黄刺玫果中总黄酮的提取工艺研究_叶松华

表 2 正交试验设计因素水平表
Tab 2 Factors of orthogonal test
水平
温度 A/℃
Байду номын сангаас
提取次数 B/次
乙醇浓度 C/%
1
50
1
60
2
65
2
70
3
80
3
80
料液比 D
1∶ 6 1∶ 8 1∶ 10
图 1 芦丁标准曲线 Fig 1 Standard curve of rutin
1． 2． 2 样品中总黄酮的含量计算 精密吸取待测 试料溶液 1． 0 ml，置于 25 ml 容量 瓶 中，如 1． 2． 1 中，从“加 30 % 乙醇至总体积为 6． 0 ml”开始进行 操作。以空白试液作参比，在波长 500 nm 处测定试 料溶液的吸光度。根据标准曲线或通过回归方程计 算出浓 度 C，并 求 出 试 料 溶 液 中 的 总 黄 酮 含 量 （ mg） 。 1． 2． 3 单因素试验设计 1． 2． 3． 1 提取时间对提取的影响 准确称取 50 g 黄刺玫果粉，加入 500 ml 70% 的乙醇，在 80 ℃ 水浴
基金项目： 山西省经信委基金资助项目（ 财 2010 － 010） ； 山西省科技攻关资助项目（ 20110321081 － 01； 20120313016 － 6）
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J Shanxi Med Univ，Jul 2013，Vol 44 No 7
液 1 ml，摇匀，放置 6 min； 分别加入 1 mol / L 氢氧化 钠溶液 10 ml，摇 匀，加 30% 乙 醇 至 刻 度，放 置 15 min。以 1． 0 ml 30% 乙醇代替待测试料溶液，作为 空白，在 500 nm 的波长处测定吸光度，结果见表 1。 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线， 见图 1。标准曲线的回归方程为： A = 12． 247 7C + 0． 002 9，Ｒ = 0． 999 7，A 为 500 nm 处吸光度，C 为溶 液中总黄酮的浓度，在 0． 008 208 － 0． 065 664 mg / ml 范围内呈线性相关。
正交试验操作步骤为： 黄刺玫果粉碎 30 目，称 取 50 g 果粉，加不同体积、不同浓度乙醇在水浴中 不同温度回流提取，一定速度振荡，提取 1． 5 h 后， 固液分离。以上述条件反复不同次数，最终合并滤 液。静置 1 h 后抽滤。各取 10 ml 用于测定总黄酮 （ 总黄酮含量指以芦丁汁，50 g 刺玫果粉所提取的 质量） 。其余滤液在 50 ℃ 下减压浓缩，浓缩成稠 膏，将稠膏真空干燥，恒重后得干浸膏，称重后计算 收率，测定总黄酮。 2 结果 2． 1 单因素试验 2． 1． 1 提取时间对总黄酮提取效果的影响 由图 2 可知，在提取时间低于 1． 5 h 时，黄酮类物质含量 呈增加趋势，大于 1． 5 h 后，呈平稳趋势。这是因为
Fig 2
图 2 提取时间对总黄酮提取效果的影响 Effect of extraction time on extraction rate of total flavonoids
2． 1． 2 料液比对总黄酮提取效果的影响 由图 3 可知，随着料液比的增大，总黄酮含量逐渐增大。当 料液比大到 1∶ 8 时，再增大比例总黄酮含量基本趋 于稳定。因为一定比例的溶剂已经将有效成分基本 溶出。综合考虑总黄酮含量、溶剂用量和能源损耗 等因素，选用 1∶ 6 － 1∶ 10 为进一步优化的范围。
黄刺玫果为蔷薇科蔷薇属野生落叶灌木黄刺玫 （ Ｒosa xanthina Lindl） 的成熟果实，广泛分布于我国 北方各省的山区和丘陵地带［1］。我省太行山脉、吕 梁山区、中条山、五台山、关帝山等地分布着大量的 野生黄刺玫，且品质高、产量大，资源非常丰富。黄 刺玫果具有健脾理气，养血调经的作用，治疗消化不 良、气滞腹泻、胃痛、月经不调等病症。
利用和客观评价提供科学依据。 1 材料与方法 1． 1 实验材料
黄刺玫果采摘自山西左权县。主要试剂： 芦丁 标准品购自中国药品生物制品检定所，亚硝酸钠、硝 酸铝、氢氧化钠、无水乙醇等试剂均为分析纯。主要 仪器设备： UV3000 紫外 / 可见分光光度计（ 日本，岛 津） ，ＲE52CS － 1 旋转蒸发仪，电子天平（ sartorius） ， 真空干燥箱，恒温水浴箱。 1． 2 实验方法 1． 2． 1 标准曲线的绘制 精密称取经 120 ℃ 减压 真空干燥至恒重的芦丁对照品 20 mg，置于 50 ml 容 量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为 对照品溶液备用。精密吸取芦丁对照品溶液 0． 5， 1，1． 5，2，3，4 ml，分别置于 25 ml 容量瓶中，加 30% 乙醇至总体积为 6． 0 ml； 分别加入 5% 亚硝酸钠溶 液1 ml ，摇 匀 ，放 置6 min ； 分 别 加 入10 % 硝 酸 铝 溶
