生物制品无菌检验 操作及其注意事项共15页文档
无菌检查操作规程
无菌检查操作规程文件编号：版本：编制/日期：审核/日期：批准/日期：受控状态:批准实施1 目的为了规范产品无菌检查操作，编制本规程。
2 适用范围本规程适用于产品无菌检查。
3 职责3.1 检验室负责对产品无菌检查的取样和化验，并填写报告；3.2 品管部经理负责签发检查报告。
4 工作程序（见《中国药典》2015年版）4.1 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
4.2 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
4.3 培养基及其制备方法硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.3.1 硫乙醇酸盐流体培养基（用于培养好氧菌、厌氧菌）酪胨（胰酶水解） 15.0g 氯化钠 2.5g葡萄糖 5.0g 新配制的0.1％刃天青溶液 1.0mlL-胱氨酸 0.5g 硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸0.3ml） 0.5g琼脂 0.75g 酵母浸出粉 5.0g水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节 pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
微生物检测要求
一、无菌操作要求1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5~0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%~3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。
三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法。
1.灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。
无菌试验操作检验规程
1 范围适用于本规程规定的医疗器械的无菌试验方法。
无菌检查法系用于检杳要求无菌的医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
本试验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染。
2 引用标准GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法。
第2部分:生物学试验方法。
《中华人民共和国药典（2015年版）》菌片标准按生物菌片供应商提供的方法进行3器材及试剂3.1器材:a)试管b)酒精灯c)75%乙醇棉d)灭菌刻度吸管(1mL)e)灭菌平皿(9cm)f）勺锥形瓶g)三角烧瓶h)灭菌剪刀、镊子i)恒温培养箱j)生化培养箱k)高压蒸汽灭菌器l)电热千燥箱3.2培养基及试剂:a)流体硫乙醇酸盐培养基b)改良马丁培养基c)营养琼脂培养基3.3稀释液、冲洗液及其制备方法:3.3.1 质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液;3.3.2 0.1%蛋白胨水溶液:取蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1 ± 0.2，分装、灭菌。
3.3.3 pH7.0氯化钠一蛋白陈缓冲液:取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解、滤清、分装、灭菌。
4实验操作:4.1实验前准备:4.1.1培养基要求:用于培养需(厌)气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敏度检查及其他各项要求应符合《中国药典(二部)》附录中《无菌检查法》的规定。
培养基可按药典的处方制备，也可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
制备后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境。
培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用;若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.1.2器具灭菌:与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸气灭菌器内121℃30min,或置电热干燥箱内160℃——2h。
无菌检验
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杂菌计数 和病原性鉴定
细菌制品检测室
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目的及用途
用于允许含一定数量杂菌疫
（菌）苗的检验鉴定。
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1.杂菌计数
重新抽取样品3瓶
分别做50倍稀释，移植到含4%血 清及0.1%血红素的马丁琼脂（或G.A） 琼脂平板2只，37℃培养 48小时，室温24小时
数菌落数（CFU） 计算杂菌数
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检 验
