GOD法测定血清中葡萄糖浓度
临床上测定血糖浓度的原理
临床上测定血糖浓度的原理
临床上测定血糖浓度的原理主要有以下几种方法：
1. 葡萄糖氧化-还原法：使用葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时还原辅酶（如辅酶NAD+），导致辅酶的吸收光谱发生变化。
通过测量吸光度变化来确定血液中的葡萄糖浓度。
2. 葡萄糖酸脱氢酶法：使用葡萄糖酸脱氢酶（GDH）将葡萄糖酸还原为葡萄糖，同时将辅酶还原为辅酶NADH。
然后通过测量辅酶NADH的吸收光谱来确定血液中的葡萄糖浓度。
3. 电化学法：将血液型的电极浸入葡萄糖溶液中，根据葡萄糖产生的氧化还原反应，测量电解质浓度来计算葡萄糖浓度。
4. 免疫测定法：利用特定抗体与葡萄糖结合，形成抗原抗体复合物。
然后通过测量复合物的光学、电化学或放射性信号来确定血液中的葡萄糖浓度。
这些方法各有优劣，临床根据需要选择合适的方法来测定血糖浓度。
血清葡萄糖浓度的测定
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧 化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深 浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
• 空腹血糖损害IFG (impaired fasting glucose) 和糖耐量减退IGT (impaired
glucose tolerance) 是正常向糖尿病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是糖尿
病， 但是将来发生2型糖尿病的危险性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据
有关研究报道，每年5-8%的 IGT者将发展成为2型糖尿病。
人体对糖的耐受现象 OGTT为口服葡萄糖负荷试验，可了解人体进食葡萄糖后的血
糖调节能力，早期发现糖代谢异常，早期诊断糖尿病，是一种简
单、快捷的诊断方法。 OGTT重复性差，操作繁琐，并非必需的糖尿病诊断方法，因 此不推荐临床常规应用。
方法：试验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于150 g，且维持正常活 动。影响试验的药物应在三天前停用，受试前应空腹10-16 h。空腹取血后，5 分钟内饮入250 mL含75 g无水葡萄糖的糖水(妊娠妇女用量为100 g，儿童按1.75
实验步骤
B S T
工作液 dH2O
葡萄糖标准液 血清
1.00 mL 10 uL
-
1.0 mL 10 uL -
1.0 mL 10 uL
混匀， 37C， 15 mins dH2O 0.50 mL 0.50 mL 0.50 mL 混匀，以B管调零，在510nm波长处读取S管和T管的吸光度. 计算:
葡萄糖测定方法范文
葡萄糖测定方法范文1.血糖仪检测法血糖仪是一种小型的便携式电子设备，可以准确测量血液中的葡萄糖浓度。
该方法常用于个人家庭监测，也可以由医生在诊所或医院进行测量。
血糖仪通常与测试试纸一起使用，试纸上含有特定的化学物质，可以与血液中的葡萄糖反应产生颜色变化，然后通过电子设备进行读数，从而确定血糖浓度。
2.葡萄糖氧化酶法（GOD-PAP法）葡萄糖氧化酶法是一种常用且经济实惠的葡萄糖测定方法。
它利用葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并与PAP酶（对氨基酚磺酸酯酶）和4-氨基酚（对氨基酚）发生反应，产生一种可见光吸收的紫色产物。
紫色的强度与血液中的葡萄糖浓度成正比，可以通过比色法或分光光度计进行测量。
3.葡萄糖脱氢酶法（GDH法）葡萄糖脱氢酶法是一种常用的葡萄糖测定方法，也被广泛用于血糖仪中。
该方法利用葡萄糖脱氢酶将葡萄糖氧化成葡萄糖酮，并与辅酶NAD(P)+反应，产生NAD(P)H。
NAD(P)H的浓度与血糖浓度成正比，可以通过比色法或分光光度计进行测量。
4.高效液相色谱法（HPLC法）高效液相色谱法是一种精确而灵敏的葡萄糖测定方法，常用于临床和科研实验室。
该方法利用高效液相色谱仪分离血液中的葡萄糖，并通过紫外光检测器测量葡萄糖的浓度。
该方法不受干扰物质的影响，并且具有较高的准确性和重复性。
在实际应用中，葡萄糖测定方法的选择取决于不同的因素，包括可用的设备和试剂、测量的准确性和精确性要求、操作的便捷性以及花费等。
此外，不同的葡萄糖测定方法对于样品的要求也有所不同，一般需要经过预处理，如抗凝剂处理、离心沉淀、过滤等。
