WB01菌种活化步骤(精)
菌种活化保存法
附件：新菌株（乳酸菌）斜面培养法1.购买新菌株（安瓿瓶装冻干粉）2.菌种管开启方法一：按购买菌种上的说明进行操作即可。
3.菌种管开启方法二（本次实验方法均在水平层流台进行）：3.1水平层流台开启风机跟紫外灯，半个小时3.2 用浸过75 ％酒精的脱脂棉擦净菌种管。
3.3将菌种管顶端在火焰上加热，注意避免直接加热菌体或加热过度。
3.4 将无菌水滴至加热过的菌种管顶端，使玻璃开裂。
3.5 用锉刀或镊子敲下已开裂的菌种管的顶端。
4.用玻璃三角瓶121.0℃灭菌约10-30ml的生理盐水20分钟5.将开封后的冻干粉倒入生理盐水中，摇匀6.用接种环沾取生理盐水，转接与MRS培养基平板上，在36.5℃中恒温培养48-72小时后，得到二代菌。
7.此时可以使用二代菌进行菌株扩大培养，或对其进行保存菌种。
注意事项：1 菌种活化前，请将冻干菌种管冷藏保存在5 ℃-10 ℃环境下。
3 菌种经过冷冻干燥后，生长延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。
4 菌种活化及使用过程应做好安全防护工作。
第二代第2 代)观察是否具有典型的菌落形态,然后挑取单一的纯菌落,进行革兰染色、镜检,观察其染色特征及菌体形态,并进一步做生化鉴定实验以确定菌种。
第三代为工作用菌。
乳酸菌菌种保存法方法一：斜面保存法（略）方法二：20%甘油保存法器材：冻存盒、冻存管(2ml装)、甘油（丙三醇）、MRS肉汤培养基、1ml移液器及枪头、酒精灯、水平层流台、高压灭菌锅操作步骤：1.在水平层流台中用接种环挑取所需保存的的菌株放于灭菌过的MRS肉汤培养液，进行36.5℃恒温培养48小时2.配制40%的甘油，用移液器移取0.5ml于冻存管中，放于冻存盒3.用报纸将冻存盒包扎好，放于灭菌锅中灭菌（121.0℃、20Min）4.在水平层流台中，用移液器移取0.5ml培养后的MRS肉汤培养液加入到冻存管中，拧紧盖子，摇匀，标识。
5.在冻存盒外也做好操作人，日期，所保存的菌种等信息标记6.将冻存盒放于保鲜袋中，放入冰箱的冷冻室层进行保存，一般可以保存至两三年。
实验一侧孢芽胞杆菌菌种活化及复壮
实验一侧孢芽胞杆菌菌种活化及复壮一、实验目的1.了解菌种衰退的原理．2.熟悉发酵菌种活化和复壮的方法．二、实验原理菌种在传代过程中，原有的生产性状会逐渐下降，这就是菌种的衰退。
衰退是菌株的自发突变引起的，一旦发现衰退，就必须进行复壮。
复壮就是通过纯种分离和性能测定等方法从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌种原有性状的一种措施。
菌种活化就是逐级扩大培养是为了得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。
菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化,让菌种逐渐适应培养环境。
三、实验器材与试剂1、菌种侧孢芽胞杆菌斜面保藏菌种2、实验器材天平、手提式电热灭菌锅、超净工作台、接种环、电热鼓风干燥箱、生化培养箱、光学显微镜、电炉、酒精灯、铁架台、玻璃漏斗、试管、三角瓶、载玻片等3、试剂葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、硫酸镁、硫酸锰、复红染色液、结晶紫染色液、卢哥氏碘液、95%乙醇、番红染色液、香柏油、氢氧化钠、盐酸四、实验步骤1、斜面培养基配方：葡萄糖10g、蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化钠5g、水1000mL、琼脂20g、pH值7.2～7.4。
摇瓶培养基：蔗糖1.5%、蛋白胨0.2%、酵母膏0.4%、碳酸钙0.5%、磷酸氢二钾0.1%、硫酸镁0.03%、硫酸锰0.002%2、按配方准确称取所需的药品，溶解、过滤、分装、包扎、灭菌（121℃30min）、冷却、摆斜面。
3、斜面无菌检查。
28℃，37℃恒温培养箱培养观察。
4、接种培养：无菌室清洁、紫外灯灭菌、操作人员清洁、消毒、用接种环接种斜面。
37℃恒温培养箱中培养1d。
重复转接3代斜面5、镜检。
分别用简单染色或革兰氏染色涂片观察，菌的生长情况，是否有杂菌。
6、生长好的菌种置冰箱中保藏备用。
五、注意事项1、灭菌要彻底，冷气一定排尽，并保证灭菌温度和时间。
2、接种时要严格按无菌操作规程进行。
菌种活化_操作方法
低温保存管（cryotube）中之一般菌种临时存放及活化A. 低温保存管之临时存放及解冻1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。
2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。
3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。
