水样中病毒核酸的提取
核酸的提取与鉴定实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告
实验报告：核酸的提取与鉴定
I. 实验目的：
通过实验学习核酸提取和鉴定的步骤，掌握核酸提取实验技能，初步了解PCR技术及其在分子生物学中的应用。
II. 实验原理：
DNA分子在水性条件下具有极强的极性，由此，在化学性质上只要是极性且亲水性的溶剂都能迅速膨胀和破裂DNA分子的双链
结构，并溶解其中的碱基、核苷酸、脱氧糖等。
利用这一原理，
我们可以用溶液来提取含有核酸的样品，然后通过紫外吸光度计
检测该提取物中核酸的含量。
此外，PCR技术是一种被广泛运用
于DNA扩增的技术，其主要原理是通过DNA聚合酶扩增DNA
的特定片段。
III. 实验步骤及结果：
1. 核酸提取：将实验样品加入细胞破解液并混匀，离心后取上
清液，加入等体积的异丙醇，轻轻振荡混合并离心15分钟，然后
弃上清液，加入70%无水乙醇并离心，倒掉液体后用氧气吹干。
最终的核酸提取物的溶解液浑浊且无法肉眼辨认样品。
2. 核酸鉴定：将已经提取的样品分别用紫外吸光度计测量其光密度，结果表明与对照的D.W相比，样品中的核酸具有极高的光密度值，证明核酸提取步骤成功，核酸鉴定实验成功。
IV. 结论：
通过本次实验，我们成功地提取了样品中的核酸，并对提取后的核酸进行了鉴定，证明提取物中含有大量的核酸，表明核酸提取和鉴定实验成功，也为分子生物学的研究提供了基础。
核酸提取经验及原理总结
核酸提取经验及原理总结核酸提取是分子生物学研究中的一项重要技术，它可以从生物样品中分离和纯化出目标的核酸分子，为后续的实验操作提供基础。
本文将对核酸提取的经验和原理进行总结，以帮助读者更好地理解和应用该技术。
核酸提取的经验总结：2.样品的预处理：在核酸提取前，需要对样品进行一些预处理，如细胞裂解、组织破碎等。
这些步骤有助于释放和保护核酸分子，促进提取效果。
3.溶解和裂解：核酸提取的第一步是将样品溶解和裂解，以释放核酸分子。
溶解缓冲液常用于裂解样品，并加入蛋白酶进行蛋白质降解。
此时需要考虑样品的特性和实验要求，选择合适的裂解缓冲液和裂解方法。
4.核酸分离：核酸分离是核酸提取的关键步骤，常用的分离方法有酚-氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。
在选择分离方法时需考虑样品的类型和实验要求，以及各种方法的特点和优势。
5.纯化和浓缩：提取的核酸分子中常含有杂质，需要进行纯化和浓缩。
常用的纯化方法有酚-氯仿法、琼脂糖凝胶电泳法和商用纯化试剂盒等。
纯化后的核酸可以进行浓缩，以提高其浓度和纯度。
6.质量检测：核酸提取后，需要对提取的核酸分子进行质量检测。
常用的检测方法有琼脂糖凝胶电泳、比色法和荧光分析等。
通过检测可以了解核酸的浓度、纯度和完整性，为后续实验提供准确的数据。
核酸提取的原理总结：1.细胞裂解和溶解：细胞裂解是将细胞壁和细胞膜破坏，使细胞内容物暴露在溶液中。
细胞溶解液中常含有裂解缓冲液和蛋白酶等物质，以促进细胞的裂解和蛋白质的降解。
2.核酸分离和纯化：核酸在细胞溶解液中可以与其他细胞成分分离，常用的方法有酚-氯仿法。
酚可溶于水，而氯仿可溶于有机溶剂，通过两相溶剂的分层，可以将核酸沉淀到有机相中，从而实现核酸的分离。
3.杂质去除和浓缩：通过纯化方法，可以将核酸与其他杂质分离。
如硅胶柱和磁珠法通过静电吸附和洗脱来除去杂质，商用纯化试剂盒则通过离心柱等固相材料来实现。
纯化后的核酸可以进行浓缩，以提高其浓度和纯度。
4.质量检测：核酸提取后，需要对提取的核酸进行质量检测。
核酸提取的基本步骤及原理
核酸提取的基本步骤及原理
核酸提取的基本步骤包括以下几个步骤：
1. 细胞或组织的损毁与裂解：将样品中的细胞或组织破坏并裂解，使内部的核酸暴露在溶液中。
常用方法包括机械破碎、化学裂解或酶裂解等。
2. 蛋白质去除：通过加入蛋白酶等蛋白质分解酶，将样品中的蛋白质降解，以便之后纯化核酸。
