实验7 用生长谱法测定微生物的营养
2022年信阳师范学院生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年信阳师范学院生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、放线菌既可以以______繁殖，也可以以______繁殖，______繁殖是放线菌的主要繁殖方式。
2、病毒的非增殖性感染有______、______和______3种类型。
3、在豆血红蛋白分子中，其蛋白质部分由______所触发，再由______ 的基因进行编码和合成；而血红素部分则由______所触发，再由______ 基因进行编码和合成。
4、化能有机营养型微生物的能源是______，氢供体是______，基本碳源是______，其代表性微生物是______和______等。
5、真菌菌丝具有的功能是______和______。
6、人类对微生物的发现和认识，比对动、植物晚得多，其原因是微生物具有______、______、______和______四个特点。
7、巴氏消毒法的具体方法很多，主要可分为两类，即______和______。
8、微生物生态学是生态学的一个分支，它的研究对象是______与其周围的______和______环境条件间的相互作用规律。
9、艾姆斯试验中用的菌种是______的营养缺陷型______，通过回复突变可以测定待测样品中______的存在。
10、病原菌主要通过______、______和______等的作用在宿主体内繁殖与扩散。
二、判断题11、细菌的鞭毛是通过其顶端生长而非基部生长而伸长的。
（）12、被动扩散是微生物细胞吸收营养物质的主要方式。
（）13、反硝化作用是化能自养微生物以硝酸或亚硝酸盐为电子受体进行的无氧呼吸。
（）14、TMV衣壳是由许多衣壳粒所构成，衣壳粒是以逆时针方向螺旋排列在核心外围的。
（）15、伞菌的担子是一个细胞，而木耳的担子由三个横隔分成四个细胞。
（）16、菌物界是指广义的真菌界，包括黏菌门、假菌门和真菌门（狭义的真菌）3部分。
（）17、可采用高压灭菌对抗体进行灭菌。
（）18、微生物与其他生物之间的关系只有互利或互害的关系。
普通生物学实验四十三微生物营养和环境条件设计实验(精)
1、了解营养元素对微生物生长发育的影 响； 2、了解微生物生长与氧气的关系； 3、了解温度对微生物生长发育的影响； 4、了解氢离子浓度对微生物生长发育的 影响； 5、了解紫外线的杀菌作用原理； 6、了解化学药剂的杀菌和消毒作用，学 习常用消毒剂的浓度和使用方法。
二、实验内容 要求根据实验目的确定实验内容，可以 是以下的参考内容，也可以是其它内容。 营养元素对黑曲霉或其它微生物生长的影 响； 氧气对微生物生长的影响； 温度对微生物生长的影响； 氢离子浓度对微生物生长的影响； 紫外线杀菌试验； 化学药剂对微生物的作用。
普通生物学实验四十三一实验目的要求能够根据自己的兴趣实验室条件实验时间等方面的因素设计一个微生物的营养物质对微生物生长的影响实验或环境条件对微生物生长的影响实验或者是这两个实验综合起来设计成一个实验以达到自己的实验目的
普通生物学实验四十三
微生物营养和
环境条件设计实验
一、实验目的
要求能够根据自己的兴趣、实验室 条件、实验时间等方面的因素，设计一 个微生物的营养物质对微生物生长的影 响实验，或环境条件对微生物生长的影 响实验，或者是这两个实验综合起来设 计成一个实验，以达到自己的实验目的。 如：
（二）思考题 1、根据实验结果，在碳、氮、磷、钾、锌等多种 营养元素中，说明影响微生物生长最大的是哪一 个？能否解释其原因？ 2、 根据微生物生长对氧气的要求，举例说明在培 养微生物时应做怎样的试验处理？ 3、你认为高温微生物能感染温血动物吗？为什么? 4、直接在紫外灯下观察实验结果时，为什么要隔一 块普通玻璃？ 5、某公司推出一种新型饮料，并声称是100%纯天 然产品，不含防腐剂，利用你所掌握的微生物学 知识，设计一个简单实验来初步判断此饮料是否 含有防腐剂。 6、总结设计实验的收获与体会，并提出建设性的建 议。
微生物生长的测定方法
微生物生长的测定方法作者：刘华来源：《神州·下旬刊》2013年第02期摘要：微生物生长情况可以通过测定单位时间里微生物数量或生物量（biomass）的变化来评价。
通过微生物生长的测定可以客观地评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响，或评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制（或杀死）作用的效果，或客观地反映微生物生长的规律。
因此微生物生长的测量在理论上和实践上有着重要的意义。
关键词：微生物测定方法计数法生理指标法微生物生长的测定有计数、重量和生理指标等方法。