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一、 抽样
1、抽样原则： （1）随机抽取样品。 （2）注意：
抽样应有代表性。
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2、抽样数量：
（1）半成品： 对每瓶（罐）分别进行，2～ 10ml 。 （2）成品： 每批制品按生产量的1%抽样， 不能少于5瓶，最多不超过10瓶。
适用范围
适应于非SPF鸡胚制造 疫苗的检验。
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培养物 S.S琼脂或麦康凯平板2付 挑选2-3菌落
O多1因子血清做玻片凝集反应
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O多1因子血清凝集反应
用白金耳在玻片上滴1-2滴因子 血清，再用白金耳取少量被检 物与因子血清混合，轻轻摇动 玻片，2分钟之内出现凝集反应， 判为阳性。
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3.结果判定
小白鼠；豚鼠不应死亡或注射部 位化脓，如出现化脓；坏死等症 状，证明有病原菌，该批制品不 合格。
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4.注意事项：
如同时污染需氧菌、厌氧菌， 依据两种鉴定方法同时进行。
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禽沙门氏菌 检验
细菌制品检测室
药品GMP检查指南(生物制品)
一．机构与人员[检查要点]药品生产和质量管理的组织机构对做好药品生产全过程监控至关重要；适当的组织机构及人员配备是保证药品质量的关键因素；人员的职责必需以文件形式明确规定；培训是实施药品GMP工作中的重要环节。
0402 生物制品生产企业生产和质量管理负责人是否具有相应得专业知识（细菌学、病毒学、生物学、分子生物学、生物化学、免疫学、医学、药学等），并具有丰富的实践经验以确保在其生产、质量管理中履行其职责。
1．主管生物制品生产企业的生产和质量管理的企业负责人应具备医药及生物学等方面的专业知识和实践经验才能确保其在生产、质量管理中履行职责。
生物制品是药品的一大类别。
生物制品是应用普通的或以基因工程（Genetic Engineering）、细胞工程（Cell Engineering）、蛋白质工程（Protein Engineering）、发酵工程（Fermentation Engineering）等生物技术获得的微生物（细菌、噬菌体、立克次体、病毒、寄生虫等）、细胞及各种动物和人源的组织和体液等生物材料制备，其制备过程是生物学过程和无菌操作过程，并用于预防、治疗、诊断疾病的药品。
我国目前生产和使用的生物制品有200多种，各生物制品生产企业所生产的品种各不相同，基于生物制品起始原辅材料、生产制备过程及质量控制等的固有特性，细菌类或病毒类疫苗（包括毒素、类菌素、抗毒素及抗血清等）生产企业的生产和质量管理负责人应具备细菌学或病毒学、生物化学、分子生物学、免疫学、流行病学等方面的专业知识；细胞因子及其他活性生物制剂生产企业，应具备生物化学、免疫学、分子生物等方面的专业知识；DNA产品生产企业，应具备现代生物技术、分子生物学、遗传学、免疫学等方面的专业知识；体内及体外诊断试剂生产企业应具备生物学、免疫学、生物化学等方面的专业知识；血液制品生产企业，应具备生物化学、分析生物学、病毒学等方面的专业知识。
2．本项规定应具备的相应专业知识，也不可机械地局限到一个人所学的具体专业学科。
中国药典2020无菌检查法
中国药典2020无菌检查法摘要：一、前言二、无菌检查法的背景和重要性三、中国药典2020 无菌检查法的内容与要求四、无菌检查法的具体操作步骤五、无菌检查法的应用领域六、结语正文：一、前言无菌检查法是我国药品质量控制中的重要手段，对于保证药品的安全性和有效性具有重要意义。
作为中国药典2020 年版的一部分，无菌检查法为药品生产、研究和检验提供了权威的指导。
本文将对中国药典2020 无菌检查法进行详细阐述。
二、无菌检查法的背景和重要性无菌检查法是一种检查药品、生物制品及其他产品中是否存在微生物污染的方法。
在药品生产和研究中，无菌检查是确保药品无菌状态的关键步骤，可以有效防止病原菌和其他微生物的污染，降低患者在使用过程中的感染风险。
三、中国药典2020 无菌检查法的内容与要求中国药典2020 无菌检查法包括以下几个方面：1.概述：无菌检查法的定义、适用范围、相关术语及定义。
2.仪器与材料：无菌操作台、超净工作台、无菌器具、培养基等。
3.操作方法：无菌检查的操作流程、操作技巧和注意事项。
4.结果判断：微生物生长的判断标准、阳性对照实验和实验结果的可靠性评估。
5.应用实例：无菌检查法在药品生产、研究和检验中的具体应用。
四、无菌检查法的具体操作步骤无菌检查法的操作步骤主要包括：样品处理、无菌操作、培养、观察和结果判断。
1.样品处理：从药品中取样，并进行适当的处理，如粉碎、溶解等。
2.无菌操作：在无菌环境下进行操作，避免微生物污染。
3.培养：将样品接种到培养基上，进行微生物生长培养。
4.观察：定期观察培养基上微生物的生长情况，记录结果。
5.结果判断：根据观察结果判断样品中是否存在微生物污染。
五、无菌检查法的应用领域无菌检查法广泛应用于药品生产、研究和检验等领域，对于保证药品质量具有重要意义。
此外，无菌检查法还应用于食品、化妆品、生物制品等行业，以确保相关产品的安全性和有效性。
