实验六 血清白蛋白测定(精美课件)
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血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定ppt课件
取96孔板一块，上四排加20％磺基水杨酸， 下三排加BaCl2液。
从下端管口取1滴洗脱液，滴于20％磺基水杨 酸中，出现白色混浊或沉淀即有蛋白质析出， 开始收集蛋白样品。
从下端管口取1滴洗脱液，滴于BaCl2中，出 现白色混浊或沉淀即有盐分析出，不再收集。
二、G-25凝胶层析脱盐
（一）葡聚糖凝胶G-25层析柱的制备 （二）上样与洗脱：
1、小心控制凝胶柱下端活塞，使柱上缓冲液面刚 好下降到凝胶床表面(注意不要使液面低于凝胶床 表面以致空气进行凝胶床)。
2、关紧下端出口，用滴管吸取盐析球蛋白液，小 心缓慢的加到凝胶床表面上(注意不要将凝胶粒中 冲起或破坏凝胶床表面的平整)。
3、开下端出口，使样品进入凝胶床（刚好下降到 凝胶床表面），关闭出口，小心加入适量pH6.5 的0.02mol/L NH4Ac
血清白蛋白、γ-球蛋白 的分离、纯化及鉴定
分离纯化的一般程序
选择材料 破碎细胞
提取 （预处理） 分离纯化 （粗分级，细分级） 分析及鉴定
实验目的
通过从血清中分离、纯化、鉴定血清 白蛋白和γ-球蛋白的实验，培养学生综合 应用盐析、离心、色谱、电泳分光等技术 来分离纯化特定蛋白质的技能。
实验原理
1. 初分级: 血清经饱和硫酸铵盐析后获得白蛋白 粗分离样品和球蛋白粗分离样品。
再生： 0.3mol/L NH4Ac 20ml， 0.02mol/L
四、醋酸纤维素薄膜电泳检查
样品：
（1 （2）粗分的γ-球蛋白液 （3）粗分的白蛋白液 （4）纯化的γ-球蛋白液：由于此溶液浓度较
低，应多次点样于同一位置（2次），每 次点样时待干后再点。 （5）纯化的白蛋白液
操作步骤： １．准备与点样 2. 电泳 （点样面朝下，110V 1h） ３．氨基黑１０B染色
从下端管口取1滴洗脱液，滴于20％磺基水杨 酸中，出现白色混浊或沉淀即有蛋白质析出， 开始收集蛋白样品。
从下端管口取1滴洗脱液，滴于BaCl2中，出 现白色混浊或沉淀即有盐分析出，不再收集。
二、G-25凝胶层析脱盐
（一）葡聚糖凝胶G-25层析柱的制备 （二）上样与洗脱：
1、小心控制凝胶柱下端活塞，使柱上缓冲液面刚 好下降到凝胶床表面(注意不要使液面低于凝胶床 表面以致空气进行凝胶床)。
2、关紧下端出口，用滴管吸取盐析球蛋白液，小 心缓慢的加到凝胶床表面上(注意不要将凝胶粒中 冲起或破坏凝胶床表面的平整)。
3、开下端出口，使样品进入凝胶床（刚好下降到 凝胶床表面），关闭出口，小心加入适量pH6.5 的0.02mol/L NH4Ac
血清白蛋白、γ-球蛋白 的分离、纯化及鉴定
分离纯化的一般程序
选择材料 破碎细胞
提取 （预处理） 分离纯化 （粗分级，细分级） 分析及鉴定
实验目的
通过从血清中分离、纯化、鉴定血清 白蛋白和γ-球蛋白的实验，培养学生综合 应用盐析、离心、色谱、电泳分光等技术 来分离纯化特定蛋白质的技能。
实验原理
1. 初分级: 血清经饱和硫酸铵盐析后获得白蛋白 粗分离样品和球蛋白粗分离样品。
再生： 0.3mol/L NH4Ac 20ml， 0.02mol/L
四、醋酸纤维素薄膜电泳检查
样品：
（1 （2）粗分的γ-球蛋白液 （3）粗分的白蛋白液 （4）纯化的γ-球蛋白液：由于此溶液浓度较
低，应多次点样于同一位置（2次），每 次点样时待干后再点。 （5）纯化的白蛋白液
操作步骤： １．准备与点样 2. 电泳 （点样面朝下，110V 1h） ３．氨基黑１０B染色
猪血清白蛋白的分ppt课件
留样：2，3 留样：4,…
白蛋白纯度的 检测
蛋白质含量的 白蛋白的相对分
测定
子质量的测定
一、血清白蛋白的分离
• 1 采血 • 2 血清分离 • 3 盐析法分离血清白蛋白 • 4 除盐
• 收集血清：
取2 mL血液，4 ℃，3,000 rpm 离心15 min，用移液枪吸取上清（血清）1 mL至10 mL离心管；留0.1mL（样1）至1.5 mL离心管，用于测定蛋白质含量和电泳.