1、计数法此法通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物的数量。
计数法又分为直接计数和间接计数两类。
⑴直接计数这类方法是利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点不能区分死菌与活菌。
计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积l mm2和高0.1mm的计数室，在1mm2的面积里又被刻划成25个（或16个）中格，每个中格进—步划分成16个（或25个）小格，但计数室都是由400个小格组成。
将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计算4-5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品所含的细菌数。
每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数×400×l000×稀释倍数⑵间接计数法此法又称活菌计数法，其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。
将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml 故人无菌平皿，再倒人适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放人适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5此法可因操作不熟练造成污染，或因培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不稳定。
用生长谱法测定微生物的营养要求
4.用6根无菌牙签分别挑取6中糖对号点植。 5.待糖粒溶化后再将平板倒置于37℃温室保温18～
24h，观察各种糖周围有无菌落圈。
作业
在某微生物实验室做实验的一个学生不慎将 两种较贵重的氨基酸样品的标签弄混，这两种氨 基酸样品均为白色粉末，在外观上很难区别，他 一时难以找到进行纸层析分析所需的标准氨基酸 对照品，实验室也不具备氨基酸分析仪，但实验 室有许多不同类型的氨基酸营养缺陷型菌株，在 这种情况下，能采用什么简单的微生物学实验将 此两种氨基酸样品区分开？
实验九
用生长谱法测定微生物 的营养要求
一.实验目的及要求
学习并掌握生长谱测定微生物营养 要求的基本原理和方法
二.基本原理
如果人工配制一种缺乏某种营养物质（例如 碳源）的琼脂培养基，接入菌种混合均匀后倒平 板，再将所缺乏的营养物质（各种碳源）点植于 平板上，在适宜的条件下培养后，如果接种的这 种微生物能够利用某种碳源，就会在点植பைடு நூலகம்该种 碳源物质周围生长繁殖，呈现出有许多小菌落组 成圆形区域（菌落圈），而该微生物不能利用的 碳源周围就不会有微生物的生长，最终在平板上 呈现一定的生长图形。
三.材料仪器
1.菌种：大肠杆菌（E. coli） 2.培养基 ：合成培养基 3.溶液或试剂
木糖，葡萄糖，半乳糖，麦芽糖，蔗糖， 乳糖，无菌生理盐水等 4 .仪器或其他用具 无菌平皿，无菌牙签，吸管。
四.实验内容及方法
1.将培养24h的大肠杆菌斜面用无菌生理盐水洗下， 制成均悬液。
2. 将合成培养基溶化并冷却至50℃左右，加入上述 菌悬液并混匀，倒平板。
2022年四川大学生物科学专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年四川大学生物科学专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、E.coli的肽聚糖单体结构与Staphylococcus aureus的基本相同，所不同的是前者① ______，② ______。
2、烈性噬菌体生活史可分五个阶段，即______、______、______、______和______。
3、TCA循环是指丙酮酸经过一系列的循环式反应而彻底氧化、脱羧、形成______、______和______的过程。
4、用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括：______、______和______。
5、核糖体的功能是______，它由存在于表层的______和位于内层的______两种成分组成；在真核生物细胞质中的核糖体的沉降系数一般为______，而在线粒体中则为______，原核生物的一般为______。
6、由科赫提出的确证某病原体为某传染病病因的学说称为______，它的主要内容有：①______，② ______，③ ______，④ ______。
7、化学治疗剂包括______、______、______和______等。