3. 核酸纯化：通过溶液的调节和加入适当的试剂，使核酸与其他杂质分离。
常用的方法有酚-氯仿萃取、硅胶柱层析、磁珠吸附等。
4. 洗涤：通过洗涤溶液的加入和溶液对样品的冲洗，去除残留的杂质，提高核酸的纯度。
5. 脱盐：通过洗涤和纯化步骤，使核酸处于含有适量盐浓度的溶液中。
6. 浓缩：通过溶液的挥发、沉淀和离心等方法，将核酸溶液浓缩到适当的体积。
7. 质量检测：使用紫外吸收光谱、凝胶电泳等方法进行核酸的质量和纯度检测。
8. 储存：将提取得到的核酸转移到适当的储存条件下，保存以备进一步应用。
核酸提取的原理是利用细胞或组织中核酸与其他成分的生化性质的差异，通过物理或化学方法分离和纯化核酸。
核酸提取的关键步骤是细胞裂解和蛋白酶处理。
在细胞裂解过程中，细胞壁和膜被破坏，同时蛋白质酶降解细胞中的蛋白质。
随后通过柱层析或吸附等方法，分离纯化核酸。
最后，通过洗涤、脱盐和浓缩等步骤去除杂质，获得纯净的核酸溶液。
核酸提取方法
核酸提取方法核酸提取是分子生物学研究中的重要步骤，它是从细胞或组织中分离出核酸的过程。
核酸提取的质量直接影响到后续实验的结果，因此选择合适的核酸提取方法至关重要。
下面将介绍几种常用的核酸提取方法。
1. 酚氯仿法。
酚氯仿法是最常用的核酸提取方法之一。
它通过酚和氯仿的密度差异来分离核酸。
首先，将细胞或组织破碎，并加入酚酚液，使细胞溶解并释放出核酸。
然后，加入氯仿，混合离心，核酸会在水相中，而蛋白质和DNA在有机相中。
最后，通过离心分离出核酸。
2. 硅胶柱法。
硅胶柱法是一种高纯度核酸提取方法。
它利用硅胶柱的亲和性分离核酸。
首先，将细胞裂解液加入硅胶柱中，核酸会与硅胶结合。
然后，通过洗涤和离心的步骤，可以去除杂质，最后用去离子水洗脱核酸。
3. 磁珠法。
磁珠法是一种快速、高效的核酸提取方法。
它利用表面修饰的磁珠与核酸的亲和性来分离核酸。
首先，将细胞裂解液加入含有磁珠的试剂中，核酸会与磁珠结合。
然后，通过磁场的作用，可以快速分离出核酸。
4. 硝酸盐法。
硝酸盐法是一种适用于古老样本的核酸提取方法。
它利用硝酸盐的氧化性来分解细胞壁，释放出核酸。
首先，将样本加入含有硝酸盐的溶液中，经过裂解和离心，可以分离出核酸。
5. 现场快速提取法。
现场快速提取法是一种适用于野外样本的核酸提取方法。
它利用快速裂解和离心的步骤来分离核酸。
首先，将样本加入裂解液中，经过快速振荡和离心，可以分离出核酸。
总结。
核酸提取是分子生物学研究中的关键步骤，选择合适的核酸提取方法对实验结果至关重要。
不同的样本和实验需求可能需要不同的核酸提取方法，因此在选择核酸提取方法时，需要根据实际情况进行选择。
希望以上介绍的核酸提取方法对您有所帮助。
核酸提取方法三种
核酸提取方法三种核酸（DNA或RNA）的提取是生物学和分子生物学研究中的一项重要技术。
这些提取方法可分为化学法、机械法和磁珠法三种。
1. 化学法：化学法是最常用的核酸提取方法之一，其基本原理是通过化学试剂破坏细胞膜和核膜，使得核酸被释放出来。
常用的化学试剂包括胰蛋白酶、SDS、EDTA、蛋白酶K等。
首先，组织样品需经过细胞破碎，方法可以是机械破碎或液氮冲击。
接下来，将样品中的蛋白质通过蛋白酶处理，以去除干扰。
然后，加入一定的试剂将DNA 或RNA稳定起来，并用氯仿醇萃取法或硅胶柱纯化法来分离核酸。
最后，用适当的缓冲液溶解核酸，使其适合后续实验使用。
2. 机械法：机械法适用于提取植物细胞原生质体中的DNA或RNA。
它的基本原理是通过物理力量破碎细胞壁和细胞膜，释放细胞质中的核酸。
机械法提取核酸的方法有刀切法、研磨法和玻璃珠破碎法等。
在刀切法中，样品被切成细小片段，然后用块状试剂研磨，最后用缓冲液洗净，使核酸溶解。
研磨法和玻璃珠破碎法则通过高速旋转或震荡的方法，利用玻璃珠等硬质物体对样品进行破碎。
3. 磁珠法：磁珠法是一种快速高效的核酸提取方法。
它利用表面修饰的磁性珠，通过磁场的作用来实现核酸的捕获、纯化和洗脱。
