中药化学实验简答题

1.简述柱色谱的基本操作方法（湿法）。

（1）吸附剂的填装。将吸附剂与洗脱剂混合，搅拌除去空气泡，徐徐倾入色谱柱中，然后加入洗脱剂将附着在管壁的吸附剂洗下，使色谱柱面平整。待填装吸附剂所用洗脱剂从色谱柱自然流下，至液面和柱表面相平时，即加供试品溶液。

（2）供试品的加入。将供试品溶于开始洗脱时使用的洗脱剂中，再沿管壁缓缓加入，注意勿使吸附剂翻起。或将供试品溶于适当的溶剂中，与少量吸附剂混匀，再使溶剂挥发去尽使呈松散状，加在已制备好的色谱柱上面。如供试品在常用溶剂中不溶，可将供试品与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。

（3）洗脱。通常按洗脱剂洗脱能力大小递增变换洗脱剂的品种和比例，分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少或不再含有时，再改变洗脱剂的品种和比例。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。

2.简述溶剂离心洗涤的方法以及离心的注意事。

方法：将盛有溶液和沉淀的混合物的离心瓶（瓶盖旋紧）放入离心机的套筒内，盖好离心盖，设定好离心时间与转速，起动时要慢，逐渐加快，停止离心操作时，应等待离心机完全停止工作时再打开盖。

注意事项：为了防止由于两支管套中重量不均衡所引起的振动而造成轴的磨损，必须在放入离心管的对面位置上，放一同样大小的试管，内中装有与混合物等体积的水，以保持平衡，确保离心机在工作的时候，仪器的盖子始终保持关闭状态。

3.简述索氏提取方法及注意事项。

提取方法：

1)折滤纸斗。取滤纸折成筒状，一端封口，将事先准备好的样品放入，并封另一端口。注意纸筒高度要低于虹吸管高度。

2)安置装置。从下到上一次安置烧瓶、索氏提取器、球形冷凝管，使烧瓶刚好被水浴锅淹没。

3)提取。加入溶剂，浸没纸筒，液面高于虹吸管1CM左右。水浴锅温度设置为溶剂的沸点。一定时间后，比如虹吸管中的溶剂颜色已无色，移去水浴锅，移去冷凝管。

注意事项：滤纸筒包样品时应严实，防止漏出堵塞虹吸管，其高度不能超过虹吸管，否则提取时，高出虹吸管的那部分就不能浸在溶剂中，提取效果不佳。纸筒大小应与提取器内筒大小相识，太细提取时会飘起来，太粗即使强行装进去，溶剂不易渗透。在加热之前，应打开冷凝水，且关闭应在撤去水浴锅之后。

4.生物碱沉淀反应的条件、试剂、反应现象，出现假阳性反应的原因及解决方案。条件（1）反应环境生物碱沉淀的反应一般在稀酸水溶液中进行。

（2）净化处理将酸水液经碱化后用氯仿萃取，除去水溶性干扰成分，然后用酸水从氯仿中萃取出生物碱，以此酸水液进行沉淀反应。

试剂碘化物复盐、重金属盐、大分子酸类等。常见的生物碱沉淀试剂有碘-碘化钾试剂、

碘化铋钾试剂、碘化汞钾试剂等

反应现象与碘化物复盐类、和重金属盐类作用，一般生成颜色沉淀

与大分子酸类类作用，生成黄色结晶

与雷氏铵盐试剂作用，生成红色沉淀或结晶

假阳性反应原因：共存的蛋白质、多肽、鞣质等成分，这些物质也能与生物碱沉淀试剂发生沉淀的反应。进而出现假阳性反应。

解决方案：对样品进行净化处理，对生物碱的定性鉴别时，应使用三种以上试剂分别进行反应，均阳性或者阴性方有可信性。

5.以虎杖中蒽醌类化合物为例，运用PH梯度法说明其分离纯化步骤及原理。

步骤（见讲义）

原理醌类化合物多具有酚羟基，具有一定飞酸性。在碱性水溶液中成盐溶解，加酸酸化后游离又可析出。根据醌类酸性强弱差别，可用PH梯度法进行分离。含—COOH > 含两个或两个以上β—OH > 含一个β—OH > 含两个或两个以上α—OH > 含一个α—OH 。故可从有机溶剂中依次用PH不同的溶液进行梯度萃取。

6.运用聚酰胺色谱分离黄酮类化合物的原理及规律。

原理：通过聚酰胺的的酰胺基与黄酮类化合物分子上的酚羟基形成氢键缔合而产生。其吸附强度取决于黄酮类化合物分子中酚羟基的数目与位置等及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力大小。

规律：①酚羟基数目越多，吸附能力越强。酚羟基的位置也有影响。

②芳香化程度越高，共轭双键越多，吸附能力越强。

③黄酮醇>黄铜>二氢黄酮醇>异黄酮

④若以含水移动相作洗脱剂，洗脱先后顺序：三糖苷、双糖苷、单糖苷、游离黄铜。若以有机溶剂作洗脱剂，结果则相反。

⑤洗脱剂影响。各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强的顺序为：水<甲醇或乙醇<丙酮稀氢氧化钠水溶液或氨水<甲酰胺<二甲基甲酰胺(DMF)<尿素水溶液

7.分别说明中药化学成分纯度判断和结构研究的方法。

纯度判读：A.熔程法 B.薄层色谱（TLC）法 C.HPLC或GC法

结构研究方法：A.红外光谱（IR） B.紫外光谱（UV） C.质谱（MS） D.核磁共振（NMR） E.旋光谱（ORD）和圆二色谱（CD）

8.重结晶的操作步骤以及溶剂的选择条件。

操作步骤1．选择适宜的溶剂，将待重结晶物质制成饱和溶液 2.加热 3．乘热过滤除去不溶性杂质 3．结晶 4．抽滤 5．结晶的洗涤和干燥

选择条件

（1）所选溶剂不与被踢纯物质发生反应。使被提纯物质热易溶，冷难溶。

对杂质的溶解非常大或者非常小（前一种情况是使杂质留在母液中不随被提纯物晶体一同析出；后一种情况是使杂质在热过滤时被滤去）

（2）容易挥发（溶剂的沸点较低），易与结晶分离除去，能给出较好的晶体

（3）无毒或毒性很小，便于操作，价廉易得，回收率高。适当时候可以选用混合溶剂