微生物检测的基本技术.pptx
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2.4 微生物检测的基本技术
染色观察 划线接种，分离纯化 生化反应
Foodmate 2004/3/13
染色观察
革兰氏染色
1884年丹麦医师Gram所发明
Hale Waihona Puke Baidu
革
1.涂片固定
兰
氏
染
色
法
2.单
染—结晶
紫染液第
一次染色
1min
4. 脱色—95%乙醇溶 液进行颜色洗脱
3.媒染— 碘-碘化钾 溶液浸湿
30S
淀粉水解试验
某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水 解后，遇碘不再变蓝色。
V-P试验
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸 缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙 酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来 鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
糖酵解试验 淀粉水解试验 V-P试验 甲基红（Methyl Red）试验 靛基质（Imdole）试验 枸椽酸盐试验： 尿素酶（Urease）试验 三糖铁（TSI）琼脂试验
糖酵解试验
不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用， 能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。
• 17、一个人如果不到最高峰，他就没有片刻的安宁，他也就不会感到生命的恬静和光荣。下午7时44分36秒下午7时44分19:44:3620.11.29
谢谢观看
5.复 染— 红色 的藩 红染 液第 二次 染色
细菌呈现第一次染色的 效果紫色，革兰氏阳
性菌（紫阳G＋）；
呈现第二次染色的效果 红色；称革兰氏阴性菌
（红阴G -）
Inoculating an agar plate to obtain single colonies
划线接种，分离纯化
灼烧
微生物生化反应：
三糖铁（TSI）琼脂试验
本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢 （变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸 ，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物， 故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍 保持黄色。
沙门氏菌的TSI试验
• 9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。20. 11.2920.11.29Sunday, November 29, 2020
• 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。19:44:3619:44:3619:4411/29/2020 7:44:36 PM
• 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。20.11.2919:44:3619:44Nov-2029-Nov-20
• 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。19:44:3619:44:3619:44Sunday, November 29, 2020
• 13、志不立，天下无可成之事。20.11.2920.11.2919:44:3619:44:36November 29, 2020
• 14、Thank you very much for taking me with you on that splendid outing to London. It was the first time that I had seen the Tower or any of the other famous sights. If I'd gone alone, I couldn't have seen nearly as much, because I wouldn't have known my way about.
甲基红（Methyl Red）试验
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步 分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量 酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
靛基质（Imdole）试验
某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反 应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化 合物。
枸椽酸盐试验
某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源， 将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于 指示剂的作用，培养基变为兰色。
尿素酶（Urease）试验
有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为 碱性，酚红呈粉红色。
1、未接种 2、尿素酶阳性 3、尿素酶阴性
slant color/butt color/ gas production/hydrogen sulfide production
a. uninoculated b. little change/alkaline/-/c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/-
。2020年11月29日星期日下午7时44分36秒19:44:3620.11.29
• •
T H E E N D 15、会当凌绝顶，一览众山小。2020年11月下午7时44分20.11.2919:44November 29, 2020
16、如果一个人不知道他要驶向哪头，那么任何风都不是顺风。2020年11月29日星期日7时44分36秒19:44:3629 November 2020
染色观察 划线接种，分离纯化 生化反应
Foodmate 2004/3/13
染色观察
革兰氏染色
1884年丹麦医师Gram所发明
Hale Waihona Puke Baidu
革
1.涂片固定
兰
氏
染
色
法
2.单
染—结晶
紫染液第
一次染色
1min
4. 脱色—95%乙醇溶 液进行颜色洗脱
3.媒染— 碘-碘化钾 溶液浸湿
30S
淀粉水解试验
某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水 解后，遇碘不再变蓝色。
V-P试验
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸 缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙 酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来 鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
糖酵解试验 淀粉水解试验 V-P试验 甲基红（Methyl Red）试验 靛基质（Imdole）试验 枸椽酸盐试验： 尿素酶（Urease）试验 三糖铁（TSI）琼脂试验
糖酵解试验
不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用， 能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。
• 17、一个人如果不到最高峰，他就没有片刻的安宁，他也就不会感到生命的恬静和光荣。下午7时44分36秒下午7时44分19:44:3620.11.29
谢谢观看
5.复 染— 红色 的藩 红染 液第 二次 染色
细菌呈现第一次染色的 效果紫色，革兰氏阳
性菌（紫阳G＋）；
呈现第二次染色的效果 红色；称革兰氏阴性菌
（红阴G -）
Inoculating an agar plate to obtain single colonies
划线接种，分离纯化
灼烧
微生物生化反应：
三糖铁（TSI）琼脂试验
本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢 （变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸 ，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物， 故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍 保持黄色。
沙门氏菌的TSI试验
• 9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。20. 11.2920.11.29Sunday, November 29, 2020
• 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。19:44:3619:44:3619:4411/29/2020 7:44:36 PM
• 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。20.11.2919:44:3619:44Nov-2029-Nov-20
• 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。19:44:3619:44:3619:44Sunday, November 29, 2020
• 13、志不立，天下无可成之事。20.11.2920.11.2919:44:3619:44:36November 29, 2020
• 14、Thank you very much for taking me with you on that splendid outing to London. It was the first time that I had seen the Tower or any of the other famous sights. If I'd gone alone, I couldn't have seen nearly as much, because I wouldn't have known my way about.
甲基红（Methyl Red）试验
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步 分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量 酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
靛基质（Imdole）试验
某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反 应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化 合物。
枸椽酸盐试验
某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源， 将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于 指示剂的作用，培养基变为兰色。
尿素酶（Urease）试验
有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为 碱性，酚红呈粉红色。
1、未接种 2、尿素酶阳性 3、尿素酶阴性
slant color/butt color/ gas production/hydrogen sulfide production
a. uninoculated b. little change/alkaline/-/c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/-
。2020年11月29日星期日下午7时44分36秒19:44:3620.11.29
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T H E E N D 15、会当凌绝顶，一览众山小。2020年11月下午7时44分20.11.2919:44November 29, 2020
16、如果一个人不知道他要驶向哪头，那么任何风都不是顺风。2020年11月29日星期日7时44分36秒19:44:3629 November 2020