微生物检测的基本技术.pptx
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药品微生物检验基础知识 ppt课件
险较小 · 保存期比较短， · 反复传代有引 · 比较容易掌握 起变异的可能；
A：甘油冷冻管保藏法
保藏温度
缺点：操作相对复杂，成本较高。 操作简便， 斜面低温 4℃左右 1～3个月 · · 成本低， 保藏法 B：斜面低温保藏法
· 铜绿假单胞菌 保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜 不宜用本法保 用本法保存。
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2白色念珠菌 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人 口腔，上呼吸道，肠道及阴 道，是医学全身性真菌感染 病的重要途径，可以引起心 膜炎、肺炎、尿布疹、鹅口 疮、阴道炎、脑膜炎、及败 血症。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
ppt课件 3
一、微生物基本介绍
3、微生物的特点
体形微小；
结构简单；
生长繁殖快；
种类繁多，分布广，适应性强。
包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、 支原体和病毒等。
ppt课件 4
一、微生物基本介绍 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有
1大肠埃希菌
ppt课件 25
二、培养基
4、培养的再融化方式 水浴加热 微波炉 电热炉加热 注意： 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次 融化的培养基应置于45℃～50℃的水浴中，不得超过8小时
ppt课件 26
二、培养基 5、培养基的性能评估
所有购回的、配制好的培养基均应进行质量控制试验（培养 基适应性检查） 理化指标（P55） 微生物学指标（P55）
ppt课件
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四、微生物限度检查法
1、定义
A：甘油冷冻管保藏法
保藏温度
缺点：操作相对复杂，成本较高。 操作简便， 斜面低温 4℃左右 1～3个月 · · 成本低， 保藏法 B：斜面低温保藏法
· 铜绿假单胞菌 保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜 不宜用本法保 用本法保存。
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2白色念珠菌 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人 口腔，上呼吸道，肠道及阴 道，是医学全身性真菌感染 病的重要途径，可以引起心 膜炎、肺炎、尿布疹、鹅口 疮、阴道炎、脑膜炎、及败 血症。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
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一、微生物基本介绍
3、微生物的特点
体形微小；
结构简单；
生长繁殖快；
种类繁多，分布广，适应性强。
包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、 支原体和病毒等。
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一、微生物基本介绍 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有
1大肠埃希菌
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二、培养基
4、培养的再融化方式 水浴加热 微波炉 电热炉加热 注意： 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次 融化的培养基应置于45℃～50℃的水浴中，不得超过8小时
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二、培养基 5、培养基的性能评估
所有购回的、配制好的培养基均应进行质量控制试验（培养 基适应性检查） 理化指标（P55） 微生物学指标（P55）
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四、微生物限度检查法
1、定义
《微生物检验基础知识》PPT
采样
根据检验目的和要求，选择适当的采 样方法和采样点，确保采集的样品具 有代表性。
计数与测定
对目标微生物进行计数和测定，得到 样品中微生物的数量和活性等指标。
01
02
样品处理
对采集的样品进行预处理，包括稀释、 均质化等，以便后续的检验操作。
03
微生物分离与纯化
通过培养基和培养条件的选择，将目 标微生物从样品中分离出来并进行纯 化，得到单一物进行快速检测和鉴定。
微生物检验技术的发展趋势
自动化与智能化
随着技术的发展，微生物检验将越来 越依赖于自动化和智能化的设备和技 术，提高检验效率和准确性。
快速检测技术
发展快速、简便的检测方法，缩短检 验时间，提高检验效率。
高通量检测技术
采用高通量技术，一次处理大量样品， 提高检测的通量和效率。
《微生物检验基础知识》
目录
• 微生物检验概述 • 微生物基本知识 • 微生物检验技术 • 微生物检验在食品安全中的应用 • 微生物检验在医疗领域的应用 • 微生物检验的注意事项与伦理规
范
01
微生物检验概述
微生物检验的定义和目的
微生物检验的定义
微生物检验是对微生物进行观察、分析和检测，以获得有关微生物种类、数量、 形态、生化特性等方面的数据，从而判断其与人类健康、环境安全等方面的关 系。
按照应用领域分类
微生物检验可以根据应用领域的不同，分为医学微生物检验、食品 微生物检验、环境微生物检验等。
微生物检验的应用领域
医学领域
食品工业
微生物检验在医学领域中有着广泛的应用 ，如诊断疾病、监测传染病、研究病原菌 的特性等。
