冷冻切片方法及注意事项
冰冻切片实验技术
实验技术：组织切片的制备点击次数：350 发布日期：2009-11-9 来源：长沙赢润仅供参考，谢绝转载，否则责任自负组织切片的制备二）切片方法-细节注意1 切片方法的选择光镜和免疫组化研究的切片一般为5μm，而神经组织切片为20-100μm，有利于追踪神经纤维的走行。
1.1 冰冻切片是免疫组织化学中最常用的一种切片方法，能够最大量的保存抗原、操作简便，主要适用于不稳定的抗原（如检测细胞膜的某些抗原成分），但标本来源受限。
冰冻切片时,组织中水分易形成冰晶,影响抗原定位。
冰晶小而多，对组织结构损害大。
因此可采用以下措施减少冰晶的形成：①速冻，缩短组织从-33～-43℃的时间。
具体方法是：⑴干冰-丙酮（乙醇）法：将150-200ml丙酮（乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不冒气泡时，温度可达-70℃。
用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（乙醇）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。
将组织（约1cm×0.8cm×0.5cm）t投入异戊烷内速冻30-60s后取出，置-80℃低温保存或置恒冷冰箱内以备切片；⑵液氮法：将组织块平放于软塑料瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾。
此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
取出组织块后立即置入-80℃冰箱贮存或作恒冷切片。
②将组织置于20%-30%蔗糖溶液中1-3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。
冰冻切片一般用恒冷切片机。
切片后如不染色，必须将切片吹干，贮存于低温冰箱内，进行短暂预固定干燥后贮存于低温。
【目的】组织标本必须首先被制成组织切片，再经过染色处理，然后才能在显微镜下进行临床诊断和科学研究。
【原理】苏木素染色结合伊红染色是常规组织学染色技术，也称为H & E染色。
冰冻切片制片实验步骤及注意事项
冰冻切片制片实验步骤及注意事项冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片制片实验步骤1、组织固定：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。
将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
2、脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底。
3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，组织周围滴上OCT包埋剂，将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。
4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚°8-10μm。
将干净的载玻片平放于切出的组织片上方即可将组织贴于载玻片上。
-20°保存备用。
注意事项1、组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2气（-78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（-80℃）③ 液氮（-190℃）④ 液氮冷却的丙烷（-19℃）。
液氮适用于组织化学，较安全。
缺点：组织块易发生龟裂。
2、为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。
但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。
故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定（10分钟左右）固定，可显示琥珀酸脱氢酶。
3、电镜出现后，需要保存细胞的超微结构，以4%缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7.）84ml；蔗糖8g）固定较好。
这些固定液主要用于水解酶，而不适于许多氧化还原酶和转移酶。
冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片制作方法与注意事项冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。
下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。
一、冰冻切片的制作方法：1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。
2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。
3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。
4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。
5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。
6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。
7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。
二、冰冻切片的注意事项：1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。
液氮和刀片冷冻架是常用的设备。
2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。
刀片的选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀片可以提高切片质量。
3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。
