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菌落计数器注意事项 菌落计数器操作规程
菌落计数器注意事项菌落计数器操作规程1、仪器应放置在平整坚固的试验台上使用。
2、点数菌落时，计数笔不要过于倾斜，轻轻点下至有弹跳感，听到“嘟"声即可，如点按过重，易损坏计数笔。
3、仪器应防潮、防猛烈震动、防直接日光暴晒 1、仪器应放置在平整坚固的试验台上使用。
2、点数菌落时，计数笔不要过于倾斜，轻轻点下至有弹跳感，听到“嘟"声即可，如点按过重，易损坏计数笔。
3、仪器应防潮、防猛烈震动、防直接日光暴晒、防酸碱侵蚀，用后应加防尘罩。
4、注意防止细菌污染计数池。
5、如仪器发生不计数的问题，可按检验键。
如计数，说明计数笔坏。
如仍不计数，说明仪器本身有问题，若发觉故障，请不要任意拆卸，应请有阅历的技术人员检修，或由本厂检修。
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菌落计数器是一种数字显示式半自动细菌检验仪器。
由计数器，探笔、计数池等部分构成。
计数器内接受CMOS集成电路细心设计，LED数码管显示，字高16mm，菌落计数器是一种数字显示式半自动细菌检验仪器。
由计数器，探笔、计数池等部分构成。
计数器内接受CMOS集成电路细心设计，LED数码管显示，字高16mm，清楚光亮。
搭配专用探笔，计数灵敏精准明确。
深色纵深背景式计数池内，接受节能环形荧光等侧射照明，菌落对比清楚。
池面有确定的倾斜度，便于察看。
本仪器可减轻试验人员的劳动强度。
提高工效，提高工作质量。
广泛用于食品、饮料、药品；生物物品、化妆品、卫生用品、饮用水、生活污水、工业污水、临床标本中细菌的检验。
是各级卫生防疫站、环境监测站、食品卫生、监督检验所、医院、生物制品所、药检所、商检局、食品厂、饮料厂、化妆品厂、日化厂及大专院校、科研单位试验室的必备仪器一、使用方法：1、将电源插头插入220伏电源插座内。
菌落总数及大肠菌群检验中的注意事项
菌落总数及大肠菌群检验中的注意事项作者：李银花来源：《幸福家庭》2020年第10期菌落总数可以反映食品、饮用水等受到污染的程度。
大肠菌群则是一类与粪便污染有关的细菌。
食品安全卫生管理中，菌落总数、大肠菌群均是重要的参考指标，通过对食品中菌落总数、大肠菌群的及时检验，可为食品安全管理提供依据。
本文介绍菌落总数及大肠菌群在检验中需要注意的事项。
菌落总数、大肠菌群检验结果的准确性会受到检验方法的影响，合理选择检验方法至关重要。
目前菌落总数检验方面，如果是生活饮用水检验，需要参照GB/T 5750.12-2006;食品检验需要参照GB 4789.2-2016。
两种方法最大的不同是培养基。
生活饮用水菌落总数检验方法中的培养基为营养琼脂（NA），食品菌落总数检验中使用平板计数琼脂（PCA）。
其中NA对细菌培养更有利，且可避免细菌成片状生长。
饮用水菌落总数检验如果选择PCA，测定结果可能会偏高，导致合格饮用水结果误判。
大腸菌群的检测有MPN法与平板法两种。
其中MPN法为半定量计数，如果食品中大肠菌群含量较低，可选择该方法。
而大肠菌群较多的食品则可选择平板法，该方法是定量计数法。
通常情况下限度单位是确定选择哪种方法的依据，如单位为MPN/g或MPN/mL，应使用MPN法;如果单位是CFU/g或CFU/mL，此时可选择平板法。
部分特殊食品需要使用其他大肠菌群检验方法，如酱油、醋等虽然限度单位要求为MPN/100mL或MPN/100g，但是不能选择上述方法，而应该参照GB/T 4789.3-2003。
菌落总数以及大肠菌群检验还需要减少环境引起的污染问题。
因此，在检验中，检验人员需要保证样品在洁净区处理，检验中接触到的不同仪器、器具等需要做好消毒灭菌工作。
比如可将检验需要使用的金属取样工具、玻璃培养皿、刻度吸管等置入不锈钢消毒桶中，通过热空气消毒箱予以消毒;如果是培养基、生理盐水等含水物品，可应用湿热灭菌处理。
取样前保证样品包装处于密封状态。
大肠菌群平板计数法检验流程
大肠菌群平板计数法检验流程
朋友！今天咱来唠唠这大肠菌群平板计数法的检验流程。
先说准备工作哈，这可重要啦！得把那些培养皿、移液器啥的都准备好。
我跟你说，我刚开始学的时候，就老忘这忘那的，被师傅好一顿骂！
然后呢，就是取样。
这取样可得小心，千万别弄撒了，不然又得重来，那可烦死个人！我记得有一次，我手一抖，样本撒了一地，唉，当时我那个心呐，哇凉哇凉的。
接下来就是接种啦！这一步可得仔细，就跟绣花似的。
我记得好像是用移液器吸取一定量的样品，加到培养皿里。
不过也可能记错喽，嘿你可得自己多注意。
培养的时候，你就等着吧。
这期间你可别着急，着急也没用。
我以前就老着急，总想着快点出结果，结果啥也没弄好。
等培养好了，就开始计数啦！这时候你得瞪大眼睛，一个一个数清楚。
要是数错了，那可就白忙活了。
哦，对了！之前说的取样，一定要保证无菌操作，不然结果就不准啦！这可是关键中的关键。
我跟你讲，这检验流程啊，就得多练。
我刚开始也是笨手笨脚的，现在不也熟练了嘛！
要是你在操作过程中遇到啥问题，别慌，慢慢琢磨，或者来问我也行。
我这又扯远啦，反正按照这步骤来，多练几次，你肯定能掌握！怎么样，朋友，加油干吧！。
大肠菌群平板计数法的注意事项
大肠菌群是经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。
在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。
方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。
但大肠菌群多少算是含量较高呢国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g（mL）为界，超过这个含量一般认为是含量较高。
但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。
假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g（mL），那必须选用平板计数法。
若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。
因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。