总之，葡萄糖测定是一项重要的实验室检查方法，能够帮助医生评估人体内的血糖水平，对疾病的诊断和治疗起到重要作用。
各种葡萄糖测定方法各有优缺点，选择适合的方法需要考虑实际需求和实验条件。
血清中葡萄糖浓度的测定
实验器材与试剂
（一）器材 5ml移液管，50或100ul微量可调式移液器 721E型分光光度计 ，37度恒温水浴锅 （二）试剂 （1）0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）：称取 无水磷酸二氢钠8.67g,称取无水磷酸二氢钾5.3g， 溶于蒸馏水800ml中，调节pH=7.0,定容至1L （2）酶试剂：取过氧化物酶12 000 U，葡萄糖 氧化酶1 200 U,4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠 100mg，溶入磷酸盐缓冲液80ml中，用磷酸盐缓冲 液定容至100ml，置于4℃保存。
临床意义
• 生理性高血糖：可见于摄于高糖食物后，或情绪 紧张导致肾上腺分泌增加时。 • 病理学高血糖：a 糖尿病:病理性高血糖常见于胰 岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。b 内分泌腺 功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及 髓质功能亢进，引起各种对抗胰岛素的激素分泌 过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，现 已归入特异性糖尿病中。c 颅内压增高：刺激血 糖中枢，如颅外伤，颅内出血，脑膜炎等，引起 血糖增高。d 脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻 和高热等也可使血糖轻度增高。
血清葡萄糖浓度的测定 （GOD-POD法）
小组成员：石子涛 习文 盛世豪 蒋勇
实验目的
1.掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理。
2.掌握血糖变化的临床生理意义。
知识窗
酶法分析是指用酶作为工具定量测定某种物
质含量的分析方法。定量分析的目标可以是酶的 底物，辅酶，也可以是酶的激活剂或抑制剂。
其分类如下：
实验原理
• 酶法测定血清葡萄糖是用以过氧化物酶作指示酶 的偶联酶反应定量法。 • 葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧将葡萄糖氧化成葡 萄糖酸，同时释放出过氧化氢。过氧化物酶 (POD)催化过氧化氢氧化色素原，并使色素原氧 化成红色醌类化合物（色素），即Trinder反应。 其生成量与葡萄糖含量成正比。
godpod法测血糖实验报告
godpod法测血糖实验报告一、实验目的本次实验旨在探究 godpod 法在血糖检测中的准确性、可靠性以及操作的便捷性，为临床血糖监测和糖尿病的诊断与管理提供参考依据。
二、实验原理Godpod 法是一种基于葡萄糖氧化酶（GOD）和过氧化物酶（POD）的酶促反应来测定血糖浓度的方法。
葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下与显色剂发生反应，产生可测量的颜色变化，通过比色法测定吸光度，进而计算出血糖浓度。
三、实验材料与设备1、实验试剂葡萄糖标准液（浓度分别为 28mmol/L、61mmol/L、111mmol/L）葡萄糖氧化酶试剂过氧化物酶试剂显色剂2、实验仪器分光光度计移液器恒温箱离心机试管、刻度吸管等四、实验步骤1、样本采集采集空腹静脉血 3ml，注入含有抗凝剂的试管中，轻轻混匀。
以 3000r/min 离心 10 分钟，分离血浆备用。
2、标准曲线绘制分别取不同浓度的葡萄糖标准液 01ml，加入到试管中，然后加入30ml 葡萄糖氧化酶试剂和 03ml 过氧化物酶试剂，充分混匀。
将试管置于 37℃恒温箱中孵育 15 分钟。
取出试管，在分光光度计上于 505nm 波长处，以空白管调零，测定各标准管的吸光度。
以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3、样本测定取01ml 待测血浆样本，按照与标准曲线绘制相同的步骤进行操作，测定吸光度。
4、计算结果根据样本的吸光度，在标准曲线上查出对应的葡萄糖浓度。
五、实验结果1、标准曲线绘制的标准曲线呈现良好的线性关系，相关系数 r 为 0998。
2、样本测定结果对 10 份血浆样本进行测定，结果如下（单位：mmol/L）：｜样本编号|测定值|｜｜｜｜1|52|｜2|68|｜3|49|｜4|75|｜5|58|｜6|82|｜7|46|｜8|63|｜9|71|｜10|55|六、结果分析1、准确性将测定结果与已知的血糖参考值进行比较，发现大部分样本的测定值与参考值偏差在允许范围内，表明 godpod 法具有较高的准确性。