切片太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。
4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。
在切割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。
5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。
6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。
冰冻切片的操作方法有哪些
冰冻切片的操作方法有哪些冰冻切片是一种常见的食物处理技术，它可以确保食材在冷冻过程中保持原始的形状和质地。
下面是关于冰冻切片的操作方法的详细说明。
1. 准备工作在进行冰冻切片之前，首先需要准备好一些必要的工具和材料。
这些包括切菜刀、切菜板、塑料袋或保鲜膜、冷冻盒或密封袋以及适量的冰块。
2. 选择适合冰冻切片的食材不是所有的食材都适合冰冻切片。
最适合冰冻切片的食材通常是那些有较高水分含量和较低油脂含量的食材，例如水果、蔬菜和肉类。
这些食材冰冻后容易切片且切片后质地会更加口感丰富。
3. 清洗和准备食材在切片前，需要彻底清洗食材以确保其卫生。
如果有必要，去掉果皮或蔬菜的外皮。
此外，根据需要将食材切成适当大小的块状，以方便在冷冻过程中进行切片。
4. 将食材放入塑料袋或密封袋中把要切片的食材放入塑料袋或密封袋中，然后将袋子密封。
确保将食材放在一层，并尽量避免重叠。
这有助于确保冷冻后食材可以更容易地进行切片。
5. 冷冻食材将装有食材的塑料袋或密封袋放入冷冻盒或冷冻室中。
在冷冻过程中，密封袋中的食材将逐渐凝固，并且保持原始的形状和质地。
通常情况下，将食材冷冻4-6小时即可。
6. 取出食材并切片冷冻时间到达后，从冰箱中取出袋子。
使用切菜刀和切菜板，将食材迅速切成薄片。
由于食材已经冷冻，这将更容易进行。
7. 存储和使用切片食材将切片食材放回密封袋中，并将其重新放入冷冻器中。
这样可以确保食材保持新鲜和安全。
在需要使用切片食材时，只需取出所需数量即可，而无需解冻整个食材。
冰冻切片是一种方便快捷的食材处理方法，可以让食材保持原始的形状和质地。
通过以上的操作方法，您可以轻松地进行冰冻切片，并在需要时使用这些切片食材来制作各种美食。
请记住，在进行冰冻切片之前，请确保食材的新鲜和卫生，并按照适当的贮存方式保存切片食材，以确保其品质和食用安全。
冷冻切片方法及注意事项
一、实验前准备清理实验台及仪器。
开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（- 15~-20 ℃*）。
准备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品。
二、取材解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡,使细胞内结构移位。
（注：取材中目的标本既要明确也要确保其结构的完整性，应避免不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度最好不要超过3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。
甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。
）三、冷冻切片1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。
2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
3、调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μm间。
4、调好防卷板。
制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。
切片时，以切出完整、平滑的切片为准。
切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带,可避免组织摊片过程中皱折,保证组织结构的完整及切片的美观。
注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。
常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。
B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。
（OCT包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。
）②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30秒钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织周围再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。
冰冻切片免疫组化染色步骤
冰冻切片免疫组化染色步骤引言冰冻切片免疫组化染色是一种常用的实验方法，用于研究细胞和组织的分子表达。
它结合了冷冻样本的切片技术和免疫组织化学染色的原理，能够可视化特定分子在组织中的位置，从而帮助我们理解生物过程和疾病机制。
本文将介绍冰冻切片免疫组化染色的步骤和注意事项。
步骤一：样本制备1.收集组织样本，根据需要进行切割和处理。
2.快速冷冻组织样本，可用液氮或乙醚等方法冷冻，并保存在低温环境中。
步骤二：切片制备1.取出冷冻样本，将其置于切片机或切片冷冻器中。
2.进行组织切片，通常厚度为5-10微米，利用切片刀或者切片冷冻器的微调装置。
3.将切片收集在清洁的载玻片上，可以使用专门的载玻片来增强切片与载玻片间的附着力。
步骤三：固定和脱水1.将载玻片上的切片放入4%的中性缓冲福尔马林缓冲液中固定细胞和蛋白质。
2.固定15-30分钟后，用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将福尔马林去除。
3.将切片脱水，使用逐渐浓度的乙醇和脱水溶液，如70%乙醇、95%乙醇和100%乙醇。
步骤四：抗原修复1.对于有些抗原，如细胞核抗原，需要进行抗原修复。
这可以通过热、酸或酶消化等方法进行。
2.一种常用的抗原修复方法是将切片置于高温或高压下进行热诱导抗原修复。
