组织切片染色技术(PPT46页)

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组织切片制作PPT课件

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载玻 片
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九 、烤 片 40℃需烤1天或1昼夜;60℃烤0.5至1小时,放在酒精
灯上烤片(必须来回晃动),或70℃左右的温度烤片, 只需3至5分钟即可。
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十、 染 色 1 苏木精(素)-伊红染色方法
具体步骤:
(1)二甲苯 I
(10 min)
(2)二甲苯II
(5 min)
1 切片前的准备 (1)切片前必须了解切片机的基本结构和性能。装刀架、刀片。检验刀片是否锋利。 (2)载玻片、盖玻片的处理:洗液浸泡24小时后用自来水充分洗涤,95%酒精中浸泡,
再用软绸布或纱布擦干待用 。 (3)为了使切出的薄片能粘贴在载玻片上,可用蛋清与甘油(1:1)混合物均匀抹在载玻
片上,再使切片附贴在玻片上。 (4)另外,准备水浴锅、蓬松的中号毛笔,眼科镊,水槽等物。
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2 切片制作过程
(1)冷冻组织蜡块,固定刀架、刀片 和蜡块。 (2)切片 :切片厚度:5μm;转速: 40至50次/分钟。 (3) 展片 (4)捞片 、烫片(45o )、捞片
(5)切片过程中,固定好蜡块、刀片,注意刀与蜡块的角度(5o )。出现蜡片上卷、裂隙、 刀痕等立即移动刀片或切片刀,换至刀刃锋利处。毛笔必须由下向上拔动,烫片时水温不宜 过高等等。
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二、固 定
固定就是将采取的新鲜组织,放入固定液内,借助化学药品的作用使细胞内 的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成份沉淀保存下来。同时,使组织硬化不变形, 有利于固定以后的处理。
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1
固定液的用量
应充足,一般为组织块体积的10倍左右。
2
固定时间
应根据组织的种类、性质、大小,固定液的种类、性质、渗透力的强弱而定。

免疫组织化学染色技术PPT课件

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• 抗原(antigen)
1. 定义:是一类在适合条件下能激发机体免疫系 统发生免疫应答,并能与免疫应答产生的效应物 质(抗体和效应细胞)在体内或体外发生特异性 结合反应的物质。抗原具有两种性能:
(1)免疫原性(immunogenicity) 指抗原分子 具有诱导机体产生免疫应答的特性。
( 2 ) 反 应 原 性 ( reactogenicity ) 指 抗 原 分 子 与 抗体或效应 T 细胞等免疫应答产物发生特异性反 应的特性。
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2. 抗原的分类
免疫学分类
完全抗原、半抗原 胸腺依赖抗原与非依赖抗原
临床分类
外源性抗原:微生物、花粉等 内源性抗原:隐蔽的自身抗原、肿
瘤相关抗原等 同种异型抗原:人类白细胞抗原、
血型抗原 异嗜性抗原:人与其他动物、植物
等之间存在的共同抗原7
• 抗体(antibody)
1. 定义:机体受到抗原刺激后,通过体液免疫应答, B淋巴细胞活化、增殖,分化为浆细胞,由浆细胞 合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白, 称为抗体。
间接法:是将酶标记在第二抗体或与第二抗体具有亲和 性的某种分子上,检测组织或细胞内的特异性抗原物质。
间接法中所用的一抗是针对组织或细胞中某种抗原的特
异性抗体,多数抗体是由家兔制备的多克隆抗体或由小鼠
制备的单克隆抗体。
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第二抗体是第一抗体的抗体,所以只要不同的 第一抗体均来自同一种属动物,与标记的第二抗 体结合就能用来显示不同特异性抗原的存在。这 样可避免直接法中标记每一种第一抗体的麻烦。 通过某种技术增加第二抗体上标记酶的含量, 可提高免疫组织化学染色的敏感度。
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尸检组织 由于取材时一般均已超过死亡后2小时以上,组织有不同

