五种核酸提取法对猪繁殖与呼吸综合征病毒提取效率的比较
山东某猪场猪繁殖与呼吸综合症病毒感染的分离与鉴定
ＶｒｓＰ Ｒ Ｖ＇ 异株是其主要病原Ⅲ ｉ ，Ｒ Ｓ ） ｅ ３ ￣ 以来。关于 Ｐ Ｒ Ｖ诊断、 ＲＳ 分 公司合成 。
离报道不断出现 ， 国各地始终处 于 Ｐ Ｒ Ｖ的威胁之 中， 全 Ｒ Ｓ 在灭
（ ） 一 Ｔ Ｇ Ｃ ＣＡ Ａ Ｔ Ａ ３ Ａ１ Ａ Ｇ Ｃ ＡＧ Ｃ Ｇｒ Ａ Ｃ 一 ５ Ｃ
取 Ｒ —Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ检测 Ｐ Ｒ Ｖ阳性 的组织匀浆 ， ０ ０ｒ ｉ离心 ＲＳ ３ ０ ｒ ｎ ／ ａ
山东省疑似发生 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ某猪场发病仔猪 的血清 、 肺脏 、 、 １ ． 病 毒 的 分 离 脾 ．４ ２ 肾、 淋巴结等组织 。
１１ 毒 株 、 胞 、 验 动 物 ．２ ． 细 试
称取病料组织怖 脏 、 巴结）０ｇ 淋 １ 于组织匀浆机 中 ， 加人生 置 一 Ｏ℃冻存备用 。 ２
１ ． 细胞 培 养 ．３ ２
．２ ２ 确的诊断 。 笔者在临床见到大量的疑似 Ｐ Ｒ Ｖ病例 ， ＲＳ 从症状 、 剖 １ ． 组 织样 品 的 处 理
０ ｍ 次 的疑似 Ｐ Ｒ Ｖ感染进行 了血清学 、 ＲＳ 分子生物 、 细胞学 的全 面诊 理盐水 １０ Ｌ研磨 ，待匀浆后转移至盐水瓶内反复冻融 ３ ，
１ｍｎ取上清经 ０ ２ ｍ微孔滤膜进行过滤除菌 ， １ Ｌ ５ ｉ， ． ２ 取 接种 ｍ Ｐ Ｒ ＶＶ 一 ３ ２参 考毒株 、 ｒ一 ４ Ｒ Ｓ Ｒ ２３ Ｍａ １５细胞 由 山东 滨州 博 长成单层 的 Ｍａｃ １ ５ ｃ ｒ 一 ４ 细胞 ，７℃ Ｃ ３ Ｏ 培养箱 内吸附 １ ｈ后倒掉 莱威生物技术 中心提供 ， 自购 ３ ５日龄 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ非免疫猪 ２头。 毒液 ，加入含 ２ Ｌ细胞维持液 ，盲传直至出现典型的细胞病 ０ｍ
自 ２０ ０ ６以来我 国许多猪场猪 的“ 高热病”被证实为猪 繁殖 Ｃ Ｒ ２ ３） ， Ｖ 一 ３２的核衣壳蛋 白基 因（ 因１ Ｏ Ｆ Ｐｒｉｅ ｅｒｄ ｃｖ ｄＲ ｓｉ ｔｒＳｎ ｒｍ 了扩增片段为 ４２ｂ ｏ ｎ ｐｏｕｔ ｅ ｎ ｅｐ ａ ｙ ｙｄｏ ｅ ｃ Ｒ ｉ ａ ｒｏ ３ ｐ的特异引物，引物均 由上海生物工程有 限
猪繁殖与呼吸综合征RT-PCR诊断
猪繁殖与呼吸综合征RT-PCR诊断陈圣丰（生物工程 2 班）摘要:本试验采用RT－PCR方法来诊断猪疑似PRRS病毒结果为阳性，目前RT－PCR方法已经广泛应用于科研和生产中，该方法是分子生物学中的重要手段之一，是从生物界的微观领域研究生物的多用途工具,与传统的血清中和试验、酶联免疫吸附试验等方法相比具有高效特异和快速诊断和广泛实用等优点。
也是目前国内外最先进的分子生物学方法。
通过RT－PCR方法试验的多次摸索，以便熟练分离和扩增出不同类型的PRRSV株目的基因，掌握用RT－PCR技术在实验或临床上快速检测和诊断出某猪场疑似PRRS的目的。
本试验最重要的结果是扩增出PRRSV基因片段和确定其毒株类型，证实该病料带有PRRSV阳性。
因此，RT-PCR方法的建立为PRRS核酸的快速、准确诊断以及进行分子流行病学的调查和防治PRRSV提供了新的技术手段。
关键词:猪繁殖与呼吸道综合征; 核酸检测; RT－PCREstablishment of RT-PCR Method for Diagnosing Porcine Reproductive and Respiratory SyndromeCHEN Sheng-feng03 Bio-engeneering 2 classAbstract: This test adopts RT-PCR method to diagnose it is positive that the pig suspected PRRS virus result is,RT-PCR method has already been applied to scientific research extensively and in the production at present, This method is one of the important means in molecular biology, Study the biological multiuse tool from the micro field of the living nature, until traditional serum neutralize, test, enzyme unite immunity absorb method of testing etc. compare, have high-efficie. It is a domestic and international most advanced molecular biology method at present too, Try to find out many times through what RT-PCR method tested, In order to separate and amplify out different kinds of PRRSV a purpose genes skillfully, Measure and diagnose some pig farm suspected PRRS of purposes fast on mastering in the experiment with RT-PCR technology or clinical, It is to amplify PRRSV genetic fragment out and confirm its poisonous types to originally test the most important result, there is positive PRRSV to verify this pathological material of disease. So RT-PCR foundation of method core sour fastKey words:porcine reproductive and respiratory syndrome; detect ion of RNA; reverse transcription and polymerase chain reaction (RT-PCR)猪繁殖和呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS) 是一种由猪繁殖和呼吸综合症病毒(PRRSV)诱发的世界性高度接触性传染病。