六、结语总之，无菌检查法是药品质量控制中的关键环节。
无菌检查法PPT
培养基与试验菌
培养基种类及用途
维扬我武 克壮其猷 第5页
pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 硫乙醇酸盐流体培养基 营养琼脂培养基 营养肉汤培养基
稀释液和冲洗液
菌液制备中用于生孢梭菌的液体培养；无菌检查方法学验证中 用于滤筒中金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的 培养。
用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的 活化培养与平板计数。
无菌方法学验证
维扬我武 克壮其猷
薄膜过滤法
第19页
为降低在洁净区操作菌液风险，也可在保证滤膜 完整性的前提下，将装有培养基的滤筒移至阳性 室，然后使用注射器吸取1ml合适浓度（<100 cfu）的菌液注入供试品及阳性对照滤筒内。
阳性对照 取一装有同体积培养基的集菌培养器，加入等量试验菌，做为阳性对照。 阴性对照 取相同稀释液、冲洗液及同批次集菌培养器同法操作，做为阴性对照。
——中国药典第三部附录XII A 《无菌检查法》
定义与要求
标准依据 《中国药典》2010年版： 一部 附录XIII B 二部 附录XI H 三部 附录XII A
标准依据、人员要求
维扬我武 克壮其猷 第3页
人员要求
无菌检查人员需要具备微生 物专业知识，并经过无菌技 术培训。
定义与要求
环境要求
维扬我武 克壮其猷 第4页
如含供试品的任意容器内试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验 量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量、增加培养基用量、使用灭活剂 和中和剂、更换滤膜品种等方法消除抑菌作用，并重新进行方法学验证。如使用中 和剂、灭活剂和表面活性剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
无菌方法学验证
图片来自网络
无菌方法学验证 薄膜过滤法-操作
微生物实验操作注意事项
微生物实验注意事项一、无菌操作要求1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2. 进行接种食品样品时.必须穿专用的工作服、帽及拖鞋.应放在无菌室缓冲间.工作前经紫外线消毒后使用。
3. 接种食品样品时.应在进无菌室前用肥皂洗手.然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4. 进行接种所用的吸管.平皿及培养基等必须经消毒灭菌.打开包装未使用完的器皿.不能放置后再使用.金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5. 从包装中取出吸管时.吸管尖部不能触及外露部位.使用吸管接种于试管或平皿时.吸管尖不得触及试管或平皿边。
6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作.接种细菌或样品时.吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝.必要时还要烧到环和针与杆的连接处.接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min.再经火焰烧灼。
8. 吸管吸取菌液或样品时.应用相应的橡皮头吸取.不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃.并要密封.不得随意打开.并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门.另设有0.5-0.7m2的小窗.以备进入无菌间后传递物品。
2. 无菌间内应保持清洁.工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒.擦拭工作台面.不得存放与实验无关的物品。
3. 无菌间使用前后应将门关紧.打开紫外灯.如采用室内悬吊紫外灯消毒时.需30W紫外灯.距离在1.0m处.照射时间不少于30min.使用紫外灯.应注意不得直接在紫外线下操作.以免引起损伤.灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭.除去上面灰尘和油垢.以减少紫外线穿透的影响。
4. 处理和接种食品标本时.进入无菌间操作.不得随意出入.如需要传递物品.可通过小窗传递。
5. 在无菌间内如需要安装空调时.则应有过滤装置三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等.必须经灭菌后方能使用。
药品GMP检查指南(生物制品)
一．机构与人员[检查要点]药品生产和质量管理的组织机构对做好药品生产全过程监控至关重要；适当的组织机构及人员配备是保证药品质量的关键因素；人员的职责必需以文件形式明确规定；培训是实施药品GMP工作中的重要环节。
0402 生物制品生产企业生产和质量管理负责人是否具有相应得专业知识（细菌学、病毒学、生物学、分子生物学、生物化学、免疫学、医学、药学等），并具有丰富的实践经验以确保在其生产、质量管理中履行其职责。
1．主管生物制品生产企业的生产和质量管理的企业负责人应具备医药及生物学等方面的专业知识和实践经验才能确保其在生产、质量管理中履行职责。
生物制品是药品的一大类别。