步骤五：阻断和孵育1.使用蛋白质阻断剂，如牛血清蛋白、BSA等，在切片上进行孵育，以防止非特异性结合。
2.孵育时间通常为30分钟至1小时。
步骤六：一抗孵育1.加入一抗，即特异性抗体，与切片上的靶分子结合。
2.一抗浓度和孵育时间根据实验需要和抗体质量进行优化。
步骤七：洗涤1.使用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将未结合的一抗去除。
2.洗涤时间和次数根据实验要求和抗体特性进行优化。
步骤八：二抗孵育1.加入荧光标记的二抗，与一抗结合形成复合物。
2.二抗可以识别一抗的种类，常见的二抗有荧光标记的抗鼠IgG、抗兔IgG等。
步骤九：洗涤1.使用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将未结合的二抗去除。
肿瘤组织冷冻切片步骤
肿瘤组织冷冻切片步骤肿瘤组织冷冻切片是一种常用的组织学技术，用于研究和诊断肿瘤。
它可以快速制备组织切片，保留细胞和组织的形态特征，并可进行进一步的染色和分析。
本文将介绍肿瘤组织冷冻切片的步骤以及相关注意事项。
步骤一：取样首先，需要从患者体内获取肿瘤组织样本。
这可以通过手术或活检等方式进行。
在手术过程中，医生会尽可能地采集到代表性的肿瘤组织，并将其放入含有生理盐水的容器中。
步骤二：固定为了保持组织的形态结构和化学成分，需要对取得的样本进行固定处理。
最常用的固定剂是10%缓冲福尔马林溶液（10% formalin），它能够使蛋白质凝固并保持其形态。
将取得的样本浸泡在足够量的10%缓冲福尔马林溶液中，通常需要固定24小时。
固定时间的长短可以根据样本的大小和类型进行调整。
步骤三：包埋在固定完成后，需要将样本进行包埋以便后续处理。
包埋是将组织置于固化剂中，使其形成坚固的块状，方便切片。
首先，将固定好的组织样本转移到70%乙醇溶液中进行脱水处理。
随后，使用清洁的毛刷将组织表面上的血液和其他污物清洗干净。
接下来，将组织样本浸泡在甘油溶液中进行透明化处理。
透明化是为了去除乙醇并使组织更易于渗透冷冻剂。
最后，将透明化处理后的组织样本放入冷冻剂（如液氮）中进行冷冻。
冷冻过程应尽量快速以避免组织损伤。
步骤四：切片在完成冷冻过程后，可以开始制备切片。
这里使用的是冷刀法（cryostat method），即利用一台设备称为“冷刀”来制备切片。
首先，将经过冷冻处理的组织块放入冷刀中，并调整刀片的角度和厚度。
通常，切片的厚度为4-6微米。
然后，启动冷刀设备，使其开始制备组织切片。
冷刀会通过低温和微震动的方式将组织块切割成薄片，并将其收集在载玻片上。
步骤五：染色和分析制备好的组织切片可以进行进一步的染色和分析。
最常用的染色方法是荧光染色和免疫组化染色。
荧光染色可以通过使用荧光标记的抗体来检测特定蛋白质或核酸序列。
这种方法可以提供高度特异性和灵敏度，并可用于观察细胞内分子的定位和相互作用。
冰冻切片注意事项
冰冻切片注意事项冰冻切片是一种常用的实验技术，在科学研究、医学诊断和药物开发中起着关键作用。
这种技术可以将组织样本以无损坏的方式保存，并用于后续的显微镜观察和分析。
然而，要获得高质量的冰冻切片需要注意一些重要的事项。
以下是一些关键的注意事项。
1.选择合适的切片仪器和材料：要获得最佳的切片效果，应选择高质量的切片仪器和材料。
切片仪器应具备高速度和高精度的切割能力，并且能够保持适宜的温度和湿度。
切片材料应选择具有较好的冷冻保护性能和切割性能的材料。
2.适当的标本处理：在进行冰冻切片前，标本应进行适当的处理。
首先，标本应被固定以保持其形态和结构的稳定性。
常用的固定方法包括冷冻固定、化学固定和生理盐水固定等。
其次，在进行冷冻切片前，标本应进行充分的去水处理，以使切片的质量更好。
3.适宜的切片温度：切片温度是决定切片质量的重要因素。
一般情况下，切片温度应尽量低，以减小标本的结构变形和切割的损伤。
通常，切片温度应控制在-20℃至-30℃之间。
4.适当的切片速度：切片速度是决定切片厚度和切片质量的关键因素。
切片速度过快会导致切片厚度不均匀，切片速度过慢则容易引起标本的变形和损伤。
一般情况下，切片速度应适中，并且应根据不同的标本类型进行调整。
5.切片后的处理：切片后，切片应立即进行处理，以防止切片的结构变形和氧化。
处理方法包括立即放入冷冻保存或石蜡包埋等。
6.切片的储存和保存：冰冻切片在使用前需要进行储存和保存。
一般情况下，切片应保存在低温环境中，以保持其形态和结构的稳定性。
冷冻切片的保存时间一般较短，通常为几天至几周。
7.切片质量的评估：为了确保冰冻切片的质量，应对切片进行适当的评估。
评估的方法包括显微镜观察和组织学染色等。
通过评估，可以发现切片中存在的问题，并采取相应的措施进行改进。
总之，冰冻切片技术在科学研究和医学诊断中具有重要的应用价值。
遵循上述的注意事项，可以获得高质量的冰冻切片，从而提高实验和诊断的准确性和可靠性。
冷冻切片机使用注意事项
冷冻切片机使用注意事项
冷冻切片机是一种常见的实验室设备，主要用于制备组织切片。
正确使用冷冻切片机不仅能够提高切片质量，还能延长设备的使用寿命。
下面将介绍一些使用冷冻切片机的注意事项。
使用冷冻切片机前，必须先进行设备的准备工作。
正确操作冷冻切片机也是非常重要的。
首先，将待切割的组织样本冷冻至适当的温度，以保持样本的完整性和切片质量。
然后，将冻结的样本固定在切片机的刀座上，并将切片刀片调整到合适的位置。
在切片过程中，要保持手部稳定，避免晃动或用力过猛，以防止切片时产生的抖动或切割不平整。
同时，要注意切片速度的控制，过快或过慢都会影响切片质量。
第三，切片后的样本需要进行适当的处理。
切片完成后，将切好的样本放置在适当的载玻片上，并用适量的生理盐水或缓冲液进行浸泡。
然后，可以根据需要进行染色或其他后续处理步骤。
在处理过程中，要避免样本受到外界环境的污染或损坏。
使用完冷冻切片机后，要进行及时的清洁和维护。
首先，将切片刀片和刀座取下，用生理盐水或缓冲液清洗干净。
同时，要注意清洗过程中的安全，避免刀片或刀座造成伤害。
然后，将冰盒和其他部件进行清洗和消毒，保持设备的卫生和无菌性。
通过以上的注意事项，我们可以正确使用冷冻切片机，提高切片质量，并保护设备的使用寿命。
同时，在使用过程中要注意安全，避免发生意外事故。
希望本文对大家使用冷冻切片机有所帮助。
冰冻切片机使用说明
冰冻切片机使用说明一、前言二、产品组成配件包（切片刀、导向条、收纳盒等）三、使用方法1.准备工作-确认工作环境干燥、通风，并确保有充足的操作空间。
-检查电源电压是否符合器具要求，是否接地良好。
