临床检验基础实验指导

临床检验基础学实验指导

血液常规检验

一、微量吸管得使用、毛细血管采血、计数板得鉴定与使用【实验目得】:掌握微量吸管得使用、毛细血管采血、计数板得鉴定、构造与使用、

【实验试剂】:红细胞稀释液、75％乙醇、消毒药棉。

【实验器材】: 一次性采血针、计数板、盖玻片、微量吸管、2ml吸管、中号试管、显微镜、小玻璃棒。

【实验原理】:一次性采血针刺破毛细血管后,用微量吸管吸取一定量得血液,稀释一定得倍数,冲入计数池计数一定体积内得细胞得数量。

【实验方法】:一、微量吸管得使用:用抗凝血训练微量吸管得使用、

二、毛细血管采血(以红细胞计数为例):

准备:取清洁干燥试管一支,加2ml红细胞稀释液。

采血部位选择、按摩→75％乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒→待酒精挥发干(否则血流不成滴)→自指尖腹内侧迅速刺针→擦去第一滴血→准确吸取10ul血液→用无菌干棉球压住伤口止血→用无菌干棉球擦去管尖外围余血后→将血液释放到稀释液底部→回吸上清液2－３次→轻轻混匀。

三、计数板构造与应用

1.计数板构造

外观构造:每块计数板由“H”型凹槽分上下两个计数室,在计数室两侧各有一条支柱,比计数室高出0、1mｍ,将一块平整光滑得血细胞计数专用盖玻片(24.0mｍ×20、0ｍm×0、6ｍm)覆盖其上时,盖玻片与计数室间形成0.1ｍm得缝隙、

格子构造:计数池长、宽各3mｍ,平均分成9个大格,每个大方格得容积就是0。1 mｍ３四角得四个大方格分别用单线划分成16个中方格,就是白细胞计数区域;中央得大方格用双线条划分成25个中方格,每个中方格又用单线划分成１6个小方格,其中四角与正中得5个中方格就是红细胞计数区域。

２、计数板得使用:

用清洁干燥柔软得纱布擦拭计数板及盖玻片→用推盖法从计数板下缘向前平推盖玻片将其盖在计数室上→充分混匀细胞悬液→充池→静置→观察细胞分布情况(若严重不匀,应重新充池、)

【注意事项】:

1.采血部位应选择皮肤完整,不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。

2.针刺应迅速,深度适宜(约2—3mｍ)、待血液自行流出,擦去第一滴血。

3。微量吸管取血时应将微量吸管管尖侧着插入血滴中央。若血流不暢,可以左手自采血部位远端向指尖稍压力至血液流出为止。切忌用力挤压,造成组织液混入,影响结果准确性。

4.计数板在使用中勿让手指接触计数池及盖玻片表面,以访油腻污染,致使充液时起泡。

二、血涂片得制作,瑞氏染色

【实验目得】:掌握血片制作方法,瑞氏染色原理及方法。

【实验试剂】:瑞-吉氏复合染液 (Ⅰ液、Ⅱ液)

【实验器材】:显微镜、载玻片、推玻片、一次性针头、消毒棉球、洗耳球【实验原理】:细胞得着色既有化学得亲与作用,又有物理得吸附作用,不同得细胞由于其所含化学成分不一样,化学性质各不相同,所以对染料得亲与力也不一样,因此将细胞染成不同得颜色、

【实验方法】:一、瑞一吉氏复合染液配制

Ⅰ液:取瑞特染粉1ｇ,吉姆萨染粉０、3g,置洁净研钵中,加少量甲醇(分析纯),研磨片刻,吸出上层染液,再加少量甲醇,继续研磨,再吸出上层染液。如此连续几次,共用甲醇5０0ml、收集于棕色瓶中,每天早晚各振摇3′共5天,再存放一周,将染液过滤后即可使用。

Ⅱ液:磷酸盐缓冲液(ＰH6、５-6。8),取磷酸二氧钾(无水)6。64g,磷酸氟二钠(无水)2。5６ｇ,加少量蒸馏水溶解,调整PＨ后,加水至1000ｍl。

二、血片制作、瑞氏染色方法

准备:取清洁干燥载玻片,边缘光滑清洁推玻片各一张、

１、制备血涂片:取载玻片→取血1滴于载玻片右端(边缘留1。5cm

空隙)→左手持载玻片,右手持推玻片→将推玻片放至血滴前沿逐渐后移至血滴沿推片散开后,推玻片与载玻片成30°~３5°得夹角以平稳得速度将

血液向前推进→干燥(手持载玻片末端迅速在空气中挥动干燥)。

2、染色:将干透得血涂片放在水平位置→加瑞吉氏复合染液Ⅰ液数滴,以染液覆盖整个血膜为度→静置染0、5～1min→滴加约2倍于Ⅰ液量得Ⅱ液→用洗耳球吹气混匀→染色５—10ｍｉn→平持玻片用流线型水洗→干燥→镜检

【注意事项】:

1.严格皮肤消毒。

2。血滴大、血黏度高、推片角度大、速度快则血膜厚,反之则血膜薄。

3。染料放置时间越长,美兰逐渐氧化为天青,染色效果越好。

4.染液淡,室温低,细胞多则染色时间长,反之减少染色时间。

５.水洗方法为平持血涂片流线型水缓缓冲洗干净,不要先倒掉染液。

三、白细胞计数(WBC)

【实验目得】:掌握白细胞计数得原理、操作方法与结果报告、

【实验原理】:用白细胞稀释液将全血稀释一定得倍数并破坏红细胞,充入血细胞计数池,显微镜下计数一定体积得白细胞数,经换算求出每升血液中得白细胞数量。

【实验试剂】:白细胞稀释液

【实验器材】: 显微镜、改良Neubaｕer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒

【实验方法】:准备:取清洁干燥试管一支,加０、38mｌ白细胞稀释液。

采血部位按摩→７5％乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒→待酒精挥发干(否则血流不成滴)→自指尖腹内侧迅速刺针→擦去第一滴血→准确吸取２0ｕl血液→用无菌干棉球压住伤口止血→用无菌干棉球擦去管尖外围余血

后→将血液轻轻释放到稀释液底部→回吸上清液2－3次→混匀→室温静置至液体变为棕褐色即红细胞破坏完全→清洁计数板、盖玻片→充池→静置２—3min待细胞下沉→低倍镜下计数四角大方格内得白细胞总数→计算→报告、

计算:WBＣ=四个大方格内得白细胞数(N)/4×10×2０×106=Ｎ/2０×

１０9／Ｌ

【注意事项】:

1、采血部位应选择皮肤完整,不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。

2.针刺应迅速,深度适宜(约2—3mm)。待血液自行流出,擦去第一滴血。

3、稀释液要过滤使用,试管、计数板均须清洁,以免混入杂质被误认为白细胞。

4。加稀释液、血液量应精确,以保证稀释倍数。

5.计数池内细胞分布要均匀,每个大方格间白细胞数差异不得超过均值得±１０％,否则要重新充液计数。