微生物检验在食品工业中是必不可少的环 节，通过对食品中的微生物进行检测，可 以确保食品的安全性和卫生质量。
微生物检测技术PPT
采样所出的问题
食品微生物检验的样品送检
采样后，在送检过程中，要尽可能保持检样原有的物理和微生物状态，不要 因送检过程而引起微生物的减少或增多。
无菌方法采样后，所装样品的容器要无菌，装样后尽可能密封，以防止环境 中的微生物进一步污染； 进行微生物检验的样品，送达实验室要越快越好，一般不应超过3h。若路途 遥远，可将不需冷冻的样品，保持在1～5 ℃环境中送检，可采用冰桶等装置； 若需保持在冷冻状态（如已冰冻的样品），则需将样品保存在泡沫塑料隔热 箱内，箱内可置干冰，使温度维持在0℃以下，或采用其他冷藏设备； 送检样品不得加入任何防腐剂； 水产品因含水分较多，体内酶的活力较旺盛，易于变质。因此，采样后应在 3h内送检，在送检途中一般都应加冰保存； 对于某些易死亡病原菌检验的样品，在运送过程中可采用运送培养基。 检样标注适当的标记并填写微生物学检验特殊要求的送检申请单。其内容包 括：样品的描述，采样者的姓名，采样的日期、时间、地点，采样时的温度 和湿度等
微生物的培养
－－微生物培养中的氧气条件
培养设备：包括接种室、恒温培养室、恒温培养箱、液体发酵——摇 床、厌氧培养罐等。 好氧培养：例如平板培养、斜面培养、浅层液体培养、液体振荡培养 或通气搅拌培养等都属于好氧培养的方法。 厌氧培养：除了最简便的深层液体培养以外，可以采用物理、化学或 生物学的方法来排除培养容器中的空气或空气中的氧气，创造厌氧条 件。对于严格厌氧的微生物，要用化学和物理并用的方法。在进行厌 氧培养时，可以用指示剂检查系统中的还原条件，一般实验室中常用 的如葡萄糖——美兰指示剂。
（5）生产工序监测采样
•
车间用水：自来水样从车间各水龙头上采取冷却水，汤料从车间容器不同部 位用100ml无菌注射器抽取。
微生物检测技术演示文稿ppt课件
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pH
低温保藏
腌制
微生物 食品
aw
干燥
高温保藏
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消毒 --杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达 到无害化的FF。
灭菌 --用物理和化学方法杀灭或清除传播媒介上一 切微生物的方法。
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-
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利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方
细菌的特殊结构有荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
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大肠杆菌
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金黄色葡萄球菌
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2、酵母
酵母菌（yeast）是一通俗名称，没有确切定义。 一般认为酵母菌具有以下五个特点： ➢ 个体一般以单细胞状态存在 ➢ 多数出芽繁殖，也有的裂殖 ➢ 能发酵糖类产能 ➢ 细胞壁常含有甘露聚糖 ➢ 喜在含糖量较高、酸度较大的环境中生长酸度较
法。高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活， 从而起灭菌作用。低温通常起抑菌作用。 嗜冷微生物适合于－ 10℃生活的细菌，最适生长温度在20℃左右。 嗜温微生物生 长温度在15～45℃之间，最适生长温度在37℃左右的细菌。
嗜热微生物生长温度在30～75℃之间，最适生长温度在55℃， 在100℃以上温度生长，称为嗜高热微生物。
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-
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2. 快速酶触反应及代谢产物的检测
快速酶触反应是根据细菌在生长繁殖过程中 可合成和释放某些特异性的酶，根据酶的特性，选 用相应的底物和指示剂，反应的测定结果有助于细 菌快速诊断。如美国3M Petfifilm TM微生物测试片 可分别快速测定细菌总数、霉菌、酵母菌、大肠杆 菌、金黄色葡萄球菌、大肠菌群等。
微生物检验 PPT课件
技术逐渐推 广应用
第一节 免疫荧光抗体技术检测食品微生物
二、基本原理
抗体与荧光素结合后，并不影响其和相应抗原
发生特异性结合反应，事先将待测抗原固定于载玻
片上，滴加荧光标记抗体，若荧光标记抗体与相应 抗原发生特异性结合反应，不能被缓冲液冲掉，在 荧光显微镜下可观察到荧光，否则荧光抗体被缓冲 液冲掉，在荧光显微镜下观察不到荧光。
四乙基罗丹明 (RB200) 570
四甲基异硫氰酸罗丹明 (TRITC) 550
最大发射 光波长
520～530
595～600
620
荧光颜色
黄绿色
橘红色
橙红色
4.荧光抗体的制备
荧光抗体的制备程序： 制备免疫血清或McAb ↓ 抗体纯化 ↓ 抗体标记： 搅拌法、透析法 方法 ↓ 标记物提纯：去除游离荧光素 去除过度标记或未结合抗体 ↓ 标记物鉴定：含量、特异性、效价、F/P 鉴定 ↓ 实际应用
3.荧光色素的要求
（1）应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基因 （2） 荧光效率高 （3）荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明 （4）与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质 （5）标记方法简单，安全无毒 （6）与蛋白质的结合物稳定，易于保存
异硫氰酸荧光素 ( FITC) 最大吸收 光波长 490～495
