霉菌和放线菌的接种、培养及形态观察
实验五放线菌、霉菌的形态观察
放线菌
放线菌的观察
霉菌可产生复杂分枝的菌丝体，分为营养菌丝体和气生菌丝体， 气生菌丝生长到一定阶段后分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生 孢子。
特化的营养菌丝：吸取养料： 假根、吸器
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）其孢子的形态特征是分类的
重要依据。例如：青霉的繁殖菌丝无顶囊，经多次分枝，产生几
轮对称或不对称的小梗，小梗上着生成串的青色分生孢子，孢子
四、实验报告
1、绘图并说明放线菌基内菌丝、气生菌丝和孢子丝 的形态和结构特征。 2、绘图并说明你所观察到的霉菌的形态特征。 (1) 曲霉、青霉、根霉和毛霉的菌落颜色及特征。
(2) 绘制曲霉、青霉、根霉和毛霉的个体形态图，并 注明各部位名称。
五、思考题
1、你主要根据哪些形态特征来区分所观察的几 种霉菌？ 2、在平皿培养微生物时，为何要将平板倒置？ 3、 镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气 生菌丝？
实验五 放线菌、霉菌的形态观察
一、目的要求
1、观察和掌握放线菌、霉菌的形态结构 及其特征。
2．了解几类常见霉菌的基本形态特征。
二、基本原理
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌.以链霉 属为例：细胞呈丝状分枝，菌丝直径很细（＜1μm，与细菌相似）。 在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的单细胞状态。当其 孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分枝并以放射状向 基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄 代谢废物功能的基内菌丝（substrate mycelium，又称基质菌丝、 营养菌丝或一级菌丝），同时在其上又不断向空间方向分化出颜色 较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝（aerial mycelium， 或称二级菌丝）。不久，大部分气生菌丝成熟，分化成孢子丝 （spore-bearing mycelium）,并通过横割分裂方式，产生成串的 分生孢子（conidia，spore）。在显微镜下直接观察时，孢子丝依 种类的不同，有直、波曲、钩状、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察， 放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状．能否产生菌丝体及由菌丝 体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
实验四放线菌、霉菌、酵母菌形态及大小观察
气生菌丝发育到一定阶段，其上可 气生菌丝发育到一定阶段， 分化出形成孢子的菌丝，即孢子丝， 分化出形成孢子的菌丝，即孢子丝， 又称产孢丝或繁殖菌丝。 又称产孢丝或繁殖菌丝。其形状和 排列方式因种而异， 排列方式因种而异，常被作为对放 线菌进行分类的依据。 线菌进行分类的依据。 营养菌丝发育到一定阶段， 营养菌丝发育到一定阶段，伸向空 间形成气生菌丝， 间形成气生菌丝，叠生于营养菌丝 可覆盖整个菌落表面。 上，可覆盖整个菌落表面。在光学 显微镜下观察，颜色较深， 显微镜下观察，颜色较深，直径较 ），有的产色素 粗（1-1.4 µm），有的产色素。 ），有的产色素。 营养菌丝生长于培养基内或紧贴表 吸收营养，也称基内菌丝。 面，吸收营养，也称基内菌丝。一 般无隔膜，直径0.2-0.8 µm，长度差 般无隔膜，直径 ， 别很大，有的可产生色素。 别很大，有的可产生色素。
实验四 放线菌、霉菌、酵母菌 放线菌、霉菌、 形态（及大小） 形态（及大小）观察
一、实验目的
• • 观察了解放线菌、 观察了解放线菌、霉菌及酵母菌的形态 特征 掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方 法
二、实验原理
• （一）放线菌 • 单细胞、多核区、丝状的革兰氏阳性细菌。 单细胞、多核区、丝状的革兰氏阳性细菌。 在形态上具有分枝状菌丝， 在形态上具有分枝状菌丝，以孢子进行繁 殖。放线菌实际上是属于细菌范畴内的原 核微生物
四、实验内容及操作
• • • • （一）放线菌形态观察（插片法） 放线菌形态观察（插片法） （二）霉菌形态观察 （三）酵母菌形态观察 （四）微生物大小测定
--
融合
子囊孢子
酵母菌菌落特征
与细菌菌落类似，但一般较细菌菌落大且厚， 与细菌菌落类似，但一般较细菌菌落大且厚，表面 湿润，粘稠，易被挑起，多为乳白色，少数呈红色。 湿润，粘稠，易被挑起，多为乳白色，少数呈红色。
实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.