培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。
无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。
特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。
大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。
当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。
另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。
但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。
稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。
大肠菌群检测中平板计数法主要操作要领
大肠菌裙检测是一项非常重要的微生物检测工作，它可以帮助我们了解环境和食品中是否存在大肠菌裙，从而保证人们的健康安全。
在大肠菌裙检测中，平板计数法是一种常用的检测方法。
下面将介绍大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领。
1.准备工作在进行大肠菌裙检测之前，需要准备相应的实验器材和培养基。
实验器材包括平板计数仪、移液器、无菌培养皿等。
培养基一般选择大肠埃希氏菌（EC）培养基。
2.样品处理将待测样品取适量放入无菌容器中，进行适当的稀释。
这一步要确保样品的稀释倍数适中，以保证后续的计数结果准确。
3.接种和培养取一定量的处理过的样品，在无菌工作台上均匀涂抹于含有适量培养基的培养皿上，然后进行培养。
培养条件一般为37摄氏度，培养时间为24小时。
培养后会形成菌落，这些菌落代表了原始样品中的细菌数量。
4.计数和记录在培养后，利用平板计数仪对菌落进行计数。
计数的时候需要注意避免重复计数同一菌落，保证计数准确。
需要记录计数结果，包括菌落数量和相应的单位。
5.结果分析根据计数结果，可以对原始样品中的大肠菌裙数量进行估算。
可以通过对对照组和样品组的比较来判断样品中大肠菌裙的数量是否合格。
大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领就是以上几点。
通过严格按照这些要领进行操作，可以确保检测结果的准确性和可靠性。
在进行操作过程中，还需要遵守无菌操作规范，确保实验过程中不受外界污染。
希望大家在进行大肠菌裙检测时能够严格按照操作要领进行，保证测试结果的准确性，从而更好地保障人们的健康安全。
大肠菌裙检测中的平板计数法是一种经典的微生物计数方法，它主要用于测定食品、饮用水、环境等样品中大肠菌裙的数量。
在这个过程中，我们需要注意几个关键的环节，来保证实验的准确性和结果的可靠性。
在准备工作环节，我们需要保证实验器材和培养基的质量。
实验器材一定要经过严格的消毒和清洁，以免外来细菌的污染影响实验结果。
培养基的选用也尤为重要，要选择与待测细菌的生长要求相适应的培养基，以保证细菌在培养基上的正常生长。
大肠菌群测定—食品中大肠菌群的测定方法
培养特性： 大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄 糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃， 在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。
➢ 在普通营养琼脂上有3中菌落形 态：
➢ 1）光滑型：菌落边缘整齐， 表面有光泽、湿润、
➢ 光滑、呈灰色，在生理盐水 中易分散；
计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳 糖胆盐发酵管。
•
接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml
以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠
杆菌混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵管对照。
• 置36±1℃温箱培养24±2小时，如所有发酵管 都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产 气者，则与对照的混合菌种一起按下列程序进 行。
4、 大肠菌群最可能数（MPN ）的报告
➢ 根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表（见附录
B ) ，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的 MPN 值。 ✓注意：当检样的量与表中的量有增加或减少时，
表内的数也应相应减少或增加。
大肠杆菌 0157显色 培养基上 的菌落
在伊红美兰乳糖琼脂（EMB）上
大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂上的典型特征
设备和材料
食品中大肠菌群测定
参考 GB4789．3-2010
➢主要由肠杆菌科中埃希氏菌属、肠杆菌 属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属 的Ⅲ亚属细菌组成。
3、大肠杆菌的生物学特性
基本形态
此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.50.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但 不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛， 但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体 动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微 荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良 好，革兰氏染色阴性。