表1 Tab 1
芦丁浓度与吸光度的关系 The relationship between concentration of rutin and absorbance
No
芦丁浓度 / （ mg / ml）
吸光度 A
1
0． 008 208
0． 109
2
0． 016 416
0． 201
3
0． 024 624
中图分类号： TQ460． 7 文献标志码： A 文章编号： 1007 － 6611（ 2013） 07 － 0535 － 04 DOI： 10． 3969 / J． ISSN． 1007 － 6611． 2013． 07． 008
Study on extraction process of flavonoids from fruit of Ｒosa xanthina Lindl YE Songhua，WANG Xiaoyan，YANG Yingying，FENG Xiazhen，ＲUAN Wenhui* （ Shanxi Institute of Medicine and Life Science，Taiyuan 030006，China； * Corresponding author，E-mail： nnhc@ sina． com） Abstract： Objective To optimize the extraction process of total flavonoids in fruit of Ｒosa xanthina Lindl． Methods Ultravioletvisible spectrophotometer was applied to determine the content of total flavonoids with the rutin as the control． With the quantity of total flavonoids as a target index，extraction hours，ratio of material to solution，ethanol concentration，extraction temperature were investigated by single factor test． Based on the results of the single factor test，the orthogonal investigation was employed to test the effects of the extraction temperature，extraction times，ethanol concentration and ratio of material to solution． Ｒesults The ethanol concentration had the most significant effect，and the extraction times had the least effect on the content of total flavonoids． The best extraction process was to reflux three times with ten times of ethanol solution（ 70% ） at 80 ℃ for 1． 5 h each time． Conclusion The method is simple and feasible for extracting total flavonoids from the fruit of Ｒosa xanthina Lindl． Key words： fruit of Ｒosa xanthina Lindl； flavonoids； extraction process； orthogonal design
在目前研究进展中，由于黄酮类化合物对预防 和治疗高血脂、血栓引起的心脑血管疾病有较好疗 效，因而最 具 有 药 理 学 研 究 价 值［2］，黄 刺 玫 果 中 所 含的总黄 酮 类 物 质 在 该 方 面 具 有 显 著 功 效［3，4］，且 具有高效、低毒副作用的优势，所以开发该药物的社 会前景和市场前景非常可观，而有关野生黄刺玫果 中总黄酮提取工艺的研究尚未见报道。本研究以芦 丁为标准品，采用正交试验法对黄刺玫果中总黄酮 的提取工艺进行研究，为黄刺玫果总黄酮成分的提 取和利用提供理论依据，也为黄刺玫果资源的充分
山西医科大学学报，2013 年 7 月，第 44 卷 第 7 期
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提取 1． 5 h 后，黄酮类物质在溶液中趋于饱和状态， 不利于黄酮类物质的继续溶出，可以通过增加提取 次数来解决这个问题。在正交试验中可以考虑将提 取次数作为其中的一个因素。
成分的溶出增加，与黄酮类化合物竞争乙醇，从而导 致黄酮类物质提取率的下降。
0． 307
4
0． 032 832
0． 393
5
0． 049 248
0． 613