实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察（一）放线菌的形态观察1 目的观察放线菌的基本形态特征掌握培养放线菌的几种方法2 原理放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
3 材料3.1 菌种灰色链霉菌(Str. griseus),天蓝色链霉菌(Str. coelicolor),细黄链霉菌（Str.microflavus）。
3.2 培养基高氏1号培养基。
3.3 器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。
4 流程4.1插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检→记录绘图4.2压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加盖玻片→镜检→记录绘图4.3埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜检→记录绘图5 步骤5.1插片法5.1.1倒平板将高氏1号培养基熔化后，倒10~12毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用.5.1.2插片将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或1/3(图5-1)。
5.1.3接种与培养用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养3～7天。
5.1.4观察培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。
直接在显微镜下观察。
5.2压印法5.2.1制备放线菌平板同5.1.1。
在凝固的高氏1号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。
实验三霉菌放线菌形态观察及微生物菌落观察
观察青霉菌 丝和分生孢 子着生情况：
1.单轮生青霉群；2.对称二轮 生青霉群；3.多轮生青霉群；4. 不对称生青霉群
担子菌担孢子的观察
切片标本的制作：现场演示
下次实验准备
每组两个平板，分别是马铃薯培养基（培养 真菌），另一个高氏培养基（培养放线菌）
实验室环境中微生物的检查 用棉签取实验室环境条件下的微生物进 行涂板。
一、实验目的
了解放线菌、霉菌、酵母菌和大型真菌的特点 并观察其形态特征
学习掌握霉菌染色的基本方法
二、实验原理
原核微生物
放线菌：
由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细 胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入 培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝） 和生长在培养基表面的气生菌丝。有些 气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波 浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆 形或杆状。气生菌丝及孢子的形状和颜 色常作为分类的重要依据。
真核微生物
酵母菌：酵母菌细胞一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或
柠檬形。酵母细胞核与细胞质有明显的分化，个体直 径比细菌大几倍到十几倍。繁殖方式也较复杂，无性 繁殖主要是出芽生殖，有些酵母能形成假菌丝。有性 繁殖是通过接合形成子囊及子囊孢子。
霉菌：凡在营养基质上形成绒毛状、棉絮状或蜘蛛网
形丝状菌体的真菌，统称为霉菌。霉菌包括分类学上 许多不同纲或类的真菌，它们分别属于藻状菌纲、子 囊菌纲、担子菌纲和半知菌类。
常见大型真菌：在分类上属于子囊菌纲和担子菌纲，
均为丝状真菌。
三、实验材料
放线菌和真菌培养物
1. 放线菌培养物：青色链霉菌四天插片培养物。 2. 啤酒酵母24至28h液体培养物。 3. 黑曲霉和根霉4d搭片培养物。 4. 各种真菌示范片。 5. 市售平菇
实验三 酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察
实验三酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察一目的要求1.观察酵母菌的个体形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
2.掌握酵母菌的菌落特征及其与细菌菌落的区别。
3．学会识别霉菌的菌落特征，掌握霉菌的乳酸石炭酸制片法。
4．学习观察霉菌个体形态及各种无性孢子的方法。
5．学会观察放线菌的菌落特征，个体形态及其繁殖方式。
二实验原理1．酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，多数是圆形或椭圆形，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。
用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
2.霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有分支的菌丝体和分化的繁殖器官。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
因此，在观察时要注意菌丝直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖形成的孢子是那一种？孢子是怎样着生的？3.放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。
常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。
孢子的表面光滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形态特点都是鉴定放线菌的重要依据。
三实验材料1．菌种（1）啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、热带假丝酵母;（2）毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉;（3）白色链霉菌、红色链霉菌2. 0.1%的美蓝染色液，乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉蓝溶液, 芽孢染色液、无菌水、盖玻片、载玻片，接种钩，接种铲。
四内容与步骤1．酵母菌(1)菌落特征和菌苔特征的观察。
观察菌落表面干燥或湿润、隆起形状、边缘整齐度、大小、颜色等，并用接种环挑菌，注意与培养基结合是否紧密。
霉菌和放线菌的接种、培养及形态观察
一、实验目的：
1、了解霉菌，放线菌形态观察的基本方法并了 解其基本形态特征.