4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。
B. 菌株活化: 在无菌操作下1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。
2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。
C. 划线法1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。
2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。
3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。
4. 灼烧接种环，将接种环归位。
D. 图示（1）金属接种环（2）平板划线法冷冻干燥管之开管说明下列步骤请在无菌环境下操作：1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。
2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。
3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。
4、( a ) 适用于细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。
WB操作原理以及流程细节
WB实验的基本原理及操作流程【实验原理】一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。
因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除ELISA法外，也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。
前两法有“南”和“北”之意，故本法遂被延伸称为Western(西)印迹法，该法能用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨出与专一抗血清结合的专一性蛋白质。
将聚丙烯酰胺凝胶上分辨出的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上并与第一抗体共孵。
第一抗体专一地与待分离蛋自质的抗原决定簇结合，然后用另一种蛋自质，如135I-蛋白A或辣根过氧化物酶连接的山羊抗IgG检测已结合上去的抗体。
本法所需时间6小时或过夜。
蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所用条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并尽可能减少其相互间的聚集。
最常用的方法是将强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，并通过加热使蛋白质解离后再加样于电泳凝胶上。
变性的多肽与SDS结合并因此而带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在聚丙烯酰凝胶电泳中的迁移只与多肽的大小相关。
在达到饱和的状态下，每克多肽约可结合1.4克去污剂，借助已知分子量的标准参照物，则可测算出多肽链的分子量。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳大多在不连续缓冲系统中进行，其电泳槽缓冲液的pH值与离子强度不同于配胶缓冲液，当两电极间接通电流后，凝胶中形成移动界面，并带动加入凝胶的样品中所含的SDS多肽复合物向前推进。
样品通过高度多孔性的积层胶后，复合物在分离胶表面聚集成一条很薄的区带(或称积层)。
曲于不连续缓冲系统具有把样品中的复合物全部浓缩于极小体积的能力，故大大提高了SDS聚丙烯酰胺凝胶的分辨率。
最广泛使用的不连续缓冲系统最早是由Ornsstein(1964)和Davis(1964)设计的，样品和积层胶中含Tris-Cl(pH6.8)，上下槽缓冲液含Tris-甘氨酸(pH8.3)，分离胶中含Tris-Cl(pH8.8)的。
草稿
菌种活化不同的保存方法有不同的活化方法：1.真空冷冻干燥法保存菌种在复苏时先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，将安瓿管顶部烧热，用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养；2. -80℃冰箱冻结法保存菌种复苏时，从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。
直到内部结冰全部溶解为止，约需50秒-100秒。