大肠菌群平板计数法的注意事项
大肠菌群是经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。
在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。
方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。
但大肠菌群多少算是含量较高呢国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g（mL）为界，超过这个含量一般认为是含量较高。
但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。
假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g（mL），那必须选用平板计数法。
若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。
因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。
培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。
无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min 即可使用。
特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。
大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。
当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。
另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。
但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。
稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。
肉制品中大肠菌群的检验—第二法大肠菌群平板计数法
平 板
无菌磷酸盐缓冲液
计
数
无菌生理盐水
法
1mol/LNaOH 溶液
1mol/LHCl溶液
四、大肠菌群平板计数检样程序
选择15~150平板计数 典型和可疑菌落
36℃±1℃培 养18h~24h
典型菌落为紫红色 周围有红色胆盐沉 淀环，直径为0.5mm
挑选10个典型菌 落接种到BGLB
五、大肠菌群平板计数检样操作步骤
大肠菌群平板计数法
目录页
样品的采集和处理 设备和材料 培养基和试剂
大肠菌群平板计数检样程序 大肠菌群平板计数检样操作步骤
一、样品的采集和处理
大
1. 样品的采样原则和采样方案
肠
菌 群
样品的采样原则和采样方案和大肠菌群MPN计数法一样，都
平 板
按照国家食品微生物学检验总则GB4789.1—2016中的相关规定
计 数
去实施。
法
2. 样品的采集和处理
样品的采集和处理方式与大肠菌群MPN计数法一样，都按
照国家食品微生物学检验肉与肉制品检验GB/T 4789.17—2003
中的相关规定去实施。
二、设备和材料
备和材
菌
群
料如下：
平
板 计
➢ 恒温培养箱、恒温水浴箱、 均质器、振荡器、无菌
数 法
吸管或微量移液器及吸头、无菌锥形瓶、天平、菌落
计数器、无菌培养皿、菌落计数器、pH 计或pH 比
色管或精密pH 试纸等。
三、培养基和试剂
大 肠
煌绿乳糖胆盐(brilliantgreenlactosebile,BGLB)肉汤
菌 群
结晶紫中性红胆盐琼脂(violetredbileagar,VRBA)
(完整word)大肠菌群检验操作规程
大肠菌群计数检验操作规程一、目的建立大肠菌群计数检验的标准操作程序，使操作过程规范化.二、适用范围适用于大肠菌群计数的检验操作。
三、职责1.检验人员严格按检验操作规程进行检验.2.QC主管监督检查执行情况.四、程序1。
范围本方法适用于大肠菌群计数（coliforms）的测定2。
术语和定义2.1 大肠菌群：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
3. 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下:3.1 恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。
3。
2冰箱：2℃～5℃。
3.3 恒温水浴箱：46℃±1℃。
3。
4天平：感量为 0。
1 g.3。
5均质器。
3。
6振荡器。
3.7无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量 500 mL。
3.9无菌培养皿：直径 90 mm。
3.10 pH计或 pH比色管或精密 pH试纸。
3。
11菌落计数器.4。
培养基和试剂4。
1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose,LST）肉汤：见附录 A 中 A。
1。
4.2 煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录 A中A。
24.3磷酸盐缓冲液：见附录 A中 A。
3.4。
4无菌生理盐水：见附录 A中 A。
4。
4。
5无菌 1 mol/L NaOH:见附录 A中 A。
5.4。
6无菌 1 mol/L HCl：见附录 A中 A.6。
5。
检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。
图1大肠菌群 MPN计数法检验程序6.操作步骤6。
1 样品的稀释6。
1.1 固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min,或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min～2 min,制成 1:10 的样品匀液。
【检测】关于大肠菌群平板计数法的一些实践经验分享!