2、掌握培养基配置，无菌操作，接种与培养，
显微镜观察等各种综合微生物技能的运用。
二、实验原理
1、微生物接种方法：接斜面、接平皿、接三 角瓶。
2、微生物的培养方法：静止培养、振荡培养。
二、实验原理
1、放线菌（玻璃纸法）：
制备培养基 倒平板 放玻璃纸，铺平
制菌悬液
培养7d
涂布菌液
28℃倒置
制片观察。
2、真菌（载片法）： 准备湿室 融化培养基 整理湿室
点接孢子ห้องสมุดไป่ตู้
加水棉球
覆培养基
28℃保湿培养7d
加盖玻片
镜检。
3、形态观察
• 观察内容：
霉菌、放线菌的营养菌丝体、
气生菌丝体、孢子丝、分生孢子 头、分生孢子、孢子梗、足细胞 等的形态和结构。注意不同微生
物典型结构形态的区别。
五、注意事项
1、本实验步骤均应无菌操作； 2、倒平板时，摇动培养皿要轻，以免溅出；
3、铺玻璃纸时，涂布棒冷却后，才可与玻璃 纸接触；
4、加盖玻片时要轻压，使培养物均匀的分布 在盖玻片下； 5、取玻璃膜观察时，取放线菌最薄的地方； 6、培养时，培养基滴半滴，以保证一周后结 果理想。
3、放线菌的培养观察方法： 插片法、搭片法、玻璃纸法。 4、霉菌的培养观察方法：载片培养法。
三、实验器材
1、器皿：湿室、镊子、平板、无菌滴管、
显微镜、涂布棒、移液器、滤纸、水棉球载 玻片等。 2、培养基：高氏一号培养基、半固体PDA 培养基。 3、菌种：5406链霉菌、黑曲霉、青霉。
四、实验步骤
实验3 霉菌与放线菌形态观察
实验三霉菌与放线菌形态观察姓名：李昳昕年级专业：08药学节次：周一90节组数：第五组一、实验目的1、掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征2、掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征二、实验原理1、霉菌的原理:霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。
此染色液制成的霉菌标本片其特点是（a）细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；（c）溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。
霉菌的菌丝、分生孢子梗和分生孢子的形态常作为分类的重要依据。
2、放线菌的原理:放线菌在固体培养基上呈辐射状生长而得名。
放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。
菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。
有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。
孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。
气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。
三、实验器材1、菌种：培养48-72h的曲霉（Aspergillus sp.），青霉 (Penicillium sp.)，根霉(Rhizopus sp.), 培养72-120h的5406放线菌(细黄链霉菌).2、染色液和试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液,生理盐水,石炭酸复红染液，吕氏碱性美蓝染液.3、器材：土豆培养基平板或查氏培养基平板，高氏1号培养基平板, 接种环，载玻片，盖玻片，镊子，酒精灯等。
四、实验方法(一) 霉菌观察:1、直接观察: 将培养3—4天的霉菌培养皿打开，放在显微镜低倍镜下寻找菌落的边缘，直接观察菌丝，分生孢子梗和分生孢子。
2、染色观察: 于洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用镊子从霉菌菌落的边缘外取少量带有孢子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。
置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。
(二) 放线菌观察:1、放线菌自然生长状态的观察将培养3—4天的放线菌培养皿打开，放在显微镜低倍镜下寻找菌落的边缘，直接观察菌丝，孢子丝和孢子。
课件：放线菌、霉菌形态的观察
扦片法
将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖 玻片后培养，使放线菌丝沿着培养基表面与盖 玻片的交接处生长而附着在盖玻片上，观察时， 轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这 种方法可以观察到放线菌自然生长状态下的特 征，而且便于不同生长期的形态。
玻璃纸法
玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻 璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种 于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长 形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻 片上直接镜检，这种方法既能保持放线菌的自 然生长，也便于观察不同生长期的形态特征。
印片法
将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先 印在载玻片上，经染色后观察，这种方 法主要用于观察孢子丝的形态，孢子的 排列及其形状等。方法简便，但形态特 征可能有所改变。
三、材料与器材
• 菌种：自行分离到的土壤放线菌 • 培养基：高氏1号琼脂培养基. • 载玻片，接种铲，番红染液，显微镜
等。
四、实验作
单轮青霉群 帚状枝由单轮小梗构成。 对称二轮青霉群 帚状枝两次分枝，对主梗呈对称着生。 多轮青霉群 帚状枝多次分枝，并对称。 不对称青霉群 帚状枝两次或两次以上分枝，不对称。
• Observe the prepared slides of Aspergillus sp.