开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养3. 液氮超低温冻结法保存菌种复苏与-80℃冰箱冻结法保存菌种复苏相似，从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。
直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。
开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。
一般菌种活化需要以下几个步骤：第一配置菌种适宜生长的培养。
第二将菌种从保藏状态恢复到室温状态，比如将冷冻的菌种解冻。
第三将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养，此步骤称为菌种复壮。
第四步挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2-3次，从而得到生长良好的菌落。
感受态细胞的制备1．宿主菌株纯化：1)从70℃冰箱取出甘油冻存的菌种，接于5ml YPD液体培养基，30℃，振荡培养过夜。
2)将培养物稀释到合适浓度，涂布YPD平板，30℃培养2天。
3)用无菌牙签挑取酵母单菌落，分别点种于MD平板和YPD平板，30℃培养2～4天。
4)挑取在YPD平板上生长而在MD平板上不生长的菌株，划线YPD培养基平板，30℃培养2天。
2．挑取单菌落接种到10 ml YPD液体培养基，30℃，250rpm培养12h左右。
3．取培养物按照l％接种量接种到50mlYPD液体培养基，30"C，250rpm振荡培养约13h至OD600为1．3～1．5。
活化菌种的方法
活化菌种的方法菌种是微生物学研究中非常重要的一部分，它们可以用于制备各种发酵产品，如酸奶、酒、酱油等。
但是，菌种经过一段时间的保存后，会出现休眠或死亡的现象，这就需要进行活化处理，使其恢复生命活力。
本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。
一、温度法温度法是最常用的活化菌种方法之一。
该方法是将被保存的菌种移至适宜的温度环境下进行培养，使其恢复生命活力。
具体方法是将菌种从冰箱中取出，放置于适宜的温度环境中进行培养。
一般情况下，大多数菌株的培养温度为30℃左右。
二、营养法营养法是通过添加适当的营养成分来活化菌种。
该方法适用于营养成分缺乏、菌种处于休眠状态的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到含有适量营养成分的培养基中进行培养。
常用的营养成分包括葡萄糖、酵母粉、胰蛋白胨等。
三、pH法pH法是通过改变培养基的pH值来活化菌种。
该方法适用于菌种处于休眠状态、培养基酸碱度不适宜的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到pH值适宜的培养基中进行培养。
一般情况下，大多数菌株的适宜pH值为6.5-7.5。
四、氧气法氧气法是通过调节培养环境氧气含量来活化菌种。
该方法适用于需氧菌株、培养环境氧气含量不足的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到含有适量氧气的培养基中进行培养。
常用的氧气供应方式包括摇床培养和搅拌培养。
五、复苏法复苏法是通过多种活化手段的组合来活化菌种。
该方法适用于菌种处于极度休眠状态、多种单一活化手段无法恢复生命活力的情况。
具体方法是将保存的菌种接种到含有多种活化成分的培养基中进行复苏培养。
常用的活化成分包括葡萄糖、酵母粉、胰蛋白胨、氧气等。
总之，活化菌种是菌种保存和利用中的重要环节。
选择合适的活化方法可以使菌种恢复生命活力，保证其在后续的利用中发挥更好的作用。
活化菌种的方法
活化菌种的方法菌种的活化是指将冷冻、干燥或其他方式保存的菌种重新复苏，使其具有生物活性和生长能力的过程。
活化菌种的方法有很多种，根据菌种的特点和保存方式的不同，选择不同的方法进行活化。
本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。
一、液体培养法液体培养法是一种简单、易操作的活化菌种方法。
首先将保存的菌种接种到含有适当营养成分的液体培养基中，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。
液体培养法的优点是适用范围广，可以用于多种菌种的活化，且容易控制生长条件，可以获得较高的活化率。
但液体培养法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
二、固体培养法固体培养法是将保存的菌种接种到含有适当营养成分的固体培养基上，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。