【检测】关于大肠菌群平板计数法的一些实践经验分享!一、VRBA培养相关问题1.所用器皿是否需要灭菌？答：不需要。
配制培养基所用到的锥形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要灭菌，但要求一定要清洗干净，表面无污渍、无残留。
煮沸完成后，取下锥形瓶，用一般常用的卫生纸（软纸）覆盖瓶口，用橡皮筋缠绕，待冷却至适宜温度即可倾注培养基。
在倾注培养基时，须点燃酒精灯，稍微灼烧锥形瓶口。
2.如何保持“煮沸2min”？答：可以用电磁炉或电热板进行加热煮沸，在该培养基即将煮沸时调低温度。
实际操作时，不需要严格按照此要求进行，加热煮沸数秒即可。
原因：本培养基很难保持煮沸2min，一旦煮沸，则培养基很快上涌、翻腾，若不调低温度或立刻采取其他措施，则培养基可在数秒内喷涌出来，严重者可喷涌2米以上、电磁炉周围1—2米范围内都是培养基飞溅的范围（实验室危险因子之一）。
3.若培养基未用完，是否可以冷藏起来下次用？答：不可以。
4789.28中已规定，固体培养基最多允许熔融1次（指的是经过高压灭菌冷却后的培养基还可以熔融一次后使用）。
且VRBA培养基冷却后，再次熔融时非常容易喷涌，若温度控制不当，底部培养基熔融后很快就会发生喷涌（即培养基未完全熔融就会发生喷涌现象）。
4.倾注完成后是否需要“覆盖一层”？如何覆盖？答：一般情况下不需要覆盖。
在实际操作过程中，若检验员初次接触该食品（或食品品类），则有必要在倾注培养基后再覆盖一层（原因是不清楚该样品是否会发生蔓延）。
而如此往复测试几次后，若该样品或食品品类均不存在蔓延现象，则以后的实验中都不需要进行覆盖。
若重复多次测试后都有蔓延现象，则以后的检验中最好都进行覆盖，最好是在原培养基已凝固或半凝固（不会发生晃动）时再倾注一层培养基（“一层”是指缓慢倾注培养基至培养基刚好能够覆盖整个平皿）。
二、如何确定培养基上长的是不是大肠菌群？答：不要去管什么是大肠菌群的典型形态，建议新手们认真按照标准进行证实试验，此证实试验非常简单，每一次VRBA上有菌落生长都进行证实试验，如此往复3-4次，对于哪种形态才是大肠菌群已经能够了然于心了。
大肠菌群平板计数法标准号
大肠菌群平板计数法标准号大肠菌群平板计数法是指在实验室条件下，通过将待检样品分散在含有特定培养基的平板上，利用培养基对大肠菌群产生的特异性反应，以及对大肠菌群可生长的特定条件进行培养和计数，从而评估样品中大肠菌群的数量。
该方法已被广泛应用于食品、环境和医疗卫生等领域的微生物检测。
大肠菌群平板计数法标准号是《食品微生物学通则》GB 4789.3-2016。
该标准是由中国国家标准化管理委员会于2016年发布的，是用于食品微生物检测的基本规范。
根据该标准，大肠菌群平板计数法的操作流程主要包括样品制备、平板培养、菌落计数和结果表达。
下面将对每个步骤进行详细介绍。
首先，样品制备是指将待检样品进行预处理，以提高大肠菌群的检测效果。
根据不同样品的特点，可以采取不同的处理方法，如加入适量的缓冲液进行搅拌均匀、加热杀菌和稀释等。
此外，还需要注意样品制备过程中的卫生要求，以防止交叉污染。
然后，将样品均匀地分散在含有选择性培养基的平板上。
选择性培养基可以抑制非大肠菌群的生长，从而增加大肠菌群在平板上的菌落形成，方便后续的计数。
常用的选择性培养基有MacConkey琼脂、立兰肠杆菌培养基等。
接下来，将含有样品的平板置于适宜的温度和湿度条件下进行培养。
大肠菌群在一定的温度范围内可迅速繁殖，通常将培养温度控制在37摄氏度。
此外，还需要为培养提供适当的湿度，可以通过在培养箱内放置含水的培养皿或湿度控制器来实现。
菌落计数是大肠菌群平板计数法的核心步骤。
通常，在培养一定时间后，将平板上的菌落进行计数。
菌落计数可以手工进行，也可以使用计数仪来实现。
在进行计数时，需要注意区分出不同的菌落，并排除其他非大肠菌群的菌落。
最后，根据菌落计数的结果，可根据标准对样品中大肠菌群的数量进行评估。
通常，大肠菌群的计数结果以CFU/g（或CFU/mL）表示，即每克（或每毫升）样品中大肠菌群的菌落数。
需要注意的是，大肠菌群平板计数法在应用中存在一定的局限性。
食品大肠菌群的测定(平板计数法).