-将主机放置在稳定的平坦台面上，确保主机处于水平状态。
-打开器具箱，将配件包中的切片刀、导向条等取出。
2.安装-将主机的钢带插槽对准配件包中的导向条，轻轻将导向条插入主机中。
-确认导向条安装牢固，无松动。
3.切片准备-将待切片的食材洗净、去皮，并将其切割成适合器具进料口的大小。
-将切片刀放置在配件包中的收纳盒中，提前冷冻至-18℃。
-待切割食材入冷冻刀片之前，先将其放入冰箱冷冻室进行冷冻，待其表面结冰。
4.开始切割-先将主机连接电源，并将电源开关打开。
-将待切割的食材缓缓放入刀片之间，使用推料器帮助推送食材。
-如遇到切片时食材粘附在刀片上，可停止机器运行，清理刀片，然后继续操作。
-使用完毕后，及时停止机器运行，并将电源开关关闭。
5.清洁和维护-在清洁和维护之前，务必断开电源，并等待切片刀完全停止转动。
-用湿布擦拭机器外壳和刀片，不要使用有机溶剂或者腐蚀性清洁剂。
-定期检查导向条的稳定性和切片刀的锋利程度，如有问题及时更换或维修。
-将切片刀放回配件包中的收纳盒中，保证器具的整洁。
四、注意事项-请勿用手直接接触切片刀，以免造成伤害。
-在使用过程中，注意保持适当的距离，避免刀片和身体接触。
-请勿将机器放在不稳定的位置，以免发生意外。
-在清理和维护过程中，务必断开电源，避免发生电击。
-请勿将机器用于除食品外的其他物品切割，以免损坏机器和产生危险。
-请勿将机器用作其他目的，以免发生意外。
五、故障排除故障：刀片无法转动解决办法：断开电源，检查机器内是否有食材卡住，清理食材，并重新启动。
故障：刀片转速慢解决办法：断开电源，检查机器内是否有异物卡住切片刀，清理异物，并重新启动。
故障：切片后食材较粗解决办法：查看切片刀是否磨损，如磨损应及时更换。
冰冻切片制作及质量控制
冰冻切片制作及质量控制冰冻切片是一种常用的组织学研究方法，广泛应用于生物医学研究领域。
它可以保持组织的原始形态和结构，适用于光镜、电镜和免疫组化等多种研究方法。
在进行冰冻切片制作时，需要注意一些关键步骤和质量控制措施，以确保获得高质量的切片材料。
1.样品准备样品准备是冰冻切片制作的第一步。
样品可以是动物组织或细胞，也可以是植物组织。
在样品准备过程中，需要注意以下几点：-样品的自然纹理：对于动物组织，应将样品固定在适当的溶液中，以保持其自然纹理。
对于植物组织，应注意保持组织的形态和结构。
-样品的尺寸：样品的大小应适合冰冻切片仪的切片室大小。
过大的样品可能无法完全冻结，导致切片质量降低。
2.样品冷冻将样品冷冻是冰冻切片制作的关键步骤之一、样品冷冻的目的是在不损坏样品的情况下将其冷冻成脆性，以便后续切片。
以下是几种常用的样品冷冻方法：-空气冷冻：样品通过将其放置在冷冻剂中（如液氮或酒精等）迅速冷冻，使其变得脆性。
这种方法适用于较小的样品。
-次凝胶冷冻：将样品浸入液体凝胶中，使其均匀冷冻。
这种方法适用于较大的样品。
-快速冷冻机冷冻：使用快速冷冻机将样品超快速冷冻。
这种方法可以快速冷冻样品，并保持其形态和结构。
3.样品切片样品冷冻后，可以使用冰冻切片机将其切成薄片。
以下是一些注意事项：-选择合适的切片机：合适的切片机应具有良好的冷冻性能和切割能力。
切片机的刀片应尖锐，以便切割样品。
-控制切片厚度：切片厚度直接影响到后续研究结果的准确性。
根据实验需求选择合适的切片厚度，并保持在一定范围内的一致性。
-控制切片速度：切片速度应适中，过快可能导致切片不均匀，过慢可能导致切片丢失或拉长。
-冷藏切片：在切片过程中，应将切好的切片放入冷冻盒中，以防止其变形或融化。
冷藏过程中应注意避免切片受压。
4.质量控制为了确保冰冻切片的质量，需要进行一定的质量控制措施：-内外标准：在切片中加入内外标准物质，以确保切片的准确性和可比性。
冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片制作方法与注意事项一、固定：固定即借助化学试剂是组织和细胞中的有机和无机成分凝固或沉淀，停止发生死后组织变化，尽量保持其活体状态的过程。
固定的方法有浸泡固定法，注射、灌注固定法，蒸汽固定法，本实验用的是注射、关注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难流入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定，就可采用灌注或灌流固定法。
固定时将固定液直接注入动物的血管，经血管分支到达整个组织或全身，从二十只得到充分固定。
固定液分为单纯固定液和混合固定液。
单纯固定液有甲醛、乙醇、氯化汞、醋酸、苦味酸等，混合固定液包括Bouin液、Zenker液、Carnoy液、中性甲醛液等。
本实验用的固定液为4%甲醛（10%福尔马林）。
固定后的处理：用水配制的固定液固定后应用流水冲洗，可是组织中的固定液随时溢出和随时洗去。
对小动物和脑组织等，应以浸泡为主，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。
【注意事项】1.固定要及时。
2.组织块的大小要合适。
3.应有足够的固定液，一般与组织块的比例为20:1，容器勿过小，组织勿过多。
4.固定时间要合适，甲醛固定液一般固定两天左右，第一天要更换一次固定液。
5.要进行促使固定，在固定期间轻轻地搅动组织或摇动容器使组织移动有利于固定液的渗透，适当提高温度也可缩短固定时间。
6.选择合适的固定液。
7.一次取材数量过多时，应对取材部位和顺序进行编号，并及时做好记录。
二、脱水脱水就是用某些溶剂逐步将组织块内的水分置换出来的过程，使用的试剂称为脱水剂。
脱水剂有非石蜡溶剂的脱水剂如乙醇、丙酮等，和脱水兼石蜡的脱水剂如正丁醇等。
本实验所用的是乙醇脱水。
乙醇是最常用的脱水剂，其优点是脱水能力强，即能与水相混合，又能与透明剂相混，并可使组织硬化，便于切片。
缺点是穿透组织的速度快，且容易使组织收缩、变脆。
为克服这一缺点，在一般脱水中，应采用循序渐进的方法，逐步升级，经一系列不同浓度的乙醇，使组织中的水分逐渐被乙醇代替。
冷冻切片方法及注意事项
冷冻切片方法及注意事项冷冻切片是一种常用的组织学研究方法，它能够帮助研究人员观察和分析生物组织的结构和功能。
下面将详细介绍冷冻切片的方法及注意事项。
1.组织采集：首先需要选择适当的生物组织样本，可通过手术切取、尸检或动物献体等方式获得。
2.组织处理：取出组织样本后，应立即进行处理，以防止样本脱水和坏死。
可将组织放入理化盐水或生理盐水中，避免干燥、坍塌或变形。
3.固定组织：使用适当的固定剂对组织进行固定，以保持组织结构的完整性。
