第25次课 体内药物分析_PPT幻灯片
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尿液是很好的细菌生长液，若需收集24小时或 更长时间的样品或不能立即测定的，应置冰箱冷藏 或加防腐剂（1%甲苯、过饱和氯仿）保存。
三 生物样品前处理
（一）药物在体内的存在形式
游离型：原形药物或代谢物
缀合物：药物或其代谢物与葡萄糖醛酸等结合 结合物：药物与蛋白质结合
因此，在样品测定之前要进行适当的样品制备。 包括分离、纯化、浓集、必要时还需对待测组分进 行化学衍生化。
2．样品量少、不能重复取样：生物样品多数在特定
条件下采集，无法再次取样，且浓度低、变化幅
度大，在测定前需浓缩、富集以适应分析方法要
求。
返回 首页
2、唾液：
优点：样品易得，取样无痛苦，尤易为儿童接收。 缺点：药物浓度变化大 采取：漱口15分钟，收集自然流出或经舌在口内 搅动流出的唾液。也可采取物理、化学方法刺激 使唾液流出。
（二）样品前处理的目的
1、提高测定方法灵敏度、准确度和专属性 2、保护测定仪器不受生物样品中类脂和蛋白质 等的污染。
（三）样品的分离与纯化
包括样品去除蛋白质、缀合物水解和待测组分的提取。
1、去除蛋白质
（1）加入与水相混溶的有机溶剂：乙腈、甲醇、乙 醇、丙酮等。 （2）加入中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、枸橼酸盐 等。 （3）加入强酸：三氯醋酸、高氯酸、硫酸-钨酸等。
免疫测定法原理
将被测药物作为抗原（ Ag ）免疫动物使其产
生抗体（Ab），然后根据抗原、标记抗原（ Ag* ）
与一定量的抗体分子竞争结合的程度来测定抗原
（药物）的含量。
Ag*t
标记抗原总量
Agt
+ Ab
Ag*-Ab+ Ag*f
游离标记抗原
Ag-Ab+ Agf
抗原总量
游离抗原
五 体内药物分析方法建立的一般实验步骤
多数药物是亲脂性的，可用有机溶剂提取出来， 而大多数内源性杂质是强极性的，不被提取出。
液-液提取中需注意的问题：
① 适当的有机溶剂：常用乙醚、氯仿等。 ② 适当的水相pH值：由药物的pKa值确定，一般碱 性药物在碱性条件、酸性药物在酸性条件下提取。
碱性药物最佳pH 高于pKa值1-2个pH单位 酸性药物最佳pH 低于pKa值1-2个pH单位 中性药物：多选碱性下提取
③ 离子型药物：离子对提取发 ④ 提取技术：提取次数尽可能少，不要求提取完 全，而要求适量而稳定的提取率。
（2）液-固提取（LSE）：
将生物样品溶液通过填有适宜担体的小柱，使 药物保留在担体上，洗去杂质后，用适当的溶剂洗 脱下来测定；或杂质保留在担体上，先把药物洗脱 下来测定。
（四）被测组分的浓集
1、对照品测定：选择测定条件、浓度线性范围等 2、经过纯化处理的空白样品测定：测定空白值， 考虑分离度。 3、空白样品加对照品测定：求得样品回收率，检 验样品中是否有干扰。 4、体内实际样品测定
（4）加入金属离子：CuSO4-Na2WO4等。 （5）酶解法：常用枯草菌蛋白酶
2、缀合物水解
尿液中药物多数呈缀合物状态。 （1）酸水解：适量盐酸 （2）酶水解：常用葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶 或两者混合。
3、待测组分的提取
提取目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分 提取方法：
（1）液-液提取（LLE）：
浓集方法：
1、末次提取时，加入溶剂尽可能少 2、挥去溶剂：
（1）通入气流（氮气）吹干 （2）减压法：适于易随气流挥发或遇热不稳定药物
（五）化学衍生化
GC中，极性较大、挥发性低的药物或代谢物→极性 小、稳定性好的衍生物