固体培养法的优点是可以获得单个菌落，可以对菌株进行纯化和鉴定。
但固体培养法的缺点是需要较长时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
三、滴定法滴定法是将保存的菌种加入到含有适当营养成分的液体培养基中，然后逐渐加入新的培养基，使菌株逐渐适应新的环境。
滴定法的优点是可以逐渐适应新的环境，可以获得较高的活化率。
但滴定法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
四、化学处理法化学处理法是利用化学物质对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。
常用的化学处理方法包括酸碱处理、渗透压处理、氧化还原处理等。
化学处理法的优点是操作简单，可以获得较高的活化率。
但化学处理法对菌株的适应性要求较高，有可能对菌株造成伤害，影响其生物活性和生长能力。
五、生物处理法生物处理法是利用其他微生物对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。
常用的生物处理方法包括共培养法、共生法、共生菌法等。
生物处理法的优点是可以利用其他微生物对菌株进行适应性调节，可以获得较高的活化率。
但生物处理法对微生物的适应性要求较高，且需要较长时间才能获得足够的活化菌种。
菌种复活、传代、保藏、销毁操作规程
4.6.3灭菌后，再进行清洗和处理。
4.6.4销毁的菌种应做好记录。销毁时由化验负责人监督销毁，保管人员负责销毁。
5.相关记录
无
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4.2菌种确认
用无菌接种环取上述培养物，在相应的培养基平板（营养琼脂、大豆胰蛋白胨琼脂）上或相应的细菌鉴别平板（如伊红亚甲蓝、麦康凯、十六烷基三甲胺、甘露醇高盐）上划线分离单个菌落，置适宜条件下培养（若该类微生物为厌氧菌，则培养条件应为厌氧条件）。以同样方法取真菌和酵母菌至SDA（萨布罗培养基）平板上或玫瑰红钠培养基平板上，23～28℃下培养7d；培养后观察是否具有典型的菌落状态，然后挑取单一纯菌落，进行革兰染色、镜检，观察其染色特征及菌体形态以确定菌种。
4.4.9应记好传代记录。
4.5菌种的保藏
4.5.1将试管斜面菌种放入冰箱中4～6℃冷藏保存。
4.5.2将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中4～6℃保存。
每支保存菌种需标明菌名、标准编号、传次、传代日期。
4.6菌种的销毁
4.6.1菌种使用后或超过贮存期的应进行销毁。
4.6.2需销毁的菌种，应用高压蒸汽（121℃）灭菌20分钟。
4.3污染处理
假如在该平板上发现有其他菌落生长，则说明操作有污染或菌种不纯。要将该污染培养物做灭菌处理，寻找原因，重新分离挑选纯菌落。
食品卫生检验12国产冷冻干燥菌种的活化方法
-1-冷冻干燥菌种的活化方法
一、菌种管开启方法
1用浸过75％酒精的脱脂棉擦净菌种管。
2将菌种管顶端在火焰上加热，注意避免直接加热菌体或加热过度。
3将无菌水滴至加热过的菌种管顶端，使玻璃开裂。
4用锉刀或镊子敲下已开裂的菌种管的顶端。
二、菌种活化培养
1.用无菌吸管吸取0.3mL-0.4mL 适宜（※）的液体培养基，滴入菌种管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状液体。
一般细菌建议使用胰蛋白胨大豆肉汤（TSB ）、脑心浸液肉汤（BHI ）等高营养的培养基；
嗜盐性弧菌建议使用含3%-3.5%氯化钠的胰蛋白胨大豆肉汤；
乳酸菌建议使用MRS 肉汤；
真菌建议使用真菌培养基；
2.取约0.2mL 菌悬液，转接于特定的琼脂培养基斜面或平板上，剩余的菌液注入特定的液体培养基（3mL-4mL ）内，然后再按照菌种的特性，在一定温度下进行培养。
三、注意事项
1菌种活化前，请将冻干菌种管冷藏保存在5℃-10℃环境下。
2厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态。
3菌种经过冷冻干燥后，生长延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。
4菌种活化及使用过程应做好安全防护工作。
分享你需要知道的标准菌株的活化方法！
分享你需要知道的标准菌株的活化方法！食品实验室服务实验室必须保存有满足试验需要的标准菌种/菌株，除检测方法（如药物敏感试验、抗菌性能测试）中规定的菌株外，还应包括应用于培养基（试剂）验收/质量控制、方法确认/证实、阳性对照、阴性对照、人员培训考核和结果质量的保证等所需的菌株。
并且标准菌种必须从认可的菌种或标本收集途径获得。