葡萄糖测定葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。
2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定3 个月。
3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。
4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。
5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。
2h 以后方可使用。
7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
用GOD法测定血清中葡萄糖浓度
酶法：葡萄糖氧化酶法
（一）化学法
方法
磷钼酸法 （Folin-Wu）
类型
原理
定量 G+Cu2+→Cu2O↓ 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 →蓝色钼化合物
（430nm）
用途及备注
稳定、准确、但对 葡萄糖无特异性，
受血中非糖还 原物 质的影响。
邻甲苯胺法
定量
G+邻甲苯胺→蓝绿色的席弗(Schiff)碱 （630nm）
思考题：
a) 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂 终止酶的反应？
b) 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸 酶活力测定中的显色反应有何异同？
c) 为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考 值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.89~6.11mmol/L Folin-Wu法： 4.4~6.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.89~6.11mmol/L
③ 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张
病理性高血糖：
①糖尿病
②内分泌腺功能障碍
③颅内压增高
④脱水引起高血糖
生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动
病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，
肝源性和胰岛素瘤等。
❖调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮 质激素和肾上腺素。
血糖的来源、去路
血糖水平恒定的生理意义
保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以 葡萄糖供能的组织器官。 ➢ 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡 萄糖供能； ➢ 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； ➢ 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供 能。
酶法（GOD-PAP法）测血清葡萄糖
酶法(GOD -PAP 法)测血清葡萄糖实验目的熟悉酶法测定血液中葡萄糖糖浓度的原理掌握测定血糖的意义实验原理本方法采用两种酶（GOD ：葡萄糖氧化酶；POD ：过氧化物酶）测量葡萄糖含量，具体反应如下：葡萄糖 ＋ O 2−−→−GOD葡萄糖酸 ＋ H 2O 2H 2O 2 ＋ 4-氨基安替比林＋酚−−→−POD醌亚胺染料(红色) ＋ H 2O醌亚胺染料在500nm 处有吸收峰，其颜色的深浅与葡萄糖的浓度成正比。
实验时采用已知浓度的葡萄糖溶液作标准管，经反应测定A 标，待测样品在同样条件下反应后测定A X ，这样可计算得到样品中葡萄糖浓度。
本法测得人血糖的正常值约为3.9一6.1mmol/L 。
仪器设备各类分光光度计，自动生化分析仪均可 学生实验仪器一套试剂1．酶试剂：葡萄糖氧化酶(G0D)＞1200U过氧化物酶(PAP)＞1200U“U”是酶的活性单位4—氨基安替比林0．8mmol/L2．磷酸缓冲液pH7．23．葡萄糖标准液：100mg／dL(5.55mmol/L)实验操作1．酶工作液配臸：酶试剂与缓冲液根据标本量，临用前按体积比1﹕4混匀，2—8℃可保存一个月。