Black Mold, Aspergillus variecolor. (SEM
实验四、放线菌、霉菌形态的观察
（一）放线菌形态的观察
一、目的要求
• 学习掌握观察放线菌形态的基本方法 • 初步了解放线菌的形态特征
二、基本原理
放线菌是指能形成分枝丝状或菌丝的一类革兰氏 阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，为了观 察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察 方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线 菌自然生长条件下的形态特征，本实验介绍其中几 种常用的方法
放线菌和霉菌的形态结构观察(共26张PPT)
、乳酸石
炭酸溶液
、载片及盖
片、显
微
示(一无)霉隔菌菌菌丝落、特假征根的、观匍察匐枝镜、孢、子囊接梗、种孢子环囊 、接种针、酒精灯、蒸馏水等。
实验内容（放线菌）
(一)菌落形态的观察
观察放线菌菌落表面形状、大小、颜色、边缘，以及 有无色素分泌到培养基内等；
并用接种环挑取菌落，注意菌丝在培养基上着生的紧密情 况。
并用接种环挑取菌落，注意菌丝在培养基上着生的紧密情况。
(二)其他物品 (三)孢子形状的观察（印片染色法）
并用接种环挑取菌落，注意菌丝在培养基上着生的紧密情况。 高倍镜(400×)下观察灰色链霉菌和淡紫灰链霉菌的孢子及孢子丝。
图2-100为根霉属的接合孢子
％美蓝染液 实 验 二
孢子囊破裂后能观察到囊托及囊轴。
灰色 链霉菌
印片法或 直接观察法
个体形态及生殖方式图
(三)描述产黄青霉、黄曲霉、黑根霉的菌落 的颜色及特征
与培养
微生物 名称
大小
表面 形状
菌丝 颜色
孢子 颜色
菌丝 高矮
生长 密度
基 结合程
嗅 味
度
黑根霉
产黄青霉
黄曲霉
(四) 绘制产黄青霉、黄曲霉、黑根霉的个体 形态及生殖方式图
微生物名称
菌丝结构（及分化结构）
无性孢子
黑根霉(糖化酶、 示无隔菌丝、假根、匍匐枝、
酿酒)
孢子囊梗、孢子囊
产黄青霉(青霉素 示有隔菌丝、分生孢子梗及其
)
分枝方式、小梗
黄曲霉(蛋白酶、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ示有隔菌丝、足细胞、顶囊、
制酱油)
分生孢子梗及小梗
孢囊孢子 分生孢子 分生孢子
实验五放线菌、霉菌及真菌的形态观察
对实验结果的理解与思考
• 通过本次实验，我们观察到了放线菌、霉菌及真菌的形态特征， 了解了它们在形态学上的差异。这些微生物在自然界中广泛分 布，对环境和生物体产生重要影响。例如，某些放线菌可以产 生抗生素，对人类医疗和农业具有重要意义；而某些霉菌可以 引起食品和物品的霉变，对人类生活造成困扰。因此，对微生 物形态学的深入了解有助于我们更好地认识和利用这些微生物 资源。
放线菌
放线菌是一种呈辐射状排列的细菌，其菌落形态通常为圆形或不规则形，表面粗糙、干燥 ，颜色多样。放线菌的细胞壁厚，呈革兰氏阳性。
霉菌
霉菌的菌落形态通常为绒毛状、絮状或蜘蛛网状，颜色多样，包括白色、灰色、褐色等。 霉菌的菌丝体非常发达，且具有分支。
真菌
真菌的形态多种多样，包括酵母、霉菌和大型真菌。真菌的菌落形态通常为圆形或椭圆形 ，表面光滑、湿润，颜色多样。真菌细胞壁薄，呈革兰氏阳性或阴性。
04 结果分析
放线菌形态分析
01
02
放线菌的形态多样，包 括链状、球状和杆状等。
放线菌的菌落形态也较 为多样，有的呈圆形， 有的呈不规则形状。
03
放线菌的菌落表面粗糙 或光滑，颜色各异，有 的呈白色，有的呈黄色 或橙色。
04
放线菌的细胞壁通常较 厚，具有分枝的菌丝， 有利于在各种环境中的 生存和繁殖。
03 实验步骤
样品采集与制备
样品采集
从不同环境（土壤、水体、空气 等）中采集放线菌、霉菌及真菌 的样本。
样品制备
将采集的样本进行分离、纯化， 制备成适合显微镜观察的样品。
显微镜观察
显微镜选择
选择适合观察放线菌、霉菌及真菌的 显微镜，如光学显微镜或电子显微镜 。
观察方法
将制备好的样品放置在显微镜下，观 察放线菌、霉菌及真菌的形态特征， 如菌丝、孢子等。
放线菌的培养与观察 实验报告
放线菌的培养和形态观察摘要本实验目的是学习并掌握放线菌的培养方法，初步了解放线菌的形态特征。
以青色链霉菌（Streptomyces glaucus）和弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)为实验材料，利用高氏I号培养基进行培养，采用插片法制片，用高倍镜观察其菌丝及孢子丝形态。
【1】青色链霉菌（S.glaucus）的菌落呈青灰色，菌丝颜色较浅，孢子丝螺旋形；弗氏链霉菌(S.fradiae)菌落呈暗黄色，菌丝颜色较浅，孢子丝较菌丝粗且直。
关键词放线菌观察插片法菌丝孢子丝引言放线菌是能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌，其菌丝（包括基内菌丝和气生菌丝）及孢子丝有着各种不同的形态，以孢子进行繁殖。
实验主要是观察其菌丝与孢子丝，为了保证菌丝与孢子丝的完整，实验采用插片法培养放线菌。
菌丝与孢子丝之间的区别比较明显，很容易区分，观察时需要注意的是它们的形态与位置关系。
1 材料和方法1.1材料1.1.1菌种青色链霉菌（S. glaucus），弗氏链霉菌（S. fradiae）。
1.1.2培养基髙氏I号培养基:可溶性淀粉2g KNO3 0.1g K2HPO4 0.05g MgSO4• 7H2O0.05g NaCl 0.05g FeSO4• 7H2O0.001g（母液）琼脂 2g 蒸馏水 100mL pH 7.2～7.41.1.3仪器和其他用品平板培养皿，盖玻片，镊子，酒精灯，显微镜，擦镜纸，接种环等。