8、微生物寄生于其他微生物的例子如______、______；微生物寄生于植物的例子如______；微生物寄生于动物的例子如______。
9、普遍转导与局限转导主要区别在于：①普遍转导噬菌体是______噬菌体，而局限转导噬菌体是______噬菌体，②普遍转导噬菌体能转移供体菌的______基因，而局限转导噬菌体只能转移供体菌的______基因。
10、抗原物质呈现其免疫原性的物质基础有三点，即______、______和______。
二、判断题11、细菌和真菌的鞭毛都是以旋转方式来推动细胞运动的。
（）12、微生物有极广的碳源谱，它不论对整个微生物界整体或对个别微生物种来说，都是一致的。
（）13、酿酒酵母只进行同型酒精发酵，而绝不存在异型酒精发酵。
（）14、E.coli T偶数噬菌体的核心是由线状双链DNA构成的。
大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选
大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选生命科学学院09级生物技术1班余振洋200900140156指导老师：林建群同组者：潘红芳摘要营养缺陷型菌株是微生物遗传学研究中重要的选择标记和育种的重要手段，在发酵工业上有广泛用途。
本实验以大肠杆菌原养型菌株为材料，计划通过诱变得到并筛选出营养缺陷型，从而了解细菌营养缺陷性的获得步骤并掌握氨基酸营养缺陷型的筛选方法和鉴别过程。
关键词营养缺陷，诱变，生长谱测定，大肠杆菌（E.coli）1．引言1.1 营养缺陷型营养缺陷型是指缺乏合成某种对自身生长繁殖所必须的营养物质（氨基酸、维生素、碱基等）的能力的突变型，只能从周围环境或培养基中获得这些物质或其前体物才能正常生长。
由于营养缺陷型不能合成某种末端产物，解除了合成代谢的反馈抑制作用，限量添加所需生长因子克服生长障碍后，可选择性大量合成积累所需的中间代谢产物。
因此，营养缺陷型在工业上有重要的应用价值。
营养缺陷型是由野生型突变产生，营养缺陷型经回复突变恢复野生表型得原养型。
1.2 紫外线诱变紫外线是一种短波光，波长介于100-400nm之间。
紫外线是一种非电离辐射诱变剂，照射物体时可使原子的内层电子能级提高，但不能使原子失去电子。
紫外线是微生物育种中最常用的诱变剂之一。
由于碱基间电子的相互作用，DNA分子在260nm处有最大的紫外吸收峰，因此决定了紫外线诱导细胞发生突变的有效波长为260nm。
15W紫外灯产生的紫外线中，80%集中在260nm左右，诱变效应良好。
低剂量紫外线可诱变获得较多的正突变，高剂量紫外线则易产生大量负突变，但可获得特性明显改变的突变菌株。
紫外线诱发突变的原理是使DNA同一链上的两相邻胸腺嘧啶之间发生交联，形成胸腺嘧啶二聚体。
在DNA复制时，相应核苷酸无法与胸腺嘧啶二聚体配对形成碱基对，DNA复制中断，引起突变。
当细胞中的DNA分子含有大量胸腺嘧啶二聚体时，SOS修复机制被激活，DNA被修复，但包含大量错配的碱基对，从而导致基因突变。
实验八 微生物营养需求的测定(张理珉)
——用生长图谱法（Auxanographic） ——用生长图谱法（Auxanographic） 用生长图谱法 测定大肠杆菌的碳源需求
实 验 内 容 一
培养基和实验物品的准备
实验课马上要进行的工作（每组） 实验课马上要进行的工作（每组）
1、配制50ml同化碳源固体培养基——液体培养基已由 配制50ml同化碳源固体培养基 同化碳源固体培养基——液体培养基已由 教师准备好，各组量取， 教师准备好，各组量取，按配方称取相应琼脂加入包 扎灭菌； 扎灭菌； 2、5ml无菌水2支（装于15×150mm试管） 5ml无菌水 无菌水2 装于15×150mm试管 试管） —— 1支用于菌悬液的制备；另1支用于空白对照 支用于菌悬液的制备； 可以多装一些），使用蒸馏水制作； ），使用蒸馏水制作 （可以多装一些），使用蒸馏水制作； 3、2ml无菌吸管1支 2ml无菌吸管 无菌吸管1 4、直径5~6mm圆形滤纸片20片左右，用纸包好灭菌。 直径5~6mm圆形滤纸片 片左右 用纸包好灭菌。 圆形滤纸片20片左右， 注意：配制培养基及糖试剂必须用蒸馏水。 注意：配制培养基及糖试剂必须用蒸馏水。 5、准备下次实验用的材料：用5ml牛肉膏蛋白胨半固体 准备下次实验用的材料： 5ml牛肉膏蛋白胨半固体 培养基（ %的琼脂），融化后 教师已准备好） 的琼脂），融化后（ 培养基（0.8 %的琼脂），融化后（教师已准备好） 分装于15×150mm试管中加塞包扎灭菌 10支 试管中加塞包扎灭菌， 分装于15×150mm试管中加塞包扎灭菌，10支/组；
4、培养： 、培养：
37 ℃倒置培养12~24小时 倒置培养12~24小时
5、观察结果： 、观察结果：
生长状况、菌苔的直径大小和浓淡程度。 生长状况、菌苔的直径大小和浓淡程度。 各班次确定具体时间。 各班次确定具体时间。