生物制品是应用普通的或以基因工程（Genetic Engineering）、细胞工程（Cell Engineering）、蛋白质工程（ProteinEngineering）、发酵工程（Fermentation Engineering）等生物技术获得的微生物（细菌、噬菌体、立克次体、病毒、寄生虫等）、细胞及各种动物和人源的组织和体液等生物材料制备，其制备过程是生物学过程和无菌操作过程，并用于预防、治疗、诊断疾病的药品。
我国目前生产和使用的生物制品有200多种，各生物制品生产企业所生产的品种各不相同，基于生物制品起始原辅材料、生产制备过程及质量控制等的固有特性，细菌类或病毒类疫苗（包括毒素、类菌素、抗毒素及抗血清等）生产企业的生产和质量管理负责人应具备细菌学或病毒学、生物化学、分子生物学、免疫学、流行病学等方面的专业知识；细胞因子及其他活性生物制剂生产企业，应具备生物化学、免疫学、分子生物等方面的专业知识；DNA产品生产企业，应具备现代生物技术、分子生物学、遗传学、免疫学等方面的专业知识；体内及体外诊断试剂生产企业应具备生物学、免疫学、生物化学等方面的专业知识；血液制品生产企业，应具备生物化学、分析生物学、病毒学等方面的专业知识。
2．本项规定应具备的相应专业知识，也不可机械地局限到一个人所学的具体专业学科。
无菌微生物限度检查及方法验证.ppt
• 实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、戴手表、戒指等首饰；不得 吃东西。应严格按更衣程序更衣。
• 记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微 生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将 报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌 室前，至少开启机房运转1小时以上。
菌种的传代和保藏
菌种的保藏方法
• 使菌种的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，从而在一定时间内 不发生变异并保持生命活力。
• 一般来说，低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的三个 重要因素
• 无论使用那种菌种保藏方法，都应进行验证，以确保在相应保存条 件下的菌种不会变异并且性能稳定。
• 菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代（GMP，药 典）
微生物实验室应制定菌种的保藏管理规程来规范菌种的来源、申购、保 管、转种传代、存储和领用等方面的要求，确保菌种的溯源性和稳定性； 防止试验用菌种因多次传代而失去典型生物学特征发生变异或死亡，保 证菌种长期正确、稳定，从而确保实验的灵敏度和重现性。
微生物实验室的质量管理
•菌种保存应有专人负责，加锁保存于冰箱中。 •实验室的标准菌株应来自CMCC（中国药品生物制品检定所医学菌种保 藏中心或ATCC（美国菌种保藏中心）等国际法定菌种保藏机构。有接 收、确认记录。 •菌种的转种等均应在超净工作台进行，以防污染。 •各种菌种应按规定时间接种，所有保藏的菌种均应贴有相应的标签，有 菌种清单。
• 培养箱、冰箱需在设备的每个腔室内放置经校准过的玻璃温度计，每天 检查设备腔室内的温度状况并且在日志上做好相应的记录。定期回顾每 个设备的温度记录数据，以考察设备的运行状态。
无菌实验室操作规程
无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物学研究和实验的重要场所，其操作规程对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将详细介绍无菌实验室操作规程的五个部分。
一、实验室准备1.1 清洁与消毒：无菌实验室应定期进行清洁和消毒，确保实验环境的无菌状态。
清洁应使用无菌纱布和无菌溶液，消毒则应选择适当的消毒剂，如酒精或过氧化氢。
1.2 实验器材准备：在进行实验前，必须确保实验器材的无菌状态。
实验器材应经过高温高压灭菌或使用无菌过滤器过滤，确保无菌操作的可靠性。
1.3 个人防护：进入无菌实验室前，实验人员应穿戴适当的个人防护装备，包括无菌手套、口罩和实验服。
这些装备能有效减少外界微生物的污染，保证实验的无菌性。
二、无菌技术操作2.1 消毒操作：在进行无菌实验前，必须进行适当的消毒操作。
这包括用酒精或火焰对实验台面、实验器材和手术刀进行消毒处理，以杀灭表面的微生物。
2.2 灭菌操作：在进行培养基、培养皿等实验材料的制备时，必须进行灭菌操作。
常见的灭菌方法包括高温高压灭菌、紫外线辐射灭菌等，确保实验材料的无菌性。
2.3 采样操作：在进行微生物采样时，必须采取严格的无菌操作。
这包括用无菌棉签或无菌吸管进行采样，避免外界微生物的污染。
三、培养基制备与使用3.1 培养基配制：在制备培养基时，必须按照一定比例将培养基粉末与无菌蒸馏水混合，并进行高温高压灭菌，以确保培养基的无菌性。
3.2 培养基使用：使用培养基时，必须采取无菌技术进行操作。
这包括使用无菌吸管或无菌移液器取出适量的培养基，并将其均匀涂布在培养皿上。
3.3 培养基保存：未使用完的培养基应保存在冰箱或低温冷藏室中，避免细菌的生长和污染。
同时，应定期检查培养基的无菌性，确保其质量。
四、细胞培养操作4.1 细胞传代：在进行细胞培养时，必须进行细胞传代操作。
这包括将细胞从旧培养皿中取出，用无菌吸管或无菌移液器转移到新的培养皿中，以保持细胞的健康和纯度。
4.2 细胞培养液更换：细胞培养液应定期更换，以保持培养液的无菌性和营养成分的充足。