这种方法常用于自动化的核酸提取设备中，并通过磁力分离技术简化了传统柱层析法的操作步骤。
在磁珠法中，首先制备表面修饰的磁性珠，以使其能够选择性结合DNA或RNA。
然后，将样品与磁珠混合，使核酸与磁珠结合。
通过磁场的引导和离心沉降，磁珠与被结合的核酸被分离出来。
最后，通过洗脱步骤，将核酸从磁珠上解离，使其溶解在适当的缓冲液中。
总结：核酸提取是分子生物学研究中至关重要的一步，能够从组织样品中提取出纯度较高的DNA或RNA。
化学法、机械法和磁珠法是常用的核酸提取方法。
化学法利用试剂破坏细胞和核膜，使核酸被释放出来；机械法通过物理力量破碎细胞壁和细胞膜，释放细胞质中的核酸；磁珠法则利用表面修饰的磁性珠来捕获、纯化和洗脱核酸。
核酸提取原理及的方法
核酸提取原理及的方法核酸提取是生物学研究中常用的一项操作技术，用于从生物样本中提取出纯度较高的核酸物质，以供进一步的分析和实验使用。
核酸提取的原理是将细胞膜破裂，使得核酸释放到溶液中，然后通过几种方法去除蛋白质、其他杂质和溶液中的酶，最后将纯的核酸物质从溶液中沉淀出来。
核酸提取的方法有很多种，下面将介绍常用的几种方法。
1. 酚/氯仿法（Phenol/Chloroform Extraction）：这是最常用的核酸提取方法之一、首先将细胞样本加入到含有酚和氯仿的溶液中，酚能溶解脂质，破坏细胞膜；然后离心使其分为两相，上层为水相，下层为有机相。
水相中含有核酸和水溶性杂质，有机相中含有脂质和非水溶性杂质。
将上层水相取出，通过分子筛或盐的作用去除水相中的酚、蛋白质等杂质，最后通过异丙醇沉淀法将核酸沉淀下来。
2. 硅胶柱层析法（Silica Column Chromatography）：这是一种常用的纯化核酸的方法。
首先将细胞样本经过裂解步骤释放核酸，然后将裂解液加入硅胶柱中，硅胶能够吸附核酸。
通过洗涤和洗脱的步骤去除杂质，最后将纯度较高的核酸溶液从硅胶柱中洗脱出来。
3. 盐沉淀法（Salt Precipitation）：这是一种简单快速的核酸提取方法。
首先将细胞样本经过裂解步骤释放核酸，然后加入盐溶液（如氯化钠），通过高盐浓度的作用沉淀核酸。
通过离心将核酸沉淀下来，去除杂质。
最后通过加入适当的溶剂将核酸溶解出来。
4. 柱层析法（Column Chromatography）：这是一种基于分子大小差异的核酸提取方法。
首先将细胞样本经过裂解步骤释放核酸，然后将裂解液加入到一个具有分子层次的柱中。
根据核酸的大小和形状差异，通过洗涤和洗脱的步骤将目标核酸从其他杂质中分离出来。
除了以上介绍的几种方法，还有磁珠萃取法、酵素消化法等核酸提取方法。
这些方法各有优缺点，可以根据实验的需要选择适合的方法。
需要注意的是，在进行核酸提取过程中，应当避免核酸样本的污染，一些常见的措施包括使用丙酮等剂去除有机物和酶，使用无菌工具和试剂，以及进行负控实验等。
核酸的操作方法提取方式
核酸的操作方法提取方式核酸（nucleic acid）是生物体中的重要分子之一，包括DNA（脱氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）。
提取核酸的操作方法有多种，主要步骤包括样品预处理、细胞破碎、核酸溶解、纯化和测定。
1. 样品预处理：样品预处理是提取核酸前的关键步骤，目的是为了去除干扰物质并保护核酸的完整性。
常见的样品包括血液、尿液、组织等。
样品预处理可以根据具体样品的特点选择相应的方法，如血液样品可以使用抗凝剂抽取血液并离心，组织样品可以冷冻保存或使用组织裂解液进行细胞破碎等。
2. 细胞破碎：细胞破碎是提取核酸的关键步骤，目的是破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内核酸释放出来。
常用的细胞破碎方法有物理方法和化学方法。
物理方法包括振荡、高压破碎、超声波破碎等，化学方法包括酶解、碱裂解等。
选择合适的方法应根据样品的特点和所需的核酸类型进行选择。
3. 核酸溶解：细胞破碎后的溶液中含有核酸和其他的细胞组分，需要进行进一步的处理。