生长谱法设计实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生长谱法的基本原理和操作步骤；2. 掌握利用生长谱法研究植物生长发育规律的方法；3. 通过实验，验证不同生长条件对植物生长发育的影响。
二、实验原理生长谱法是一种研究植物生长发育规律的方法，通过改变植物的生长条件（如光照、温度、水分等），观察植物的生长发育变化，从而了解植物在不同生长条件下的生长发育规律。
三、实验材料1. 植物材料：小麦种子；2. 实验器具：生长箱、温度计、湿度计、光照计、显微镜、电子天平、剪刀、培养皿等；3. 试剂：蒸馏水、植物生长调节剂等。
四、实验方法1. 实验分组：将小麦种子分为若干组，每组设置不同的生长条件，如温度、光照、水分等；2. 种子处理：将小麦种子浸泡24小时，然后用蒸馏水洗净，均匀播种于培养皿中；3. 生长条件设置：根据实验设计，调整生长箱中的温度、光照、水分等条件；4. 观察与记录：定期观察植物的生长发育情况，包括植株高度、叶片数量、叶面积等；5. 数据处理：将观察数据记录于表格中，并进行统计分析。
五、实验步骤1. 种子浸泡：将小麦种子浸泡24小时，然后用蒸馏水洗净；2. 播种：将处理好的小麦种子均匀播种于培养皿中；3. 设置生长条件：根据实验设计，调整生长箱中的温度、光照、水分等条件；4. 观察与记录：定期观察植物的生长发育情况，包括植株高度、叶片数量、叶面积等；5. 数据记录：将观察数据记录于表格中；6. 数据处理：对观察数据进行统计分析。
六、实验结果与分析1. 不同温度对小麦生长的影响：观察不同温度条件下小麦的生长发育情况，分析温度对小麦植株高度、叶片数量、叶面积等指标的影响；2. 不同光照对小麦生长的影响：观察不同光照条件下小麦的生长发育情况，分析光照对小麦植株高度、叶片数量、叶面积等指标的影响；3. 不同水分对小麦生长的影响：观察不同水分条件下小麦的生长发育情况，分析水分对小麦植株高度、叶片数量、叶面积等指标的影响；4. 统计分析：对实验数据进行统计分析，得出不同生长条件下小麦生长发育的规律。
微生物的生长-生长测定PPT共27页
第
七 4.涂片染色法
章
应用：可同时计数不同微生物的菌数，适于土壤、
牛奶中细菌计数。
微
生方法：用镜台测微尺计算出视野面积；取0.1ml菌
物 液涂于1cm2面积上，计数后代入公式：
的
生
每ml原菌液含菌数
长
=视野中平均菌数×(涂布面积/视野面积) ×100 ×稀释倍数
（二）计繁殖数间接法
是一种活菌计数法，这是一种依据活菌在液体 培养基中会使其变混或在固体培养基上（内）形成 菌落的原理而设计。
已知细胞数的微生物样品 测定ATP含量
测定未知细胞数的 微生物样品的ATP含量
换算出每个细胞所含的ATP量
即可算出未知样中细胞数
ATP浓度的测定 荧光素酶 E ＋ 还原型荧光素 LH2 ＋ ATP
Mg2＋
E-LH2 • AMP复合物 ＋ ppi O2
光 E＋L＋AMP＋H2O ＋
生物发光仪
在这个反应系统中，酶、荧光素和O2都过量时，
微生物的生长-生长测定
16、人民应该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱献 生
最常用的是平板菌落计数法
平板菌落计数法
最常用的一种方法。常用来测定牛奶、食品、 水及其它材料中的含菌数。
有些细菌如无法在固体培养基中生长或其他 原因，可用液体稀释法，借助统计学来判断其活 菌数。
实验7 用生长谱法测定微生物的营养
六结果与讨论 绘图表示生长情况。 根据实验结果，大肠杆菌和枯草杆菌所能利用的碳 源各是什么？
和方法。 二、实验内容 • 用生长谱测定大肠杆菌和枯草杆菌所需要的碳源。 三、实验原理 • 为了使微生物生长繁殖，必须供给所需碳源、氮源、 无机盐、微量元素、生长因子等，如果缺少其中一种 该微生物便不能生长。根据这一特性，可将微生物接 种在一种只缺少其中某些营养物的完全适合的琼脂培 养基中，倒成平板，再将所缺的这种营养物（如各种 碳源）点植于平板上，经适温培养该营养物便逐渐扩 散于植点周围。该微生物若可利用或需要此种营养物， 便在这种营养物扩散处生长繁殖，微生物繁殖之处便 出现圆形菌落圈，即生长图形，故此法为生长谱法。 这种方法可以定性，定量地测定微生物对各种营
五)实验用具 无菌平板，无菌镊子，无菌试管，无菌1000ul吸头， 酒精灯。 五、实验步骤 • 将大肠杆菌斜面和枯草杆菌斜面用无菌生理盐水洗 下，制成菌悬液。 • 将合成培养基约20ml,熔化后冷却到50 ℃左右加入 1000 ul大肠杆菌悬液，摇匀，立即倾注于直径为 90mm的无菌培养皿中，待冷却凝固后，在平板背 面用记号笔划分六个区，并标明要点植的各种糖类， • 用无菌镊子，分别夹取6种糖中的滤纸片对号点植。 （注意防止交叉糖份污染） • 倒置于37℃温箱培养18-24h，观察各种滤纸片周围 有无菌落圈。