▲CNAS-CL09-2013《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》常用标准菌种来源美国菌种保藏中心ATCC英国国家典型菌株保藏中心NCTC中国医学细菌保藏管理中心CMCC中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC▲ ATCC和CICC标准菌种的常见包装形式接下来一起了解下标准菌株的活化方法ATCC标准菌种KWIK-STIK TM产品的活化说明将KWIK-STIKTM产品平衡至室温，撕开袋子。
取出菌种管，揭下标签上可撕取部分，贴于原始培养皿或QC记录本上。
捏碎管帽处的安瓿，使其释放出液体，将管子直立以使液体流入管底。
挤压管底的菌球，使之与液体混合，以形成均匀的菌悬液。
将棉签浸于菌悬液中，并于培养皿约三分之一范围内轻轻挤压并旋转涂抹。
使用无菌接种环进行三区或四区划线，以尽可能分离出单菌落。
随即在适合的温度和条件下倒置培养已接种的原始培养皿。
按照适宜的生物危害品处置方法（如121℃高压30 min），丢弃菌种管。
▲ ATCC标准菌株KWIK-STIK TM产品操作说明CICC标准菌种的操作说明使用酒精棉球擦拭冻干菌种管表面进行消毒。
将冻干管顶端置于酒精灯火焰上均匀加热约1~2分钟。
立即滴2~3滴无菌水于加热部位，使管壁破裂。
使用镊子或剪刀敲击裂痕处，将管顶端敲落。
吸取约0.5mL液体培养基于冻干管中，将冻干菌粉充分溶解。
取0.2mL菌悬液转移至装有5mL~8mL液体培养基的试管中混匀，并取0.1mL菌悬液转移至平板培养基上，进行划线分离。
将液体培养基和平板培养基置于合适条件下培养。
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本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==活化步骤篇一：菌种活化步骤总结一下菌种活化需要以下几个步骤：第一配置菌种适宜生长的培养基第二将菌种从保藏状态恢复到室温状态，比如将冷冻的菌种解冻第三将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养，此步骤称为菌种复壮第四步挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2-3次，从而得到生长良好的菌落经过这四个步骤就到达将菌种从保藏状态活化的目的篇二：ACF活化步骤ACF活化步骤说明：F4：反洗出水阀F6：活化进水阀F7：活化出水阀F8：空气排空阀步骤：1. 反洗将要活化的ACF 15-20分钟，小流量排水3分钟2. 将其他未活化的ACFF7打开排水1分钟3. 打开将要活化的ACF的F6，F7，F8阀门4. 确认板式换热器循环侧各阀门均为开启状态5. 打开热水消毒水泵6. 将板换蒸汽侧的排冷凝水阀打开排冷凝水，之后关闭7. 缓慢打开板换蒸汽进口阀门，开始ACF升温8. 待ACF温度升至95℃以上时，打开其他未活化的ACF的F4和F6，冲洗10秒后关闭9. 进入保温阶段，时间不少于2小时10. 保温将要结束时，打开此ACF的两个取样阀，冲洗10分钟后关闭，保温结束，关闭F811. 关闭板换蒸汽进口阀，打开进UF水阀，进入循环降温阶段12. 当ACF温度降至40℃以下冷却降温结束，关闭热水消毒水泵，关闭所有阀门13. 进行ACF反洗，正冲，结束后立即投入使用篇三：斯列普活化炉使用流程官网地址：斯列普活化炉使用流程物料流程：物料进入加料槽后，借重力作用沿着产品道缓慢下行，依次经过预热带、补充炭化带、活化带、冷却带，完成全部活化过程，最后由下部卸料器卸出。
炭化预热段利用炉内热量预热除去水分。
在补充炭化段，炭化料被高温活化气体间接加热使炭的温度不断提高进行补充炭化。
关于菌种活化知识点总结
一、菌种活化的原理和方法1.原理菌种活化的原理是通过特定的方法对微生物菌株进行处理，改善其生长环境和代谢活动，提高其生理功能和应用性能。
菌种活化的关键是创造一个有利于微生物生长和活性的环境，促进微生物的代谢活动和生长繁殖。
2.方法菌种活化的方法主要包括以下几种：(1) 培养基优化：改良培养基的配方，提供适宜的营养物质、微量元素和pH值，创造一个有利于菌株生长和代谢的环境；(2) 激活培养：通过操作改变培养条件，如温度、氧气含量、光照等，刺激微生物的生理活性和代谢活动；(3) 生物激素处理：利用一定的生物激素或生长因子来刺激微生物的生长和代谢活动；(4) 培养基添加：在培养基中添加一些特定的辅助物质，如细胞因子、氨基酸等，促进微生物的生长和代谢活动；(5) 抗生素处理：在一定的浓度范围内添加抗生素，抑制一些有害细菌的生长，保护有益微生物的生长环境；(6) 培养温度控制：控制培养温度，促进微生物的生长和代谢活动。