实验目的
1. 掌握血液样品的正确处理和制备方法 2. 掌握血清白蛋白粗分离的一般方法 3. 掌握离子交换法分离纯化蛋白质 4. 掌握蛋白质纯度检测的方法 5. 掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量
的原理和方法
6. 学会考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
原理与操作
血清的制备
留样：1
白蛋白的分离 白蛋白的纯化
• 在一定范围内，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈
线性关系，符合下式：logMW=K-Bx（MW为分子 量，X为迁移率，k、B均为常数）
• 若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对
数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同 条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准 曲线上求得分子量。
计算猪血白蛋白的分子量 ：logMW=K-Bx
• SDS的作用：1.能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋
白质的二级和三级结构，强还原剂（巯基乙醇）能 使二硫键断裂，使蛋白质完全变性；2.能与变性的 蛋白质按比例结合，形成SDS-蛋白质复合物。
• SDS-蛋白质复合物的特点：1. 由于结合大量的SDS，
使蛋白质丧失了原有的电荷状态；2.复合物都是椭 圆棒状。
120V。
• 电极缓冲液：pH 8.3 Tris –Gly • D 染色：脱色考马斯亮兰R-250，过夜。 • E 脱色：先用蒸馏水冲洗凝胶，再用脱色液（冰醋酸：蒸馏
血清白蛋白测定
天内：对低、中和高浓度，分别在上午、中 午、下午、晚上，进行m轮，每轮n次重复 测定，分别求取三种浓度的精密度数据
天间：对低、中和高浓度，每天测定1次，连 续监测20天以上，分别求取三种浓度的精 密度数据
3.实验材料
试剂：商品试剂盒 器材：试管、加样枪、722分光光度计
4.实验方法
5.实验结果
重复性能评价试验的意义重复性试验的目的是评估实验方法出现偶然误差的概率由于导致偶然误差的因素非常多包括仪器稳定性分析环境温度试剂质量标准品的稳定性吸量准确性混匀的充分性以及反应时间的把握度等因此做好重复性试验的前提是
血液清蛋白测定
与 重复性实验
血液清蛋白测定与重复性实验
一、BCG法测定血液清蛋白试验 二、商品BCG试剂重复性能评价试验
【计算】
1、检验20次测定数据的离群值；如存在异常值时 应剔除。对小样标本来讲，Grubbs检验方法概率意 义明确，能给出严格的结果，是最合理的检验方法。
用Grubbs检验准则，检验离群值的统计学工式是：
Xd X G
S
式中Xd为离群值；X 为包括离群值在内的测定值 的均数；S为包括离群值在内的测定值的标准差。
(2) 如果离群值是两个或两个以上都分布在同一侧，X1、 X2都是离群值，则首先检验最内侧的一个数据（X2），即 通过检验G2来决定X2是否应该舍弃。如果X2应该舍弃，X1 自然应该舍弃。如果X2不应舍弃，则再检验X1，但在检验 X1时，测定次数不应该做为少了一次。
(3) 如果离群值有两个或两个以上，而且又分布于均数两 侧，例如X1和Xn都同属于离群值，则分别检验X1和Xn，是 否应该舍弃。如果有一个数据决定舍去，那么在检验另一 个数据时，测定次数应该作为减少一次来处理，而且此时 应该选择的99%置信水平。
