五种核酸提取法对猪繁殖与呼吸综合征病毒提取效率的比较

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ＨｅＳｈｉｃｈｅｎｇ，ＬｉｎＹｕａｎ，ＷａｎｇＣｈａｎｇｊｉａｎ，ＬｉｕＤａｏｘｉｎ，ＴａｎＤａｎｇ２，
ＴａｎｇＸｉａｏｍｉｎｇ，ＷａｎｇＷｅｉｇｕｏ，ＬｕＸｉｎｈｕａ，ＱｉｕＬｉｘｉｎ ‘ ，ＨｅＹｕｌｉｎｇ
ｂｅａｄＲＮＡｅｘｒａｔｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｎｏｏｂｖｉｏｕｓｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ，ｂｕｔｔｈｅＴｉａｎｌｏｎｇｍａｇｎｅｔｉｃｂｅａｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｅｆｉｆｃｉｅｎｃｙ
状，是严重威胁全球养猪业发展的重要传染病之一
ｐ］
。
１．４．１Ｔｒｉｚｏｌ提取。在离心管中依次加入７５０ｕＬＴｒｉｚｏｌ和２５０ｕＬ样品，震荡混匀，静置１０ｍｉｎ：
加入２００ｕＬ氯仿，混匀，静置１０ｍｉｎ，４℃ 离心１５ｍｉｎ；转移上清至一新离心管中，加入５００ｕＬ
ｓｔａｂｌｅａｎｄｇａｖｅｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｅｉｃｆｉｅｎｃｙ．Ｔｈｅｍａｇｎｅｔｉｃｂｅａｄｅｘｒｔａｃｔｉｏｎｅｉｃｆｉｅｎｃｙｈａｄｎｏｓｉｇｎｉｉｃｆａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅ
随着分子检测技术的广泛应用，核酸提取技术
获得长足发展。第一代化学法，如异硫氰酸胍．酚．
提取法操作较简单、提取效率高、提取质量稳定；近年发展起来的第三代磁珠提取法提取效率更高，且可进行仪器自动化批量提取，在有批量提取要求的实验室中广受推崇［１－２］ｏ猪繁殖与呼吸综合征病
中图分类号：Ｒ３７３．１
文献标识码：Ａ文章编号：１００５ — ９４４Ｘ（２０１４）０８－００７０－０４ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｉｆｖｅＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎＯｆＰＲＲＳｖｉｒｕｓｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓ
的选择提供技术参考。方法用五种不同核酸提取方法对４份１０倍梯度稀释的ＰＲＲＳＶ阳性血清、２份ＰＲＲＳＶ
阳性组织悬液及其离心后的上清液共８份样品同时进行核酸提取，用荧光ＲＴ－ＰＣＲ方法进行检测，获取各样品
ＰＲＲＳＶ荧光ＲＴ－ＰＣＲ结果的ＣＰ值，分析五种提取方式的相对提取效率。结果对合适的提取样品，磁珠提取法相对提取效率最高，吸附枉法其次，Ｔｉｆｚｏｌ提取法相对效率较差；在三种磁珠提取法中，提取效率相差在２个
摘要：目的研究ＴｉｒｚｏｌＲＮＡ提取法、杭州博日吸附柱ＲＮＡ提取法、Ｐｒｏｍｅｇａ核酸提取仪磁珠ＲＮＡ提取法、
西安天隆核酸提取仪磁珠ＲＮＡ提取法、Ｔｈｅｒｍｏ核酸提取仪磁珠ＲＮＡ提取法等五种不同核酸提取方法对不同含量猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）ＰＥｌ，｝生Ｊ弹品的相对提取效率，为动物疫病监测诊断实验室核酸提取方式
＿１ ’ 锄扬耗霞
五种核酸提取法对猪繁殖与呼吸综合征病毒提取效率的比较
何世成，林源，王昌建，刘道新，谭丹，唐小明，王卫国，鲁杏华，邱立新，何玉玲（１．湖南省动物疫病预防控制中心，湖南长沙４１００１４；２．长沙市动物疫病预防控制中心，湖南长沙４１０００６）
ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｃｏｌｕｍｎＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆＢＩＯＥＲ，ｍａｇｎｅｔｉｃｂｅａｄＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆＰｒｏｍｅｇａ，ＸｉａｎＴｉａｎｌｏｎｇａｎｄＴｈｅｒ —