首先将细胞碎片进行离心，沉淀废弃物质，获得上清液。
然后，将上清液进行蛋白酶处理，以去除蛋白质。
最后，使用一定的缓冲液或溶液使核酸溶解于其中，以便进行后续的纯化工作。
4. 核酸纯化：核酸纯化是提取核酸过程中的关键步骤，常见的核酸纯化方法有有机相提取法、硅胶纯化法、树脂柱纯化法等。
有机相提取法基于核酸在有机溶剂和水溶液之间的分配系数，通过多次萃取和相分离的步骤进行。
硅胶纯化法利用硅胶的吸附性质，将核酸吸附到硅胶表面，再通过洗脱的步骤提取核酸。
树脂柱纯化法则是利用树脂柱的特定亲和性，将核酸与其他杂质分离开来。
选择合适的核酸纯化方法应根据实验的要求和核酸的特性来决定。
5. 核酸测定：核酸提取完成后，需要对提取得到的核酸进行测定。
常用的核酸测定方法有吸光法、电泳法、PCR等。
吸光法可以通过核酸的吸光系数计算浓度，电泳法可以通过核酸在电场作用下的迁移距离计算分子大小，PCR则可以快速放大核酸片段以扩增数量。
核酸提取的方法
核酸提取的方法
核酸提取是指从生物样品中分离纯化核酸的过程，常用的核酸提取方法主要有以下几种：
1.酚-氯仿法（Phenol-Chloroform Extraction）：将生物样品与
酚-氯仿混合，通过离心分离出有机相和水相，有机相中含有
核酸，可以经过乙醇沉淀得到纯化的核酸。
2.硅胶柱法（Silica Column Extraction）：将生物样品经过裂解，混合硅胶柱柱料，利用硅胶吸附核酸，经过洗脱步骤得到纯化的核酸。
3.离心柱法（Spin Column Extraction）：使用离心柱将生物样
品吸附于柱载体上，利用离心力和洗涤缓冲液来分离和纯化核酸。
4.磁珠法（Magnetic Bead Extraction）：利用磁珠表面特定基
团与核酸进行非特异性吸附结合，通过磁性分离方法来分离和纯化核酸。
这些方法在细胞、血液、组织等生物样品的核酸提取中被广泛应用，根据实验需求和样品类型可以选择合适的方法。
两种水源性诺如病毒富集方法的比较
作者简介: 冯微宏(１９７３￣) ꎬ男ꎬ江苏无锡人ꎬ副研究员ꎬ博士ꎬ主要从事腹泻病毒病原生物学研究ꎬｐｅｔｅｒ＿ｇｒｅａｔ＠ １６３.ｃｏｍ.
∗责任作者ꎬ许秋瑾(１９７０￣) ꎬ女ꎬ江苏无锡人ꎬ研究员ꎬ博士ꎬ主要从事湖泊生态学、环境毒理与风险评估研究ꎬｘｕｑｊ＠ ｃｒａｅｓ.ｏｒｇ.ｃｎ
Ｇｅｌ Ｄｏｃ ＸＲ ＋ 凝胶成像仪购自美国 Ｂｉｏ￣Ｒａｄ 公司( 货
号:５８３８) ꎻＷＴ６００￣２Ｊ 型精密蠕动泵及配套硅胶软管
购自保定兰格恒流泵有限公司ꎻＰｕｒＬＶｓ ＴＭ 真空抽滤系
ＲＴ￣ＰＣＲ ( 反转录酶￣聚合酶链反应) 方法的检测下限.
统购自北京卓诚惠生生物科技有限公司ꎻＮａｎｏＣｅｒａｍ
２８ ８％±６ １％ꎬ说明阴离子膜吸附￣洗脱法对病毒的富集回收率显著高于阳离子膜吸附￣洗脱法( Ｐ<０ ０５) . 研究显示ꎬ综合富集效
果、耗费时间和成本等因素ꎬ阴离子膜吸附￣洗脱法比阳离子膜吸附￣洗脱法更适用于日常水源性诺如病毒的富集工作.
关键词: 诺如病毒ꎻ 阴离子膜ꎻ 阳离子膜ꎻ 病毒富集
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ: ｎｏｒｏｖｉｒｕｓꎻ ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｓｉｔｉｖｅ ｍｅｍｂｒａｎｅꎻ ｅｌｅｃｔｒｏｎｅｇａｔｉｖｅ ｍｅｍｂｒａｎｅꎻ ｖｉｒｕｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
诺如病毒是一种重要的水传播病毒ꎬ被认为是最
特征性片段的质粒由无锡疾病预防控制中心微生物
包裹的单股正链 ＲＮＡ 病毒ꎬ其基因组可以分成 ３ 个
泛使用的水体中诺如病毒的富集方法是病毒吸附￣洗
管购自美国 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ 公司( 货号:Ｃ３０４３) .