任务五 典型和可疑菌落计数
• 选择菌落数在15~150之间的平板，分别计 数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 • 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形 成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
• 任务六 证实试验
• 从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和 可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，进 行证实试验。 • BGLB肉汤管产气者，所对应的菌落即为大 肠菌群阳性菌落。
注意事项 • 1、选择稀释度时，应以对含菌量的估计为 依据，具体情况所选稀释度不同。 • 2、两种检测方法的比较
• 平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更 精确。 • 适合用于污染比较严重的样品，但对于污 染菌量太少的样品，还是MPN法更有优势。
任务四 平板制备
选择适宜的稀释样液 根据对标本情况的估计,选择 3 个适宜稀释度,吸取该稀释度1mL稀释液于灭菌平皿内。 待培养基冷却至46℃左右，以无菌操作侵入无菌培 养皿中。每个平皿倒入约15-20mL培养基，利用培养基冲 散菌液，混匀。冷却凝固后，再在表面加3-4mL培养基。
从样品稀释到平板 涂布要求在15min 内 完成。
加入46℃结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)培养基 12~15ml待琼脂凝固后，再加3-4mL培养基覆盖。 挑选菌落接种BGLB
典型菌落为紫红色 , 菌 落周围有红色的胆盐沉 淀环。菌落直径为 0.5ห้องสมุดไป่ตู้m 或更大。
实践操作
任务一 仪器试剂准备
任务二 仪器试剂灭菌
任务三 样品稀释制备
全过程遵循无菌操作程序，考虑如何满足要求？ ⑴检样处理 以无菌操作取经过充分摇匀的检样25mL， 放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内做成1:10的 均匀稀释液。 ⑵样品稀释 用1mL灭菌吸管,吸取1:10稀释液1mL,沿管壁 徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内 （注意吸管尖端不要触及管内稀释液),充分振摇试管，使 之混合均匀,制备成1:100的稀释液。另取1mL灭菌吸管,按 上项操作顺序，作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次, 即换用1支1mL灭菌吸管。
大肠菌群检验原始记录(平板计数法)
XX公司
食品微生物检验记录
检品编号：检品名称：
【大肠菌群】按GB 4789.3-2010第二法平板计数法进行检验
环境条件：温度：湿度：
仪器设备：超净工作台编号：；培养箱（36℃±1℃）编号：
电子天平编号：
培养基与试剂：（配制日期：年月日）
①结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）；②无菌生理盐水；③煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤
样品操作
取 5 份独立包装的样品，分别取（）、、、、做为测试样品，按如下述操作，测得结果；
每份测试样品加入225 mL无菌生理盐水，均质，制成1:10样品均液（调节pH值为6.5~7.5），吸取 1 mL（1:10）样品均液至9 mL灭菌生理盐水中做10倍递增稀释。
选、和稀释液检测，培养基为结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA），℃，培养h（从月日: 到月日: ）,
挑选10个不同类型典型和可疑菌落，接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管，℃培养h（从月日: 到月日: ）。
标准规定：（标准号：）
n=5 c= m= CFU/g（mL）M= CFU/g（mL）结论：□符合规定□不符合规定
检验者：复核者：检验日期：。
平板菌落计数法
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载平板菌落计数法地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容平板菌落计数法（一）目的要求学习平板菌落计数的基本原理和方法。
（二）基本原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液。
2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。
3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
（四）操作步骤l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
大肠菌群平板计数限量标准
大肠菌群平板计数限量标准1. 引言大肠菌群是一类存在于人体肠道中的细菌，其计数可以作为评估肠道菌群健康状态的重要指标。
为确保食品安全和公共卫生，制定一份大肠菌群平板计数限量标准具有重要意义。
2. 目的本标准的目的是通过设定大肠菌群平板计数的限量，以减少食品和饮用水中的大肠菌群污染，保障公众健康。
3. 定义3.1 大肠菌群：指在大肠中常见的一类细菌菌群。
3.2 平板计数：采用平板培养方法，通过计数可成满足一定生长条件的菌落形成单位，来确定大肠菌群数量。