2．标本处理：抽取全血37℃保温5分钟，3000转离心10分钟，取上清液备用。
3．取小试管3支编号，按下表操作：说明：①理论上1号管应再加入10μL蒸馏水才能与其它各管溶液体积一致，但是10μL体积对总体积影响很小，故不精确加入亦可。
②酶工作液的体积视当时的反应条件而定，此为建议值。
总之使反应后的红色溶液吸光度值适当(A 值在0.2到0.5之间)即可。
③10μL 液体不易精确加入，实验时要仔细检查移液枪的密封性。
此外，移液枪外壁沾有的少许残留液体也要用滤纸小心吸干。
各管加好后，混匀，臵37℃水浴10分钟，0.5cm 光径比色杯在500nm 波长下比色(722型分光光度计)。
计算C X ：血清中葡萄糖浓度； C 标：标准液中葡萄糖浓度 A X ：待测管吸光度； A 标：标准管吸光度A X / A 标= C X / C 标(因每一管中加入的其它试剂体积一致) C X = C 标· A X / A 标代入已知数据即得。
葡萄糖测定标准操作规程
葡萄糖测定标准操作规程1.检验原理：（葡萄糖氧化酶法）葡萄糖氧化酶（GOD ）利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。
过氧化物酶（POD ）在色原性氧受体4-氨基安替比啉（4-AA ）和对羟基苯甲酸钠去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量成正比。
D-葡萄糖+2O +O H 2−−→−GOD 葡萄糖酸+22O H222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD 红色醌类物质+4O H 2 2.试剂组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清或用草酸钾-氟化钠抗凝的血浆。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释：6.1在给定的样本/试剂比例和条件测定时，本试剂线性范围可达25mmol/L。
样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本，最大稀释倍数为10.6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×187.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在500nm处吸光度大于0.200时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：R1：无色或淡红色透明液体，无悬浮物及沉淀；R2无色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.2008.4线性范围：试剂的线性区间为[2.2-25]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.2-4.7]mmol/L区间内，线性绝对偏差不超过±10U/L；（4.7-25）mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：使用参考物质测定时，当浓度≤4.16mmol/L，实测值与标识值偏差应不超过±0.833mmol/L，当浓度＞4.16mmol/L，实测值与标识值偏差应在±20%范围内。
实验三 GOD-POD法测定葡萄糖的回收和干扰试验1
4、消除干扰的方法有
1）空白对照 包括试剂空白和标本空白。 2）物理、化学方法去除干扰（可能会引入新的干扰） 3）只使用对干扰物的敏感度不高的方法。如：己糖激酶法 测定GLU，酶法测定肌酐等 4）以两点法或双波长法消除部分干扰，可以设计双试剂法 消除内源性干扰
2．纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样 品的10%，避免将血清稀释过度，引起误差 的改变。
3．准确加量是最主要的技术关键。
注意事项(干扰试验)
1、加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常所 见浓度的上限，有可能时应达到病理标本 的最高值。
2、凡可疑干扰物都应做，这里仅是举例示范。 3、适当增加测定次数以减少实验的随机误差。
样本测定
37 ℃水浴，10分钟，500nm比色。
结果计算-回收率