1.2方法【1】1.2.1 配制培养基按配方配制100ml高氏I号培养基，并与培养皿一起高温灭菌30min。
1.2.2制作培养基平板1.2.3接种无菌操作分别在青色链霉菌和弗氏链霉菌高氏Ⅰ号培养基上挑取菌种在制备的高氏Ⅰ号培养基平板上密集划线接种。
1.2.4插片无菌操作用镊子取灭菌盖玻片以约45°角插入平板琼脂接种线上。
1.2.5 培养将平板倒置，于28℃培养7d。
1.2.6 菌落形态观察。
细菌、酵母菌、霉菌和放线菌接种方法和形态观察
注意：由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，黑体字部分自己看一下。
由于11-13周为教学质量检查周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。
细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察一、微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 基本原理将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技术称为接种。
接种的关键是严格进行无菌操作。
常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。
3 实验材料3.1 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的斜面培养物3.2 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基的斜面和平板3.3 试剂：5ml无菌生理盐水试管3.4 仪器与其他用品酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。
4 操作步骤4.1 斜面接种法斜面接种法主要用于传代活化、纯化培养、鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行。
4.1.1准备工作将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
4.1.2接种环灭菌右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。
4.1.3拔管塞和烧烤试管口用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
4.1.4接种环冷却和取菌将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出。
实验三 微生物菌落,放线菌、酵母菌、霉菌形态观察
它们是怎样形成的？ 7．细菌、放线菌、酵母菌、霉菌在制片方法上有何特点？ 8．总结在显微镜下看到青霉、黄曲霉和黑根霉在以下各方 面的异同： (1) 菌丝有隔或无隔 (2) 无性繁殖的方式 (3) 有性繁殖的方式
内容： 1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落
形态。 2．观察放线菌的形态结构特征 3．观察酵母菌个体形态。 4．曲霉、青霉、根霉形态观察。
二、材料和用具
1．菌种：金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、 酿酒酵母、灰色链霉菌、黑曲霉、 产黄青霉、根霉。
2．染液：乳酸石炭酸棉兰，吕氏美兰染液， 碘液，0.04%的中性红染色液，0.1%美蓝 染色液，石炭酸复红染色液。
3．其他：显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、 镊子、接种环。
三、操作步骤及注意事项
(一) 观察菌落 1．注意细菌菌落的形状、高度、大小、颜色、
是否湿润、光泽、透明度、边缘状况。
2．观察酵母菌菌落表面湿润或干燥，有无光 泽、隆起形状、边缘的整齐度、大小、颜 色等。
3．观察放线菌菌落表面形状、大小、颜色、 边缘，以及有无色素分泌到培养基内等。
4．观察青毒、曲霉、根霉平板中的菌落，描 述其菌落特征。注意菌落形态的大小，菌丝 的高矮，生长密度，孢子颜色和菌落表面等 状况。并与细菌、放线菌、酵母菌菌落进行 比较。
菌落特征
形态：点状、圆形、丝状、不规则、 假根状、纺锤形
隆起：扁平、拱起、凸透镜状、枕状、 脐突状
边缘：完整、波纹、裂中状、噬蚀状、 丝状、卷曲
(二) 放线菌形态特征的观察 用镊子取放线菌时要注意力度，太轻不宜取 下，太重则会损环菌丝形态。
(三) 酵母菌的形态观察 注意通过微加热增加酵母的死亡率，易于观 察死亡细胞。
实验五放线菌、霉菌及真菌的形态观察
放线菌在显微镜下一般气丝在上，基丝在 下，气丝色暗，基丝较透明。有的放线菌 只产生基丝而无气丝。 本实验采用插片法来观察放线菌的菌丝形 态。
2．酵母菌：酵母的菌落形态与细菌的相仿， 由于酵菌细胞比细菌的大，细胞内有许多分化 的细胞品，细胞间隙含水量较少，不能运动， 帮菌落较大、较厚，外观较稠和、不透明，菌 落颜色多为乳白色或矿烛色。
实验五
放线菌、霉菌及酵母菌的 形态观察
一．实验目的
学习并掌握观察放线菌、霉菌及酵母菌 形态的基本方法；
初步了解放线菌、霉菌及酵母菌的形态 特征。
二．实验原理
1．放线菌：是一类主要呈菌丝状生长和孢子繁 殖的陆生性较强的革兰氏阳性细菌，广泛分布 于含水量低、有机质丰富的微碱性土壤中。