常用的固定剂有福尔马林、戊二醛、乙醛等。
固定时间应根据组织大小和厚度进行调节，较小的组织可以固定2-4小时，而较大的组织可能需要24小时以上。
4.预冷冻：固定后的组织应在冷冻前进行预冷冻处理，以提高冷冻切片的质量。
预冷冻的方法包括放入冷冻剂中（如液氮、干冰等）或将其放入冰盒中进行冷藏，使组织完全冷却。
5.冷冻切片：使用冷冻切片机将预冷冻的组织切成薄片。
为了获得更好的切片结果，刀片的角度和厚度需要进行适当的调整。
同时，切制时需要快速而轻柔地移动切片机，以防止组织被拉伸或损坏。
6.切片收集：将切片收集在玻片上，通常使用细长形的切片夹或切片板来收集切片。
确保切片不受损并保持平整。
7.切片保存：将切片放入适当的保存溶液中，如PBS（磷酸盐缓冲液）或甘油等，以防止切片干燥和变形。
可以根据需要选择冷藏或冷冻保存。
冷冻切片需要注意以下事项：1.样本质量：选择新鲜、完整的组织样本，避免坏死、变性或损伤的组织。
2.固定剂选择：选择适当的固定剂进行组织固定，以保持组织结构的完整性。
3.冷冻速度：组织应尽快冷却，以避免组织脱水或破坏。
冷冻速度过慢可能会导致晶体形成，影响切片质量。
4.切片机状态：保持切片机的良好状态，定期检查刀片的锋利度和调整角度，以确保切片的质量。
5.切片技巧：需要轻柔、均匀地切片，避免组织被拉伸或扭曲。
同时，切片过程中需要快速操作，以减少冰晶对组织的破坏。
6.切片收集：收集切片时要避免切片叠加或悬浮，以免影响切片的观察和分析。
冷冻切片操作指南
冷冻切片操作指南在医学、生物学和食品科学等领域中，冷冻切片是一种重要的技术，用于将样品冷冻固化后，切割成薄片以供进一步观察和研究。
本文将为读者提供一份冷冻切片操作指南，介绍冷冻切片的基本原理、实验室操作步骤和注意事项。
一、冷冻切片的基本原理冷冻切片是将样品通过快速冷冻技术使其迅速固化，然后使用切片机或显微切片机将固化的样品切割成薄片。
冷冻切片的目的是保留样品的形态和结构，避免切片过程中的伤害和变形。
冷冻切片一般适用于需要保留细胞和组织结构的实验。
二、实验室操作步骤1. 样品准备：将待切割的样品准备好，可以是细胞、组织或食物等。
样品处理过程中需要注意保持样品的完整性和活性。
2. 冷冻固化：将样品放置在冷冻剂中，例如液氮或冷冻盒中的冰水混合物中，进行快速冷冻固化。
冷冻时间需要根据不同样品的特性进行优化，一般在几分钟至数小时之间。
3. 选用切片仪器：根据实验需求，选择合适的切片仪器，可以是手动的切片机或半自动/全自动的显微切片机。
4. 切片调整：根据实验需求，调整切片仪器的切割参数，例如切片厚度和速度等。
通常，薄片的厚度在几微米至数十微米之间。
5. 切片过程：将冷冻固化的样品放置在切片仪器的切片台上，固定好，并且调整好切割参数。
使用手动或电动操作切片仪器，将样品切割成所需的薄片。
6. 切片收集：将切割好的薄片收集起来，可以使用切片刷或显微镊子等工具进行操作。
注意保持薄片的完整性和干燥，避免受到污染和损坏。
7. 切片处理：根据实验需求，进行切片的进一步处理，例如染色、免疫组化等。
三、注意事项1. 样品处理过程中需要注意保持样品的完整性和活性，避免样品受到损伤和变性。
在样品处理过程中，可以使用缓冲液或甘油等物质进行保护。
2. 冷冻固化的时间和温度需要根据不同样品的特性进行优化。
过长或过短的冷冻时间都可能导致样品质量下降。
3. 在选择切片仪器时，需要根据实验需求和预算等因素进行权衡。
手动切片机相对便宜，但操作较为繁琐；半自动/全自动的显微切片机操作更为方便，但价格较高。
冰冻切片
其他信息
其他信息
冰冻干燥 原理 为冰冻组织保持高度真空，直到去除组织中的水分。 过程 小块组织骤冷→立即在真空干燥脱水（－30～－40℃）冰升华，水气去除，不会发生酶的弥散→材料干后， 升到室温浸于石蜡或碳蜡包埋。 特点 能出色地保存组织的酶活性，还有助于保持组织的结构。但仪器贵，需时长。 冰冻替代法 原理 低温下用液体脱水剂取代组织中的水分。
应用
应用
（1）在手术进行中，突然发现病人的病变与原诊断，原定手术方案不相符合，或者怀疑时，需要病理确定。 （2）了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其 它的治疗措施。 （3）对于已确定为恶性肿瘤的患者，则需要了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤组织。 （4）在做剖腹探查时所发现的肿块或者异样的组织。 （5）显示组织中的脂肪和脂类物质，这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研组织等。 （ 6 ） 某 些 酶 的 显 示 如 AT P 酶 ， 琥 珀 酸 脱 氢 酶 等 。 （7）神经病理学技术中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏 法等。 （8）对某些物质所进行的免疫荧光的研究。
冰冻切片
在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法
01 定义
03 使用原因
目录
02 应用 04 制作方法
05 优缺点
07 其他信息
目录
06 注意事项
基本信息
在手术台上取下的组织放到冷冻机里面-20度左右冻成硬块，制成切片用于快速诊断,该诊断仅作参考，应以 石蜡诊断为主。
定义
定义
冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其 制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻 切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年 前被认为是非常重要的技术，也逐步被淘汰了。当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到重视。
冷冻切片要注意什么
冷冻切片要注意什么冷冻切片是一种常见的切片方法，常用于生物组织的切片，以便于后续的检测和分析。
在进行冷冻切片时，需要注意以下几点：1. 样品的准备样品的准备是冷冻切片的首要步骤。
样品的处理方法可能会因为样品的来源和需要的扫描方法等因素而有所不同。
总的来说，常见的样品处理方式包括特定的固定液处理、涂覆有机材料等。
如果样品过于薄或过于厚，都会对切片效果产生影响。
因此，在切片前要确保样品质量良好，且符合所需要求。
2. 切片的温度在冷冻切片的过程中，样品温度是需要进行严格控制的，同时，也要保证切片设备的温度稳定。