组织切片染色技术

组织切片染色技术

染色过程中可能会出现ห้องสมุดไป่ตู้色不均匀、染色过度等问题
染色过程中可能会对组织造成损伤影响观察效果
适用范围及限制因素
适用范围:适用于组织学、病理学、细胞生物学等领域的研究
优点:能够清晰地显示组织结构、细胞形态和细胞间关系
限制因素:染色过程中可能会对组织造成损伤影响观察结果 限制因素:染色过程中可能会出现染色不均匀、染色过度等问题影响观察 结果
未来发展前景和展望
技术进步:随着科技的发展组织切片染色技术将更加精确、高效
应用领域:组织切片染色技术将在医学、生物学、材料科学等领域得到更广泛的应用 智能化:随着人工智能技术的发展组织切片染色技术将更加智能化实现自动化、智能化 染色 环保:随着环保意识的提高组织切片染色技术将更加注重环保减少对环境的影响
完好无损
防护手套:选择合适的 防护手套如防化手套、 防尘手套等并确保其完
好无损
防护鞋:选择合适的防 护鞋如防化鞋、防尘鞋
等并确保其完好无损
防护口罩:选择合适的 防护口罩如防尘口罩、 防化学口罩等并确保其
完好无损
防护帽:选择合适的防 护帽如防化帽、防尘帽 等并确保其完好无损
注意事项:确保个人防 护装备的完好无损并正 确使用避免接触有害物 质保持个人卫生定期更
在法医学鉴定中的应用
组织切片染色技术在法医学鉴 定中的应用
组织切片染色技术在法医学鉴 定中的优势
组织切片染色技术在法医学鉴 定中的具体应用案例
组织切片染色技术在法医学鉴 定中的发展趋势
在环境监测等领域的应用
环境监测:用 于检测水质、 土壤、空气等 环境样品中的
污染物
生物医学研究: 用于研究细胞、 组织、器官等 生物样品的结

组织学切片与染色技术

组织学切片与染色技术

组织学切片与染色技术组织学切片与染色技术是生物学中非常重要的实验技术之一。

这种技术可以帮助研究人员了解生物体内组织器官和细胞的结构、功能以及相互联系等。

所以这种技术被广泛应用于生物学、医学、生命科学、农业科学等领域。

什么是组织学切片?组织学切片是指将组织、器官、细胞等样品切成极薄的片状,便于研究人员在显微镜下观察和研究。

通常,组织学切片需要使用切片机将样品切成约5微米至20微米的厚度。

不同样品切片时厚度有所不同。

对于一些比较硬的样品(如骨头),需要使用特殊的切片技术和设备,以确保切出来的薄片质量。

组织学切片的作用通过组织学切片,研究人员可以在显微镜下观察和研究样品的结构、组成、功能等,得出诸如细胞类型、器官组织、血管分布等的信息。

除此之外,组织学切片还可以帮助确定病理诊断,检查是否有异常细胞或病理变化,有助于诊断某些疾病。

组织学染色技术组织学染色是指在组织学切片上涂抹一种或多种染料,以帮助观察者更好地识别和分辨细胞和组织结构。

常见的组织学染色技术有苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色(IHC)等。

苏木素-伊红染色技术苏木素-伊红染色技术是最常用的组织学染色技术之一。

这种染色技术可以帮助区分细胞类型和结构,并能显示细胞和组织的基本结构、形态和染色性质。

在染色过程中,样品需要先用苏木素染色,然后用伊红染色,最后用乙醇和苯胺清洗和染色。

苏木素会染成红色,伊红会染成蓝色,使组织在显微镜下呈现出各种颜色。

免疫组织化学染色技术免疫组织化学染色技术是一种特殊的组织学染色技术,用于检测组织和细胞中的蛋白质。

通过在组织学切片上添加免疫组织化学染色抗原,然后再加上抗体,就可以在显微镜下观察到特定的蛋白质。

这种技术通常被用于诊断肿瘤和癌症等疾病,同时还可以帮助研究人员了解蛋白质的分布和功能等方面。

结语组织学切片和染色技术是在现代生物学研究中非常重要的手段和技术,它可以帮助我们更好地认识生物体内的组织、器官和细胞结构,同时还可以帮助诊断某些疾病和发现异常变化。

《切片技术》PPT课件

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•micrometer (µm )= 10-6 meter
•nanometer (nm) = 10-9 meter
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组织学的研究技术
• 显微镜技术: 光镜:light microscopic, LM 电镜:electronic microscopic, EM
–透射电镜(transmission electron microscope, TEM):观察细胞内部结构
– 勿挤压组织块
– 保持组织原有形态、保持组织清洁
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• 固定
为了阻止组织细胞的死亡后变化,防止自溶与腐败,保持组 织内细胞原有的形态结构,切取组织块后应立即进入固定液, 常用的固定方法有:
– 小块组织固定法:标本:固定液为1:4~20;最常用的方法,但组织 块不易过大过厚,最好置入冰箱冷藏室内固定,冷藏固定时间适当延 长,特别是组织化学实验用的材料,冷藏固定效果会更好。
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Embedding 包埋
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切片机
石蜡切片机
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冰冻切片机
How does a microtome work?
Microtome Arm
Tissue Block
Tissue
Section
Knife
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Microscope Slide
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切片
…on Cryostat (frozen)
Organisms
Organs
Cells (20u) Nucleus (2 u) Bacteria (0.5 u) Organelles Viruses Macromolecules A... toms