不同接毒方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖效果比较
（ａ Ｙ ｇＬ ａ ｇＢｏ—ｅｇｎｅ ｎ ｏ Ｌ Ｄ，ａｇｉ Ｓａ ｎｉ １１０；ｈｎ ） ｖ ｎ ｉ ｎ ｉ ｒ ｇＣ ．，Ｔ Ｙ ｎ ｌｇ，ｈａ ｘ ７ ２０ Ｃ ｉａ ｆ ｅｉ ｎ
Ａ ｓ ａ ｔ Ｆ ｕ ｉｅｅｔ ｎ ｃｌ ｉｎｍｅ ｏ ｓｏ ｏｃ ｅｒｐｏｕ ｔ ｅａ ｄ ｒｓｉ ｔｒ ｓｎ ｒ ｉ ｓ（ Ｒ Ｓ ｂｔ ｃ ： ｏｒｄ ｆ ｎ ｏｕａ ｏ ｔ ｄ ｆｐｒｉ ｅｒｄ ｃ ｖ ｎ ｅｐｒ ｏｙ ｙ ｄｏ ｖ ｕ Ｐ Ｒ Ｖ） ｒ ｆｒ ｉ ｔ ｈ ｎ ｉ ａ ｍｅ ｒ
ｍａｅ ｉｌ ｔｒａｓ，ｅ ｓ ｈ ｒ ｌａ ． ａ ｅ ｔ ｅ ｗｏ ｋ ｏ ｄ Ｋｅ ｒ ｓ：ＰＲＲＳ ； ｒ 一 １ ５ ｃ ｌｓ；ｎ ｃ ｌ ｔ ｎ ｍｅｈ ｄ ｙ ｗｏ ｄ Ｖ Ｍａ ｃ ４ ｅｌ ｉ ｏ ｕ ａｉ ｔ ｏ ｏ
猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 （ ｏｃ ｅＲ ｐｏｕｔｅ Ｐｒｉ ｅｒｄｃ 与呼 吸综合征 病毒 （ Ｒ Ｓ 感 染 Ｍａｃ一１５细胞 ４种不 同接 毒方 法 的 比 Ｐ Ｒ Ｖ） ｒ ４
较研 究， 筛选 出一种在 规模 化生产 中既能保证 毒价 ， 能减 少 工 艺流 程 ， 高 工作 效 率 ， 又 提 降低 污染 几 率及 生产 成本 的接种 方法 。结果表 明， 与其他 方 法相 比 ， 同步接 毒 法效 果 最佳 ， 不仅 毒 价 最高 ， 而且
猪繁殖与呼吸综合征综述及RT—PCR检测
猪繁殖与呼吸综合征综述及RT—PCR检测作者：牛宪翔来源：《农民致富之友》2016年第24期[摘要] 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称蓝耳病，以母猪的繁殖障碍和呼吸系统疾病为主要症状，由PRRS病毒引起。
该传染病主要引起的症状是发热、厌食，母猪怀孕后期导致流产，木乃伊胎、死胎、弱仔等；对幼龄仔猪损害比较大，会引起呼吸系统疾病，死亡率很高。
[关键词] 猪繁殖与呼吸综合征 RT-PCR[中图分类号] S831 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2016）12-0274-01引言猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称蓝耳病，以母猪的繁殖障碍和呼吸系统疾病为主要症状，由PRRS病毒引起。
该传染病主要引起的症状是发热、厌食，母猪怀孕后期导致流产，木乃伊胎、死胎、弱仔等；对幼龄仔猪损害比较大，引起呼吸系统疾病，死亡率很高。
导致严重的免疫抑制进而继发多种其他疾病而造成死亡。
由PRRSV变异株引起的“高热综合征”呈现高发病率和高死亡率的特点，我国将这种传染病称为“高致病性猪蓝耳病”，并且列为国家一类动物疫病。
1 病原学PRRSV具有两个基因型；1型是欧洲型，代表毒株为Lelystad病毒；2型是美洲型，代表毒株是VR2332病毒，欧洲型与美洲型核苷酸序列相似度为60%。
同一种基因型的PRRSV毒株之间有着较为广泛的变异，有基因突变、缺失和插入以及毒株间的基因重组现象，基因组中易变区域包括NSP2、ORF5和ORF3.不同毒株的GP5蛋白差异较大，1型与2型的同源性仅52%～55 %，相当于PRRSV与LDV的同源性。
欧洲型和美洲型病毒均具有典型的免疫抑制性。
2 流行病学2.1 传染源PRRS唯一易感染并且出现临床症状的自然宿主。
病猪和带毒猪是传染源与传播源。
处于感染猪可以通过唾液、鼻腔分泌物、公猪精液、粪便和尿液排出病毒，怀孕母猪后期以乳汁形式排毒，对本病耐过的猪也可长期带毒并且不断向体外排出病毒。
猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及应用
4542023猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法R T-PC R检测方法的建立及应用陈雷兆丰华生物科技(福州)有限公司福州350014摘要为解决当前猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株类型复杂、各毒株之间交叉免疫保护不佳的现状,本研究针对N SP2基因保守区域设计1对特异性引物,通过条件优化,建立一种能够快速区分经典株、高致病性毒株和N A D C30-l i ke毒株的检测方法。
该方法与C SFV、PC V2、PR V、PED V、T G EV无交叉反应。
对不同毒株类型进行检测,结果显示该方法特异性强,能够将经典株、高致病性猪蓝耳病毒株和类N A D C30株进行快速区分,为猪群快速区分PR R SV感染类型及疫苗的选择、使用提供科学防控依据。
关键词猪繁殖与呼吸综合征经典毒株高致病性毒株N A D C30-l i ke毒株文献标识码:A文章编号:1003-4331(2023)04-0027-04D evel opm ent and appl i cat i on of one st ep R T-PC R m et hod f or t he det ct i onof porci ne reproduct i ve and res pi rat ory s yndrom e vi rusChen Lei(J of unhwa Bi ot echnol ogy(Fuz hou)Co.Lt d,Fuz hou350014)A bs t ract I n or der t o di s t i nct i on t he com pl ex t ypes of por ci ne r epr oduct i ve and r espi r at or y s yndr om e vi r us(PR R SV)s t r ai ns and t he poor cr os s-i m m une pr ot ect i on am ong t he s t r ai ns,a m et hod was es t abl i s hed t o di st i ngui s h di f f er entt ypes ofPR R SV,i ncl udi ng t he cl as⁃si calst r ai n,t he hi ghl y pat hogeni c s t r ai n and t he N A D C30-l i ke st r ai n by t he condi t i on of opt i m i z at i on.The r es ul t i ndi cat ed t hat i t has no cr os s r eact i on wi t h CSFV,PCV2,PR V,PED V and TG EV.A nd t he det ect i on of di f f er ent t ypes of vi r us