4. 大肠菌群平板计数限量标准4.1 食品中的大肠菌群平板计数限量标准：4.1.1 食品类别 | 大肠菌群平板计数限量（单位：CFU/g）鲜肉类食品| ≤100熟肉或熟制品| ≤10生鲜水果蔬菜| ≤100加工水果蔬菜| ≤10食品类加工品| ≤104.1.2 大肠菌群的检验方法：采用标准的培养基和平板计数法，培养温度为37°C，培养时间为24-48小时。
4.2 饮用水中的大肠菌群平板计数限量标准：4.2.1 饮用水类别 | 大肠菌群平板计数限量（单位：CFU/mL）自来水| ≤10包装饮用水| ≤104.2.2 大肠菌群的检验方法：采用标准的培养基和平板计数法，培养温度为37°C，培养时间为24-48小时。
5. 检测与监管5.1 大肠菌群平板计数的检测应由具备相应技术与资质的实验室进行。
5.2 相关部门应定期进行食品和饮用水的大肠菌群平板计数检测，确保其符合本标准要求。
5.3 如超出限量标准，则需要采取相应措施，例如立即终止生产、销售或使用，并进行卫生处理等。
6. 结论本标准制定了食品和饮用水中大肠菌群平板计数的限量标准，旨在确保食品安全和公共卫生。
相关部门和实验室应积极采取措施，加强对大肠菌群平板计数的监管和检测，保障公众的健康与安全。
注：CFU - 菌落形成单位 (Colony Forming Unit)。
菌落总数测定中的注意事项
菌落总数测定中的注意事项检测过程中的留意事项菌落计数留意事项cmcmcm结果计算留意事项 N =C/(n1+0.1n2)d(1)式中:N 样品中菌落数;C平板(含相宜范围菌落数的平板)菌落数之和;n1第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;n2其次稀释度(高稀释倍数)平板个数;d 稀释因子(第一稀释度)。
N =C/(n1+0.1n2)d= (232+244+33+35)/[2+ (0.12)]10-2 =544/0.022=24727表示为25000或2.5104。
3、若全部稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不行计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
4、若全部稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
5、若全部稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
6、若全部稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU 之间,其中一部分小于30CFU 或大于300CFU 时,则以最接近30CFU 或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
菌落总数的报告1、菌落数小于100CFU 时,按"四舍五入'原则修约,以整数报告。
2、菌落数大于或等于100CFU 时,第3位数字采纳"四舍五入'原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按"四舍五入'原则修约后,采纳两位有效数字。
3、若全部平板上为扩散菌落而无法计数,则报告菌落扩散。
4、若空白对比上有菌落生长,则此次检测结果无效。
5、称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。
大肠菌群的检测方法、仪器使用知识及注意事项
大肠菌群的检测方法、仪器使用知识及注意事项在现代医学领域中，大肠菌群的检测方法和仪器使用知识及注意事项成为了一个备受关注的话题。
大肠菌群是指寄生在人体消化道中的一类微生物群集，它们在人体内发挥着非常重要的作用，包括促进食物消化、合成维生素和抵御有害微生物等。
了解大肠菌群的检测方法以及仪器的使用知识和注意事项，对于维护人体健康具有重要意义。
要确定人体内大肠菌群的状况，通常会采用多种检测方法。
其中最常见的是通过实验室检测人体排泄物中的菌群成分来判断其种类和数量。
这种方法需要采集受检者的粪便样本，并通过特殊的培养基和培养条件来筛选出大肠菌群，再通过显微镜或分子生物学方法来鉴定其种类和数量。
另一种常见的检测方法是通过血清学检测，通过检测受检者血中抗原和抗体水平变化来间接推测大肠菌群的状况。
还有基于DNA 测序技术的高通量测序方法，可以更准确地识别大肠菌群的组成和数量，但是成本较高。
在具体操作时，使用检测大肠菌群的仪器需要特别注意一些事项。
首先是要做好实验室的无菌操作，确保样品不被外界环境中的杂菌污染。
其次是要熟练掌握各种仪器的使用方法，包括显微镜、培养皿和PCR仪等。
在使用时要严格遵守使用说明，避免因误操作导致结果的不准确。
另外，针对不同检测方法，抽取样本的部位和存储条件也有所不同，需要严格按照标准操作规程操作，以保证结果的准确性。
对于大肠菌群的检测方法和仪器使用知识及注意事项，我个人认为，这些知识的掌握对于医学研究和临床诊断具有十分重要的意义。
通过检测大肠菌群的种类和数量，可以更准确地了解人体内微生物群集的状况，为诊断和治疗提供更科学的依据。
仪器的正确使用和注意事项的遵守，可以有效避免误操作带来的不准确结果，保障医学研究和临床诊断的准确性和可靠性。
大肠菌群的检测方法、仪器使用知识及注意事项是一个十分广泛而且复杂的领域，在医学领域有着重要的应用价值。
只有深入了解这些知识，才能更好地发挥它们在医学研究和临床诊断中的作用。
菌落计数器注意事项 菌落计数器如何操作
菌落计数器注意事项菌落计数器如何操作1、仪器应放置在平整坚固的试验台上使用。
2、点数菌落时，计数笔不要过于倾斜，轻轻点下至有弹跳感，听到“嘟"声即可，如点按过重，易损坏计数笔。
3、仪器应防潮、防猛烈震动、防直接日光暴晒 1、仪器应放置在平整坚固的试验台上使用。
2、点数菌落时，计数笔不要过于倾斜，轻轻点下至有弹跳感，听到“嘟"声即可，如点按过重，易损坏计数笔。
3、仪器应防潮、防猛烈震动、防直接日光暴晒、防酸碱侵蚀，用后应加防尘罩。
4、注意防止细菌污染计数池。
5、如仪器发生不计数的问题，可按检验键。
如计数，说明计数笔坏。