《组织切片制作》PPT课件

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(三)切片制作 1.将洁净的载薄片涂薄层蛋白甘油放人烤片盒内待用。 2.将切割修整好的蜡块用普通刀片先将蜡块的组织切面暴露 出来修平,固定在切片机上的标本台上并拧紧螺旋。 3.蜡块先固定在标本台上切片刀固定于刀台上,拧紧固定刀 的螺丝同时调整刀与蜡块的切片距离使刀与蜡块贴紧后再固定 刀台螺丝,刀的角度为25度角。 4.调节微动装置,调至切片所需厚度(一般为 5μm~7μm)。 5.修材。右手握旋转轮摇把按顺时针方向均匀地摇动直到组 织块切面完整暴露为止。
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2.单纯固定液 乙醇(酒精)、甲醛(福尔马林)、重铬酸钾、苦味酸、锇酸、丙酮、 冰醋酸
(1)乙醇(酒精)(alcohol) 优点: ①价格低,易购买,易溶于水,使用方便,95%浓度,无水乙醇100%; ②市售有两种:100%;95%; ③能硬化组织起固定作用; ④也是一种最常用的脱水剂。
固定液配制:甲醛1份与9份自来水混合即为10%(4%)浓度 的甲醛固定液。
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优点:①渗透力较强;②组织收缩小;③细胞核染色较好。 缺点: ①质量较差的formalin在低温下久存容易产生一种白色的沉 淀物称“三聚甲醛”(付醛),经氧化成为甲酸而使溶液呈 酸性,影响细胞核染色。可在备用甲醛溶液中放入适量的碳 酸钙或碳酸镁,简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或 者白色粉笔作为中和剂。 ②酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑色细颗粒 状物,称为福尔马林色素,在切片上形成黑色小颗粒,不溶 于水和酒精,影响染色效果和切片的观察。
2.染色需要的试剂及染色液的配制:
① 0.5%~1%盐酸—酒精:用于细胞核染色分色。
配制:100ml的70%~80%酒精中加人0.5ml或者1ml的浓 盐酸。

组织切片染色技术

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四、染色剂
2.按主要用途分
(1)胞核染色剂:
苏木素、胭脂红、甲苯胺蓝、美蓝和孔雀绿等。
(2)胞质染色剂:
伊红、淡绿、橘黄G、酸性品红和苦味酸等。
(3)脂质染色剂:
苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑、硫酸尼罗蓝和油红等。
四、染色剂
3.按染色剂分子中的发色团分
(1)亚硝基类:发色团为亚硝基(-NO),如萘酚缘-B。
(一)染色剂染色的化学基础
染色剂分子能够显示颜色的基因,称为发色团。 主要的发色团有:
-N=N, -N=O, C=O, C=C
偶氮基
亚硝基 羰基 烯基
含有发色团的苯环化合物,称为色原。
苯+发色团=色原
染色剂分子中还需具备促使染色剂与组织细胞相结合 的基因,这样基因又称为助色团。
如—NH2 —COOH —OH —SO3H
(2)硝基染料:发色团是硝基(-NO2),如苦味酸。 (3)偶氮类:发色团为偶氮基(-N=N-),属于这一类的染色剂
有橘黄G、刚果红、俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。
(4)醌亚胺类:含有两个发色团,一个是印胺基(-N=)、一个 是醌型苯环,如硫堇、美蓝、甲苯胺蓝O、硫酸尼罗蓝、中性红和 碱性藏红花O、焦油紫等。
1000ml
② 苏木素
3g∽5g
③ 碘酸钠
1g
④ 钾明矾
50g∽80g
⑤ 水醋酸
20ml
其优点是:配后即可应用染色力较强。
其缺点是:极易产生金属膜沉淀。
二、苏木素-伊红染色液的配制
2.埃利希(Ehrlich),苏木素染液 配制
①无水乙醇 100ml
②甘油
100ml
③苏木精
2g
④钾明矾

病理组织切片制作技术PPT课件

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病理组织切片制作技术
• 病理组织切片制作技术概述 • 样本的收集与处理 • 组织切片的制备 • 病理组织切片的观察与诊断 • 病理组织切片制作技术的发展趋势
01
病理组织切片制作技术概述
切片制作的意义和目的
诊断疾病
教学质量
通过对病理组织进行切片制作,可以 观察组织结构和细胞形态,协助医生 诊断疾病。
环境控制
制作切片的实验室应保持清洁、干燥, 防止灰尘、温度等因素对切片质量造 成影响。
02
样本的收集与处理
样本的采集
手术切除
对于需要病理诊断的病例, 医生会进行手术切除病变 组织。
活检
通过穿刺或钳取的方式获 取少量病变组织用于病理 诊断。
尸检
对于死亡病例,通过尸检 获取病变组织。
样本的处理
清洗
利用人工智能技术对病理组织切片进行图像识别和分类,辅助医生 快速诊断。
辅助诊断系统
基于人工智能技术的辅助诊断系统,能够根据病理组织切片的特征, 提供初步诊断结果。
Hale Waihona Puke 预测模型利用人工智能技术构建预测模型,根据病理组织切片的特征预测疾病 发展趋势和预后情况。
THANKS
感谢观看
切片的染色
染色原理
染色是通过化学或物理方法使组织切 片着色,以突出或显现组织中的不同 结构。
常用染色方法
苏木精-伊红染色(HE染色)是病理 组织切片中最常用的染色方法,能较 好地显示细胞核和细胞质的结构。
切片的封固
封固剂选择
根据不同的染色方法选择合适的封固剂,如中性树胶、香柏 油等。
封固步骤
在染色和脱水完成后,用封固剂将切片固定在载玻片上,以 防止切片在观察和保存过程中发生脱落或损坏。