放线菌的菌落形态特征为：形成干燥、不透 明、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉” 的菌落。菌落与培养基连接紧密，难以挑取， 菌落正反面颜色不一致，在菌落边缘的琼脂平 板上有变形的现象，有泥腥味。
1. 放线菌形态观察： A. 用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培 养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片上。 B. 另取一洁净载玻片置火焰上微热后，盖在 菌苔上，轻轻按压，使培养物（气丝、孢丝或 孢子）粘附在后一块载玻片中央，有印迹的一 面朝上，通过火焰2～3次固定。 C. 用番红染液覆盖印迹，染色约1min后水洗 D. 干后用油镜观察
3. 霉菌的形态观察： A. 先观察霉菌的菌落形态; B. 然后在载玻片上滴加一滴0.1％的美蓝染液； C. 用解剖针或镊子从霉菌菌落底部小心挑取少 量已经产孢子的霉菌菌丝； D. 放在载玻片上的染液中 E. 盖上盖玻片，置于低倍镜下观察，必要时换 高倍镜。
06-放线菌及霉菌形态观察
有些气生菌丝分化成 各种孢子丝，呈螺旋 各种孢子丝，呈螺旋 状、波浪形或分枝状 等，着生形式有丛生、 互生和轮生三种。孢 互生和轮生三种。孢 子的表面光滑或粗糙， 圆或椭圆和杆状。孢 子有各种颜色。这些 形态特点都是鉴别放 线菌的重要依据。
2、霉菌(Molds)： 霉菌是一些“丝状真菌(filamentous fungi)”的统称， (filamentous fungi) 不是分类学上的名词。凡是在基质上长成毛状、棉絮状 或蜘蛛网状的丝状真菌统称霉菌。 霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大(直径33 10µm 10µm)，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。观察时 要注意菌丝粗细，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根 ，无性繁殖或有性繁殖时形成的孢子是哪一种，孢子是 怎样着生的。
菌落特征：质地致密，在培养基上着生牢固，不易挑 菌落特征：质地致密，在培养基上着生牢固，不易挑 取；一般为圆形，秃平或有皱褶；菌落表面呈粉末状、 颗粒状或絮状（孢子）。
细黄链霉菌( 细黄链霉菌(Streptomyces microflavus) microflavus)
显微形态：单细胞菌丝体，菌丝内一般无隔膜。 显微形态：单细胞菌丝体，菌丝内一般无隔膜。 菌丝体分为两部分： 1、基内菌丝—深入培养基中的营养型一级菌丝 基内菌丝— （较透明、浅色）。一般无隔膜，直径0.2-0.8µm， （较透明、浅色）。一般无隔膜，直径0.2-0.8µm， 可产生各种色素。 2、气生菌丝—由基内菌丝从培养基向上伸展的二 气生菌丝— 级菌丝（颜色较深），直径1 1.4µm 级菌丝（颜色较深），直径1-1.4µm 。
四、方法及步骤
1、放线菌观察： 放线菌观察： 印片法：用接种铲切取5406放线菌一块（带有 印片法：用接种铲切取5406放线菌一块（带有 培养基）→ 培养基）→在载玻片上轻压一下，弃去培养基，制 成印片→固定（火焰）→蕃红染色→水洗→吸干→ 成印片→固定（火焰）→蕃红染色→水洗→吸干→ 镜检。 扦片法： 扦片法：
微生物实验-放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察
毛霉与根霉的比较
①两者皆有假根，但根霉属有匍匐枝，毛霉属无。 ②根霉属有囊托，毛霉属无。③两者皆具囊轴④ 毛霉属孢子囊梗单株从菌丝上发生，分枝或不分 枝，根霉无分支。
二、实验原理
酵母
酵母菌是单细胞真核微生物。
酵母菌细胞的形态通常有球形、
卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬
形或藕节形等。比细菌的单细胞 个体要大得多，一般为1~5微米 ′5~30微米。酵母菌无鞭毛，不 能游动。
毛霉
毛霉又叫黑霉、长毛霉。
菌丝无隔、多核、分枝状，在基物内外能 广泛蔓延，有假根，无匍匐菌丝。
毛霉
毛霉显微结构
根霉
根霉(Rhizopus)属于毛霉目 根霉在自然界分布很广，用途广泛，其淀粉酶活性很强，
是酿造工业中常用糖化菌。我国最早利用根霉糖化淀粉 （即阿明诺法）生产酒精。
根霉显微形态
实验四 放线菌、霉菌、 酵母菌的形态观察
实验四 放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察
一、实验目的
1、学习掌握观察放线菌、霉菌标本片形态特征。
2、学习掌握观察酵母菌标本片形态特征。
二、实验原理---放线菌
放线菌 因菌落呈放线状而的得名
二、实验原理
放线菌
放线菌的形态比细菌复杂些， 但仍属于单细胞。在显微镜 下，放线菌呈分枝丝状
七、下一个实验
实验五 微生物数量的测定
酵母菌具有典型的真核细胞
结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、
细胞质、液泡、线粒体等，有的
还具有微体。
啤酒酵母的菌落
红酵母的菌落
各种酵母菌的菌落
酵母菌和霉菌的培养对比
电镜下的酵母
三、实验器材
1、菌种：根霉、青霉、曲霉、放线菌、酵 母等标本片
放线菌及霉菌状态观察
放线菌及霉菌形态观察内容：一、实验目的1.了解放线菌、霉菌形态观察的原理。
2.学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方法。
3.初步了解放线菌、霉菌的形态特征。
二、实验原理放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。