如仍不计数，说明仪器本身有问题，若发觉故障，请不要任意拆卸，应请有阅历的技术人员检修，或由本厂检修。
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菌落计数器计数方法详解菌落计数器由计数器、探笔、计数池等部分构成，计数器接受CMOS集成电路细心设计，LED数码管显示，字高13mm，清楚光亮，搭配专用探笔，计数灵敏精准，菌落对比清楚。
便于察看。
可广泛用于食品、饮料、药品、生物制品、化妆品、卫生用品、饮用水、生活污水、工业废水、临床标本中细菌数的检验。
那么菌落计数器都是怎样进行计数的呢？上海巴玖来为您认真讲解菌落计数器的计数方法。
1.计数器测定法即用血细胞计数器进行计数。
取确定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜察看计数。
由于计数室的容积是确定的（O.1mm3），因而依据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立刻得出结果（本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数）。
微生物检测注意事项——大肠菌群和菌落总数
分析与检测T logy科技30 食品安全导刊 2018年9月我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌落总数、大肠菌群和致病菌3项，其中致病菌一般指“肠道致病菌和致病性球菌”，主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、致病性链球菌4种。
此外，鉴于很多霉菌能够产生毒素，引起消费者食物中毒及其他疾病，故特定产品也应对产毒霉菌进行检验。
大肠菌群检测注意事项方法选择大肠菌群（C o l i f o r m b a c t e r i a）是指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中是否有污染肠道致病菌的可能。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界中广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方。
人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因之一，粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则大肠菌群的其他菌株较多。
大肠菌群检测的关键在于方法的选用，食品中大肠菌群检测有两种表示方法，其一是以100m L(g)检样内大肠菌群最大可能数（M P N）表示，检测方法需使用G B/T4789.3-2003《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》；其二以每g（m L）样品中大肠菌群的MP N值表示，检测方法需使用G B4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》。
G B/T4789.3-2003《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》虽然被后更新的方法代替，但卫生部关于规范食品中大肠菌群指标的检测工作公告（2009年第16号）明确指出，为规范食品中大肠菌群指标的检测工作公告如下：现行食品标准中规定的大肠菌群指标以“M P N/100克或M P N/100毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大微生物检测注意事项——大肠菌群和菌落总数□ 董玲 上海英斯贝克商品检验有限公司大肠菌群（Coliform bacteria）是指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
菌落总数、大肠菌群测定方法.docx
菌落总数和大肠菌群测定（固体样品）药品：1、平板计数琼脂2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）4、氯化钠设备材料：烧杯、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。
一、准备工作（指导书是按一个样品所需物品准备的，实验室可按样品量增加）1、平板计数琼脂培养基准备----用于菌落总数测定将三角瓶放在电子称上，去皮，按平板计数琼脂使用说明称量，加200ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸加热煮沸，充分溶解，盖上硅胶塞，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧。
2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤----用于大肠菌群测定（a）将烧杯放在电子称上，去皮，按使用说明称量，加100ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸，充分溶解。
（b）用10ml（毫升）的吸管分装到9支（18*180规格）试管中，每支试管加10ml的月桂基溶液LST （合计90毫升）。
（C）9支试管分别放入倒气管（开口向下），排气，盖上硅胶塞。
3、0.85%的生理盐水----用于样品稀释将广口瓶去皮，称取氯化钠1∙91g加225ml蒸馏水，摇匀，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧；同样配制第二瓶。
4、准备2个空试管，盖上硅胶塞----用于样品稀释。
5、准备8个培养皿，用布包扎好。
6、准备至少3支5ml和1支IOmI带有刻度的吸管，用布包扎好（顶部可用棉球塞住，防止吸液时，液体不慎吸入洗耳球）。
7、准备操作的工具：剪刀1把、镊子1个、勺子等打开产品包装所需工具，用布包扎好。