ｓａｍｅｔｉｍｅ．ＴｈｅＲＮＡｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｑｕａｎｔｉｉｆｅｄｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｒｅａｌ — ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲＴ＿ＰＣＲ．ＲｅｓｕｌｔｓＦｏｒｔｈｅａｐ — ｐｒｏｐｒｉａｔｅｓａｍｐｌｅｓ，ｔｈｅｅｘｒｔａｃｔｉｏｎｅｉｃｆｉｅｎｃｙｏｆｍａｇｎｅｔｉｃｂｅａｄｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ；ｔｈｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｃｏｌｕｍｎＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｏｌｌｏｗｅｄ：ａｎｄＴｒｉｚｏｌＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓｌｏｗｅｒ；ｔｈｅｒｅｗａｓ２ＣＰｖａｌｕｅｄｅｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｔｈｅｔｈｒｅｅｍａｇｎｅｔｉｃ
ｍｏ）ｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＰＲＲＳＶｖｉｒｕｓｅｓ，ＳＯａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅｔｅｃｈｎｉｃａｌｒｅｆｅｒｅｎｃｅｏｒｆａｎｉｍａｌｄｉｓｅａｓｅｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓｉｎｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＰＲＲＳＶＲＮＡｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅ５ＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｎｐｏｓｉｔｉｖｅｓｅｒｕｍｓａｍｐｌｅｓｏｆＰＲＲＳｖｉｕｓｒｅｓｄｉｌｕｔｅｄｓｅｉａｒｌｌｙｆｒｏｍ１０。。ｔｏ１０ａｎｄ２ＰＲＲＳＶｐｏｓｉｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎａｎｄｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔａｔｔｈｅ
ｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｄｉｍｐｏｒｔｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ＰＲＲＳＶ；Ｔｒｉｚｏｌ；ａｄｓｏｐｔｒｉｏｎｃｏｌｕｎ；ｍａｍｇｎｅｔｉｃｂｅａｄｅｘｒａｔｃｔｉｏｎ
ＣＰ值内，差异不明显，但以天隆磁珠提取法提取效率更高。结论预装试剂结合仪器自动化操作的磁珠法提取效果稳定，效率最高；国产仪器国产试剂提取效率不亚于进１：２仪器和试剂。
关键词：ＲＮＡ提取；ＰＲＲＳＶ；ＴＲＩＺ０Ｌ：吸附柱；磁珠法
（１．ＨｕｎａｎＣｅｎｔｅｒｆｏｒＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ４１００１４；
２．Ｃｈ Fra Baidu bibliotek ｎｇｓｈａＣｅｎｔｅｒｏｒｆＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ４１０００６）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｉｍＴｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｅｘｒｔａｃｔｉｏｎｅｍｃｉｅｎｃｙｏｆｉｆｖｅＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ（ＴｒｉｚｏｌＩＡｅｘｒａｔｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ、
本研究以ＰＲＲＳＶ阳性样品为对象，平行比较
了五种不同提取方法提取效率的差异，旨在获取动物疫病监测实验室选择合适、可靠的核酸提取方法
异丙醇，混匀，静置２０ａｉｒｎ，４ ℃离心１０ｍｉｎ；去上清，离心管倒置晾干，加ｌｍＬ７０％冰乙醇洗，
氯仿提取法、Ｔｒｉｚｏｌ提取法等操作繁琐、耗时、易污染，对人员技术水平要求较高；第二代为吸附柱
一
２０１４年第３１卷第８期
毒（ＰＩＳＶ）是一种有囊膜的单股正链ＲＮＡ病毒，在临床上能引起母猪的繁殖障碍和仔猪的呼吸道症
ｗａｓｈｉｇｈｅｒｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＰｒｅ — ｉｎｓｔａｌｌｅｄｒｅａｇｅｎｔｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈａｕｔｏｍａｔｉｏｎｍａｇｎｅｔｉｃｂｅａｄｓｔｏｅｘｔｒａｃｔｗａｓ