非小细胞肺癌组织中LRP的表达与意义

非小细胞肺癌组织中LRP的表达与意义
目的:研究非小细胞肺癌组织中肺耐药蛋白(LRP)的表达情况,探讨其表达与非小细胞肺癌临床诊断和治疗的关系。

方法:采用免疫组织化学SP法检测56例非小细胞肺癌组织中LRP蛋白的表达。

利用自动图像分析仪定量分析LRP的相对含量(灰度) 。

结果:LRP 主要在NSCLC 的细胞浆表达,细胞膜有少量表达,总阳性表达率为63.7%,LRP 表达强度与组织学类型有关,在腺癌中的平均灰度值明显高于鳞癌(P＜0.001),其表达强度与临床分期、有无淋巴结转移及年龄无关。

结论:检测NSCLC 组织中LRP的定量表达,可以准确反映NSCLC 组织的耐药性及化疗敏感性,对指导肿瘤化疗具有重要的临床意义。

[Abstract] Objective: To study the non-small cell lung cancer tissues of lung resistance protein(LRP) and discuss itsrelationship of diagnosis and treatment in non-small celllung cancer. Methods: Immunohistochemical SP method was used to detect LRP protein with 56 cases of non-small cell lung cancer. Use automatic image analyzer to analyze the relative content of LRP. Results: LRP was mainly in the cytoplasm of NSCLC, a small amount in membrane, with a total positive rate of 63.7%, LRP intensity is related to histological type, the amount of LRP in Adenocarcinoma was significantly higher than the average value of squamous cell carcinoma (P＜0.001), the LRP intensity had nothing to do with clinical stage, lymph node metastasis and age. Conclusion:The detection of NSCLC tissues of the quantitative of LRP, it can accurately reflect the organization NSCLC chemotherapy drug resistance and sensitivity ,and does good to chemotherapy.
[Key words] Non-small cell lung cancer;LRP;Immune
肺癌是人类最常见的肿瘤之一,多数发现时已到中晚期,失去了手术机会,因此化疗就成为肺癌治疗以及控制术后复发和转移的主要手段,但效果多不理想,主要原因是由于肿瘤细胞的多药耐药性(multidrugresistance ,MDR) 。

研究发现许多基因参与了肿瘤的多药耐药机制。

肺耐药蛋白( lungresistancerelatedprotein ,LRP) 作为人类穹隆体主蛋白,表达于许多肿瘤组织中,介导细胞对多种化疗药物如多柔吡星、丝裂霉素、顺铂和烷化剂等产生耐药性[1] 。

为阐述非小细胞肺癌中LRP 蛋白表达的临床意义,笔者采用免疫组织化学SP法检测47例非小细胞肺癌组织中LRP蛋白的表达,利用自动图像分析仪定量分析LRP的相对含量(灰度) 。

探讨其在非小细胞肺癌发生发展中的作用及与非小细胞肺癌生物学行为的关系,预测肿瘤对化疗的敏感性,从而指导肿瘤化疗。

1资料与方法
1.1 一般资料
选取2004年12月～2006年6月西安交通大学附属一院手术切除并经病理学确诊的非小细胞肺癌患者47例, 全部患者术前均未接受放、化疗等其他任何
抗肿瘤治疗,47例患者中,男32例,女15例,年龄(57.13+11.79)岁。