二、菌种活化的应用菌种活化技术具有广泛的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 环境保护和修复：菌种活化技术可用于土壤修复、水体净化、废水处理等环境保护和修复工作，促进有益微生物的生长和活性，加速污染物的降解和清除；2. 生物农药和生物肥料：菌种活化技术可用于生产高效、低毒的生物农药和生物肥料，提高其杀菌、杀虫活性和利用率，减少对环境和人体的危害；3. 食品加工和酿造：菌种活化技术可用于食品发酵和酿造工艺中，提高微生物的代谢产物质量和产量，改善产品口感和品质；4. 医药和保健品：菌种活化技术可用于生产保健品和药物中，提高药物的活性和利用率，加快药效，降低副作用。
随着现代科学技术的不断发展，菌种活化技术也将会有更广阔的发展空间和应用前景，主要体现在以下几个方面：1. 专业化和精细化：菌种活化技术将更加专业化和精细化，针对不同的微生物菌株和应用领域，开发出更加精准和有效的活化方法和配方；2. 生物工程技术：菌种活化将会与生物工程技术相结合，通过改造菌株的基因、调控代谢途径、提高酶活性等方法，实现微生物的高效利用和生产；3. 微生物资源开发：菌种活化技术将会成为开发和利用微生物资源的重要手段，通过菌株的活化和增殖，实现对微生物资源的高效开发和利用；4. 产业化应用：菌种活化技术将会逐步应用到相关产业领域，如环境保护、农业生产、食品加工和医药制造中，推动相关产业的快速发展和升级。
菌种活化传代
菌种活化与传代一、菌种活化下列步骤请在无菌环境下操作：1、把冻干菌种管、灭菌1ml 滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或净化工作台。
2、先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干，用75% 乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。
点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。
（有些商品化的产品打开更方便）3、取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许（无菌水也可），加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行培养。
( a ) 适用细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基或无菌水，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。
( b ) 适用霉菌、酵母菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。
4、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养才能正常生长。
经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。
二、菌种传代1、培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。
标签上写上菌名及接种日期。
至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。
2、点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。
左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。
【2018-2019】大肠杆菌菌种活化步骤word版本 (6页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==大肠杆菌菌种活化步骤篇一：抑菌实验步骤抑菌实验：待测菌金色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；绿脓杆菌菌种活化：菌种，进行活化，可以划线，也可以涂布，划线：直接用接种环在酒精灯上烧过之后，等之冷却，蘸取进行划线！涂布：用枪头吸取100ul的菌液涂布既可！本实验采用涂布法1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h)2. 枯草芽孢杆菌培养条件（过夜培养）3.绿脓杆菌最佳培养条件（14-17h）培养基MH（A）培养基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；琼脂 12.5gMH液体培养基配制方法：称取本品36.5克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。