s t r ai ns showed t hat t he m et hod was s peci f i c and coul d di st i ngui s h t he t hr ee t ypes of vi r us st r ai ns qui ckl y,t hat's pr ovi des a r api d di scr i m i nat i on and s el ect i on bas i s ofPR R S vacci nes f or pr event i on and cont r olofepi dem i c di seas es.K ey w ords Por ci ne r epr oduct i ve and r es pi r at or y syndr om e Cl ass i cals t r ai n H i ghl y pat hogeni c st r ai n N A D C30-l i ke st r ai n猪繁殖与呼吸综合征(Pr oci ne r epr oduct i ve andr es pi r at or y s yndr om e,PR R S)主要是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PR R SV)Ⅰ型和Ⅱ型引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要特征的传染病[1]。
不同接毒方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖效果比较_吕永钢
不同接毒方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖效果比较吕永钢,吴韬,王朝蕾,焦铁军,崔卓宇,杨鹏程,王昆(杨凌绿方生物工程有限公司,陕西杨凌 712100)[收稿日期]2009-12-11 [文献标识码]A [文章编号]1002-1280(2010)03-0034-03 [中图分类号]S852.651[摘 要] 通过对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV )感染M arc-145细胞4种不同接毒方法的比较研究,筛选出一种在规模化生产中既能保证毒价,又能减少工艺流程,提高工作效率,降低污染几率及生产成本的接种方法。
结果表明,与其他方法相比,同步接毒法效果最佳,不仅毒价最高,而且繁殖毒液时间缩短,减轻了工作量,节省生产成本。
[关键词] 猪繁殖与呼吸综合征病毒;M arc-145细胞;接毒方法作者简介:吕永钢(1980年-),助理兽医师,从事动物疫苗的生产及研发工作。
Effect Co mparison of D ifferent Inoculation M ethods of Porci ne R eproductiveand R esp i ratory Syndro m e V irusM ulti p licati onLV Y ong-gang ,WU Tao ,WANG Zhao-le,i JI A O T ie-j u n ,C U I Zhuo-yu,YANG Peng -cheng ,WANG Kun(Yangli ng L v fang B io -e ng i n e ering Co.,LTD,Yang li ng,Shaanx i 712100;China )A bstract :Four different i n oculation m ethods o f porci n e repr oducti v e and resp iratory syndro m e v irus (PRRSV )infecting M arc-145ce lls were co m pared i n PRRSV anti g en fl u id y ield ,and a scientific and effecti v e inocu l a ti o n m ethod fit for the i n dustria l producti o n requ ire m ents w as screened ou,t it can reduce the technology pr ocess ,i m prove w ork effic i e ncy ,decrease po ll u ti o n probab ility and pr oducti o n costs ,ensure v irus titers at the sa m e ti m e .The resu lts sho w ed t h at the m et h od of si m ultaneous i n oculation w it h PRRSV to the culture m edi u m had the best e ffect co m pared w ith other m ethods .It ensured the h i g hest v ir us titers and can sho rten harvest ti m e ,save ra w m aterials ,ease the w orkload .K ey words :PRRSV;M arc-145cells ;i n ocu lati o n m ethod 猪繁殖与呼吸综合征(Porc i n e Reproducti v e and Resp iratory Syndro m e ,PRRS)是近年来严重威胁现代养猪业的一种烈性传染病,主要引起母猪发热、厌食、死产、流产、弱仔、繁殖障碍及仔猪呼吸道症状,其主要特征为高热和高死亡率,给我国养猪业造成巨大的经济损失[1]。
多重PCR方法快速检测猪的5种呼吸道病原菌
U sing this multiple PCR method，bacteria could be detected from lung tissues of challenged mice w ith App，H ps，Bb and T+ Pm respectivel h in Tryptic Soy Broth (T SB) supplem ented with 5%calf serum and NA D + factor．Sim ultaneous detection of pathogens in 269 clinical sam ples from the central area of China revealed the universal existence of App， H ps，Bb，T + Pm and M hp．In conclusion，the multiple PCR assay show ed excellent specificity， sensitivity and reduplication and could detect five pathogenic bacteria of respiratory tract in sw ine．We expected that this multiple PCR assay could be useful extensively for epidemiological survey and clinical differential diagnosis of five com m on respiratory diseases in swine． K ey words：swine；respiratory tract disease；m ultiplex PCR ；detection