③水中存在一些抑制 ＲＴ￣ＰＣＲ 的物质
核酸环境采样操作方法
核酸环境采样操作方法
核酸环境采样是一种常用的实验操作方法，用于采集和分离环境中的核酸样品，并进行后续的实验分析。
下面是一种常用的核酸环境采样操作方法：
1. 准备材料：无菌手套、无菌试管、无菌移液枪、无菌吸头、消毒液、0.1 M PBS （pH 7.4）、冰箱。
2. 环境样品采集：选择要采集的环境样品，如土壤、水样、空气中的悬浮颗粒等。
避免对环境造成污染，使用无菌工具进行采集。
3. 样品处理：将采集到的环境样品放入无菌试管中。
根据所需的实验方法，可以选择加入一定体积的PBS缓冲液进行稀释。
加入PBS缓冲液后，使用无菌吸头或者移液枪充分混匀样品。
4. 预处理：将采集的样品在高速离心下，离心沉淀下来的核酸样品。
倒掉上清液，避免样品和上清液相互污染。
5. 提取核酸：根据需要提取的核酸类型，选择适当的核酸提取方法。
常用的核酸提取方法有酚/氯仿法、柱式提取法、磁珠提取法等。
6. 纯化核酸：提取得到的核酸可能存在杂质和废弃物，需要进行纯化处理。
常用的核酸纯化方法有酒精沉淀法、柱式纯化法等。
7. 测定核酸浓度：用核酸浓度检测仪等仪器准确测定提取得到的核酸的浓度和纯度。
8. 储存核酸：将提取和纯化得到的核酸样品分装到无菌的试管中，并存放在-20C 或-80C的冰箱中。
这是一种常用的核酸环境采样操作方法，但根据实验需求和样品特点的不同，操作步骤和细节可能略有不同。
因此，在具体操作前，最好参考相关实验方法和操作手册，以确保实验的准确性和稳定性。
用于从样本中提取核酸的方法和试剂盒与流程
核酸提取是分子生物学研究中非常重要的步骤，其影响着后续实验的结果。
目前，有许多不同的方法和试剂盒可以用于从样本中提取核酸，但每种方法都有其优缺点。
本文将介绍常见的核酸提取方法和试剂盒，并详细说明其使用流程。
希望能帮助读者更好地理解核酸提取的原理和操作步骤。
一、常见的核酸提取方法1.酚-氯仿提取法酚-氯仿提取法是最经典的核酸提取方法之一。
其原理是利用酚和氯仿两种有机溶剂与水相不相溶的特性，将核酸从样本中分离出来。
虽然酚-氯仿提取法具有成本低、操作简单等优点，但由于酚和氯仿均具有毒性，对实验人员的健康造成潜在风险，且提取效率较低。
2.硅基离子交换法硅基离子交换法是一种通过硅胶基质固相吸附核酸分离纯化的方法。
其原理是利用硅胶质地的吸附能力，将核酸固定在硅胶表面，然后通过洗涤和洗脱的方式得到纯化的核酸。
硅基离子交换法具有提取效率高、纯度好等优点，但需要使用硅基离子交换柱和大量有机溶剂，成本较高。
3.磁珠法磁珠法是近年来发展起来的一种核酸提取方法，其原理是将在不同条件下具有不同亲和性的磁珠与核酸结合，然后通过磁力分离的方式将核酸提取出来。
磁珠法具有操作简便、提取效率高、易于自动化等优点，目前被广泛应用于临床诊断和科研领域。
二、常见的核酸提取试剂盒1.常规核酸提取试剂盒常规核酸提取试剂盒是市面上最常见的一种提取试剂盒，适用于各种类型的样本。
其操作流程一般包括细胞破碎、蛋白酶处理、核酸结合、洗脱等步骤，提供了一整套的实验操作说明。
常规核酸提取试剂盒通常包括硅基离子交换柱、试剂液、配套的离心管等。
2.血浆/血清核酸提取试剂盒血浆/血清核酸提取试剂盒是专门用于提取血浆或血清中的核酸的试剂盒。
由于血浆/血清中的核酸含量较低，且受到抗凝剂和其他成分的干扰，因此需要专门设计的提取试剂盒。
血浆/血清核酸提取试剂盒一般包括了特殊的蛋白酶和离心管。
3.病毒核酸提取试剂盒病毒核酸提取试剂盒是专门用于提取病毒中的核酸的试剂盒，适用于临床病毒检测和科研领域。
核酸提取方法步骤及方法
核酸提取方法步骤及方法(1)浓盐法利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M Nacl抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的CCL3一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及CCL3相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95％乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按CCL3---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。
在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠Nacl溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M 柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.（2）阴离子去污剂法:用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.（3）苯酚抽提法:苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。