将合成培养基约20ml熔化后冷却到50左右加入1000ul大肠杆菌悬液摇匀立即倾注于直径为90mm的无菌培养皿中待冷却凝固后在平板背面用记号笔划分六个区并标明要点植的各种糖类用无菌镊子分别夹取6种糖中的滤纸片对号点植
实验7 用生长谱法测定微生物 的营养要求
一、实验目的 学习并掌握用生长谱法测定微生物营养的基本原理
养物质（如碳源、氮源维生素）的需要，字微生物
微生物的营养与生长
化能自养型 光能自养型
二氧化碳、碳 酸盐等
光能自养型
二氧化碳、碳 酸盐等
氮源
蛋白质及其降解 产物
蛋白质及降解 物、有机无机 氮化物
无机氮化物
无机氮化物
能源 生长因子
与碳源同 维生素
有机碳源或光 能
氧化无机物或 利用光能
光能
部分需要
不需要
不需要
无机元素
无机盐
无机盐
无机盐
无机盐
四、微生物对营养物质的吸收方式、特点 1、 简单扩散( simple diffusion )，一种物理扩散。 动力：细胞膜两侧的浓度差。 能量：不需。 载体：不需。 例：CO2 、气体、水、小分子脂溶性、水溶性 物质。大肠杆菌对Na+的吸收。
Van Niel 通式：CO2+H2A——[CH2O]+H2O+A
2、光能有机营养型 能源：光 碳源：二氧化碳或简单有机化合物 供氢体：有机化合物
例：红螺菌： CO2 +异丙醇——[CH2O]+丙酮+H2O 可利用净化有机废水，生产SCP。
3、化能无机营养型 氢细菌、铁细菌、硫化细菌、硝化细菌等 能源：还原态无机物氧化：NH3、NO2、H2、H2S 、S、 S2O3-、Fe2+等。 碳源：CO2、CO32+ 供氢体：无机化合物 例1：氧化亚铁硫杆菌：Fe2+—— Fe3+ + e + E
工业应用：获取大量菌体或代谢产物。可以通过补 料或调节pH值延长此时期。
4、衰亡期（declined phase） 生长出现负增长，即新生细胞数＜死亡的细胞数，
现象：形态多样，如菌体畸形等；有的微生物 出现自溶；有的微生物开始产生或放出对 人类有用的抗生素等次生代谢物。
山东省烟台市第一中学2024年高三(最后冲刺)生物试卷含解析
2024年高考生物模拟试卷注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。
2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。
回答非选择题时，将答案写在答题卡上，写在本试卷上无效。
3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。
一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。
每小题只有一个选项符合题目要求）1．下列关于生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质鉴定实验的叙述，正确的是A．可溶性还原糖、蛋白质的鉴定，可用酒精灯直接加热B．脂肪鉴定的操作步骤依次是切片→制片→染色→洗去浮色→观察C．苏丹Ⅲ染液可将脂肪颗粒染成橘黄色D．常用番茄、苹果等作为鉴定植物组织内还原糖的实验材料2．下列有关生物变异和进化的叙述，错误的是（）A．隔离是物种形成的必要条件B．杂合子Aa自交后代出现性状分离、是基因重组的结果C．无论是自然选择还是人工选择作用，都能使种群基因频率发生定向改变D．二倍体西瓜经一定浓度秋水仙素诱导，可得到四倍体西瓜，从而产生新物种3．在家兔动脉血压正常波动过程中，当血压升高时，其血管壁上的压力感受器感受到刺激可以反射性地引起心跳减慢和小血管舒张，从而使血压降低，仅由此调节过程判断，这一调节属于（）A．神经调节，负反馈调节B．神经调节，免疫调节C．体液调节，负反馈调节D．体液调节，免疫调节4．一对表现型正常的夫妇生了一个患某种单基因遗传病的男孩（不考虑突变和染色体交叉互换）。
下列分析合理的是（）A．可以断定控制此病的基因位于X染色体上B．可以排除控制此病的基因位于Y染色体上C．可以断定该男孩的母亲是杂合体D．若这对夫妇再生一个男孩，该男孩正常的概率是1/25．下列关于原核细胞、真核细胞和病毒的叙述正确的是（）A．原核细胞生命系统的边界是细胞的最外层结构B．高等动物体内的大多数细胞不会形成纺锤体C．含叶绿体的细胞内色素均存在于原生质层内D．用含32P的培养基可直接标记新冠病毒的遗传物质6．下列关于真核细胞结构和功能的叙述，正确的是A．组成细胞生物膜的基本支架都是磷脂双分子层B．高尔基体是细胞内蛋白质合成、加工和运输的场所C．细胞利用核孔实现核内外大分子物质的自由转运D．在mRNA合成的同时都会有多个核糖体结合到mRNA上二、综合题：本大题共4小题7．（9分）图甲是某学习小组同学“探究影响植物光合速率因素”的实验装置，灯为冷光源。
微生物生长的几种检测方法
微生物生长的几种检测方法关于微生物生长的几种检测方法一、生长量测定法1.1体积测量法：又称测菌丝浓度法。