猪繁殖与呼吸综合征诊断方法
目录
01. 临床症状观察 02. 实验室检测方法 03. 病理组织学检查 04. 综合诊断与防治措施
体温变化
01 体温升高：感染猪繁殖
与呼吸综合征的猪体温 会明显升高，通常在 40-42摄氏度之间
03 体温波动：感染猪繁殖
05
进行免疫，避免疫苗失效或免疫失败
01
淋巴结肿大
02
淋巴结充血
03
淋巴结出血
04
淋巴结坏死
05
淋巴结纤维化
06
淋巴结钙化
其他器官病变
肺脏：充血、水
01
肿、出血、坏死 肾脏：肿大、出
03
血、坏死 淋巴结：肿大、 05
出血、坏死
肝脏：肿大、出
02
血、坏死 脾脏：肿大、出
04
血、坏死
诊断依据
1
临床症状：发热、呼吸困难、咳嗽、腹泻等
2
血清学检测
间接ELISA法： 检测猪血清中 的抗体
直接ELISA法： 检测猪血清中 的抗原
免疫荧光法： 检测猪血清中 的抗体
免疫印迹法： 检测猪血清中 的抗原
免疫层析法： 检测猪血清中 的抗体
免疫电泳法： 检测猪血清中 的抗体
病原核酸检测
1
样本采集：采集病 猪的鼻拭子、肺泡
灌洗液等
2
核酸提取：提取样 本中的核酸
3
荧光定量PCR：检 测样本中的猪繁殖 与呼吸综合征病毒
核酸
4
结果分析：根据检 测结果判断猪是否 感染猪繁殖与呼吸
综合征病毒
肺部病变
肺泡壁增厚 肺泡腔内有大量炎性细胞浸润
几种猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清制备方法的比较
几种猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清制备方法的比较作者：王玉玲等来源：《福建畜牧兽医》 2020年第4期王玉玲赖道华潘晶晶詹先强兆丰华生物科技（福州）有限公司福州350014摘要比较评价几种猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清制备方法，分析各种方法的优缺点及其适用范围，找到一种操作简便、效果理想的方法。
方法：20只成年家兔随机分为4组，分别制订不同的免疫方案进行免疫，获取猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清。
通过比较发现，四足掌、皮下、后大腿肌肉混合免疫程序简单，操作方便，且抗原用量较少；皮下、后大腿肌肉混合免疫所需抗原量较大，但免疫途径最简单，可用于需求量较大的免疫血清的制备；而静脉、后大腿肌肉混合免疫因过敏反应较大，会造成动物机体的严重损伤，故基本不予采用。
关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清混合免疫效价文献标识码：A文章编号：1003-4331（2020）04-0014-03Comparison of several preparation methods of porcine reproductive andrespiratory syndrome virus positive serumWang Yuling Lai Daohua Pan Jingjing Zhan Xianqiang（Jofunhwa Biotechnology(Fuzhou) Co. Ltd, Fuzhou 350014）Abstract Several preparation methods of porcine reproductive and respiratory syndrome virus positive serum were compared and evaluated, the advantages and disadvantages of each method and their applicable scope were analyzed, and a simple and effective method was found. Methods: twenty adult rabbits were randomly divided into four groups. Different immune schemes were established to immunize them, and the positive serum of porcine reproductive and respiratory syndrome virus was obtained.Through comparison, it is found that the mixed immunization program of quadruped palm, subcutaneous and posterior thigh muscles is simple, convenient to operate, and the dosage of antigen is small, and the amount of antigens needed for subcutaneous and posterior thigh muscle mixed immunization is larger, but the immune route is the simplest, which can be used in the preparation of immune serum with great demand.However, the mixed immunity of vein and posterior thigh muscle is more allergic, which will cause serious injury of animal body, so it is basically not used.Key words Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Positive serum Mixed immunization Titer猪繁殖与呼吸综合征（PRRS），又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种接触性传染病，各日龄猪均可发病，1987年由美国首先报道。