HPLC中，分子结构无紫外吸收→具紫外吸收或荧光 的衍生物
1、GC中化学衍生化：
烷基化、酰化、硅烷化等。
例：烷基化
RCOOH、ROH、RSH、RNH2 CH3I源自文库CH3N2等
RCOOCH3、ROCH3、RSCH3、RNHCH3 极性降低，挥发性增加
2、HPLC中化学衍生化
常用衍生化试剂有：邻苯二醛、丹酰氯、荧胺等。
柱前衍生化 化学衍生化
柱后衍生化
四 含量测定方法
色谱分析法（HPLC、GC、TLC） 光度分析法（UV、荧光、可见） 免疫测定法（RIA、EIA、FIA）
3、尿液：
尿样测定主要用于药物剂量回收研究、药物肾清 除率和生物利用度等研究，以及测定代谢物类型等。
优点：采取简便，取样量大，受试者无痛苦。 缺点：药物浓度变化也大，需采集一定时间内的尿 样。 采取：动物应在代谢笼中进行，通过笼下漏斗接收。
（二）样品贮存
取样后最好立即进行分析，不能立即分析的， 则短期内冷藏(4℃)，长期冰冻(-20℃) 。
另外，在用药过量、误服或服毒等中毒事件中， 为解毒急救或判断案情，也需要进行体内药物分析； 还有对一些兴奋剂、致幻剂、镇静剂等药物滥用现象 也需要进行体内药物进行检测。
（三）体内药物分析的特点
1．干扰物质多：生物样品中含有大量的内源性物，
质如蛋白质、脂肪等，以及代谢物、结合物等，
样品一般均需经过分离、净化后才能进行分析。
一 概述
（一）体内药物分析的概念
体内药物分析：是一门研究进入人或动物体内，存在 于生物样品（如体液、组织、器官和排泄物等）中的 药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分 析方法学。
（二）体内药物分析的意义
通过体内药物分析结果可求得药物动力学参数， 可了解药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄情况。 因此，体内药物分析为药物研究、制剂质量管理、临 床用药等提供了数据和信息。
三 生物样品前处理
（一）药物在体内的存在形式
游离型：原形药物或代谢物
缀合物：药物或其代谢物与葡萄糖醛酸等结合 结合物：药物与蛋白质结合
因此，在样品测定之前要进行适当的样品制备。 包括分离、纯化、浓集、必要时还需对待测组分进 行化学衍生化。
2．样品量少、不能重复取样：生物样品多数在特定
条件下采集，无法再次取样，且浓度低、变化幅
度大，在测定前需浓缩、富集以适应分析方法要
求。
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2、唾液：
优点：样品易得，取样无痛苦，尤易为儿童接收。 缺点：药物浓度变化大 采取：漱口15分钟，收集自然流出或经舌在口内 搅动流出的唾液。也可采取物理、化学方法刺激 使唾液流出。
（二）样品前处理的目的
1、提高测定方法灵敏度、准确度和专属性 2、保护测定仪器不受生物样品中类脂和蛋白质 等的污染。
（三）样品的分离与纯化
包括样品去除蛋白质、缀合物水解和待测组分的提取。
1、去除蛋白质
（1）加入与水相混溶的有机溶剂：乙腈、甲醇、乙 醇、丙酮等。 （2）加入中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、枸橼酸盐 等。 （3）加入强酸：三氯醋酸、高氯酸、硫酸-钨酸等。
免疫测定法原理
将被测药物作为抗原（ Ag ）免疫动物使其产
生抗体（Ab），然后根据抗原、标记抗原（ Ag* ）
与一定量的抗体分子竞争结合的程度来测定抗原
（药物）的含量。
Ag*t
标记抗原总量
Agt
+ Ab
Ag*-Ab+ Ag*f
游离标记抗原
Ag-Ab+ Agf
抗原总量
游离抗原
五 体内药物分析方法建立的一般实验步骤
多数药物是亲脂性的，可用有机溶剂提取出来， 而大多数内源性杂质是强极性的，不被提取出。