通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。
菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。
1.2称干重法：可用离心或过滤法测定。
一般干重为湿重的10-20%。
在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。
干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。
如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。
称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activitydryyeast,ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
1.3比浊法：微生物的生长引起培养物混浊度的增高。
通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。
对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。
将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。
该法主要用于发酵工业菌体生长监测。
如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。
1.4菌丝长度测量法：对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长二、微生物计数法2.1血球计数板法:血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1mm2面积上刻有400个小方格。
第八章微生物遗传变异与菌种选育习题及答案
第八章微生物遗传变异与菌种选育习题及答案第八章《微生物遗传与菌种选育》习题及参考答案一、名词解释1．点突变：DNA链上的一对或少数几对碱基发生改变，称为点突变。
2．感受态：受体菌最易接受到外源DNA片段并实现转化的生理状态。
3．基因工程：又称重组DNA技术，它是根据人们的需要在体外将供体生物控制某种遗传性状的一段生物大分子-----DNA切割后，同载体连接，然后导入受体生物细胞中进行复制、表达，从而获得新物种的一种崭新的育种技术。
4．接合：遗传物质通过细胞间的直接接触从一个细胞转入到另一细胞而表达的过程称为接合。
5．F'菌株：当Hfr菌株内的F因子不正常切割而脱离其染色体时，可形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，含有这种F因子的菌株称为F'菌株。
6．诱变育种：使用各种物理或化学因子处理微生物细胞，提高突变率，从中挑选出少数符合育种目的的突变株。
7．营养缺陷型：由于基因突变引起菌株在一些营养物质（如氨基酸、维生素和碱基）的合成能力上出现缺陷，而必须在基本培养基中添加相应的物质才能正常生长的突变型。
野生型：指从自然界分离到的任何微生物在其发生人为营养缺陷突变前的原始菌株。
原养型：一般指营养缺陷型突变株经回复突变或重组后产生的菌株。
9．重组DNA技术：是指对遗传信息的分子操作和施工，即把分离到的或合成的基因经过改造，插入载体中，导入宿主细胞内，使其扩增和表达，从而获得大量基因产物或新物种的一种崭新的育种技术。
10．基因重组：或称遗传重组，两个独立基因组内的遗传基因，通过一定的途径转移到一起，形成新的稳定基因组的过程。
11．基因突变（genemutation）和移码突变：基因突变（genemutation）：一个基因内部遗传结构或DNA序列的任何改变，而导致的遗传变化就称基因突变。
移码突变：指诱变剂会使DNA分子中的一个或少数几个核苷酸的增添或缺失，从而使该部位后面的全部遗传密码发生转录和转译错误的一类突变。
生长谱法鉴定营养缺陷型
生长谱法鉴定营养缺陷型
生长谱法主要用于鉴定微生物的哪种特性？
A. 抗生素敏感性
B. 营养需求
C. 酸碱耐受性
D. 温度适应性
在进行生长谱法鉴定时，通常需要使用哪种培养基作为基础？
A. 复杂培养基
B. 最小培养基
C. 选择培养基
D. 鉴别培养基
如果某种微生物在添加了特定氨基酸的最小培养基上能够生长，而在未添加该氨基酸的培养基上不能生长，这表明该微生物是哪种类型的营养缺陷型？
A. 原型
B. 渗漏型
C. 条件型
D. 绝对需要型
生长谱法鉴定营养缺陷型时，通常不需要考虑以下哪个因素？
A. 培养基的pH值
B. 培养基的渗透压
C. 培养温度和时间
D. 微生物的接种量
下列哪种微生物的营养缺陷型不能通过生长谱法进行有效鉴定？
A. 细菌