天间：对低、中和高浓度，每天测定1次，连 续监测20天以上，分别求取三种浓度的精 密度数据
3.实验材料
试剂：商品试剂盒 器材：试管、加样枪、722分光光度计
4.实验方法
5.实验结果
重复性能评价试验的意义重复性试验的目的是评估实验方法出现偶然误差的概率由于导致偶然误差的因素非常多包括仪器稳定性分析环境温度试剂质量标准品的稳定性吸量准确性混匀的充分性以及反应时间的把握度等因此做好重复性试验的前提是
血液清蛋白测定
与 重复性实验
血液清蛋白测定与重复性实验
一、BCG法测定血液清蛋白试验 二、商品BCG试剂重复性能评价试验
【计算】
1、检验20次测定数据的离群值；如存在异常值时 应剔除。对小样标本来讲，Grubbs检验方法概率意 义明确，能给出严格的结果，是最合理的检验方法。
用Grubbs检验准则，检验离群值的统计学工式是：
Xd X G
S
式中Xd为离群值；X 为包括离群值在内的测定值 的均数；S为包括离群值在内的测定值的标准差。
(2) 如果离群值是两个或两个以上都分布在同一侧，X1、 X2都是离群值，则首先检验最内侧的一个数据（X2），即 通过检验G2来决定X2是否应该舍弃。如果X2应该舍弃，X1 自然应该舍弃。如果X2不应舍弃，则再检验X1，但在检验 X1时，测定次数不应该做为少了一次。
(3) 如果离群值有两个或两个以上，而且又分布于均数两 侧，例如X1和Xn都同属于离群值，则分别检验X1和Xn，是 否应该舍弃。如果有一个数据决定舍去，那么在检验另一 个数据时，测定次数应该作为减少一次来处理，而且此时 应该选择的99%置信水平。
《血清蛋白质测定》课件
血清蛋白质按功能可分为载体蛋白、凝血蛋白、补体系 统成分、免疫球蛋白和酶等。
血清蛋白质的功能
维持血浆渗透压
血清蛋白质能够维持血浆 渗透压，保持血液的正常 循环。
参与物质运输
血清蛋白质能够结合并运 输脂类、离子、药物等物 质，维持体内代谢平衡。
参与免疫调节
血清蛋白质如免疫球蛋白 ，能够参与机体免疫应答 ，抵御病原体入侵。
发展前景广阔，血清蛋白质测定将在临床实践中发挥更加重要的作用，为患者带来更好的诊 疗体验和治疗效果。同时，随着生物技术的不断发展，血清蛋白质组学的研究也将得到更加 深入的开展，有望为疾病的诊断和治疗提供更多的线索和思路。
THANKS
感谢观看
通过金属表面增强效应，提高拉曼散 射信号，实现对蛋白质的快速、高灵 敏度检测。
质谱技术
利用质谱仪对蛋白质进行定性和定量 分析，具有高灵敏度、高特异性的优 点。
血清蛋白质组学的研究进展
血清蛋白质组学是研究血清中蛋白质组成、表达 01 和功能的一门科学，对于疾病诊断和治疗具有重
要意义。
血清蛋白质组学研究涉及蛋白质分离、鉴定、定 02 量和功能分析等多个方面，需要综合运用多种技
肝病患者由于肝功能受损，蛋白质合成能力下降，导致 血清蛋白质水平降低。通过测定血清蛋白质水平，可以 评估肝病患者的病情严重程度和预后。
慢性肝炎、肝硬化、肝癌等肝病患者常伴有血清白蛋白 、前白蛋白等指标的降低，这些指标的变化有助于指导 临床治疗和评估治疗效果。
肾病患者的血清蛋白质测定
肾病患者由于肾脏滤过功能受损，蛋白质从尿中 丢失，导致血清蛋白质水平降低。通过测定血清 蛋白质水平，可以评估肾病患者的病情严重程度 和预后。
02 血清蛋白质测定在临床实践中广泛应用于多种疾 病，如感染、肿瘤、心血管疾病等，为医生提供 重要的参考信息。
血清蛋白质的功能
维持血浆渗透压
血清蛋白质能够维持血浆 渗透压，保持血液的正常 循环。
参与物质运输
血清蛋白质能够结合并运 输脂类、离子、药物等物 质，维持体内代谢平衡。
参与免疫调节