一般情况下，冷冻切片的温度在-20到-50之间，具体温度要根据样品的情况进行调整。
在样品切割过程中，切片机要保持足够的冷却能力，以保证切片的质量。
如果切片机温度不足，可能会导致样品破裂或切片不均匀。
3. 切片机的选择不同的样品和切片要求需要不同的切片机。
对于较硬的样品或者需要制作大量薄切片的情况，选择稍微强一点的轮廓切片机。
对于一些细胞和肌肉等柔软的样品，可以使用冷冻微扫描切片机，以获得更高清晰度的切片效果。
4. 切片后的保存切片后要进行保存，以便后续进行染色和显微镜分析等操作。
不过，一定要注意样品的保存条件。
保存时，要避免温差过大、光、氧气或潮湿等环境影响，同时要遵循防止细菌和霉菌污染的措施，以确保样品的稳定性。
冷冻切片的现代CCD摄像机和显微镜能力很大程度上depends on 选择的样品制备方法。
为了实现这种高功率，必须注意上述几点的细节。
与传统切片技术相比，冷冻切片技术有更多精确测量的优势。
但由于这项技术的复杂性，需要耗费很多时间和精力来管理。
只有在细致的样品准备、精度正确的设备和适当的卫生条件下，才能获得最佳的冷冻切片效果。
冷冻切片操作指南
冷冻切片操作指南
随着科学技术的进步，冷冻切片技术被广泛应用于多个领域，包括生物学、医学和材料科学等。
冷冻切片技术可以帮助研究人员了解物质的微观结构和特性，为相关研究提供有力的支撑。
本文将为您介绍冷冻切片的操作指南。
一、准备工作
1. 准备好所需材料
在进行冷冻切片之前，您需要准备好以下材料：
- 组织样本：可以是动物组织、植物组织或其他材料。
- 冷冻切片仪：根据需要选择适当型号的冷冻切片仪。
- 切片刀：保持切片刀的锋利度，以确保切片质量。
- 冷冻剂：例如液氮或乙醇。
- 切片架：用于放置切片。
2. 样本固定和冷冻
首先，您需要对样本进行固定和冷冻。
固定样本的方法根据研
究目的的不同而有所差异。
对于生物组织，常用的固定剂包括甲醛、乙酸乙酯等。
接下来，将固定的样本放入冷冻剂中进行冷冻。
确保
样本充分冷冻，以提高切片质量。
二、冷冻切片操作步骤
1. 准备切片仪
根据切片仪的使用说明准备切片仪，确保各项设置都正确。
如
有需要，调整刀片的角度和速度，以获得最佳的切片效果。
2. 切片样本
将冷冻的样本置于切片仪的切片架上，并将切片架放入切片仪中。
调整刀片的位置，使其与样本接触。
启动切片仪，开始切片操作。
切片时应保持手部稳定，以避免切片变形或切片质量下降。
3. 收集切片
使用显微镜观察切片，将切片以适当的方式收集起来。
可以使
用刷子、针头或切片网格等工具收集切片。
注意切片的顺序和位置，以便后续的实验操作和图像分析。
冰冻切片的步骤及注意事项
冰冻切片的步骤及注意事项嘿，友友们！今天咱来唠唠这冰冻切片的那些事儿，可别小看它哟，这里头的步骤和注意事项那可不少呢！
先说这第一步，取材那可是相当关键呐！就好比你要做一道超级美味的菜，原料得新鲜吧！取材的时候就得眼疾手快，别磨蹭，不然那材料都不新鲜啦！而且取的位置也得准，不然切出来的片子可就不地道喽。
然后就是速冻啦，这就像是给材料来个急速冰镇。
嘿，可别慢悠悠的，得赶紧把它冻得邦邦硬，不然切片的时候可就不好玩啦。
想象一下你切个软不拉几的玩意儿，那能成啥样！
接着就是切片啦，这可是个技术活。
就跟咱削苹果似的，你得手法稳，不然切出来那一片片厚的厚，薄的薄，那可不行！我跟你说，这时候就得开启“大师模式”，每一刀都得恰到好处，别整那些歪七扭八的片子出来。
哎呀，这过程中可得注意好多事儿呢。
比如说温度得控制好，太高了不行，太低了也不行。
温度不对，那切出来的片子不是皱皱巴巴就是碎成渣，这可不是咱想要的结果嘛。
还有呢，切片机也得爱护好，就跟咱的宝贝似的，不然它捣乱起来，你可就有的愁喽。
有时候啊，这冰冻切片就跟一场战斗似的，你得和各种因素斗智斗勇。
一不小心哪里出点差错，那片子可不就给你颜色看啦！但咱也不能怕呀，就得勇敢面对，慢慢摸索，找到最佳的方法。
我还记得刚开始接触冰冻切片的时候，那真叫一个手忙脚乱啊。
不是这儿出问题就是那儿不行，简直让我哭笑不得。
不过呢，随着经验的积累，现在咱也能轻松应对啦。
总之呢，冰冻切片虽然有些麻烦，但只要咱掌握了步骤和注意事项，加上那么一点点的耐心和细心，就一定能把它搞定！友友们，加油干吧，让我们在冰冻切片的世界里闯出一片天！。
冰冻切片的步骤要求和作用
冰冻切片的步骤要求和作用冰冻切片是一种常见的组织切割技术，它使用低温冷冻样品，然后使用切片机将样品切成非常薄的切片。
冰冻切片技术是生物学研究和医学诊断中不可或缺的重要工具。
它可用于观察许多样品的内部结构，如细胞、组织和器官等，进一步了解它们的功能和形态。
下面将详细介绍冰冻切片的步骤要求及其作用：1.样品固定：在进行冰冻切片前，样品需要进行固定以保持其形态、结构和细胞凝胶状态。
常见的固定方法包括乙醛固定和冷凝固定。
选择适当的固定方法取决于待测样品的特性和研究目的。
2.固定样品冷冻：在进行冰冻切片前，固定的样品需要在低温下冷冻。
冷冻操作的关键是控制冷冻速度和温度，以防止样品在冷冻过程中发生损伤。
常见的冷冻方法包括液氮冷冻和冷冻板冷冻。
液氮冷冻可以实现更快的冷冻速度，而冷冻板冷冻则可以更好地控制冷冻温度和速度。
3.制备切片：冷冻后的样品需要进行切片。
切片机通常用于切割样品。
在切片机工作之前，需要将切片刀冷却到适当的温度，以防止冻结的样品在切割过程中解冻。
然后，将冷冻样品放在切片机上，并调整合适的切片参数，包括切片厚度和速度等。
4.收集切片：完成切割后，收集切片并放置在适当的载玻片或载片上。
注意不要损坏或弄丢切片，同时避免切片之间的交叉污染。
将切片放置在载片上后，可以进行染色、免疫染色或其他实验处理。
5.形态学检查：切片制备完成后，可以使用显微镜对切片进行形态学检查。
通过观察切片，研究者可以进一步了解样品的内部结构，如细胞、组织或器官的形态、形状、大小、有丝分裂状态、细胞排列、器官的血供和微观解剖结构等。
6.免疫组化处理：冰冻切片的一个重要应用是免疫组化染色。
可以使用适当的抗体来标记感兴趣的分子，从而确定其在样品中的存在和定位。
这种技术可以帮助研究者确定一些蛋白质的表达情况、定位和数量，并进一步揭示其在生物学过程中的功能。
7.其他实验处理：除了免疫组化处理外，冰冻切片还可以在其它实验中应用。
例如，可以在切片上进行蛋白质或核酸的杂交实验，研究蛋白质表达的变化或基因表达的调控。
冰冻切片的原理、流程和注意事项
冰冻切片的原理、流程和注意事项1冰冻切片的原理冰冻切片是指新鲜组织不经过任何固定、脱水、透明等处理，不需要石蜡包埋，直接在低温恒冷切片机冷冻后马上进行切片的一种方法。