无菌检查操作规程
1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
2.围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。
3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。
4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。
5.容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。
5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。
缓冲间及操作室均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。
5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。
在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。
5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。
取直径90mm双碟，在接种室点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。
5.1.4无菌室应准备好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75％酒精棉及拖鞋等。
5.2仪器、用具：5.2.1真空泵、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g）、抽滤瓶（500ml）、三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约5cm），孔径应在0.45±0.02μm )载玻片、洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。
兽用生物制品成品检验流程
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中检所无菌检查和微生物限度检查操作规范
中检所无菌检查和微生物限度检查操作规范无菌检查和微生物限度检查操作规范（中国药品生物制品检定所）一、无菌室的要求：无菌室是无菌检查、微生物限度检查的重要设备，面积不小于6平米，高度2.4-2.8m为宜。
建筑材料要光洁，不吸潮，无凸起，耐腐蚀，易清洗。
无菌室内部应六面光滑，无缝隙，里面连接处应呈凹凸形，不留死角。
操作间和缓冲间的门不应直对，缓冲间两个。
无菌室内采光面积要大，照明灯应镶嵌在天花板内，光照应分布均匀，光照度不低于300lux，电源开关应设在室外。
无菌室、缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯，每立方米2-2.5瓦，距实验台高度不超过1米，并应定期检查辐射强度，距1米处应不低于70微瓦/平方厘米，无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置，控制温度18-26℃，相对湿度40%-60%，操作间或净化工作台的洁净空气应保持与相临环境形成正压，不低于4.9帕。
操作区洁净度100级，操作间洁净度10000级，洁净度定期检查。
无菌室及缓冲间不得存放其他杂物，如培养箱。
用消毒液清洁无菌室操作台面，开启无菌室紫外灯和层流空气过滤30分钟以上。
无菌室的无菌程度，常用的沉降菌测定方法为：取营养肉汤琼脂平板3个，置无菌室的操作区台面左、中、右位置上，开盖暴露30分钟，在30-35℃培养2天后，计算菌落数。
用于无菌检查的无菌室或微生物限度检查的无菌室，细菌总数应小于3个，浮游菌每立方米应小于5个，否则，不能用于无菌检查和微生物限度检查。
二、培养基的准备1、培养基的制备：配制培养基的蒸馏水或去离子水应符合规定。
再称取需气菌、厌气菌培养基、真菌培养基的干燥培养基，加水溶化后，调节PH值，使灭菌后需气菌、厌气菌培养基的PH值为7.0-7.3，真菌培养基的PH值为6.2-6.6，分装、盖塞、灭菌，待用。
2、培养基灵敏度试验：培养基是无菌试验的基准物质，关系到无菌试验结果的科学、准确、可信度，因此，培养基灵敏度试验是无菌试验的重要组成部分。
无菌检查法标准操作程序要点
1目的建立一个无菌检查法标准操作程序，保证实验的准确性、可靠性。
2范围适用于原料、辅料及成品的无菌检查。
3职责微生物检验员遵照执行。
4内容无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
4.1 培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。
4.1.1 培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2〜25°C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.1.1.1 硫乙酵酸盐流体培养基胰酪胨15. 0g 氯化钠 2. 5g酵母浸出粉 5. 0g 新配制的0. 1 % 刃天无水葡萄糖 5.0g 青溶液 1.0mlL-胱氨酸0. 5g 琼脂0. 75g硫乙醇酸钠0.5g 水1000ml(或硫乙醇酸）（0.3ml)除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节p H , 使灭菌后在25℃的p H 值为7.1 土0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。