检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒抗体的两种ELISA方法的比较及其应用
摘 要 ： 用 检测 猪 繁 殖 与 呼 吸 障 碍 综 合 征 病 毒 （ Ｒ Ｖ） 种 不 同 目标 蛋 白 抗 体 的 间 接 Ｅ １Ａ 方 法 对 来 自 １ 采 Ｐ ＲＳ 两 ＬＳ ０个 规 模 猪
场 ２ ６份 血 清 进 行 检 测 ， 果 显示 ， 被 抗 原 分 别 为 核 蛋 白 （ ｕ ｌ ｐｏｅ ， 和 以 ＧＰ １ 结 包 Ｎ ｃ ｏ ｒｔｉ Ｎ） ｅ ｎ ５蛋 白为 主 的膜 蛋 白 （ ｍｂａ ｅｐｏ ｍｅ ｒｎ ｒ－
Ｃ ｉｅｅ ｏ ｒａ ｆ ｔｒ ａｙＭｅｉｉｅ ｈｎｓ ｕｎ ｌ ｅｉ ｒ ｄｃｎ Ｊ ｏ Ｖｅ ｎ
中 国兽 医 杂 志 ２ １ ０ ２年 （ ４ 第 ８卷 ） ４期 第
２７
检 测 猪 繁 殖 与 呼 吸 障碍 综 合 征病 毒 抗 体 的 两种 Ｅ Ｉ Ａ 方 法 的 比较及 其应 用 ＬＳ
中 图 分 类 号 ：８ ２ ６ ９ １ ￥ ５． ５ ． 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：５９６ ０ （ ０ ２ ０—０ ７０ ０ ２ —０ ５２ １） ４０２ —３
Ｃｏ ｍｐａ ｉｏ ｆｔ ｒ ｓ ｎ ｏ ｗｏ ＥＬＩ Ａ ｓ ａ ｓ ｆ ｒ ｔ ｅ ｄ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｈ ｏ ｃ ｎ ｅ ｏ ｕ ｔｖ Ｓ ａ ｓ ｙ ｏ ｈ ｅ ｅ ｔｏ ｆ ｔ ｅ ｐ ｒ ｉ ｅ ｒ ｐｒ ｄ ｃ ｉ ｅ
Ｗ ＡＮＧ ｎ ｐ ｎ Ｙａ — ｉｇ ，Ｚ ＡＮＧ ｕ ｎ ｌ ｎ ，Ｊ ＡＮＧ ｈ ｎ — ｉ，ＸＵ ｕ Ｈ Ｃｈ ａ －ｉ ｇ ａ Ｉ Ｚ ｏ ｇ ｑ Ｈ ｉ
（ ．Ｚ ｅｉｎ ｉ ｌ ｓａ ｅＣｏ ｔｏ ｎ ｅ ，Ｈａ ｇ ｈ ｕ ３ ０ ２ １ ｈ ｊ ｇ Ａｎｍａ ｅ ｓ ｎ ｒ ｌ ａ Ｄｉ Ｃｅ ｔｒ ｎ ｚ ｏ １ ０ ０，Ｃｈｎ ； ｉａ
RT-PCR检测猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒方法的建立与应用
进 行说 明 ，分 别 在 ５３％ பைடு நூலகம்５５℃和 ５９℃ 的退 火温 度 下进 行 试验 ，结
第 三步就 是ＰＲＲＳＶ病毒ｃＤＮＡ的合成 ，具 体来 说 就是 首先 要完 果 表 明 ，５９％ 的退火 温度 条件 下 ，ＰＣＲ产物 的特 异性 更加 理想 。
成试 剂 的 配制 ，操 作是 在 ＰＣＲ管 中完 成 的 ；紧接 着就 是 在７０℃ 的 ２．３．３ 鉴 定ＲＴ—ＰＣＲ产物
物 。
品 的新 鲜 ，从而 保证 检测 结果 的准确 率 。
第 二 步 就 是提 取病 毒 核 酸 ，主 要包 括 血 液样 品 的提 取 、组 织
第 五 ，确 定 单 相 ＲＴ—ＰＣＲ的退 火 温 度 ，我们 以ＰＲＲＳＶ为 例 子
样 品ＲＮＡ的提 取 以及公 猪精 液样 品 ＲＮＡ的提取 。
所 需要 用 到 的材 料 主要 就是 酶 类及 其 制 剂 以及相 关 的 仪器 设 反应 最 为适 宜 的Ｒ ｒｒａｑ添加量 是０．５ ｌ。
备等 。
第 四 ，关 于被 检 测 样 片 质量 对 ＲＴ—ＰＣＲ检 测 的 影 响 ，通 过 这
２．２．２ 方 法
个 实 验 ，对 陈 旧的 被检 测 样 品 和新 鲜 的被 检测 样 品 在 ＲＴ—ＰＣＲ检
第 六 步 就 是对 ＲＴ—ＰＣＲ的产 物 进 行 鉴定 ，鉴 定 的过 程 主 要 主
进 行 治 疗 的话 ，往 往会 取 得 理想 的效 果 。 由此 可见 ，关 于 “ＲＴ— 要 是 分 为 以 下几 个 步 骤 ，分 别 是 ＰＣＲ产 物 的 电泳 与 回 收纯 化处
ＰＣＲ检测猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒方法 的建立与应用”的 理 ；ＰＣＲ产 物 的 连 接 以 及 转 化 、摇 菌 、质 粒 的提 取 和 酶切 的 鉴
利用RT-PCR对病料中猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测
试验研 究
利 用Ｒ －Ｃ 对病 料 中猪 繁 殖 与呼 吸 综 合 征病 毒 的检 测 ＴＰ Ｒ
许 瑞 利① 梁俊 昌② 朱瑞 良① ②
（ 山东农 业 大学动 物科技 学院 ①
摘要
泰 安 ２ １ １ ② 山 东省枣 庄 市市 中 区畜牧 兽 医局 ） ７ ０８
合 征 病 毒 Ｊ Ａ１ 株 ， 设 计合 成 目的基 因Ｐ ＲＳ ｐ 基 因 Ｘ 毒 Ｒ Ｖ Ｎｓ２
片 段 引 物 Ｐ 、 Ｐ ２ 扩 增 ＯＲ ５ 因 的 引 物 Ｐ １ Ｐ ２ Ｎ１ Ｎ 和 Ｆ基 ５、 ５，
１ 材料与方法
１１ 材 料 ．
同时根据 已发表 的Ｃ Ｆ Ｓ Ｖ核 酸 序 列 ， 选 择 高 度 保 守 性 ５
３ ． （４１２。这与王仕荣等在广西“ 高热综合征” １ ％ ５／７ ） ４ 猪 主
图１ 引物 特异性 分析
要病原调查中，检 出率最高的为Ｐ Ｒ Ｖ 变异株毒株 占５ ． Ｒ Ｓ ９
５ ％（７ １６相 似 ，与 李 维华 （０ ８等报 道 的 Ｃ Ｆ ９ ８／ ４ ） ２ ０） Ｓ Ｖ感 染 的
（ 稿 日期 ：２ １＿ ３ ０ ） 收 ０ １ｏ— ４ Ｊ
山东畜牧兽医
１ ． 特异 性 试 验 ．３ ２ 分 别 取 实验 室 保 存 的Ｐ ＲＳ Ｘ １ Ｒ Ｖ Ｓ 一变 ２３ 多重 Ｒ ．Ｃ 检 测 病 料 ． ＴＰ Ｒ
２ １ 年第 ３ ０１ ２
异 毒 株 与ＣＳ Ｖ疫 苗 毒 株 作 为 阳 性 对 照 ， 使 用 表 １ 对 引 Ｆ 中４
取 ３ ｌ 模 板 ，进 行 多 重Ｒ －Ｃ 扩 增 以检 测 其 敏 感 性 。 ¨作为 ＴＰ Ｒ
猪繁殖与呼吸综合症的病因、流行病学及防治措施 - 养猪技术
猪繁殖与呼吸综合症的病因、流行病学及防治措施-养猪技术猪繁殖与呼吸综合症又称“猪蓝耳病”是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)所引起的猪繁殖障碍和呼吸疾病为主要特征的一种传染性疾病。
该病于1987年首次在美国发现，此后在世界许多国家都有该病例的报道，我国于1996年由郭宝清等在流产胎儿中分离到PRRSV。
近年来，全国许多省份都有该病流行的报道，是我国危害严重的疾病之一，给养猪业带来重大经济损失。
下面一起来了解一下：猪繁殖与呼吸综合症的病因、流行病学及防治措施。
1、病原该病毒属于动脉炎病毒科，动脉炎病毒属。
1991年在荷兰兽医研究中心，从感染的病猪分离得到，并命名Lelystad病毒(LV)。
病毒粒子呈卵圆形，有囊膜，直径50～65 nm，为单股正链RNA病毒。
其分为两个毒株型，即欧洲型和美洲型，两者在抗原性上有一定的差异。
2、流行病学目前，猪是唯一感染PRRSV的动物，其主要侵害繁殖母猪和仔猪，而育肥猪发病较温和。