血清蛋白质如免疫球蛋白 ，能够参与机体免疫应答 ，抵御病原体入侵。
发展前景广阔，血清蛋白质测定将在临床实践中发挥更加重要的作用，为患者带来更好的诊 疗体验和治疗效果。同时，随着生物技术的不断发展，血清蛋白质组学的研究也将得到更加 深入的开展，有望为疾病的诊断和治疗提供更多的线索和思路。
THANKS
感谢观看
通过金属表面增强效应，提高拉曼散 射信号，实现对蛋白质的快速、高灵 敏度检测。
质谱技术
利用质谱仪对蛋白质进行定性和定量 分析，具有高灵敏度、高特异性的优 点。
血清蛋白质组学的研究进展
血清蛋白质组学是研究血清中蛋白质组成、表达 01 和功能的一门科学，对于疾病诊断和治疗具有重
要意义。
血清蛋白质组学研究涉及蛋白质分离、鉴定、定 02 量和功能分析等多个方面，需要综合运用多种技
肝病患者由于肝功能受损，蛋白质合成能力下降，导致 血清蛋白质水平降低。通过测定血清蛋白质水平，可以 评估肝病患者的病情严重程度和预后。
慢性肝炎、肝硬化、肝癌等肝病患者常伴有血清白蛋白 、前白蛋白等指标的降低，这些指标的变化有助于指导 临床治疗和评估治疗效果。
肾病患者的血清蛋白质测定
肾病患者由于肾脏滤过功能受损，蛋白质从尿中 丢失，导致血清蛋白质水平降低。通过测定血清 蛋白质水平，可以评估肾病患者的病情严重程度 和预后。
02 血清蛋白质测定在临床实践中广泛应用于多种疾 病，如感染、肿瘤、心血管疾病等，为医生提供 重要的参考信息。
白蛋白测定与线性范围试验ppt课件
验〕。
6.总蛋白测定的临床意义：
〔1〕血清总蛋白浓度增高见于：
a.蛋白质合成添加〔如多发性骨髓 瘤〕；
b.血浆浓缩〔如呕吐、严重腹泻、高 烧〕。
〔2〕血清总蛋白浓度降低见于：
a.蛋白质合成妨碍〔如肝严重受损〕； b.蛋白质丧失添加〔如严重烧伤、肾病 综合征〕； c.营养不良或耗费添加〔如低蛋白饮食、 严重结核病、甲亢〕； d.血液稀释。
血清总蛋白〔TP〕测定 与线性范围实验
邹佳峻
一、双缩脲法测定血清总蛋白〔TP〕 二、线性范围实验
一、双缩脲法测定血清总蛋白 〔TP〕
1.实验目的：
掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理、 方法
熟习722分光光度计的运用
2.实验原理：CO(NH2) 2 + CO(NH2)
2 缩合
〔1〕双缩脲反响： H2N-OC-NH-CO-
• r=-1 为 完 全 负 相 关 。
• r=0为零相关， 表示无直线相关 关系 。
• 决议系数r²：反映了回归平方和占总平方和 的比例，其越接近于1，回归直线拟和的效 果越好。
• 拟合度越大，自变量X对因变量Y的解释程度 越高，自变量引起的变动占总变动的百分比 高，察看点在回归直线附近越密集。
6、输入数据，留意“自变量〞和“因变量 〞所对应的位置 ：
7、选择“分析〞→“回归分析〞 →“线 性〞 ：
Analyze >Regression >Linear
8、选择自变量〔X〕，因变量〔Y〕：
将“因变量〞选入“Dependent〞下框内，
“自变量〞选入“Independent〞下框，点 击“OK〞
3.实验资料：
• 试剂：〔1〕商品双缩脲试剂
•
〔2〕自配双缩脲试剂
6.总蛋白测定的临床意义：
〔1〕血清总蛋白浓度增高见于：
a.蛋白质合成添加〔如多发性骨髓 瘤〕；
b.血浆浓缩〔如呕吐、严重腹泻、高 烧〕。
〔2〕血清总蛋白浓度降低见于：
a.蛋白质合成妨碍〔如肝严重受损〕； b.蛋白质丧失添加〔如严重烧伤、肾病 综合征〕； c.营养不良或耗费添加〔如低蛋白饮食、 严重结核病、甲亢〕； d.血液稀释。
血清总蛋白〔TP〕测定 与线性范围实验
邹佳峻