冰冻切片具有操作简单、对环境污染小和对组织抗原损伤小的特点。
又因制作时间和材料有限，保证高质量的冰冻切片非常重要，直接影响病理诊断的正确率。
2冰冻切片的操作流程整体流程：送检和取材要求：•送检标本及时新鲜，组织无需固定，不能遇水，防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生•取材的器械要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域•所取组织块大小应合适。
组织过大切片时阻力加大，难免产生刀痕及褶皱，加大了制片的难度包埋：•包埋剂一般使用OCT或普通胶水•包埋时将包埋剂涂抹均匀，并根据组织情况和医生的要求确定包埋方向，如管腔、皮肤、囊壁等要立埋•组织体积较小，可先挤入少许胶在包埋托上形成一个”平台“，再放入小组织进行包埋冰冻温度与时间：冰冻的温度与时间时制作冰冻切片的关键因素，需要根据组织的种类、厚度和大小来调节。
如果温度过低，会造成组织过硬、切片破碎；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片切片和染色：•在组织和包埋机冻到发白后可以开始切片•是否使用防卷板可根据操作者的习惯，如使用防卷板，一般将其调整到与切片呈5度夹角•切片时右手摇轮转要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度掌握在5微米，左手持毛笔在切片形成时按住组织边缘，使其不发生卷曲•将切片展平粘贴在结晶载玻片上后，应当立即放入固定液中加以固定，如固定不及时，会发生细胞蜕变，切片中细胞核显示不清，呈”云雾状“表现冰冻切片HE染色流程：3冰冻切片的注意事项1. 组织取材要规范冰冻切片的组织要尽可能新鲜，不触碰谁，取材要及时，动作要迅速。
2.取材大小要厚薄适中在确保渠道主要病变的前提下，尽量避开钙化、坏死、脂肪等。
3. 保持取材台面和器材的干净，防止污染4. 组织表示及编号要明确5. 切片固定要及时制片过程要求快速冷冻、快速切片、快速固定。
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⑥伊红染色10－20秒。
⑦脱水，透明，中性树胶封固。
注：
固定液的选择
A中性xx溶液B95%乙醇
CAF(40%福尔马林10ml,95%乙醇90ml)
DCarnoy(纯乙醇60ml,氯仿30ml,冰醋酸10ml)
甲醛、乙醇、冰醋酸、苦味酸对组织均有固定作用。甲醛对组织的穿透力强,对组织无明显收缩和膨胀作用,但它不能抵消因冷冻所引起的细胞内液体的膨胀,所以甲醛固定的组织结构尚完好,核有肿胀、模糊。乙醇对组织有脱水收缩作用,并可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白,但后者所产生沉淀可溶解于水,使核着色不良。冰醋酸对组织有明显的膨胀作用,加重了冷冻所引起的细胞内液体的膨胀,所以用含有冰醋酸的混合固定液(如D液、E液、F液)固定的组织,核肿胀明显。F液中虽然苦味酸对组织有明显的收缩作用,但有冰醋酸的存在仍然防止不了细胞的肿胀。本实验提示混合固定液对冷冻切片HE染色的效果优于单纯固定液,但最好使用不含有冰醋酸的混合液。因此,推荐冷冻切片做HE染色时首选AF固定液。
注：
①包埋剂的选用：
包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。（OCT包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。）
分色后的水洗为自来水快洗，目的是终止分色液（
0.5%盐酸乙醇）对组织细胞的分色作用。过度分色将致使染色强度减弱，影响苏木精与伊红颜色的匹配。
蓝化后的水洗为自来水冲洗，洗掉组织中多余的碱性成分（淡氨水），为伊红染色提供适宜的染色环境。
五、冰冻切片的快速染色法
①切片固定30秒－1分钟。
②水洗(10秒)。
5、1%伊红1分钟。蒸馏水快洗。
6、80%、90%、95%乙醇速洗，每级数秒到十几秒。光镜下监控细胞核与细胞质量颜色对比。
7、100%乙醇2次，每次1~2分钟。
8、二甲苯2次，每次1~2分钟。中性树胶封固。
注：
①结束阶段的二甲苯作用为透明，其目的是增强标本的折光率，达到光镜下清晰观察染色结果。标本内若含水分可降低其折光率，导致光镜观察细微结构不清楚的结果。另二甲苯透明后有得于组织细胞的长久保存。
④当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。另者，调高冰冻点。间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。
2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
3、调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μm间。
4、调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，以切出完整、平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带,可避免组织摊片过程中皱折,保证组织结构的完整及切片的美观。
纯乙醇溶解苏木精，然后加入彻底溶解的钾明矾水溶液。分别加入氧化汞和冰醋酸，充分混合即可使用。
冰醋酸的加入可以任意选择。
4、1%伊红水溶液
伊红Y10g，蒸馏水1000mL。混合，加入几粒麝香草酚结晶防止菌类的产生。
若组织细胞染色后xx红色度较浅，加入
0.5mL稀释的醋酸水溶液到1000mL的伊红溶液内，提高其酸性，增强其色度。染色时间为15秒~10分钟。细胞质、其内的嗜酸性物质以及胶原纤维等被染成鲜亮、清晰的红色或粉红色。伊红溶液的最佳染色pH为
价格便宜，对标本浸透快，不会产生过硬效果，可作为大标本的保存液，每隔3个月更换新液体，但
10%甲醛水溶液1000mL，过量的碳酸钙（固体）沉积于底部，pH约为
7.6。可避免其色素颗粒的形成。
3、Harrisxx精
xx精
2.5g，纯乙醇25mL，硫酸铝钾50g，蒸馏水500mL，氧化汞（或碘酸钠）
1.25g，冰醋酸20mL。
4.6~
5.0。
5、0.5%盐酸乙醇溶液
浓盐酸
0.5mL，70%乙醇100mL。
通常配制0%盐酸乙醇（70%）储备液备用，需要时稀释即可。
6、0.5%氢氧化铵水溶液
25%氢氧化铵
0.Байду номын сангаасmL，自来水100mL.
