
生物
乙肝疫苗生产发展简介
16
新乡华兰，大连汉信，北京天坛
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
乙肝疫苗生产发展简介
17
• 北京生物制品研究所(天坛生物)生产
疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
深圳康泰生物制品 重组酿酒酵母乙肝疫
公司
苗
华北药厂和长春生 重组CHO细胞乙肝 物制品研究所等 疫苗
大连高新(汉信）公 重组汉逊酵母乙肝疫
司 和华兰生物疫苗 苗
乙肝疫苗生产发展简介
14
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
厂家
北京 深圳 大连 汉信
华兰 生物
种菌
啤酒 酵母 汉逊 酵母
疫苗。
• 2，利用DNA重组技术构建重组微
生物（酵母）表达（合成）乙肝抗 原：基因工程乙肝疫苗
乙肝疫苗生产发展简介
5
乙肝疫苗发展历史
• 1, 1963年Blumberg发现在血友病患者的血
清中存在一种抗体，这种抗体能与澳大利亚 土著人血液中的一种抗原起交叉反应，这种 抗原被命名为“澳大利亚”抗原。
繁殖，病毒要在细胞中繁殖，比如，流感 病毒在鸡胚细胞中生长，狂犬病毒要在地 鼠肾细胞中生生长，乙脑病毒要在vero细 胞中生长。可是乙肝病毒在所有实验过的 细胞中都不能生长。乙肝疫苗的研究受到 了严重的困难。人们不得不寻求其他的途 径去生产乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
4
乙肝抗原的来源
• 1，乙肝患者的血液：血源性乙肝
乙肝疫苗生产发展简介
2
2，减毒活疫苗
• 患者---分离出致病微生物（细菌或者
病毒）-----通过改变培养条件，获得 不再致病微生物---培养不再致病微生 物，获得大量的不再致病微生物---铝 吸附-----减毒活疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
3
乙肝病毒的体外培养至今没有成功
• 前面，我们已经讲过，细菌要在培养基中
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
12
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家
疫苗
美国默克公司 Merck
重组汉逊酵母乙肝疫苗的生产。
乙肝疫苗生产发展简介
9
乙肝疫苗的发展历史
• 第一代乙肝疫苗；血源性乙肝疫苗。
• 第二代乙肝疫苗；基因工程乙肝疫苗。
乙肝疫苗生产发展简介
10
基因工程乙肝疫苗
• 1，CHO细胞乙肝疫苗。 • 2，重组酿酒酵母乙肝疫苗。
(第一代重组酵母乙肝疫苗）
• 3，重组汉逊酵母乙肝疫苗。
次研制成功第二代乙肝疫苗-----重 组酵母乙肝。
乙肝疫苗生产发展简介
7
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
Merck公司签订合同，引进重组酵母 乙肝疫苗工业化生产技术。1993年5 月开始试生产。
• 9, 90年代德国莱茵生物技术公司发展
了一种甲基营养型酵母---汉逊酵母表 达系统,其乙肝表面抗原表达水平可达 到 500-1000mg/L. 南 韩 绿 十 字 疫 苗 公司应用该表达系统实现了重组汉逊 酵母乙肝疫苗的大规模工业化生产。
汉逊 酵母
发酵 细胞 粗纯 破碎
四级 发酵 四级 流加
高压 破碎 球磨 破碎
硅胶 吸附
PEG 硅胶 吸附
四级 流加
高压 破碎
硫酸 铵沉 淀
乙肝疫苗生产发展简介
精纯 吸附
疏水 原位 层析 吸附 DEAE 普通 分子筛 吸附 区带 疏水 普通 DEAE 吸附 分子筛
15
公司 菌种的表达水平 纯化的 收率
6
• 4, 1971年Krugman发现加热处理
的急性期乙肝患者的血清能部分预 防乙肝感染。
• 5, 1981年Merck公司在世界上首
次研制成功第一代乙肝疫苗——血 源性乙肝疫苗。
• 6, 1985年北京生物制品研究所在
国内首次研制成功血源性乙肝疫苗.
• 7, 1986年Merck公司在世界上首
乙肝疫苗生产发展简介
8
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
• 11 ,华兰生物在2009年也将开始
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
比利时史克公司 Smith kline
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
法国巴斯德研究所 重组CHO细胞乙肝 Pasteur Merieux 疫苗
德国莱茵公司下属的 重组汉逊酵母乙肝疫 韩国绿十字疫苗公司 苗
Green Cross
乙肝疫苗生产发展简介
13
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家
北京天坛生物制品 股份有限公司(北京 生物制品研究所）
的乙肝疫苗的基本情况：
• 生产技术：从美国MERCK公司引进。 • 年产量：1000万人份，3000万支。 • 生产设备：从美国购进。