牛肉膏蛋白胨固体培养基（LB培养基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，琼脂15g，NaCl 5 g，双蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃灭菌20min。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：不加琼脂，其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。
菌悬液的配制将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养24 h，用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中，震荡均匀，制成菌悬液。
具体为用接种环挑取一环（本实验是吸取100uL菌悬液）于5 mL的无菌生理盐水中，每10倍稀释一次地逐级稀释，取（10-8、10-9、10-10 、10-11）的浓度100μL做涂布实验，每个梯度平行三组，加100μL药品溶剂（二甲基亚砜）的空白对照3个平板，完全不加任何样品即只是LB培养基的完全空白对照1个平板，调整菌悬液浓度，用平板菌落法测定其菌液浓度，使其含菌体数为103 cfu/mL，即为供试菌悬液。
【参考文档】大肠杆菌菌种活化步骤-word范文模板 (6页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==大肠杆菌菌种活化步骤篇一：抑菌实验步骤抑菌实验：待测菌金色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；绿脓杆菌菌种活化：菌种，进行活化，可以划线，也可以涂布，划线：直接用接种环在酒精灯上烧过之后，等之冷却，蘸取进行划线！涂布：用枪头吸取100ul的菌液涂布既可！本实验采用涂布法1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h)2. 枯草芽孢杆菌培养条件（过夜培养）3.绿脓杆菌最佳培养条件（14-17h）培养基MH（A）培养基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；琼脂 12.5gMH液体培养基配制方法：称取本品36.5克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。
牛肉膏蛋白胨固体培养基（LB培养基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，琼脂15g，NaCl 5 g，双蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃灭菌20min。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：不加琼脂，其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。
菌悬液的配制将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养24 h，用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中，震荡均匀，制成菌悬液。
具体为用接种环挑取一环（本实验是吸取100uL菌悬液）于5 mL的无菌生理盐水中，每10倍稀释一次地逐级稀释，取（10-8、10-9、10-10 、10-11）的浓度100μL做涂布实验，每个梯度平行三组，加100μL药品溶剂（二甲基亚砜）的空白对照3个平板，完全不加任何样品即只是LB培养基的完全空白对照1个平板，调整菌悬液浓度，用平板菌落法测定其菌液浓度，使其含菌体数为103 cfu/mL，即为供试菌悬液。
菌种的活化方法
菌种的活化方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：菌种活化是指将菌种从休眠状态激活至活跃状态的过程，使其恢复生长和繁殖能力。
良好的活化方法可以提高菌种的发酵效率和产量，保证产品的质量稳定性。
下面将介绍一些常用的菌种活化方法。
一、前处理菌种在储存过程中可能会受到损伤或降解，因此在进行活化之前首先要进行前处理。
常见的前处理方法包括：将菌种在富含营养物质的培养基中培养一段时间，以恢复其活力；采用低温冷冻保存的菌种需先进行解冻和复苏处理；对于被冷冻干燥的菌种，需要通过加入适量水或培养基来复苏。
二、温度调节温度是影响菌种活化的一个重要因素。
一般来说，大多数菌种的适宜生长温度在25-35摄氏度之间。
在活化菌种时应根据不同菌种的特性和环境条件调节适宜的温度，提供一个适宜的生长环境，促进菌种的恢复和生长。
三、培养基选择培养基的选择对菌种的活化也有很大的影响。
一般来说，应选择含有适当营养成分、低毒性和无污染的培养基，以促进菌种的复苏和生长。
对于不同种类的菌种可能需要选择不同的培养基，以满足其特定的生长和营养需求。
四、氧气供应氧气是微生物生长和代谢所必需的。