一、双缩脲法测定血清总蛋白〔TP〕 二、线性范围实验
一、双缩脲法测定血清总蛋白 〔TP〕
1.实验目的：
掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理、 方法
熟习722分光光度计的运用
2.实验原理：CO(NH2) 2 + CO(NH2)
2 缩合
〔1〕双缩脲反响： H2N-OC-NH-CO-
• r=-1 为 完 全 负 相 关 。
• r=0为零相关， 表示无直线相关 关系 。
• 决议系数r²：反映了回归平方和占总平方和 的比例，其越接近于1，回归直线拟和的效 果越好。
• 拟合度越大，自变量X对因变量Y的解释程度 越高，自变量引起的变动占总变动的百分比 高，察看点在回归直线附近越密集。
6、输入数据，留意“自变量〞和“因变量 〞所对应的位置 ：
7、选择“分析〞→“回归分析〞 →“线 性〞 ：
Analyze >Regression >Linear
8、选择自变量〔X〕，因变量〔Y〕：
将“因变量〞选入“Dependent〞下框内，
“自变量〞选入“Independent〞下框，点 击“OK〞
3.实验资料：
• 试剂：〔1〕商品双缩脲试剂
•
〔2〕自配双缩脲试剂
血清白蛋白测定(精)
【操作】
取试管三支，标明测定、标准和空白管，按表 操作。
加入物 / ml 工作试剂 标准液 样品 生理盐水
测定管 4.0
0.02
标准管 4.0 0.02
空白管 4.0
0.02
充分混匀，置室温10min，用630nm波长比色，以空白管调零， 读取各管吸光度。
【计算】
血清清蛋白（g/L）＝ A测/A标×清蛋白标准 液浓度g/L
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜离子作 用生成紫红色的络合物与两分子尿素缩合后生成 的双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用形成的紫色 物质的反应相似，故称之为双缩脲反应。
双缩脲结构: H2N—OC—NH—CO—NH2试剂:
试剂
双缩脲试剂：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O)3.0g, 溶于500mL新鲜制备的蒸馏水或刚煮沸冷却 的去离子水中，加酒石酸钾纳 (NaKC4H4O6·4H2O)9.0g，碘化钾5.0g，待完 全溶解后，加入6mol/L Na2OH 100ml,最后 加蒸馏水至1000mL。
血清总蛋白测定(双缩脲法) 血清白蛋白测定（溴甲酚绿法）
实验一、血清总蛋白测定
实验目的 ⒈掌握双缩脲法测定总蛋白的原理及注意事项。 ⒉熟练测定操作步骤。 ⒊了解TP测定的主要临床意义。
实验原理
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜离子作 用生成紫红色的络合物，产生的颜色强度在一定 范围内与蛋白质的含量成正比，与同样处理的蛋 白标准液比较，经计算或查标准曲线即可求出血 清蛋白质含量。
【方法评价】 1.高胆红素血症和溶血标本对本法不产生干扰。严重高脂血症可使结