该病可以通过空气、直接接触、精液及粪便等多种途径传播，还可以通过胎盘感染胎儿，使胎儿致病。
另外，猪场卫生条件差，饲养密度大，也是该病流行的不利因素。
3、诊断方法在生产实践中可以根据妊娠母猪后期发生流产、死胎、木乃伊胎，新生仔猪死亡率高，发病仔猪出现间质性肺炎的特征性病变及临床症状，可以初步诊断为PRRS。
但该病的确诊还有赖于实验室诊断，其方法分为血清学诊断和病原学诊断。
3.1 血清学诊断血清学试验操作容易，敏感性和特异性都较高，因此广泛应用于实验室的诊断方法。
目前国内外已建立四种检测PRRSV抗体的方法：免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)、间接免疫荧光试验(IFA)、血清中和试验(SN)和间接酶联免疫吸附试验( ELISA)。
3.1.1 免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)IPMA由Wensvoort等在1991年率先建立，是当时最早用于PRRSV的血清学诊断方法，至今仍是常用的检测手段。
不同抗原收获方式对猪繁殖与呼吸综合征病毒含量的影响
福建畜牧兽医第44卷第2期2022年不同抗原收获方式对猪繁殖与呼吸综合征病毒含量的影响吴丽兰兆丰华生物科技(福州)有限公司福州350014摘要抗原收获是疫苗生产中的一个重要环节。
本文通过对比猪繁殖与呼吸综合征病毒(PR R SV)抗原收获时上清液与细胞液之间的病毒含量以及冻干后的病毒含量,筛选出较为优势的抗原收获方式。
结果表明,从病毒含量上分析,收获上清液与细胞液这两种收获方式差异不显著;从生产工艺上分析,收获上清液更有利于提高生产效率,方便临床使用。
关键词PR R SV上清液细胞液病毒含量文献标识码:A文章编号:1003-4331(2022)02-0001-02E f f ect s of di f f erent ant i gen harvest i ng m et hods on t he cont ent of porci ne reproduct i ve and respi rat ory s yndrom e vi rusW u Li l an(J of unhwa Bi ot echnol ogy(Fuz hou)C o.Lt d,Fuz hou350014)A bst ract A nt i gen har vest i ng i s an i m por t ant l i nk i n vacci ne pr oduct i on.By com par i ng t he vi r us cont ent bet ween s uper nat ant f l ui d and cel l cul t ur e f l ui d dur i ng PR R SV ant i gen har ves t and t he vi r us cont ent af t er f r eeze-dr yi ng,t hi s paper s cr eened out t he m or e ad⁃vant ageous ant i gen har ves tm et hod.The r es ul t s s howed t hatt her e w as no si gni f i cantdi f f er ence bet w een t he t wo har ves tm et hods of s u⁃per nat ant l i qui df l ui d and cel l cul t ur e f l ui d;Fr om t he anal ys i s of pr oduct i on t echnol ogy,har ves t i ng s uper nat ant f l ui d i s m or e conduci ve t o i m pr ove pr oduct i on ef f i ci ency and cl i ni calus e.K ey w ords PR R SV Super nat antf l ui d Cel lcul t ur e f l ui d V i r us cont ent猪繁殖与呼吸综合征(PR R S)是危害养猪业的一个重大传染病,传播能力强,主要引起母猪的繁殖障碍,仔猪断乳前后高病死率以及育成猪的呼吸道疾病[1]。
四种检测猪的繁殖与呼吸综合征病毒血清抗体方法的比较
四种检测猪的繁殖与呼吸综合征病毒血清抗体方法的比较严亚贤;王恒安
【期刊名称】《上海农学院学报》
【年(卷),期】1999(17)2
【摘要】本试验利用猪的繁殖与呼吸综合征病毒美洲株和上海分离株ＳＨ１建立了ＩＦ，ＩＰＭＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ三种抗体检测方法，对１２０份随机抽样猪血清检测表明，美洲株原组ＩＦＡ的阳性率为３０．８％，ＩＰＭＡ的阳性率为３０％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性率为３２．５％，ＳＨ１分离株抗原组ＩＦＡ的阳性率为３７．５％，ＩＰＭ阳性率为３７．５％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性率为４０％，进口ＥＬＩＳＡ试剂盒的检测阳性率为２６
【总页数】4页(P106-109)
【作者】严亚贤;王恒安
【作者单位】上海农学院动物科学系;上海农学院动物科学系
【正文语种】中文
【中图分类】S852.65
【相关文献】
1.猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立 [J], 王洪光;汤德元;曾智勇;罗险峰;李春燕;郝飞;刘建;李达
2.多重PCR方法用于检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒诊断方法的建立 [J], 岳丰雄;崔尚金;冉多良;戚亭;周盛华
3.多重荧光RT-PCR技术检测猪流感病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与
呼吸综合征病毒方法的建立 [J], 梁晓艳;万东山;郭兰英
4.双重RT-PGR方法检测猪流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒 [J], 罗俊;刘业兵;陈坚;宁宜宝
5.检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒的二重荧光LAMP方法的建立 [J], 谢志勤;张艳芳;李孟;李丹;邓显文;刘加波;张民秀;谢芝勋;范晴;罗思思;谢丽基;黄娇玲;王盛;曾婷婷
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因变异分析