常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝(简称“基丝”)，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝(简称“气丝”)，并进一步分化产生孢子丝及孢子。
有的放线菌只产生基丝而无气丝。
在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。
孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。
霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征。
本实验采用插片法。
插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。
观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。
这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。
三、试剂与器材1.材料黑曲霉、青霉和根霉，细黄链霉菌或青色链霉菌，灭菌的高氏I号琼脂和灭菌的查氏培养基。
2.实验器材经灭菌的：平皿、玻璃纸、无菌吸管、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片、接种环、接种铲、镊子、显微镜等。
四、实验内容倒平板→接种→插片→培养→镜检五、关键步骤及注意事项1.倒平板要厚一些，接种时划线要密。
2.插片时要有一定角度并与划线垂直。
3.观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察。
4.如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。
放线菌和霉菌的形态观察
实验4 放线菌和霉菌的形态观察实验时间：20 18年4月18日星期三第789节实验地点：13- 1331. 实验目的学习并掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征学习并掌握观察四类常见霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征2. 实验原理放线菌原理放线菌是由不同长短、纤细的菌丝所形成的单细胞的菌丝体。
菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝(或称基内菌丝，简称基丝)和生长在培养基以上的气生菌丝。
有些气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等，孢子常呈圆形、椭圆形或杆状。
能否产生气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为放线菌分类鉴定的重要依据。
放线菌的菌落形态特征为: 形成干燥、不透明、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉”的菌落。
菌落与培养基连接紧密，难以挑取，菌落正反面颜色不一致，在菌落边缘的琼脂平板上有变形的现象，有泥腥味。
霉菌原理霉菌是一类可产生菌丝体的真核微生物的统称。
霉菌的菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，菌落与培养基间连接紧密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉味。
霉菌的菌丝体分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
菌丝的孢子较大，在低倍镜下即可清晰观察到有隔或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比放线菌粗的多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。
霉菌菌丝较粗大，细胞容易收缩变形，而且孢子很容易飞散、所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。
此染色液制成的霉菌标本片特点是: (a) 细胞不变形: (b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间; (c) 溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。
霉菌的菌丝、分生孢子梗和分生孢子的形态常作为分类的重要依据。
3. 材料仪器1、菌种: 放线菌划线平板28C,3-5 天后培养物;产黄青霉，黑曲霉，黑根霉，等斜面或平板划线菌种28C培养2~3 天。
放线菌和霉菌的形态观察
实验四放线菌和霉菌的形态观察实验报告一．实验目的1.学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术。
2.初步了解细菌﹑放线菌﹑酵母菌及霉菌的形态特征和相互区别。
3．巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。
二．实验原理对个体较小的细菌进行制片时采取涂片法，通过涂抹使细胞个体在载玻片上均匀分布，避免菌体堆积面无法观察个体形态，通过加热固定使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，这种加热处理还可以杀死大多数细菌面且不破坏细胞形态。