果偏高，应采用标本空白校正。若标本混浊，可做标本空白（血清 0.02ml，加琥珀酸缓冲液4ml），用测定管吸光度减去标本空白管吸 光度后再计算结果。 2. BCG系一种pH指示剂，它受酸、碱影响较大，所用器材必须清洁， 无酸、碱污染。 3.BCG试剂的pH必须严格控制在pH4.15±0.05，pH升高可使染料 空白增高，与清蛋白结合率下降。所以，控制反应液的pH是本法测 定的关键。 4.BCG与蛋白质结合的特异性较低。它不仅与清蛋白结合呈色，还与 血 触 不清珠同中蛋，其白与它（清蛋属蛋白白α2质可球呈立蛋色即白，发）其生最中反为以应明α（显1快球，反蛋B应C白G）、与，运不与铁同其蛋蛋它白白蛋（质白属的质β反球反应蛋应速白较率）慢、 （慢反应）。实验证明，血清与BCG试剂一经混合，“慢反应”即可 发生，约持续1h才完成。 5. Brij-35是一种非离子去垢剂，它可增强BCG-清蛋白复合物的溶解 度，消除BCG同清蛋白反应时可能产生的沉淀，它的浓度高于或低于 所指定的浓度时，均导致敏感度降低和直线性丧失，对测定结果有较 大影响。故其配制浓度和所加试剂量一定要准确。
实验 血清蛋白测定
实验血清蛋白测定
实验：血清蛋白测定
实验介绍
本次实验旨在通过测定血清中的总蛋白和白蛋白浓度，计算出
非白蛋白的含量，并探究人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系。
实验步骤
1. 取得样本血液，并离心分离得到血清
2. 使用比色法测定血清总蛋白浓度，并记录结果
3. 使用免疫层析法测定血清白蛋白浓度，并记录结果
4. 计算非白蛋白含量，并记录结果
实验原理
- 比色法：利用生化试剂和光度计对血清中的蛋白质进行量化
测定。
- 免疫层析法：利用免疫学原理选择性地分离出目标蛋白质，
通过测量蛋白与抗体复合物的浓度来计算目标蛋白质浓度。
- 计算公式：非白蛋白含量＝总蛋白浓度−白蛋白浓度。
实验结果分析
通过实验，我们可以得到每个样本的总蛋白质含量、白蛋白含量和非白蛋白含量。
根据实验结果，我们可以探讨人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系，并且该方法可以用于临床诊断中，如肝功能不全、肾病综合征等。
结论
本次实验成功地测定了血清蛋白质浓度，并计算出非白蛋白的含量，同时探究了人体健康状况与血清蛋白含量之间的关系。
该方法可以用于临床诊断中，具有重要的临床应用价值。
《血清总蛋白测定》课件
异常值的原因及处理
原因
肝脏疾病、营养不良、慢性感染等。
处理
针对病因进行治疗，如补充营养、抗感染等，同时定期监测血清总蛋白水平。
结果解读的案例分析
案例1
患者男，55岁，血清总蛋白62g/L，处于正常范围，提示肝 脏合成功能和营养状况良好。
案例2
患者女，42岁，血清总蛋白48g/L，低于正常值下限，提示 肝脏合成功能受损或营养不良，需进一步检查和治疗。
运输功能
总蛋白作为载体，可以运 输多种物质，如维生素、 激素、离子等。
免疫功能
球蛋白参与免疫反应，具 有抗菌、抗病毒等作用。
血清总蛋白与健康的关系
营养不良
长期营养不良可能导致血 清总蛋白降低，影响身体 健康。
肝病
肝脏是合成蛋白质的重要 器官，肝病可能导致血清 总蛋白合成减少。
感染和炎症
感染和炎症可能导致血清 总蛋白升高，特别是球蛋 白升高。
重要性
血清总蛋白测定是评估肝脏功能 、营养状况和诊断某些疾病的重 要指标。
测定方法概览
实验室检测
通过抽取静脉血液，离心分离血清， 使用分光光度计或比浊法测定血清总 蛋白含量。
自动化检测
现代实验室多采用全自动生化分析仪 进行血清总蛋白测定，具有快速、准 确和高效的特点。
临床意义和应用
A
肝脏疾病
血清总蛋白测定可用于诊断肝脏疾病，如肝硬 化、肝炎等。总蛋白水平降低通常提示肝功能 受损。
操作规范
严格遵守实验操作规程，避免因操作不当导 致的误差。
定期对实验仪器进行校准和维护，确保其准 确性和可靠性。
02
01Βιβλιοθήκη 结果解读与报告正确解读实验结果，按照标准格式撰写实验 报告，确保报告的准确性和完整性。
溴甲酚绿法测定血清白蛋白课件
溴甲酚绿法测定血清白蛋白