在活化菌种时，应保证有足够的氧气供应，以促进菌种的代谢活动和生长。
可以通过搅拌、通气等方式增加培养基中的氧气含量，提高菌种的代谢和生长速度。
五、PH值调节PH值是影响菌种生长的另一个重要因素。
不同菌种对PH值的适应范围不同，因此在活化菌种时应考虑到不同菌种的PH值需求。
一般来说，绝大多数菌种的适宜生长PH值在6-8之间，因此应选择适当的PH值培养基来活化菌种。
六、添加生长因子有些菌种对特定生长因子有较高的依赖性，缺乏这些生长因子会导致其生长迟缓或死亡。
在活化菌种时，可以考虑添加一些生长因子或促生长物质，以帮助菌种更快地复苏和生长。
不过，需要根据菌种的特性和需求来确定添加何种生长因子以及添加的浓度。
七、时间控制菌种活化的时间一般较长，需要耐心等待。
在活化菌种时，应根据菌种的生长速度和复苏程度来控制活化时间，不能过早打断或过早结束。
安瓿管菌种活化的标准操作流程
安瓿管菌种活化的标准操作流程1.准备培养基和所需的试管或培养皿。
Prepare the culture medium and the required test tubes or petri dishes.2.将培养基加热至适当的温度，以杀灭其中的细菌。
Heat the culture medium to the appropriate temperature to kill any bacteria present.3.在无菌条件下，将培养基分装至试管或培养皿中。
Under sterile conditions, transfer the culture mediuminto the test tubes or petri dishes.4.将安瓿管菌种从冷藏保存中取出。
Remove the ampoule of fungal culture from cold storage.5.用无菌的工具打开安瓿管。
Use sterile tools to open the ampoule.6.将适量的安瓿管菌种接种到培养基表面。
Inoculate an appropriate amount of fungal culture onto the surface of the culture medium.7.用无菌的棉签或吸管轻轻均匀涂抹菌种。
Gently spread the fungal culture evenly using a sterile cotton swab or pipette.8.确保接种完全无菌，避免外界细菌的污染。
Ensure the inoculation is completely sterile and free from contamination by external bacteria.9.密封好试管或培养皿，避免空气和细菌进入。
Seal the test tubes or petri dishes to prevent the entry of air and bacteria.10.将试管或培养皿放入恒温培养箱中，保持适当的温度和湿度。
1 活化菌种
1 活化菌种取50 µL表达菌种接入6 mL的LB液体培养基（含有卡那青霉素，其工作浓度为50 µg/mL）中，于37 ℃摇床振荡培养8-12小时。
2 扩大培养将试管中活化的6 mL菌液接种到100 mL LB培养基，同时加入卡那青霉素（终浓度50 µg/mL）培养基于37℃恒温培养箱中培养2-3 小3 IPTG诱导AK的表达实验中在不同的培养时间（用OD值表征菌体密度）加入IPTG诱导表达发现，当温度为22 ℃，OD=0.6-0.8时，IPTG终浓度为0.2-0.4 mM时AK的表达量较大，诱导5-7小时。
4蛋白质提取（1）将上述各管于4 ℃，5000 r/m离心10分钟；（2）弃上清，使沉淀物质重悬，每1 g 沉淀加5 mL裂解液；（3）在冰上进行10分钟，间隔为2秒钟的超声波破壁,直到沉淀变得澄清为止；（4）于4 ℃，12000 rpm，离心10分钟，取上清，得到AK的粗提液。
5 His-tag Ni亲和层析法纯化融合蛋白预处理：(1)用2 M盐酸胍10 mL与树脂打散混合洗涤，静置10min；(2)用蒸馏水洗10min；Stripping Buffer洗20min(3)用蒸馏水洗10min；用0.3M NaOH洗20min(4)用Binding Buffer洗20min；蒸馏水洗10min；(5)用1.5 M NaCl洗20 min；用Binding Buffer洗20min；蒸馏水洗10min；(6)Ni柱再生：→50 mL 0.1 M NiSO4洗蒸馏水洗(7)6倍柱床体积Binding Buffer（pH=8.0）平衡注：流速控制在2-3ml/min.上样：插A280滤光片，调A值（0）、T值（100）；打开采集器；打开电脑蛋白核酸检测系统，保存文档并按开始采集。
将粗提液45 mL上柱，流速约为1.6-1.8 mL/min。
洗脱：上样完后，继续用Binding Buffer （pH=8.0）淋洗。