B. 酵母菌
C. 霉菌
D. 病毒
在生长谱法鉴定中，如果发现某种微生物在所有测试的最小培养基上都不能生长，这可能表明什么？
A. 该微生物是多重营养缺陷型
B. 该微生物对培养基中的某些成分敏感
C. 该微生物需要特殊的生长因子
D. 该微生物已经死亡或失活
生长谱法鉴定营养缺陷型时，通常选择哪种对照来验证实验结果的有效性？
A. 野生型微生物
B. 已知营养缺陷型的微生物
C. 不同种类的微生物
D. 不含任何微生物的培养基
下列关于生长谱法鉴定营养缺陷型的描述中，哪一项是不正确的？
A. 可以确定微生物对哪些营养物质有需求
B. 可以用于筛选营养缺陷型突变体
C. 可以直接测定微生物的生长速率
D. 可以为微生物的营养需求和代谢途径研究提供线索。
实验一用生长谱法测定微生物的营养需求
3、待培养基凝固后，在平板背面用记号笔划分为六个区，在平板
背面边缘处标记要点植的各种糖类。
4、在桌面酒精灯火焰处用镊子分别加入蘸有不同糖类的滤纸片。 5、待平板吸收干燥后，倒置于37℃温室培养18～24小时，观
察各种糖周围有无生长圈。
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这种方法可以定性的测定微生物对各种营养物质的需要。 在微生物育种和营养缺陷型的鉴定中也常用此法。
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三、实验材料
1．培养基：基础盐合成培养基（无碳培养基），固体
NaCl
1g
KH2PO4
0.5g
K2HPO4 0.5g
NH4SO4
2g
MgSO4▪7H2O 0.2g
琼脂
20g
pH 7.0
/ 1L
2. 糖类（10%,v/v ，115oC，30min高压灭菌）
木糖，葡萄糖，甘露醇，麦芽糖，蔗纸片，打孔器等
4. 实验菌种：大肠杆菌（E.coli）
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四、实验内容
1、将无碳培养基溶化后冷却至到50℃左右。 2、用无菌吸管吸取0.5ml E.coli 悬液于直径为12㎝的无菌培养
实验一用生长谱法测定 微生物的营养需求
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一、目的要求
学习用生长谱法测定微生物营养需要 （碳源）的基本原理和方法。
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二、基本原理
为了使微生物生长、繁殖，必须供给所需要的碳源、氮源、 无机盐、生长因子等，如果缺少其中一种，微生物便不能生长。
培养基的六大营养因素： 碳源
氮源
能源 无机盐
生长因子
水
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根据这一特性，可将微生物接种在一种只缺少某种营 养物的完全合适的琼脂培养基中，倒成平板，再将所 缺的营养物（例如各种碳源）点植于平板上，经适温 培养，该营养物便逐渐扩散于植点周围。该微生物若 需要此种营养物，便在这种营养物扩散处生长繁殖， 微生物繁殖之处便出现圆形落圈，即生长图形，故称 此法为生长谱法。
微生物纯培养与生长量测定
微生物纯培养与生长量测定一、微生物纯培养技术微生物在自然界中不仅分布广，而且种类多，并多是混杂地生活在一起。
要想研究或利用某一微生物，必须把混杂的微生物类群分离开来，以得到只含一种微生物的纯培养。
微生物学中将在实验室条件下由一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为微生物的纯培养。
纯培养技术包括两个基本步骤：① 从自然环境中分离培养对象。
② 在以培养对象为唯一生物种类的隔离环境中培养、增殖，获得这一生物种类的细胞群体。
针对不同微生物的特点，有许多分离方法。
应用最广的是平板法分离纯培养。
（一）、用固体培养基分离纯培养单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落（colony）。
当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔（lawn）。
不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。
大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。
所谓平板，即培养平板（culture plate）的简称，它是指固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。
这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。