5
五、计算
血清清蛋白(g/L)＝Āu/Ās×蛋白标准液浓度(g/L)
= Āu/Ās×40 (g/L)
参考范围：正常人:35－55g/L
溴甲酚绿法测定血清白蛋白
6
六、注意事项
1. BCG是一种pH指示剂，变色域为pH3.8（黄色） ~5.4（蓝绿色），因此控制反应液的pH是本法测 定的关键。
2. 血清清蛋白 :临床比较重要和常见，常与总蛋白降低的 原因大致相同。
急性 ：多见于大出血和严重烧伤。
慢性 ：肾病蛋白尿、肝功能受损，肠道肿瘤及结核伴 慢性出血、营养不良和恶性肿瘤。
若低于20g/L，临床上出现水肿。
3. A/G比值：正常人A/G>1.0
某些病人可同时出现清蛋白减少和球蛋白升高的现象， 若A/G<1.0，称为A/G比值倒置，常见于多发性骨髓瘤和 聚球蛋白升高。
4.溴甲酚紫法：特异性较好，但不能与动物血清反 应，而目前的质控血清多为动物血清，因此临床应 用少。
4. 电泳法：可以将白蛋白、球蛋白等分开，并分别 测定其含量，是种较好的方法，但过程相对复杂。
溴甲酚绿法测定血清白蛋白
8
八、临床意义
1. 血清清蛋白 ：常见于严重脱水所致的血浆浓缩。（比 较少见）
4.先天性清蛋白缺乏症：有文献报道，因清蛋白合成障碍， 血清中几乎没有清蛋白而导致清蛋白缺乏。
溴甲酚绿法测定血清白蛋白
9
实验五 溴甲酚绿法测定血清清蛋白
一、实验目的
掌握：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的基本原理和操作。 熟悉：血清清蛋白测定的临床意义。 了解：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的特点和注意事项。
溴甲酚绿法测定血清白蛋白
1
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甲胎蛋白
血浆蛋白质概述
血浆蛋白质的分类：
按分离方法分类 盐析法 ：可将血浆蛋白质分为清蛋白和球蛋白两大类。
清蛋白
血浆蛋白质概述
清蛋白(Alb)是血浆中含量最多的蛋白质，约占血
浆蛋白总量的57％～68％。在pH7.4的环境中，每分子
可带200个以上的负电荷，可作为许多物质的运输载体。
Alb由肝细胞合成，合成速度受蛋白质摄入量及血
实验六 血清白蛋白测定
学习要求
1 掌握溴甲酚绿法测定血清白蛋白的基 本原理和方法
2 了解血清白蛋白的测定方法
3 掌握血清白蛋白的参考区间和临床意义
血浆蛋白质概述
血浆中几种主要的蛋白质：
前清蛋白
清蛋白
铜蓝蛋白
转铁蛋白
结合珠蛋白
α1-酸性糖蛋白 C-反应蛋白 癌胚抗原
蛋白质
α1-抗胰蛋白酶
α2 -巨球蛋白 纤维蛋白原
BCP结合法
优点 灵敏度高，与人及动物 与Alb以外的血浆蛋白质结合少， 标本中的Alb结合力差异 干扰小 不大
缺点
除了与Alb结合外，还可 灵敏度较低，与动物标本中的
与血清中其他多种蛋白 Alb结合力相当弱，质控血清多
质也可结合
采用动物血清制备，因此应用
ห้องสมุดไป่ตู้
受限
试剂与器材
试剂与标本 1、0.5 mol/L 琥铂酸缓冲贮存液（PH4.1） 2、BCG贮存液（10mmol/L）（溴甲酚绿、NaOH 溶液） 3、叠氮钠贮存液 4、BCG试剂 5、白蛋白标准液（40g/L） 主要器材 分光光度计
第二节 体液蛋白质检验
血清清蛋白测定：
测定Alb的方法中，目前实验室应用最广的是染料结合法 与Alb结合的染料有多种，其中溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚
紫(BCP)是最常用的两种，其中溴甲酚绿(BCG)法是测定血清 Alb的推荐方法。