液-液提取中需注意的问题：
① 适当的有机溶剂：常用乙醚、氯仿等。 ② 适当的水相pH值：由药物的pKa值确定，一般碱 性药物在碱性条件、酸性药物在酸性条件下提取。
碱性药物最佳pH 高于pKa值1-2个pH单位 酸性药物最佳pH 低于pKa值1-2个pH单位 中性药物：多选碱性下提取
③ 离子型药物：离子对提取发 ④ 提取技术：提取次数尽可能少，不要求提取完 全，而要求适量而稳定的提取率。
（2）液-固提取（LSE）：
将生物样品溶液通过填有适宜担体的小柱，使 药物保留在担体上，洗去杂质后，用适当的溶剂洗 脱下来测定；或杂质保留在担体上，先把药物洗脱 下来测定。
（四）被测组分的浓集
1、对照品测定：选择测定条件、浓度线性范围等 2、经过纯化处理的空白样品测定：测定空白值， 考虑分离度。 3、空白样品加对照品测定：求得样品回收率，检 验样品中是否有干扰。 4、体内实际样品测定
（4）加入金属离子：CuSO4-Na2WO4等。 （5）酶解法：常用枯草菌蛋白酶
2、缀合物水解
尿液中药物多数呈缀合物状态。 （1）酸水解：适量盐酸 （2）酶水解：常用葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶 或两者混合。
3、待测组分的提取
提取目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分 提取方法：
（1）液-液提取（LLE）：
浓集方法：
1、末次提取时，加入溶剂尽可能少 2、挥去溶剂：
（1）通入气流（氮气）吹干 （2）减压法：适于易随气流挥发或遇热不稳定药物
（五）化学衍生化
GC中，极性较大、挥发性低的药物或代谢物→极性 小、稳定性好的衍生物
HPLC中，分子结构无紫外吸收→具紫外吸收或荧光 的衍生物
1、GC中化学衍生化：
烷基化、酰化、硅烷化等。
例：烷基化
RCOOH、ROH、RSH、RNH2 CH3I源自文库CH3N2等
RCOOCH3、ROCH3、RSCH3、RNHCH3 极性降低，挥发性增加
2、HPLC中化学衍生化
常用衍生化试剂有：邻苯二醛、丹酰氯、荧胺等。
柱前衍生化 化学衍生化
柱后衍生化
四 含量测定方法
色谱分析法（HPLC、GC、TLC） 光度分析法（UV、荧光、可见） 免疫测定法（RIA、EIA、FIA）
3、尿液：
尿样测定主要用于药物剂量回收研究、药物肾清 除率和生物利用度等研究，以及测定代谢物类型等。
优点：采取简便，取样量大，受试者无痛苦。 缺点：药物浓度变化也大，需采集一定时间内的尿 样。 采取：动物应在代谢笼中进行，通过笼下漏斗接收。
（二）样品贮存
取样后最好立即进行分析，不能立即分析的， 则短期内冷藏(4℃)，长期冰冻(-20℃) 。
另外，在用药过量、误服或服毒等中毒事件中， 为解毒急救或判断案情，也需要进行体内药物分析； 还有对一些兴奋剂、致幻剂、镇静剂等药物滥用现象 也需要进行体内药物进行检测。
（三）体内药物分析的特点
1．干扰物质多：生物样品中含有大量的内源性物，
质如蛋白质、脂肪等，以及代谢物、结合物等，
样品一般均需经过分离、净化后才能进行分析。
一 概述
（一）体内药物分析的概念
体内药物分析：是一门研究进入人或动物体内，存在 于生物样品（如体液、组织、器官和排泄物等）中的 药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分 析方法学。
（二）体内药物分析的意义
通过体内药物分析结果可求得药物动力学参数， 可了解药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄情况。 因此，体内药物分析为药物研究、制剂质量管理、临 床用药等提供了数据和信息。