加入浓度= 标准液浓度* 标准液量ml 血清量(ml) 标准液量(ml) 生理盐水量(ml)
回收浓度 = 分析样品测得浓度 – 基础样品测得浓度
回收率（%）=
回收浓度 加入浓度
100％
一般要求回收率95-105%
干扰值计算
试剂与器材
1、试剂组成：R1：苯酚10mmol/L，POD>1000U/L，抗VIC氧化 酶； R2： GOD>1600U/L, 4-AAP2mmol/L
2、试剂包装：R1及R2，标准液浓度5.55 mmol/L 3、工作试剂配制：本试剂盒为液态双试剂，加双试剂的仪器
可直接应用，试剂更稳定，加单一试剂的仪器临用时缓冲 液和酶溶液以R1：R2=3:1的比例混合。
干扰物加入浓度= 干扰物浓度*
干扰物溶液量 ml
血清量 (ml ) 干扰物溶液量 (ml ) 生理盐水量(ml )
干扰值＝加入干扰物后的测定值－基础测定值
血清葡萄糖(GLU)测定—GOD-POD(精)
正常参考范围:3.9~6.1mmol/L
注意事项
-葡萄糖有ɑ型和ß型之分，在溶液中可互相转 变。新配制的葡萄糖标准液须放置2小时以上 （最好过夜），使两者在溶液中达到平衡。
COD-POD 法初始反应特异性高，而指示反 应特异性较差，干扰往往发生在指示反应。血 液中的一些还原性物质，如维生素C、谷胱甘 肽及左旋多巴可与色原性氧受体竞争H2O2， 使结果出现偏差。
临床意义
血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的 相对平衡时，则出现高血糖和低血糖。
高血糖： 1.生理性高血糖：见于饭后1~2h；注射葡萄糖后；情绪紧张时分泌肾上腺
素增加或注射肾上腺素后等。 2.病理性高血糖： ①内分泌功能障碍：如糖尿病等 ②颅内压增加刺激血糖中枢而使血糖升高，如颅外伤，颅内出血等。 ③严重脱水：引起血液浓缩而导致血糖升高，如呕吐、腹泻、高热等。 血糖降低.： 1.生理性的低血糖：有饥饿、剧烈运动等。 2.病理性的低血糖： 胰岛素分泌过多：如胰岛β细胞增生或肿瘤。 对抗胰岛素的激素分泌不足：如垂体前叶、肾上腺皮质和甲状腺功能减退等。 血糖来源减少：如长期营养不良，严重的肝病等。
血清葡萄糖（ＧＬＵ）测定—GOD-POD法
实验目的：
⒈掌握GOD-POD法测定血糖的原理及注意事 项。
⒉熟练进行实验操作并能够正确使用加样枪 ⒊了解血糖测定的主要临床意义。
实验原理：
ＧＯＤ催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过 氧化氢，过氧化氢被偶联的ＰＯＤ催化释放出 初生态氧，后者将色原性氧受体４-氨基安替 比林偶联的酚氧化，并与4-氨基安替比林结合 生成红色醌类化合物。
操作步骤：
1、配制酶工作液：
2、按下表操作：
GOD-POD法测葡萄糖的反应进程曲线
终点法
• 平衡法 • 测定反应完成或达到平衡后底物பைடு நூலகம்产物变化的总 量，即测定反应物或产物的浓度。
实验目的
• 使用葡萄糖测定试剂盒，检测某一浓度的标准液， 以观察反应达到平衡期的时间以及显色稳定性时 间。
试剂和方法
• 7.0mmol/L葡萄糖标准溶液 • 16.7mmol/L葡萄糖标准溶液 • GOD-POD法
注意事项
• 生化反应是连续的。 • 整个实验需要记录17个吸光度数据：测定管13 （10+3）个，空白管4个。 • 合理利用等待时间，组间配合。 • 调零管不动，反应过程中，使用比色皿作为容器 水浴。
思考
• 标准液浓度的选择为什么是7.0和16.7？ • 若反应未能在规定时间内达到平衡，可能有哪些 原因？
实验目的使用葡萄糖测定试剂盒检测某一浓度的标准液以观察反应达到平衡期的时间以及显色稳定性时godpod法操作步骤试剂空白管测定管葡萄糖标准溶液20ul20ul酶酚工作液3ml3ml操作步骤在500nm波长下以蒸馏水调零前20min内每2min记录一次吸光度
GOD-POD法测葡萄糖的反应进程 曲线试验
结果评价
• • • • • • 空白管吸光度变化： 试剂空白的吸光度是否符合要求； 试剂空白的时间进程曲线是否平坦。 测定管吸光度变化： 反应能否在规定的时间内达到平衡； 反应进程曲线应平滑，说明反应过程平稳。
操作步骤
试剂空白管 测定管
葡萄糖标准溶液
水 酶酚工作液 20ul 3ml
20ul
3ml
操作步骤
• 在500nm波长下以蒸馏水调零，前20min内每 2min记录一次吸光度。10min后每3min记录一次 吸光度，观察10min。 • 用蒸馏水代替样品试剂检测试剂空白的反应时间 进程曲线。每2min记录一次吸光度,可记录3～4 个吸光度值。 • 以吸光度为纵坐标,以反应时间为横坐标作图,观察 线性期、平衡期出现的时间及显色稳定时间。
葡萄糖测定实验
葡萄糖酸+H2O2
POD