体液蛋白质检验
两种染料结合法测定血清Alb含量的优缺点比较
BCG结合法
第二节 体液蛋白质检验
血清清蛋白测定原理：
测定Alb的方法中，目前实验室应用最广的是染料结合法 【原理】在PH4.2的环境下，清蛋白解离带有正电荷，能与带 有负电荷的溴甲酚氯染料结合形成蓝绿色复合物，在波长 630nm处有吸收峰，其吸光度与白蛋白含量成正比，与同样处 理的白蛋白标准液比较，可求得血清白蛋白含量。而球蛋白则 结合外源性染料很少，因此可以在不分离清蛋白、球蛋白的情 况下直接测定血清Alb的含量。
试剂与器材
试剂与标本 一次性塑料试管4支（备用1支，不再另外提供），试
管架1个，枪架、手动可调式移液器1支（规格10～ 100μl）及配套枪头、枪头盒，10ml刻度吸管2支，洗耳 球、签字笔、记号笔、托盘各1个，计时器2个。分光光 度计1台及配套比色杯2套（每套3个，已配对）、滤纸、 擦镜纸若干。恒温水浴箱、废液缸、锐器盒、垃圾回收 桶、胶水、计算器，水性笔等。
操作步骤
加入物
待测血清（μl） 白蛋白标准液（μl
） 生理盐水（μl） BCG试剂（ml）
空白管（B） 20 0 0 4.0
标准管（S） 0 20 0 4.0
测定管（U） 0 0 20 4.0
混匀后于37℃水浴10 min，以空白管调零， 630 nm处测定各管吸光度。
标准液浓度：40g/L。
结果计算
浆胶体渗透压的共同调节。正常情况下每天约有360mg
的Alb通过肾小球滤过，但大部分（约95%）被肾小管
重吸收，在小管细胞中被降解。
血浆蛋白质概述
清蛋白
【生理功能】 1.维持血浆胶体渗透压； 2.营养作用； 3.维持血液酸碱平衡； 4.运输和解毒作用；
Alb生理功能很广泛，因此肝脏对Alb合成有 很强的代偿能力，如肾病综合症时合成量可以 增加到正常时的3倍以上。
血清球蛋白测定
目前临床实验室血清球蛋白(G)的结果多采用计算法，即血清 总蛋白与血清清蛋白的差值即为血清球蛋白的含量，并可同时计 算出清蛋白与球蛋白的比值，即A/G值，公式如下： 球蛋白(g/L)=总蛋白(g/L)－清蛋白(g/L) A/G = 清蛋白(g/L)/球蛋白(g/L) 【参考区间】 20～30g/L；A/G = 1.5～2.5/1 【临床意义】 血清球蛋白浓度升高可见于： 1.自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、风湿 热等。 2.炎症或急慢性感染，如病毒性肝炎、结核病、疟疾、麻风病、 黑热病、血吸虫病等。 3.恶性M蛋白血症，如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴瘤等
血清白蛋 白浓度（g/L） =
参考区间
测定管 吸光度
标准管 吸光度
× 标准液浓度
成人：35～50g/L；4～14岁儿童：38～54g/L
临床意义
血清Alb升高 主要见于严重腹泻、呕吐、 出汗造成的脱水及休克等 原因引起血浆浓缩而导致 的假性Alb增高（Alb的绝 对值并没有升高）；或者 一次性静脉输入过量清蛋 白，迄今为止尚未见到真 性单纯Alb升高的疾病。
血清Alb降低 临床意义同TP，但许
多时候血清Alb与TP降低 的程度不一致。
体液蛋白质检验
清蛋白与球蛋白比值倒置（A/G），倒置的现 象主要发生于慢性肝炎或肝硬化病人身上，说明 肝脏受到一定程度的损害。但是不同的倒置，其 发展结果却不完全一样。如果清蛋白高于3g，球 蛋白明显增加，往往后果亦不十分严重。但是如 果清蛋白持续地低于3g，就要警惕病情有可能恶 化，可能出现腹水、水肿等，切不可单靠A/G值来 判断病情。