此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。
此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .（4）水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95％乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66％٠80％和95％乙醇以及丙铜洗涤。
污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测方法标准
污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测方法标准
结合新型冠状病毒的特性、传播规律和现有新冠肺炎防控科学技术，国家标准化管理委员会（SAC/TC267/SC1）制定了污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测方法标准。
本标准规定了污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测方法，原理、步骤、要点及程序需测试参数，其指导性内容适用于所有相关的技术和业务领域。
一、标准的原理：样品中新型冠状病毒微粒经选择性离子交换柱型凝胶分离纯化，进行混合反转录，再经聚合酶链反应（PCR）检测。
二、标准的步骤：
1.准备样品：将采集的污水样品经由过滤和离心简单处理后进行放置，另外增加破菌程序，以确保样品最佳状态；
2.离子交换型凝胶分离：通过分离技术，结合样品稀释液，完成污水中新型冠状病毒颗粒的富集和分离；
3.核酸提取：采用启菌液提取新冠肺炎病毒的核酸；
4.核酸扩增检测：采用PCR 技术，进行核酸扩增检测和定量；
5.核酸样本杂交定性：将阳性结果的样本进行病毒基因的定性检测。
三、标准的要点：
1.精确可靠：必须确保检测指标的精确客观、识别准确度及可靠性；
2.安全高效：加强安全防护和质量把关，以确保样品处理安全高效；
3.费用低廉：降低检测系统觾耗，降低管理成本、实现新型冠状病毒性泉水安全检测耗费最低；
4.适用性高：污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测标准，具有更强的适用性，可用于污水中新型冠状病毒检测的各个环节。
本标准的设计和实施，以解决污水中新型冠状病毒的实时监测及防控检测问题，可以实现快速、准确的检测与报警，有助于科学的早期预警及筛查，从而控制新型冠状病毒的传播风险。
水样中病毒核酸的提取
水样中病毒核酸的提取从环境水样中提取微生物DNA，首先需要从水中分离微生物细胞。
最早采用也是最完美的方法是用特定孔径大小的滤膜过滤大体积水样。
出于这种考虑，MOBIO的PowerWater DNA和RNA提取试剂盒就是设计用来提取水样滤膜上的核酸的。
这些试剂盒带有5mL研磨管，标准尺寸的47mm水样滤膜稍微卷起即可轻松放入。
所有0.2或0.4μm 孔径的滤膜都没问题，屡试不爽。
所有细菌、真菌和原生动物都会留在滤膜上，病毒除外。
所以提取环境水样中的病毒就成了一件棘手的事情。
最近我们收到关于如何提取水样中病毒来信。
这是MOBIO技术部经常遇到的问题。
亲爱的技术部同志：我们希望用MOBIO的Powerwater DNA提取试剂盒提取水样中的病毒DNA。
可是我们担心病毒没办法用0.2μm孔径的水样滤膜捕捉。
我们还能用这款试剂盒吗？祝好！答案是肯定的。
首先，需要把病毒浓缩到非常小的体积。
建议浓缩到200μl甚至更小，免得稀释了试剂盒中的化学试剂。
但是病毒尺寸一般非常小，大概0.03μm-0.3μm。
要滤下这么小尺寸的东西需要用超过滤法。
能捕捉小于0.1μl物体的滤膜非常容易堵塞。
超过滤法还需要适当加压，挤压液体通过滤膜的微小细孔。
达到这些条件花费不菲，更别说在野外操作或者大体积水样了。
离心是另一个从水样中分离微生物的方法，也能用于病毒。
细菌较重，只要很低的离心力（＜3000g）不到一分钟就能离下来。
而要把病毒沉淀下来则可能要大于100000g 离心数小时(Ikner et. Al., 2012)。
超高速离心机很贵，通常一次只能处理很小体积的液体，少于50ml。
因此，同样地不现实。
除非你的水样含有大量病毒（如下水道污水），可是这由不了你。
提取环境水样中的病毒需要的是一个完全不同的技术。
不用看病毒的大小或丰度，只要病毒能带电。
大多数病毒在大于等于中性pH值时会带负电荷。
让带负电荷的病毒通过带正电的吸附介质，病毒就能被捕获(Wommack et. al., 2009)。
核酸的提取
有机沉淀剂