固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。
最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。
这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。
1. 稀释倒平板法（pour plate method）先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。
微生物的生长与控制--微生物生长的测定方法
二、微生物生长的测定方法
3
微生物计数法－染色计数法
➢ 染色计数法：✔采用特定的染色技术进行活菌染色，然后用光学显微镜计数的方法，
可分别对活菌和死菌进行计数；
✔例：酵母活细胞计数→美蓝氧化型呈蓝色，还原型无色，用美蓝对酵母
的活细胞进行染色，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由
➢ 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌，因此， 要求菌悬液中不含任何碎片。
二、微生物生长的测定方法
3
微生物计数法－薄膜过滤计数法
➢ 薄膜过滤计数法：
➢ 常用该法测定含菌量较少的空气和水中的微生物数目；
➢ 将定量的样品通过薄膜（硝化纤维素薄膜、醋酸纤维薄膜）过滤，菌体被阻留 在滤膜上，取下滤膜进行培养，然后计算菌落数，可求出样品中所含菌数。
二、微生物生长的测定方法
3
微生物计数法－电子计数器法
➢ 电子计数器法：
➢ 第一步：在电子计数器中放有电解质及两个电极，将电极一端放入带微孔的小
管，通电抽真空、使含有菌体的电解质从小孔进人管内；
➢ 第二步：测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通 过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上； 因样品的体积已知，故可以计算菌体的浓度，同时菌体的大小与电阻的大小成 正比；
二、微生物生长的测定方法
２ 生长量测定法－比浊法 ➢ 比浊法：在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，
菌数越多，光密度越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液
的光密度，就可反应出菌液的浓度；
➢ 具体测量方法：✔ McFarland 比浊管法：用不同浓度的 BaCl2与稀 H2SO4，配制成 10
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六结果与讨论 绘图表示生长情况。 根据实验结果，大肠杆菌和枯草杆菌所能利用的碳 源各是什么？
实验7 用生长谱法测定微生物 的营养要求
一、实验目的 学习并掌握用生长谱法测定微生物营养的基本原理
和方法。 二、实验内பைடு நூலகம் • 用生长谱测定大肠杆菌和枯草杆菌所需要的碳源。 三、实验原理 • 为了使微生物生长繁殖，必须供给所需碳源、氮源、 无机盐、微量元素、生长因子等，如果缺少其中一种 该微生物便不能生长。根据这一特性，可将微生物接 种在一种只缺少其中某些营养物的完全适合的琼脂培 养基中，倒成平板，再将所缺的这种营养物（如各种 碳源）点植于平板上，经适温培养该营养物便逐渐扩 散于植点周围。该微生物若可利用或需要此种营养物， 便在这种营养物扩散处生长繁殖，微生物繁殖之处便 出现圆形菌落圈，即生长图形，故此法为生长谱法。 这种方法可以定性，定量地测定微生物对各种营
五)实验用具 无菌平板，无菌镊子，无菌试管，无菌1000ul吸头， 酒精灯。 五、实验步骤 • 将大肠杆菌斜面和枯草杆菌斜面用无菌生理盐水洗 下，制成菌悬液。 • 将合成培养基约20ml,熔化后冷却到50 ℃左右加入 1000 ul大肠杆菌悬液，摇匀，立即倾注于直径为 90mm的无菌培养皿中，待冷却凝固后，在平板背 面用记号笔划分六个区，并标明要点植的各种糖类， • 用无菌镊子，分别夹取6种糖中的滤纸片对号点植。 （注意防止交叉糖份污染） • 倒置于37℃温箱培养18-24h，观察各种滤纸片周围 有无菌落圈。
养物质（如碳源、氮源维生素）的需要，字微生物
育种和营养缺陷型的鉴定中也用此法。
四、实验仪器、材料和用具 • 一)实验仪器 • 37℃恒温培养箱、1000ul取液器 • 二)微生物材料 • 大肠杆菌及枯草杆菌斜面。 • 三)培养基 • 合成培养基（详细配方见附录4.16） • 加12ml 0.04%的溴甲酚紫（PH5.2-PH6.8，颜色由黄色 变紫色，作为指示剂）0.1Mpa灭菌20min。 • 四)试剂 • 分别放有小滤纸片的10%木糖，葡萄糖，半乳糖，麦芽 糖，蔗糖，乳糖无菌溶液，无菌生理盐水。