消毒剂使用和效力验证

用无菌水代替消毒剂，步骤同上。
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验证步骤（2）：

培养和计数
取下 滤 膜放入 规 定的培养 基平板，在 规 定的温度、 时 间培养后，记数。 和阳性 对照相比，微生物数

量下降应至少3个对数值
（ 细 菌芽 孢 至少 2 个 对 数 值 ）。
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验证步骤（3）：表面挑战试验


ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ

根据设施的实际情况，选择不同材质的载体。 玻璃，不锈钢，塑料薄膜，乳胶，墙面涂料， 地面材质 接种，并确认实际数量 接触杀菌、中和、过滤……
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影响消毒剂效力的因素：

pH
温度，浓度 材质和附着物质 溶剂（水） 接触时间
微生物的类型和数量
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消毒剂作用机理

钝化胞内酶活性，影响细胞的正常代谢

酚类
季铵盐类（＋电荷），附着于细胞膜特定部分（－电荷）

阻断物质运输通道


破坏微生物细胞（膜）的结构和功能

醛类、含氯、过氧化物

中和剂毒性

将10～100 CFU的微生物加入到中和剂中 薄膜过滤，冲洗，培养，计数 与菌液对照组比较，回收率应>70％
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准备性试验（三）

中和效力


将消毒剂和中和剂混合（记录时间） 加入10～100 CFU微生物 薄膜过滤，冲洗，培养，计数 与菌液对照组比较，回收率应>70％
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验证方法 - 薄膜过滤法

菌悬液和消毒剂直接混合， 在不同的时间间隔条件下过 滤，培养后评价。
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验证准备：
- 测试菌液准备
增菌过夜，并调整至106～108 CFU/ml - 消毒剂稀释至规定浓度。 分装10ml于若干无菌试管中；试管上标注消毒时间：如 “1分钟组” ，“5分钟组” ，“10分钟组”或其他要求的时
度和规定的作用时间进行确认。
第二步：应用不同材质的载体，进行模拟试验 第三步：完成验证报告，形成SOP。
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验证菌种：
验证用菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿色假单胞菌、沙
门氏菌、大肠埃希菌、枯草杆菌、白色念珠菌、黑 曲霉、环境分离菌。 菌种选择的原则:代表性,普遍性,标准菌种。(环境中 常见的污染菌)。 菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。
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微生物对消毒剂的耐受性

形成生物膜

粘性多糖物质 中和反应

消毒剂的相互作用


固有耐受性和概率残存 致死剂量
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微生物抗力

由小到大排列一般为：

细菌繁殖体 真菌繁殖体 真菌孢子 病毒 分枝杆菌 细菌芽孢
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消毒剂的选择

需控制的微生物的类型和数量 市售消毒剂的抗菌谱 消毒剂的品牌 浓度、使用方法和接触时间 待消毒物体的材质和对消毒剂的兼容性 可能影响杀菌效力的表面有机物数量 反复使用，对设备表面的腐蚀程度 对操作者的安全性 和清洁剂/其它消毒剂的相容性 交替使用方案和对产品的影响
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化学主份
醛类 醇类
类别
杀孢子剂 2％戊二醛
举例
一般消毒剂，抗菌/病 70%异丙醇、75％酒精 毒 0.5%次氯酸钠 500µg/g氯甲酚、氯二甲酚 一般消毒剂
含氯和次氯酸钠 杀孢子剂 酚类
臭氧
过氧化氢 替代缩二胍
杀孢子剂
气态灭菌剂，液体杀 孢子剂，抗菌剂 抗菌剂
8％气体重量
4µg/g，10％～25％溶液，3 ％溶液 0.5%氯己定（洗必泰）
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正确使用消毒剂（1）
1. 2. 3. 4.
稀释消毒剂时应用纯化水、注射用水 设备使用后作彻底清洁
将环境常见菌列入验证范畴
轮换使用不同的消毒剂，消毒剂间要用无菌水充分清洗
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正确使用消毒剂（2）
1. 2. 3. 4.
使用消毒剂的人员要接受相关的培训 严格遵守“人流”、“物流”的途径 消毒的SOP：配制、使用、纠正、防护等 供应商的审核和确认
使用标准菌株和典型环境分离微生物 选择合适的浓度和接触时间，进行试验 获得挑战微生物数量下降的对数值