第一节 免疫荧光抗体技术检测食品微生物
经典的免疫分析技术
凝集反应、沉淀反应、溶血反应、补体结合实验 特点：成本低、技术简单、结果易于判断，但不易于实 现自动化。
现代的免疫分析技术
荧光免疫标记、放射性免疫标记、酶免疫标记、镧系 （稀土）元素免疫标记、临床化学免疫分析技术、发光免 疫标记、流式免疫微球技术及生物传感器技术等。 特点：灵敏、特异、快速、易于测定及实现自动化。
微生物检验基本技能ppt课件
物理消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥与低温抑菌法
热力灭菌法
干热灭菌法— 焚烧：废弃物、尸体
灼烧：接种环、试管口 干烤：玻璃器皿 红外线：医疗器械
湿热灭菌法— 巴氏消毒法：61.6-62.8 ℃30min或71.7
℃15-30s,主要用于牛乳消毒。
多数氨基酸、简单蛋白 质等
有 机 碳
糖、有机酸、醇、脂类 等
烃类
葡萄糖、蔗糖、各种淀粉、 糖蜜等
天然气、石油及其不同馏份、 石蜡油等
C(?)
C· O
—
CO2
—
CO2
C· O· X
NaHCO3
NaHCO3、CaCO3、等
微生物的氮源谱
类 型 元素水平 N· C· H· O· X N· C· H· O N· H 无 机 氮 化合物水平 复杂蛋白质、核酸等 培养基原料水平 牛肉膏、酵母膏、饼粕 粉、蚕蛹粉等
化学消毒灭菌法
消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧
化剂、表面活性剂、烷化剂。
消毒剂的应用：病人排泄物与分泌物、皮肤、
粘膜、饮水、厕所、空气、手。
影响消毒灭菌效果的因素
消毒剂的性质、浓度与作用时间 微生物的种类与数量 温度 酸碱度 有机物
二、 培养基(culture medium)
无机盐的生理功能
细胞内一般分子成分（P、S、Ca、Ma 、Fe等） 一般功能 渗透压的维持（Na+等）
生理调节物质
大量元素 无
酶的激活剂（M a2+等）
pH的稳定
化能自养菌的能源（S、Fe2+、NH4+、NO2-等）
机
微生物检验技术基础知识课件
0＜100Fra bibliotek5—
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＜10
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四、微生物限度检查法
5.4.2薄膜过滤法
滤膜孔径不大0于.45μm，直径一般5为0mm，若需要用冲洗 液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量1不00超m，过l 总冲洗量 不得超过1000m。l
?贴膜 菌面朝上于相应的琼脂培养基平板上培养，每 基至少制备一张滤膜。 ?阴性对照试（验不得有菌生长） ?菌落报告规则每张滤膜上的菌落数应不1超00过cf，u 若滤 膜上无菌生长，以1乘＜以稀释倍数的值报告菌数。
? 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果 不再复试；
? 供试品的细菌数、霉菌及酵母菌数其中任何一项不符 种项下的规定，应从同一批样品中随，机独抽立样复试两次 ，以3次结果的平均值报告菌数；
? 若供试品的细菌数、霉菌及酵母菌数、控制菌三项检 均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定，反之 品不符合规定。
四、微生物限度检查法
5.5控制菌检查
供试品的控制菌检查应按已验证的方法进行，增菌培 实际用量同控制菌检查方法的验证。
?阳性对照试验加：菌量为10～100cf，u 阳性对照试验应检 出相应的控制菌。 ?阴性对照试验取：稀释液10m代l 替供试液，阴性对照应无 菌生长。 ?按照不同的给药途径，必检的控制菌不同。
造成过度灭菌； ? 培养基保存前应标上名称和制备日期（或到期日期） ? 琼脂培养基不得0℃在或0℃以下存放； ? 琼脂平板最好现配现用，如置冰箱保存，不超过一周
二、培养基
4、培养的再融化方式 ? 水浴加热 ? 微波炉
(生物科技行业)微生物学检验基本技术
（生物科技行业）微生物学检验基本技术微生物学检验基本技术1微生物学检验基本技术随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
第一节微生物形态学检查细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。
一、显微镜检查由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1．普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2μm，而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油（浸）镜放大1000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2．暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。
在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射，因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
3．相差显微镜相差显微镜利用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4．荧光显微镜荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前大多数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。
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淀粉水解试验
某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水 解后，遇碘不再变蓝色。
V-P试验