呼 吸 道疾 病 及 免疫 抑 制 和 持续 性感 染 ， 而 导 致 新 生 仔猪 发 从 生 继 发感 染 ， 长 发 育受 阻 ， 时可 出现 神经 症 状 ， 亡率 升 生 有 死 高 ， 。 １８ ４ ９ ７年 在美 国首 先 发 现 此病 ，９ １年在 荷 兰首 次 分 １ １９ 离 到病 原 ， 名 为 Ｌ ｌｓ ｄＶｉ ｓ Ｌ 。１ ９ 命 ｅ ｔ ｒ （ Ｖ） ９ ２年 美 国学 者 也 ｙａ ｕ 分 离 到该 病 毒 ， 命名 为 Ａ Ｔ Ｒ 一２３ １ 。１ ９ Ｔ ＣＶ ３ ２２ ］ ９ ６年 郭 宝 清
７ ℃ 终 延 伸 ５ｍｉ。按 常 规 方 法 将 Ｐ Ｒ 产 物 纯 化 后 与 ２ ｎ Ｃ ｐ １ ＭＤ ８一Ｔ载 体 连 接 ， 化 Ｄ ａ 受 态 细胞 ， 氨 苄 抗性 筛 转 Ｈ５ 感 经 选 及 双 酶 切对 重 组 菌 进 行 鉴 定 。
病 ’ 。近年 来 我 国各 地 也 陆 续 报 道 有本 病 的流 行 。研 究 表 ３
之 高 ， 明这 些 毒株 可 能均 起 源于 同一 个毒 株 ， 说 通过 猪 的 运 输 流 通 等在 全 国流行 。
关 键 词 ：猪繁 殖与 呼 吸 综 合征 病 毒 ； ＯＲＦ ５基 因； 变异
猪 繁殖 与 呼 吸综 合 征 病 毒 （ Ｒ Ｓ 属 于 动脉 炎病 毒科 、 Ｐ Ｒ Ｖ）
猪繁殖与呼吸综合征几种常用检测方法比较
时， 费用也 较 高 ， 不适 合应 用 临床诊 断 ， 主要应 用 于实
验 研 究
病毒 ， 特 异性 和敏感 性 比较高 ， 因此 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ技 术应
用非常广， 不仅用于 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ的诊 断 ， 流行 病学 调 查 ， 还 可应 用 于在病 毒活 性 降低 ． 或 者细胞 培 养 出现溶解
大 的养猪 场 。
此外 。 还 可利用 抗原抗 体 特异性 反应 直接 进行 抗 原 检测 。如免 疫胶 体金方 法 ， 通过对 特异 性单 抗进 行 金银 染 色标记 ， 快速 进行 抗原 检测 ， 检测 过程 敏感 、 快 速、 特异 性强 ， 而且 一个 最大 的优点 是 ， 避 免 了酶底 物 对人 体 的毒性 作用 。 荧 光抗 体染 色技术 标记 分离 株采
用 异硫氰 酸荧 光素 。 使 分离株 成为一 种采 用荧 光抗 体
染 色技 术 就 能直 接 发 现病 猪 肺脏 抗 原 的一 种 简便 方
法。 有 的试验 方法 则 主要 是直 接选 择疑 似患病 仔 猪 的 肺 泡 巨噬细 胞进行 分离 病毒 。 然后 对通 过这 种试 验方 法 分离 到的 毒株培 养 ， 再 采用 特异性 的荧 光抗 体染 色 方 法进 行 检 测 ， 在实 际 中具 有 较 好 的特 异性 ， 但敏 感
现代农业 ２ ０ １ ７年 ４期
畜 禽 养 殖
猪繁殖 与呼吸综合征几种常 用检测方法 比较
王 久 媛
辽 宁省 朝 阳市 畜牧 兽 医监 测预 警 中心
猪 繁 殖 与 呼吸 综合 征 （ Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ ） 是 猪 群 发 生 的 一种 以呼 吸系 统 和繁 殖 系统 出现 障碍 为 特 征 的急 性 高度
不同微载体浓度在高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒培养中的比较
2020年第08期微载体悬浮培养高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒是提升该疫苗产品质量的重要工艺技术,细胞微载体悬浮培养不仅可以提高单位体积内的细胞量、提高病毒产品效价,同时还具有劳动成本低、产品批间差异小等优点。
在提升并保证病毒含量的基础上降低微载体的使用浓度,是生产部门提质降本的方向。
我公司利用5L 和50L 生物反应器微载体悬浮培养M ar c145细胞,对接毒时细胞活力、细胞密度的选择、接毒剂量、病毒收获时机等工艺参数优化基础上,进行了微载体使用浓度的比较,确定了适合的微载体使用浓度,达到抗原效价和微载体的最佳匹配效果,提升抗原效价的基础上达到最优的使用浓度。
1材料与方法1.1.1细胞与种毒M ar c-145细胞由哈尔滨元亨生物药业有限公司提供。
毒种H P-PR R SV (J X A 1-R 株)由中国动物疫病预防控制中心提供。
基础毒种由哈尔滨元亨生物药业有限公司提供。
1.1.2主要试剂M EM 培养基、D M EM 培养基、胰酶购自G I BCO 公司;新生牛血清购自山西润生,微载体(Cyt odex-1)购自G E 公司。
1.1.3主要仪器设备5L 和50L 生物反应器为广州齐志生物工程有限公司生产;CO 2培养箱(H F240型),H eal For ce 公司;1.2.1细胞培养5L 和50L 生物反应器均分别按照2、2.5、3、5、10g/L 接入微载体,按照8.6×107个细胞/g 微载体接种对数生长期的M ar c-145细胞。
1.2.2病毒增殖待细胞长至致密单层时,弃去营养液,不同微载体浓度按M O I 接种病毒,病毒液为同批次H P-PR R SV (J X A 1-R 株)经分装且冻融次数相同的种毒,换含2%血清的维持液至病毒收获。
每隔2h 取样观察CPE 情况,当70%~80%细胞出现CPE 时收毒,冻融1次,-20℃保存备用,按此方法重复试验3次。
1.2.3TCI D50测定96孔微量培养板中每孔加入细胞悬液100μL ,细胞形成单层后,将待测病毒液分别作10-1~10-8倍梯度稀释,每稀释度6孔,每孔加入不同稀释度的病毒液100μL ,细胞对照组加100μL 细胞稀释液。
猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆与原核表达
猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆与原核表达尹国友;孙婕;黄保续【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2009(30)12【摘要】通过PCR方法从重组质粒扩增得到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)结构蛋白ORF5基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a,得到重组表达载体pET-32a-GP5,转化大肠埃希菌BL21.用不同浓度的IPTG分别于37 ℃诱导.经SDS-PAGE分析,所表达的融合蛋白分子量约为31.4 ku;薄层扫描分析显示,表达量占菌体总蛋白含量的28.8%.重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别,可用于PRRSV的检测.