由于氨成分易挥发，因此应随时留意溶液中的氨的浓度。
石蜡切片的优点在于可以容易的存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80度的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的的切片，为了防止RNA降解，保存一贯很重要。冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。
②组织块过小：
先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30秒钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织周围再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。
③冷冻箱及冷冻头的温度高低，要根据不同的组织而定。温度过低会导致组织块过硬,切片碎裂,出现梯田状薄厚不均或空洞;反之,温度过高,组织块硬度不够,切片不易成形或成皱褶。数据图1供参考。
- 20℃
- 10℃冷冻箱内温度
- 15℃
- 15℃
- 20℃
- 25℃
- 15℃
- 20℃
- 25℃结果肝肾脾
淋巴结
心脏无法成片不理想,欠挺直切片挺直,完整切片出现水平小裂痕
无法成片不理想,欠挺真切片挺直,完整消化管
(食道胃肠管)- 15℃
- 20℃
- 28℃
- 35℃
- 20℃
- 25℃
- 30℃
同时,其具有配制简单、使用方便的优点。
六、实验后打扫
冷冻切片机使用结束后关闭电源,清洁腔体和擦干水气,做好使用记录。为让水蒸气蒸发，请不要马上关闭切片机的上盖移门，待过段时间再关。
如需详细说明，请借阅说明书。
七、主要试剂与溶液的配制
1、10%甲醛
甲醛水溶液（30~40%）100mL，蒸馏水900mL。
- 35℃
小脑- 23℃
- 30℃切片挺直,完整切片出现水平小裂痕
无法成片不理想,欠挺直切片挺直,完整切片出现水平小裂痕
无法成片不理想,欠挺直切片挺直,完整切片出现水平小裂痕
无法成片不理想,欠挺直切片挺直,完整切片出现水平小裂痕腺体
(唾液腺乳腺
甲状腺前列腺)- 15℃
- 20℃
- 25℃
- 30℃
皮肤- 15℃
- 20℃
- 25℃
- 30℃
- 15℃- 20℃
- 25℃
- 30℃
- 35℃
- 20℃
- 30℃
- 35℃
- 40℃
脂肪组织
花生种子- 25℃
- 35℃
- 30℃
一、实验前准备
清理实验台及仪器。
开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（- 15~-20℃*）。
准备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品。
二、取材
解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡,使细胞内结构移位。
②HE染色的水洗：
整个染色过程中共5处涉及到水洗，但其洗涤程度及作用均有所不同。
xx精染色前的水洗为蒸馏水浸洗：
切忌自来水替代蒸馏水浸洗，否则苏木精染液由弱酸性（棕红色）转变为弱碱性（蓝色），导致“有色沉淀”出现与积累，致使染色结果为黑蓝色。
苏木精染色后的水洗为自来水洗，伊红染色后的水洗为蒸馏水快洗，作用是洗去未与组织相结合的染料成分，即洗去“浮色”。伊红染液为水溶性溶液，浸洗时间长会使组织的伊红颜色减退。
四、常用冰冻切片xx精—伊红染色
染色步骤：
1、冰冻切片用10%甲醛固定1~5分钟，流水冲洗2分钟，蒸馏水浸洗3分钟。
2、xx精1~2分钟。自来水快洗。
3、0.5%盐酸乙醇分色1~2秒。蒸馏水快洗。
4、0.25%~
0.5%氨水蓝化，几秒种或至组织变蓝，自来水洗30秒~1分钟。光镜下检查细胞核分色程度。
冰冻切片由于抗原性保存比较好，所以容易出阳性结果，但是组织结构形态的保存没有石蜡切片佳，而且抗原容易弥散，不易观察抗原分布情况。石蜡切片由于处理的原因，抗原常被封闭甚至破坏，需要抗原修复步骤，而且不一定能修复成功。
表1不同温度下各种新鲜组织用冷冻切片结果
组织名称冷冻头温度
- 10℃
- 12℃
- 15℃
（注：
取材中目的标本既要明确也要确保其结构的完整性，应避免不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度最好不要超过3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。）
三、冷冻切片
1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。
EClzrke改良液[4](纯乙醇95ml,冰醋酸5ml)
FBouin液(饱和苦味酸水溶液75ml,甲醛水溶液25ml,冰醋酸5ml)
6种固定液固定后的组织切片染色效果各有差异,其中C固定液固定的切片染色效果最好,组织结构清晰,核染色鲜艳,核无明显肿胀,核浆对比度好,镜下与石蜡切片相似(图1)。D液、E液、F液染色效果均较好,结构较清晰,核染色较鲜艳,但核有肿胀,核轮廓有些模糊。A液染色效果较差,组织结构尚清楚,但细胞核肿胀比较明显且境界模糊不清(图2)。B液染色效果差,核着色不良,结构模糊。