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸 缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙 酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
• 14、Thank you very much for taking me with you on that splendid outing to London. It was the first time that I had seen the Tower or any of the other famous sights. If I'd gone alone, I couldn't have seen nearly as much, because I wouldn't have known my way about.
沙门氏菌的TSI试验
• 9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。20. 11.2920.11.29Sunday, November 29, 2020
• 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。19:44:3619:44:3619:4411/29/2020 7:44:36 PM
• 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。20.11.2919:44:3619:44Nov-2029-Nov-20
• 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。19:44:3619:44:3619:44Sunday, November 29, 2020
• 13、志不立，天下无可成之事。20.11.2920.11.2919:44:3619:44:36November 29, 2020
甲基红（Methyl Red）试验
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步 分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量 酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
靛基质（Imdole）试验
某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反 应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化 合物。
三糖铁（TSI）琼脂试验
本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢 （变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸 ，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物， 故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍 保持黄色。
slant color/butt color/ gas production/hydrogen sulfide production
a. uninoculated b. little change/alkaline/-/c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/-
。2020年11月29日星期日下午7时44分36秒19:44:3620.11.29
• •
T H E E N D 15、会当凌绝顶，一览众山小。2020年11月下午7时44分20.11.2919:44November 29, 2020
16、如果一个人不知道他要驶向哪头，那么任何风都不是顺风。2020年11月29日星期日7时44分36秒19:44:3629 November 2020
5.复 染— 红色 的藩 红染 液第 二次 染色
细菌呈现第一次染色的 效果紫色，革兰氏阳
性菌（紫阳G＋）；
呈现第二次染色的效果 红色；称革兰氏阴性菌
（红阴G -）
Inoculating an agar plate to obtain single colonies
划线接种，分离纯化
灼烧
微生物生化反应：
2.4 微生物检测的基本技术
染色观察 划线接种，分离纯化 生化观察
革兰氏染色
1884年丹麦医师Gram所发明
革
1.涂片固定
兰
氏
染
色
法
2.单
染—结晶
紫染液第
一次染色
1min
4. 脱色—95%乙醇溶 液进行颜色洗脱
3.媒染— 碘-碘化钾 溶液浸湿
30S
枸椽酸盐试验
某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源， 将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于 指示剂的作用，培养基变为兰色。
尿素酶（Urease）试验
有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为 碱性，酚红呈粉红色。
1、未接种 2、尿素酶阳性 3、尿素酶阴性
生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来 鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
糖酵解试验 淀粉水解试验 V-P试验 甲基红（Methyl Red）试验 靛基质（Imdole）试验 枸椽酸盐试验： 尿素酶（Urease）试验 三糖铁（TSI）琼脂试验
糖酵解试验
不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用， 能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。
• 17、一个人如果不到最高峰，他就没有片刻的安宁，他也就不会感到生命的恬静和光荣。下午7时44分36秒下午7时44分19:44:3620.11.29
谢谢观看