乙醇 优点： 对盐类沉淀少，沉淀中所含迹量乙醇易挥发除去，不影响以后实验。 缺点： 需要量大，一般要求低温操作。 异丙醇 优点： 需体积小，速度快，适于浓度低、体积大的DNA样品沉淀。一般不需低温。 缺点： 易使盐类、蔗糖与DNA共沉淀．异丙醇难以挥发除去。所以，最后用70％乙醇漂洗。 聚乙二醇（PEG） 优点： 可用不同浓度的PEG选择沉淀不同相对分子质量的DNA片段。应用6000相对分子质量 的PEG进行DNA沉淀时，使用浓度与DNA片段的大小成反比。 注意： PEG沉淀一般需加0.5mol/L的NaCl或10 mmol/L的MgCl2。要除去DNA沉淀中PEG。 精胺 不是有机溶剂，但可快速有效沉淀DNA精胺与DNA结合后，使DNA在溶液中结构凝缩 而发生沉淀，并可使单核苷酸和蛋白质杂质与DNA分开，达到纯化DNA的目的。
裂解液的用量原则 确保彻底裂解样品 使裂解体系中核酸浓度适中 以样品中蛋白质的含量为基准
细胞裂解
基因组DNA的提取
材料应适量，过多会影响裂解， 导致DNA量少，纯度低 针对不同材料，选择适当的裂 解预处理方式： 植物材料－－液氮研磨 动物组织－－匀浆或液氮研磨 组培细胞－－蛋白酶K 细菌－－溶菌酶破壁 酵母－－破壁酶或玻璃珠 高温温浴时，定时轻柔振荡 螯合剂
在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：β-巯基乙醇、 抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等 加入易与酚类结合的试剂：如PVP、PEG(聚乙二醇)，它 们与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合
盐离子的去除：
70％的乙醇洗涤核酸沉淀、溶解优点： 改变核酸的溶解缓冲液；
重新调整核酸的浓度；
CTAB法 SDS法
其它
病毒核糖核酸个脱氧核糖核酸的分离
试剂：含沙的TRIzol试剂，氯仿，100%乙醇，去核糖核酸酶的水液
病毒核糖核酸和脱氧核糖核酸的分离
每个切除的幼虫中肠在50毫升含沙的TRIzol试剂中是分布均匀的（点燃烤4个小时）。
表面上的中肠悬浮液在沙子固定后被收集起来，并且增加TRIzol试剂的总体积直到1毫升。
用12000克及4uC条件下离心10分钟收集细胞碎片，TRIzol试剂的上清液在25uC条件下培养10分钟。
每个样品用0.2体积的氯仿提取。
将试管相互混合15秒然后在25uC条件下繁殖2分钟。
通过在12000g，4uC条件下离心15分钟，TRIzol试剂溶液被分离形成各个层次，收集水相。
界面及有机相被存放在220uC条件下进一步加工。
DNA是从界面和有机相中用0.33体积的100%乙醇沉淀得到，并在25uC下培养3分钟。
沉淀是通过在2000g，4uC下离心5分钟得到的，并去除上清液。
所得的沉淀物要干燥并且在去核糖核酸酶的水液中重新悬浮，通过在60uC下繁殖10分钟。
DNA 的样本被保存在280uC下。
水中诺如病毒富集效果及核酸提取方法的比较
水中诺如病毒富集效果及核酸提取方法的比较余昆英;师舞阳;陈子龙;刘绮明【期刊名称】《南昌大学学报：医学版》【年(卷),期】2014(054)012【摘要】目的比较诺如病毒检测时3种核酸提取方法的效率,并对水中诺如病毒的检测方法进行初步研究。
方法采用Trizol法、硅胶柱法及磁珠法分别提取含有诺如病毒的粪便样本的核酸,Real-time PCR检测其Ct值,比较3种方法提取核酸的效率。
将含有诺如病毒的粪便加入纯水中,采用MCE-PEG法富集后,Real-time PCR检测其Ct值,评价MCE-PEG法富集病毒的效果。
结果硅胶柱法的Ct平均值最小,在3种方法中提取诺如病毒RNA效率最高,磁珠法提取效果次之,Trizol法效果最差;MCE-PEG法富集病毒效果良好。
结论磁珠法提取诺如病毒RNA效率虽不是最高,但可实现自动化,节省工作时间,降低了人力成本,是3种方法中基层实验室提取诺如病毒RNA最适合的一种;MCE-PEG法可以用来富集水中的诺如病毒。
【总页数】3页(P28-30)【作者】余昆英;师舞阳;陈子龙;刘绮明【作者单位】中山市疾病预防控制中心检验科,广东中山528403【正文语种】中文【中图分类】Q93-3【相关文献】1.两种核酸提取方法对丙型肝炎病毒RNA检测效果的比较及应用评价 [J], 范公忍;陈天宝;李冰;胡学玲;曹建彪2.牡蛎中诺如病毒核酸两种提取方法比较 [J], 袁巧;李晖;邓小玲;莫艳玲;方苓;柯昌文3.水中诺如病毒富集效果及核酸提取方法的比较 [J], 余昆英;师舞阳;陈子龙;刘绮明4.两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA提取效能的比较 [J], 田胜男;苏静芬;向志光;刘云波5.水中诺如病毒切向流超滤富集方法的研究 [J], 王建;陈秋霞;宋曼丹;杨冰;朱海明;谭慧嘉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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水样中病毒核酸的提取