【总页数】4页(P63-66)【作者】尹国友;孙婕;黄保续【作者单位】河南城建学院生物工程系,河南平顶山,467044;河南城建学院生物工程系,河南平顶山,467044;中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛,266032【正文语种】中文【中图分类】Q785;S852.659.6【相关文献】1.猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建 [J], 赵娜;田宏;吴锦艳;满自萍;尚佑军;何生虎;刘湘涛2.猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆与原核表达 [J], 梁望旺;徐涤平;伍锐;杨克礼;刘泽文;熊忠良;段正赢;邓均华;唐文娟;余爱冬3.猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州爿离株ORF5基因原核表达的研究 [J], 王彬;汤德元;李春燕;王凤;曾智勇;张晓杰;甘振磊4.猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因原核表达载体的构建与鉴定 [J], 周玉照;马志亮;孙亭亭;杨洁;张小苗;柴俊;张娜娜;张以芳5.tPA信号肽和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因原核表达载体的构建 [J], 邱璜;夏平安;卢高峰;王中明;刘明莉;李伟娟;党占国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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五种核酸提取法对猪繁殖 与 呼吸综合征病毒提取效 率的比较
何世 成 ，林 源 ，王 昌建 ，刘道 新 ，谭 丹 ， 唐 小明 ，王卫 国 ，鲁 杏华 ，邱 立新 ，何 玉玲 （ １ ． 湖 南省动 物疫 病预 防控 制 中心 ，湖 南长 沙 ４ １ ０ ０ １ ４ ； ２ ． 长 沙市动 物疫 病预 防控 制 中心 ，湖 南长 沙 ４ １ ０ ０ ０ ６ ）
随着 分子 检测 技 术 的广 泛应 用 ，核 酸提 取技 术
获得 长足 发 展 。第 一代化 学 法 ，如 异硫氰 酸胍 ． 酚．
提 取法操 作 较简 单 、提取 效率 高 、提取 质量 稳 定 ； 近 年发 展起 来 的第三 代磁 珠提 取法 提取 效率 更 高 ， 且可进 行 仪器 自动 化批 量提 取 ，在有 批量 提取 要 求 的实 验 室 中广 受推 崇 ［ １ － ２ ］ ｏ猪 繁 殖 与 呼 吸 综合 征病
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本研究 以 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 阳性 样 品为 对 象 ， 平 行 比较
了五 种不 同提 取方 法提 取 效率 的差异 ， 旨在 获取 动 物疫 病监 测实 验室 选 择合适 、 可靠 的核 酸提取 方法
异 丙醇，混匀，静置 ２ ０ ａｉ ｒ ｎ ，４ ℃离心 １ ０ ｍｉ ｎ ； 去 上清 ，离心管 倒置 晾干，加 ｌ ｍＬ ７ ０ ％冰 乙 醇 洗 ，
的选择提 供技术参 考。方法 用五种 不同核 酸提 取方 法对 ４ 份 １ ０ 倍梯度 稀释 的 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 阳性血 清、２ 份Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ
阳性 组织 悬液及其 离心后 的上 清液共 ８份样品 同时进 行核酸提取 ，用荧光 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ方法进行检 测，获取 各样 品
Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 荧光 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ结果的 Ｃ Ｐ值 ，分析五种提取 方式的相对提取 效率。结果 对合适 的提取样 品，磁珠提取 法 相对提 取效率 最 高，吸 附枉 法其次 ，Ｔ ｉ ｆ ｚ ｏ ｌ 提取 法相 对效率较 差 ；在三种磁 珠提取 法 中，提取效 率相差在 ２个
Ｃ Ｐ值 内，差异 不明显 ，但 以天隆磁 珠提取 法提取效 率更 高。结论 预装试剂 结合仪 器 自动化操作 的磁珠 法提 取 效果稳定 ，效 率最高；国产仪 器国产 试剂提取 效率不亚于进 １ ： ２ 仪 器和试剂 。
关键 词 ：Ｒ ＮＡ提 取 ；Ｐ Ｒ ＲＳ Ｖ；Ｔ Ｒ Ｉ Ｚ ０Ｌ ： 吸 附柱 ；磁 珠 法
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中图分类号：Ｒ３ ７ ３ ． １
文献标识 码：Ａ 文章编 号：１ ０ ０ ５ — ９ ４ ４ Ｘ（ ２ ０ １ ４ ）０ ８ － ０ ０ ７ ０ － ０ ４ Ｃｏ ｍ ｐａ ｒ ｉ ｓ ｏ ｎ ｏ ｆ ｉ ｆ ｖｅ ＲＮＡ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄｓ ｆ ｏ ｒ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｏ ｆ ＰＲＲＳ ｖ ｉ ｒ ｕｓ ｎ ｕｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄｓ
状 ，是严 重威 胁全 球 养猪业 发 展 的重要 传染 病之 一
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。
１ ． ４ ． １ Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 提 取 。在 离 心 管 中 依 次 加 入 ７ ５ ０ ｕ Ｌ Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 和２ ５ ０ ｕ Ｌ样 品 ， 震 荡 混 匀 ， 静 置 １ ０ ｍｉ ｎ ：
加入 ２ ０ ０ ｕ Ｌ氯 仿 ， 混 匀 ， 静 置 １ ０ ｍｉ ｎ ，４℃ 离 心 １ ５ ｍｉ ｎ ；转移 上 清 至 一新 离 心 管 中，加入 ５ ０ ０ ｕ Ｌ
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氯 仿 提取 法 、Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 提 取 法 等操 作 繁 琐 、耗 时 、 易 污 染 ，对 人 员技 术水 平要Leabharlann 求较 高 ；第二 代为 吸 附柱