2 H2O2+4-氨基安替吡林啉+酚
醌亚胺+4H2O
试剂主要成分与浓度:
试剂 主要成分 葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ） R1 过氧化物酶（ＰＯＤ） 磷酸缓冲液（ＰＨ７.０） R2 酚 4-氨基安替吡林啉 11mmol/l 0.77mmol/l 900U/L 100mmol/L 实验浓度 13000U/L
２.如果x、y之间呈直线关系，即可用经典 的直线回归分析法作统计处理，其结果 可以显示候选方法的测定结果有无系统 误差存在 直线回归方程y=a+bx，a为回归直线 的截距，代表恒定误差的大小；b回归系 数，即直线的斜率，代表比例误差的大 小
3.作相关分析 在方法比较试验中，相关系数可作 为被评价方法可否被接受的一项统计学 指标． 对求出的相关系数还应作相关系数 的t检验
方法学比对概念
• 用两种方法同时测定一批标本计算出两 种方法间检测的差值,以此来估计被评价 方法在实际测定病人标本时可能引入的 总系统误差的水平.
意义
• 将候选方法与准确度已知的方法(如参考 方法)作对比分析,以评价候选方法的准确 度,是考核候选方法是否可被采用的重要 试验.方法比较试验是用于检测候选方法 系统误差的大小包括恒定误差和比例误 差,如对适当的数据进行分析,也可以提供 误差的性质.本实验以己糖激酶法为参考 方法，用来评价葡萄糖氧化酶法的总系 统误差
葡萄糖校准液:5.55mmol/l
• 将１０ mlR1 与９０ ml Ｒ２混合均匀，即 为工作液． • 样品： 新鲜无溶血血清（１-15号样本）
操作步骤：
空白管 工作液 蒸馏水 校准 样品 3.0ml ０.０2ml ０.０2ml ０.０2ml 校准管 3.0ml 样品管 3.0ml
实验四 葡萄糖的测定
实验四葡萄糖的测定（POD-GOP法）一．实验目的1. 掌握葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法测定血糖；2. 学习使用分光光度计；3. 学习微量移液器的使用二．实验原理葡萄糖氧化酶(GOD)葡萄糖+O2 葡萄糖酸+ H2O2过氧化物酶(POD)H2O2 + 酚+ 4-氨基安替比林醌+ H2O+O2红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比，在505nm有吸收峰三．试剂1. 试剂1：磷酸盐缓冲液70mmol/L酚10.6mmol/L pH 7.02. 试剂2：磷酸盐缓冲液70mmol/L4-氨基安替比林0.8mmol/L葡萄糖氧化酶>10U/ml过氧化物酶> 1U/ml pH 7.03. 标准葡萄糖溶液 5.55mmol/L4. 兔子血清四．操作步骤1.配制工作液：取等量试剂1和试剂2混合均匀2.按下表加入有关试剂3. 充分混匀，置于37℃水浴15分钟，显色后，在波长505nm处，以空白调零，读取标准管和样品管的吸光值A4. 实验结果计算：葡萄糖（mmol/L）=[样品管吸光度（A样）/标准管的吸光度（A标）]×标准液浓度五．实验数据及结果1.数据记录2.计算结果葡萄糖=0.489/0.237*5.55mmol/L=11.45mmol/L=206.35mg/dl思考题哪些方法可增加血糖测定的准确性？答：1.增加测定的重复次数2.加样的准确，如在使用微量移液器量取液体时要称量准确，向试管中加液的顺序要正确3.可根据所得数据绘制标准曲线，并通过标准曲线求出浓度4.在使用分光光度计时注意操作准确以上的这些方法都可以增加血糖测量的准确性。
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邻甲苯胺法
定量
G+邻甲苯胺→蓝绿色的席弗(Schiff)碱 （630nm）
（二）酶
法
酶法分析是指用酶作为工具定量测定某种
物质含量的分析方法。定量分析的目标可以是 酶的底物，辅酶，也可以是酶的激活剂或抑制 剂。
酶法分析的主要方法：
单酶反应定量法和偶联酶反应定量法
单酶反应定量法：指用一种酶为工具酶定量测
空白管 (ml) – – 0.03
酶酚混合试剂
3.00
3.00
3.00
充分混匀，37℃ 水浴中保温20min； 冷却至室温后，505nm处比色 比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度值。
（2）计算
依据朗伯-比尔定律： A=KLC
血清葡萄糖= （mmol/L） 测定管吸光度 标准管吸光度 × 标准液浓度
测定 方法
有机化学法：邻甲苯胺法
酶法：葡萄糖氧化酶法
（一）化学法
方法
磷钼酸法 （Folin-Wu）
类型
原 理
用途及备注
稳定、准确、但对 葡萄糖无特异性， 受血中非糖还 原物 质的影响。