从环境水样中提取微生物DNA，首先需要从水中分离微生物细胞。
最早采用也是最完美的方法是用特定孔径大小的滤膜过滤大体积水样。
出于这种考虑，MOBIO的PowerWater DNA和RNA提取试剂盒就是设计用来提取水样滤膜上的核酸的。
这些试剂盒带有5mL研磨管，标准尺寸的47mm水样滤膜稍微卷起即可轻松放入。
所有0.2或0.4μm 孔径的滤膜都没问题，屡试不爽。
所有细菌、真菌和原生动物都会留在滤膜上，病毒除外。
所以提取环境水样中的病毒就成了一件棘手的事情。
最近我们收到关于如何提取水样中病毒来信。
这是MOBIO技术部经常遇到的问题。
亲爱的技术部同志：
我们希望用MOBIO的Powerwater DNA提取试剂盒提取水样中的病毒DNA。
可是我们担心病毒没办法用0.2μm孔径的水样滤膜捕捉。
我们还能用这款试剂盒吗？
祝好！
答案是肯定的。
首先，需要把病毒浓缩到非常小的体积。
建议浓缩到200μl甚至更小，免得稀释了试剂盒中的化学试剂。
但是病毒尺寸一般非常小，大概0.03μm-0.3μm。
要滤下这么小尺寸的东西需要用超过滤法。
能捕捉小于0.1μl物体的滤膜非常容易堵塞。
超过滤法还需要适当加压，挤压液体通过滤膜的微小细孔。
达到这些条件花费不菲，更别说在野外操作或者大体积水样了。
离心是另一个从水样中分离微生物的方法，也能用于病毒。
细菌较重，只要很低的离心力（＜3000g）不到一分钟就能离下来。
而要把病毒沉淀下来则可能要大于100000g 离心数小时
(Ikner et. Al., 2012)。
超高速离心机很贵，通常一次只能处理很小体积的液体，少于50ml。
因此，同样地不现实。
除非你的水样含有大量病毒（如下水道污水），可是这由不了你。
提取环境水样中的病毒需要的是一个完全不同的技术。
不用看病毒的大小或丰度，只要病毒能带电。
大多数病毒在大于等于中性pH值时会带负电荷。
让带负电荷的病毒通过带正电的吸附介质，病毒就能被捕获(Wommack et. al., 2009)。
首先，用0.2μm滤膜把水中的细菌和其它大个头细胞过滤掉。
然后让水样通过一个带电基质，通常使用微孔滤膜，筒式过滤器或玻璃纤维过滤器。
当有病毒通过带正电的物质时，他们就会被静电捕获，粘附在基质上。
市面上常见的商业化带正电荷滤膜有Virozorb的1MDS和NanoCeram的Virus Sampler cartridges (Luisa A. Ikner et. Al. Appl. Environ. Microbiol. 2012)。
这种带电基质一次最多能过滤多达20L水。
你可以用高浓度盐把病毒从基质中洗脱下来。
此时，病毒溶液被浓缩到很小的体积，方便用离心等方法进一步缩小到数百微升。
100μl 左右的体积可直接用DNA或RNA试剂盒进行提取了。
虽然病毒并不是水样中最主要的生物类型，但往往是最主要的致病因素
（Suttle;2007）。
怪不得很多客户都伸手要它们那微小的遗传物质。
如果你有任何关于样品病毒提取的问题，无论是血液、香蕉，请尽管联系我们。
参考文献：
Wommack KE, Williamson KE, Helton RR, Bench SR, Winget DM; Methods Mol Biol. 2009;501:3-14. Methods for the isolation of viruses from environmental samples.
Luisa A. Ikner, Charles P. Gerba and Kelly R. Bright; FOOD AND ENVIRONMENTAL VIROLOGY; Volume 4, Number 2 (2012), 41-67, DOI: 10.1007/s12560-012-9080-2; REVIEW PAPER: Concentration and Recovery of Viruses from Water: A Comprehensive Review.
Luisa A. Ikner, Marcela Soto-Beltran and Kelly R. Bright; Appl. Environ. Microbiol. 2011, 77(10):3500. DOI: 10.1128/AEM.02705-10. New Method Using a Positively Charged Microporous Filter and Ultrafiltration for Concentration of Viruses from Tap Water.
Curtis A. Suttle; Nature Reviews Microbiology 5, 801–812 (1 October 2007); Marine viruses | major players in the global ecosystem.。