生物制品无菌检验规程
生物制品无菌试验规程生物制品不得含有杂菌（有专门规定者除外），灭活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。
在制造过程中应由制造部门按各制品制造及检定规程规定进行无菌试验，分装后的制品须经质量检定部门做最后检定。
各种生物制品的无菌试验除有专门规定者外，均应按照本规程的规定进行。
1 抽样1.1原液及半成品原液及半成品应每瓶分别进行无菌试验，其抽样量应至少为0.1%，但不得少于1.0ml。
1.1.1 大罐稀释的制品抽样数量不得少于10ml。
1.1.2 原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽验。
1.2 成品每亚批均应进行无菌试验，样品应随机抽取，应具有代表性（包括分装过程的前、中、后样品）。
1.2.1分装量在100支（瓶）或以下者抽检不少于5支，101～500支（瓶）者抽检不少于10支（瓶），501～10000支（瓶）者抽检不少于20支（瓶，10001支（瓶）以上者抽检40支（瓶）。
1.2.2每瓶装量20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干200瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。
6～20ml抽检量加倍。
5ml和5ml以下者按1.2.1项抽检。
1.3凡规定需作支原体检查的制品，均应在半成品时按亚批进行检查，成品可不再做。
2 无菌试验用培养基（培养基处方可附录1）2.1 检查制品中本菌是否存活应采用适于本菌发育生长的培养基（在半成品时检查，有专门规定者除外）。
2.2 检查需氧性和厌氧性杂菌应采用硫乙醇酸盐培养基。
检查不含汞类防腐剂制品中的需氧性和厌氧性杂菌时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。
检查霉菌和腐生菌应采用改良马丁培养基。
检查混浊制品可采用不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基。
检查活菌苗时可加大琼脂含量，做成斜面。
2.3 检查支原体应采用猪胃消化液半固体或牛心消化液半固体培养基。
2.4 生物制品无菌试验用培养基亦可用经检定合格的干燥培养基配制。
2.5 无菌试验培养基的灵敏度，乙型溶血性链球菌（32210株）应达到10-8，短芽胞杆菌（7316株）和生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）应达到10-7，白色念珠菌（ATCc 10231）和腊叶芽枝霉应达到10-6。
无菌检验标准操作规程
目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。
责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容：1、标准依据：《中国药典》202X年版二部附录XI H。
2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。
检查工程包含需气菌、厌气菌及真菌检查。
假设供试品符合该项检查方法的有关规定，仅说明了在该检验条件下未发觉微生物污染。
3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级〔C级〕背景下的局部百级〔A级〕的单向流地域内或隔离系统中进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
预防微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
一般检验需对试验环境进行监控。
5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。
4、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
6、检验数量及检验量：6.1、接种每种培养基所需的最少检验数量:2%或10个〔取较少者〕，供试品无菌检查假设采纳薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对比用；假设采纳直接过滤法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对比用。
6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量〔100ml≤V≤200ml〕，采纳薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性同意，应将全部容器内的全部内容物过滤。
7、细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。
8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器〔针头〕、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、一次性使用集菌培养器。
9、消毒剂配制：9.1、75％乙醇溶液〔配制酒精棉球用〕。
9.2、0.2％新洁尔灭溶液〔配制消毒棉球用〕。
9.3、2％来苏尔溶液〔配制消毒棉球用〕。