放线菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和孢子丝组成，制片时不采取涂片法，以免破坏细胞及菌丝体形态。
通常采用插片法或玻璃纸法并结合菌丝体简单染色进行观察。
在插片法中，首先将灭菌盖玻片插入接种有放线菌的平板，使放线菌沿盖玻片和培养基交接处生长面附着在盖玻片上，取出盖玻片可直接在显微镜下观察放线菌在自然生长状态下的形态特征，而且有利于对不同生长时期的放线菌形态进行观察。
在玻璃纸法中，采用的玻璃纸是一种透明的半透膜，将放线菌菌种接种在覆盖在固体培养基表面的玻璃纸上，水分及小分子营养物质可透过玻璃纸被菌体吸收利用，而菌丝不能穿过玻璃纸而与培养基分离，观察时只要揭下玻璃纸转移到载玻片上，即可镜检观察。
由于孢子丝形态，孢子排列及形状是放线菌重要的分类学指标，可采用印片法将放线菌菌落或菌苔表面的孢子丝印在载玻片上，经简单染色后观察。
单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大多数采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。
由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水–碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。
同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。
美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。
由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。
死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞胞内还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。
实验五 放线菌
实验五放线菌、酵母菌和霉菌形态观察
一、实验目的
1．观察放线菌、酵母菌和霉菌的形态特征。
2. 巩固显微镜的使用
二、实验原理
放线菌是丝状的原核生物，主要以产生无性孢子进行繁殖。
酵母菌是单细胞的真菌，主要以出芽生殖方式繁殖。
霉菌是丝状真菌，主要以产生无性孢子和有性孢子进行繁殖。
三、实验材料和用具
青霉、根霉、酿酒酵母和放线菌。
显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环和0.1%美蓝染色液等。
四、操作步骤
（一）放线菌的形态观察
用镊子小心取出用玻璃纸法培养的放线菌培养皿中的玻璃纸，用无菌剪刀取小片置于载玻片上，用低倍镜、高倍镜观察，并绘图。
注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。
（二）霉菌的形态观察
根霉假根观察：将已做好的根霉标本置显微镜下观察。
只要用低倍镜就能观察到假根及从根节上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝，观察时注意调节焦距以看清各种构造。
（三）酵母菌的形态观察
酵母菌的活体染色观察及死亡率的测定
1．以无菌水洗下PDA斜面培养的酿酒酵母菌苔，制成菌悬液。
2. 取0.05%美蓝染色液1滴，置载玻片中央，并用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀，染色2～3min，加盖玻片，在高倍镜下观察酵母菌个体形态，区分其母细胞与芽体，区分死细胞(蓝色)与活细胞(不着色)。
3. 在一个视野里计数死细胞和活细胞，共计数5～6个视野。
酵母菌死亡率一般用百分数来表示，以下式来计算：
死亡率=死细胞总数／死活细胞总数×100%
五、实验报告
1. 计算酵母菌的死亡率
2．根霉和青霉形态图，示各部。
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三、实验器材
1、器皿：湿室、镊子、平板、无菌滴管、
显微镜、涂布棒、移液器、滤纸、水棉球载 玻片等。 2、培养基：高氏一号培养基、半固体PDA 培养基。 3、菌种：5406链霉菌、黑曲霉、青霉。
四、实验步骤
霉菌和放线菌的接种、培养和 形态观察
一、实验目的：
1、了解霉菌，放线菌形态观察的基本方法并了 解其基本形态特征.
2、掌握培养基配置，无菌操作，接种与培养，
显微镜观察等各种综合微生物技能的运用。
二、实验原理
1、微生物接种方法：接斜面、接平皿、接三 角瓶。
2、微生物的培养方法：静止培养、振荡培养。
二、实验原理
物典型结构形态的区别。
五、注意事项
1、本实验步骤均应无菌操作； 2、倒平板时，摇动培养皿要轻，以免溅出；
3、铺玻璃纸时，涂布棒冷却后，才可与玻璃 纸接触；
4、加盖玻片时要轻压，使培养物均匀的分布 在盖玻片下； 5、取玻璃膜观察时，取放线菌最薄的地方； 6、培养时，培养基滴半滴，以保证一周后结 果理想。
1、放线菌（玻璃纸法）：
制备培养基 倒平板 放玻璃纸，铺平
制菌悬液
培养7d
涂布菌液
28℃倒置
制片观察。
2、真菌（载片法）： 准备湿室 融化培养基 整理湿室
点接孢子
加水棉球
覆培养基
28℃保湿培养7d
加盖玻片
镜检。
3、形态观察
• 观察内容：
霉菌、放线菌的营养菌丝体、
气生菌丝体、孢子丝、分生孢子 头、分生孢子、孢子梗、足细胞 等的形说明霉菌，放线菌的形态特点.
七、思考题：
1、玻璃纸法可否用于培养其他微生物，为什么？
2、什么是载片培养，它适用于哪几类微生物的
形态观察，为什么？