表面挑战试验（surface challenge tests)


对使用新消毒剂前后环境微生物的检出频率和数量进行统计 学评估（无菌生产区域、GMP要求）
12
消毒剂验证步骤：
第一步：在实验室对代表细菌在规定的使用浓
过氧乙酸
环氧乙烷 季铵盐类
液态/气态灭菌剂
气态灭菌剂 一般消毒剂，抗菌剂
0.2%，1µg/g
600µg/g 200µg/g苯扎氯铵（洁尔灭）
β -丙内酯
杀孢子剂
4
100µg/g
消毒剂配制

按供应商的使用说明进行配制和储存

纯化水、注射用水

洁净室及相关受控环境使用，应进行除菌过滤。 温度提高，杀菌效力增大。效力验证时，在常温下配制。
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准备性试验（一）

选择适合的中和剂

Letheen肉汤、D/E中和肉汤（酚类，季铵盐类）、TAT肉汤基础＋吐 温20＋卵磷脂＋胰蛋白胨
消毒剂 醇类
中和剂 稀释或吐温80
戊二醛
次氯酸钠 氯己定
甘氨酸和亚硫酸氢钠
硫代硫酸钠 吐温80和卵磷脂
氯化汞及其它汞制剂
季铵盐类 酚类
硫乙醇酸
吐温80和卵磷脂 稀释或吐温80和卵磷脂
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消毒剂的文件
- 标准操作规程 SOP
- 消毒剂配制记录
- 消毒剂使用记录 - 消毒剂标签
……
消毒剂文件，应该等同与原始记录。
27
800-820-0865
www.millipore.com.cn
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D/E中和肉汤（每升）

配方 胰蛋白胨 5 g 酵母膏 2.5 g 葡萄糖 10 g 硫乙醇酸钠 1 g 硫代硫酸钠 6 g 亚硫酸氢钠2.5 g 吐温 80 5 g 卵磷脂 7 g 溴甲酚紫 0.02 g 最终 pH 7.60.2 于 25℃
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准备性试验（二）
间段。
- 配制中和剂（分装100ml，300ml）
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验证步骤（1）：
- 接种
接种各验证菌种至盛有待验证消毒剂的试管（使接后浓度>104
CFU/ml)，混合均匀，并立即开始计时。
- 中和、过滤
将消毒剂倾入100ml中和剂中，混合，稀释（如需要），过滤，然后 用100ml中和剂清洗滤膜，滤过3次。 - 阳性对照
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消毒剂验证的目的：
通过特定的微生物与某消毒剂在规定的使用
浓度下，接触规定的时间后，对微生物进行
培养、计数，考察消毒剂的消毒/杀菌效果。
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消毒剂验证的内容：

使用中稀释检测（use-dilution tests)

对不同浓度下，对消毒剂的效力进行筛选 针对不同标准菌株和环境微生物，确认接触时间
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挑战微生物(USP 29)
AOAC挑战菌 杀菌剂：大肠埃希菌ATCC 11229 金黄色葡萄球菌ATCC 6538 铜绿假单胞菌ATCC 15442 典型环境分离菌 杀菌剂：藤黄微球菌，表皮葡萄球 菌，杰氏棒杆菌 ，泡囊假单胞菌
杀真菌剂：白色念珠菌ATCC 10231 杀真菌剂：产黄青霉，黑曲霉菌 或2091 产黄青霉ATCC 11709 黑曲霉菌 ATCC 16404 杀孢子剂：球形芽孢杆菌 ，苏云金 杀孢子剂：枯草芽孢杆菌ATCC 芽孢杆菌 19659
消毒剂使用及效力验证
2007.4
消毒剂的习惯定义：

能消除以细胞繁殖形态出现的微生 物污染的化学物质。
2
消毒剂的分类定义（USP29 <1072>）





抗菌剂（Antiseptic) 化学杀菌剂(Chemical Disinfectant) 清洁剂(Cleaning Agent) 消毒剂(Disinfectant) 卫生洗涤剂(Sanitizing Agent) 杀孢子剂(Sporicidal Agent) 灭菌剂(Sterilant Agent)