FITC免疫荧光检测试剂盒小鼠FITCImmunofluorescence
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FITC 免疫荧光检测试剂盒（小鼠）
FITC Immunofluorescence Detection Kit (Mouse)
产品编号：E670005
包装规格：100 Tests/300 Tests 产品简介
免疫荧光检测试剂盒系列用于细胞或组织切片的免疫荧光染色。在有适当的一抗检测特定的目标蛋白时，就可以使用免疫荧光检测试剂盒检测到红色、绿色或蓝色等荧光。
本试剂盒含有FITC 标记的驴抗小鼠IgG (H+L) 抗体，可以用于检测小鼠来源的相应一抗，在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下可以观察到鲜艳的绿色。
FITC 是一种常用的绿色荧光探针。FITC 的吸收（激发）和发射峰分别为492 nm 和520 nm 。 产品特点
1. 本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。
2. 操作简便，灵敏度高。 保存条件
驴抗小鼠FITC 标记二抗和抗荧光淬灭封片液-20°C 避光保存，其它试剂2-8°C 保存，保质期12个月。
试剂盒组成 组分
100 Tests 300 Tests 试剂 A 封闭液 (Blocking Solution)
10 mL 30 mL 试剂 B 驴抗小鼠FITC 标记二抗 (FITC Conjugated Donkey Anti-Mouse IgG)
100 μL 300 μL 试剂 C 免疫荧光染色二抗稀释液 (Secondary Antibody Dilution Buffer For IF Staining) 30 mL 90 mL 试剂 D 抗荧光淬灭封片液 (Anti-Fade Mounting Medium)
3 mL
10 mL 操作步骤
A. 免疫荧光染色的准备工作
荧光标记二抗的稀释：将荧光标记的二抗按照1:50-200的比例用本试剂盒提供的免疫荧光染色二抗稀释液进行稀释。根据荧光的强弱，其稀释比例可以适当地提高或降低。 B. 贴壁细胞
1. 细胞爬片，PBST 洗3次，每次5 min 。
2. 加入1 mL 预冷的固定液，室温固定10 min 或更长时间。
3. PBST 洗3次，每次5 min 。
4. 0.1-0.5%Triton X-100室温通透10-15 min 。
5. PBST 洗3次，每次5 min 。
6. 封闭液室温封闭30-45 min 。
7. 一抗室温孵育60 min ，为增强与一抗的结合，建议4°C 孵育过夜，次日室温孵育60 min 。 8. PBST 洗4次，每次5 min 。
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9. 加入50 μL 稀释的荧光标记的二抗，避光孵育45-60 min 。 10. PBST 洗3次，每次5 min ，期间适当注意避光操作。 11. 如有需要可进行DAPI 或Hoechst 复染细胞核。 12. 抗荧光淬灭封片液封片，指甲油密封盖玻片。 13. 荧光显微镜下可以观察到绿色的荧光。 C. 悬浮细胞
1. 离心收集细胞样品于1.5 mL 离心管中，去掉上清后轻轻弹散细胞。
2. 加入0.5 mL 固定液，混悬细胞，固定10 min 或更长时间。
3. 离心去除固定液，PBST 洗3次，每次5 min 。
4. 0.1-0.5%Triton X-100室温通透10-15 min 。
5. PBST 洗3次，每次5 min 。
6. 最后一次离心后吸除大部分液体并保留50 μL 液体，再缓缓悬起细胞，滴加至防脱载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
7. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
8. 封闭液室温封闭30-45 min 。
9. 一抗室温孵育60 min ，为增强与一抗的结合，建议4°C 孵育过夜，次日室温孵育60 min 。
10. PBST 洗4次，每次5 min 。
11. 加入50 μL 稀释的荧光标记的二抗，避光孵育45-60 min 。 12. PBST 洗3次，每次5 min ，期间适当注意避光操作。 13. 如有需要可进行DAPI 或Hoechst 复染细胞核。 14. 抗荧光淬灭封片液封片，指甲油密封盖玻片。 15. 荧光显微镜下可以观察到绿色的荧光。 D. 冰冻切片
1. 用固定液固定10 min 或更长时间。
2. PBST 洗3次，每次5 min 。
3. 封闭液室温封闭30-45 min 。
4. 一抗室温孵育60 min ，为增强与一抗的结合，可以4°C 孵育过夜，次日室温孵育60 min 。
5. PBST 洗4次，每次5 min 。
6. 加入50 μL 稀释的荧光标记的二抗，避光孵育45-60 min 。
7. PBST 洗3次，每次5 min ，期间适当注意避光操作。
8. 如有需要可进行DAPI 或Hoechst 复染细胞核。
9. 抗荧光淬灭封片液封片，指甲油密封盖玻片。 10. 荧光显微镜下可以观察到绿色的荧光。 E. 石蜡切片
1. 切片常规脱蜡至水。
2. 根据每一种抗体的要求，对组织进行相应的抗原修复，也可选用本公司生产的抗原修复液。
3. PBST 洗3次，每次5 min 。
4. 封闭液室温封闭30-45 min 。
5. 一抗室温孵育60 min ，为增强与一抗的结合，可以4°C 孵育过夜，次日室温孵育60 min 。
6. PBST 洗4次，每次5 min 。
7. 加入50 μL 稀释的荧光标记的二抗，避光孵育45-60 min 。 8. PBST 洗3次，每次5 min ，期间适当注意避光操作。 9. 如有需要可进行DAPI 或Hoechst 复染细胞核。 10. 抗荧光淬灭封片液封片，指甲油密封盖玻片。
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