其中,腺癌21 例,鳞癌24例,腺鳞癌2例。

根据2002 年国际抗癌联盟(UICC)的分期标准分为, Ⅰ期17例, Ⅱ期11 例, Ⅲ期19例;有淋巴结转移27例,无淋巴结转移20例。

所有标本均经4%多聚甲醛液固定,石蜡包埋。

1.2方法
免抗人LRP单克隆抗体、阳性对照片,DAB 显色试剂盒, PBS 液,枸橼酸盐缓冲液等均购自福州迈新公司。

采用免疫组化SP法,按照SP试剂盒的操作步骤进行实验。

玻片预先经防脱片处理,石蜡包埋组织经4 μm连续切片,切片常规脱蜡水化后,于枸橼酸盐缓冲液中微波加热作抗原修复。

苏木精复染后,脱水,透明,封固后光镜下观察。

1.3结果判定
以肿瘤细胞质和(或) 细胞膜出现棕黄色颗粒着色为阳性。

应用自动图像分析仪测定免疫组织化学染色后的非小细胞肺癌组织中LRP的灰度值。

1.4 统计学处理
使用SPSS13.0 统计软件进行统计学处理。

两组比较用t检验,2个以上样本的比较采用q检验,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 LRP 在NSCLC 组织中的阳性表达
LRP在肿瘤细胞浆呈棕黄色颗粒着色,细胞膜有少量表达,细胞核无表达。

总阳性表达率为63.7%。

2.2 LRP 在NSCLC 组织中的表达水平与生物学行为的关系
LRP 在NSCLC 组织表达水平与组织学类型有关,在腺癌中的平均灰度值明显高于鳞癌(P＜0.001),在临床分期、有无淋巴结转移及年龄的表达水平方面差异无统计学意义。

见表1。

3讨论
NSCLC占肺部恶性肿瘤的80%,大部分患者发现时已处于中晚期,除少部分可手术外,化疗目前已成为临床治疗的主要手段。

但由于肿瘤细胞多药耐药使临床化疗的效果不能令人满意。

研究发现,药物外排增加导致肿瘤细胞内药物浓度下降是多药耐药发生的关键因素之一。

已发现与药物外排有关的蛋白主要有MRP1、LRP等多种膜转运蛋白[2]。

Izquierdo 等[3]检测了59 种肿瘤细胞系中LRP的表达情况,发现LRP表达阳性的肿瘤耐药细胞耐药谱很广泛。

LRP引起耐
药的机制目前认为有两种:第一,它可以阻止那些以胞核为靶点的药物通过核孔进入细胞核;第二,可以以运输囊泡的方式使进入细胞质的细胞毒性或抑制性药物被隔离,最终通过胞吐作用排出细胞外[4]。

多项研究还表明,LRP 在肿瘤组织中的表达率与表达水平明显高于正常组织,而且不同的肿瘤类型其表达水平也不尽相同[5]。

本实验结果与之相符,NSCLC阳性率为63.7%,腺癌LRP 阳性率和强度均高于鳞癌,这与临床上鳞癌化疗效果好相符。

本实验还发现,LRP 高表达与临床分期、有无淋巴结转移及年龄无关,说明临床分期、有无淋巴结转移及年龄与NSCLC 化疗耐药无密切关系。

本实验采用自动图像分析仪测定免疫组织化学染色后的非小细胞肺癌组织中LRP的灰度值,并进行定量分析,避免了由于人眼对色彩强度的主观感觉所造成的偏差。

因此,利用病理图像分析系统来检测NSCLC 中LRP 的表达强度,能准确了解非小细胞肺癌患者的耐药情况,对于预测化疗效果、选择治疗方案具有重要的临床意义。

[参考文献]
[1]Berger W,Setinek U,Hollaus P,et al.Multidrug resistancemarkers Pglycoprotein, multidrugresistanceprotein 1,and lungresistance protein in non2small cell lung cancer:prognostic implications[J].JCancer Res Clin Oncol,2005,131(6):355-363.
[2]李小琴,李堅.非小细胞肺癌中肺耐药蛋白mRNA的表达及临床意义[J].江苏大学学报(医学版),2008,18(4):141.
[3]Izquierdo MA,Scheffer GL,Flens MJ,et al. Broad dis2tribution of the multidrug resistance related vault lung resistance protein in normal human tissues and tumors[J].Am J Pathol,1996,148(3)∶877-887.
[4]Scheffer GL,Schroeij Ersab,Izquierdo MA,et al. Lungresistancerelated protein/major vault protein andvaults in multidrug resistant cancer[J]. Curr Opin Oncol,2000,12(6):550-556.
[5]董岩,赵晓红,纪萍.P53 和LRP 蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义[J].青岛大学医学院学报,2003,39(4):457-458.。