较Folin-Wu法特异 但不及酶法。 D-甘露糖能与邻甲 苯胺反应，生成类 似吸收光谱，造成 正误差。
定量 G+Cu2+→Cu2O↓ 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 →蓝色钼化合物 （430nm）
葡萄糖酸＋H2O2
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
过氧化物酶 （POD） Trinder反应
H2O ＋红色醌式物质
505nm
相对血糖浓度
光吸收法测定
实验步骤：
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
试剂 血清样品 葡萄糖标准液 蒸馏水
标准管 (ml) – 0.03 –
测定管 (ml) 0.03 – –
葡萄糖氧 同上 G+O2 → GA+H2O2 化酶（POD） H2O2 + 染料→有色染料 偶联法 （还原型） （氧化型） 可制试纸片定量
（4-氨基安替比林+酚 半定量筛选试验 →红色琨类化合物505nm）
（Trinder）
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理
（1）葡萄糖＋O2＋H2O
葡萄糖氧化酶 （GOD）
血糖的来源、去路
血糖水平恒定的生理意义
保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以 葡萄糖供能的组织器官。 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡 萄糖供能； 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供 能。
血糖测定的常用方法
无机化学法： Folin-Wu法
参考值： 空腹血清葡萄糖浓度:3.89～6.11mmol／L
注意事项：
① ②
③
本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂 中，再吸试剂反复冲洗试管。 此法可直接测定脑脊液葡萄糖的含量，但不能 直接用于测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿 酸等干扰物质浓度过高，可感染过氧化物酶发 硬，造成结果假性偏低。 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张 病理性高血糖：
①糖尿病 ③颅内压增高 ②内分泌腺功能障碍 ④脱水引起高血糖
生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动 病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，
肝源性和胰岛素瘤等。 调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮 质激素和肾上腺素。
思考题：
定某种物质的方法。
偶联酶反应定量法：当单酶反应底物或产物反
应底物或产物的物理化学手段无法区分时，还 可以借助另一种酶作为指示酶，通过偶联反应 进行定量分析。
方法
类型
原 理
用途及备注
血清尿液脑脊液、 公认参考方法 操作简便，特异 性和灵敏性均高 推荐常规方法
己糖激酶 定量 G+ATP→G-6-P+ADP （HK）法 分光 G-6-P + NADP+ 动态 →GA-6-P + NADPH 终点 （340nm）
a)
b)
c)
本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂 终止酶的反应？ 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸 酶活力测定中的显色反应有何异同？ 为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考 值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.89~6.11mmol/L Folin-Wu法： 邻-甲苯胺法： 4.4~6.7mmol/L 3.89~6.11mmol/L
实验九
葡萄糖氧化酶法 测定血清葡萄糖
一、实验目的
(1)了解血糖的概念。 (2) 掌握血糖的测定方法——葡萄糖氧化酶法。
What？
血糖及正常血糖水平:
血糖：指血液中的葡萄糖.
正常血糖浓度：
空腹波动在3.89～6.7mmol/L（70～110mg/dl）
餐后2h内应≤7.8mmol/L（≤140mg/dl）。