二、使用灭菌锅灭菌1、检查灭菌锅底部加热管水位是否正常，水位要高过加热丝。
2、将上面准备好的7步骤物品逐一放入锅内，注意：滴定管吸口向下，有棉球的向上。
3、盖上火菌锅盖子时，将排气管插到排气口内，注意从对角线开始拧紧螺丝，将排气阀打开（安全阀始终关闭），通电后，待排气阀放气3分钟后（锅内冷空气已经排完），关闭排气阀。
4、查看灭菌锅的压力表，当温度升到121° ,压力升到0.1MP（兆帕）时，灭菌维持15分钟后（温度和压力不能过高或者过低），断电自然冷却到接近“ 0”度后，慢慢打开排气阀，再对角拧开灭菌锅。
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大肠菌群平板计数法的注意事项
大肠菌群是经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检
测的项目。
在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群
平板计数法的注意事项。
方法选择
相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。
但大肠菌群多少算是含量较高呢？国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以
100CFU/g（mL）为界，超过这个含量一般认为是含量较高。
但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。
假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g（mL），那必须选用平板计数法。
若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标
此处不再赘述。
因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。
培养基的要求
平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。
无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min 即可使用。
特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。
大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。
当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。
另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。
但值得注意的是，VRBA
需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。
稀释度的确定
国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。
什么样的稀释度是合适的呢？这要根据计数来决定。
计数环节要求选择菌落数在15CFU-150CFU的平板进行计数，因此培养后菌落数在这个范围内的稀释度就是适宜的稀释度。
实验室经常检测的产品的大肠菌群的水平检测人员可以预计的，但是对盲样，我们能做的只有根据实
际情况多检测几个稀释度了。
这里需要提一句，液体样品的检测稀释度可以包括
原液。
证实试验
需要从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部的典型和可疑菌落进行BGLB肉汤管验证。
这里挑取的菌落也是应当有选择的，典型菌落和可疑菌落的比例应当与平板上培养的两种菌落的比例相同或相
近，这样能够降低检测过程中的误差。
计数的报告
报告过程是很多朋友存在疑问的地方，因为平板计数法的结果报告需要结合培养基菌落数和复发酵验证两方面进行计算。
存在疑问的情况主要有以下几种：
1.所有稀释度都不在计数范围内怎么办？这种情况一般都是最低稀释度的平板
都小于15CFU，这种情况就是以最低稀释度的平板菌落数乘以验证试验的比例来计算。
例如10倍稀释的两个平板上菌落数分别为10、8，菌落数为10的平皿挑取10个菌落复发酵中有8个菌落产气，菌落数为8的平皿挑取8个菌落复发酵中有7个菌落产气，则计算过程是这样的：(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g（mL）。
2.连续两个稀释度的四个平皿的菌落数都在计数范围内怎么办？这个需要参考
菌落总数检测国标里7.1.2里的公式计算。
我们需要先计算每个平皿的验证后的菌落数，再代入公式计算即可。
例如10倍稀释度两个平皿菌落数为120和125,100倍稀释度两个平皿的菌落数为17和16，经过复发酵验证产气的管数分别为7、8、8、8，则我们先计算每个平皿上的菌落数分别为
120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6（我们计14），16*8/10=12.8（我们计13），然后将84、100、14、13四个数代入公式：（84+100+14+13）/（2+0.2）*10=959，结果应报告960CFU/g（mL）。
3.只有一个稀释度的一个平皿的菌落数在计数范围，其他均不在计数范围怎么
办？这样我们只需要复发酵验证这一个平皿即可，根据这一个平皿的菌落数进行报告。
例如10倍稀释度两个平皿菌落数为160和142,100倍稀释度两个平皿的菌落数为12和13，则我们只需要从菌落数为142CFU的平皿里挑取10个菌落进行复发酵验证即可，假如共有7支发酵管阳性，则应计算142*7/10=99.4，结果报告99CFU/g（mL）。
其实只要是平板菌落计数的相关问题，我们都应按照GB 4789.1-2016里要求的结果与报告要求进行计算和报告即可，无论那种情况，都是万变不离其宗的。