组织学技术(特殊染色)PPT医学课件

组织学技术(特殊染色)PPT医学课件
一、试剂配制 Gomori醛-复红染液: 70%乙醇100ml,碱性品红0.5g, 三聚乙醛1ml,浓盐酸1ml。
※注意:先将碱性品红溶于乙醇中, 然后加入三聚乙醛和浓盐酸,静置1-2d, 待溶液变为深紫色后,过滤置于冰箱待用。
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二、取材 皮下组织
三、制作过程
1、取皮下组织铺于干净的载玻片上,自然晾干。 2、放在甲醛-乙醇固定液内固定5min; 3、水洗3min; 4、置于醛-复红染液中,室温下染色5min; 5、水洗5min; 6、置伊红染液中,染色30s; 7、常规脱水、透明、封片。
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Gomoris镀银法显示网状纤维 1、取材:淋巴结 2、试剂配制 (1)硝酸银溶液:
硝酸银 10.2g,溶于100ml蒸馏水。 (2)氢氧化钠溶液:
氢氧化钠 3.1g,溶于100ml蒸馏水。
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(3)银氨溶液的配置:
取5ml 硝酸银溶液, 缓慢滴加氨水至溶液变得清亮;
再加入5ml氢氧化钠溶液, 此时溶液变黑色再滴加氨水至溶液清亮后,
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(6)入丽春红酸性品红液3-5min,蒸馏水速洗; (7)入1%磷酸钼水溶液5min; (8)倾去磷酸钼,直接用2%亮绿液染3-5min; (9)0.5%冰醋酸冲洗切片,将亮绿全部洗掉; (10)95%乙醇,无水酒精脱水,
二甲苯透明,树胶封固。
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5、结果 A 细胞染成红色,位于胰岛周边; B细胞染成紫红色,位于胰岛中央; D细胞染成绿色,位于A 细胞与B细胞之间。
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※ 苏木精本身不是染料,不能单独使用,
因为对组织的亲和力很小。
苏木精必须氧化成苏木红才能染色,
常用的氧化剂如:氧化汞、过锰酸钾、
碘酸钠、重铬酸钾。氧化的苏木精脱掉二个原子的氢。

组织切片染色技术分析共48页PPT

组织切片染色技术分析共48页PPT
33、如果惧怕前面跌宕的山岩,生命 就永远 只能是 死水一 潭。 34、当你眼泪忍不住要流出来的时候 ,睁大 眼睛, 千万别 眨眼!你会看到 世界由 清晰变 模糊的 全过程 ,心会 在你泪 水落下 的那一 刻变得 清澈明 晰。盐 。注定 要融化 的,也 许是用 眼泪的 方式。
35、不要以为自己成功一次就可以了 ,也不 要以为 过去的 光荣可 以被永 远肯定 。
组织切片染色技术分析
31、别人笑我太疯癫,我笑他人看不 穿。(名 言网) 32、我不想听失意者的哭泣,抱怨者 的牢骚 ,这是 羊群中 的瘟疫 ,我不 能被它 传染。 我要尽 量避免 绝望, 辛勤耕 耘,忍 受苦楚 。我一 试再试 ,争取 每天的 成功, 避免以 失败收 常在别 人停滞 不前时 ,我继 续拼搏 。
41、学问是异常珍贵的东西,从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间,才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话,只需要教育; 而要挑战别人所说的话,则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是:在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联

组织切片染色技术ppt课件

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2.特殊染色
特殊染色就是为了显示特定的组织结构或其他的特殊成分,是常 规染色的必要补充,也是染色技术中不可缺少的部分。它在病理 诊断中起到辅助作用。
3.单一染色
选用一种染料进行的染色,如用铁苏木素染睾丸生精细胞等。
4.复染色
用两种不同性质的染料进行染色的方法,如用苏木素和伊红分别 使细胞核及胞质染成两种颜色。
精选ppt课件2021
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* 苏木素是碱性染料,蓝紫色,可以使细胞核等着色。被苏木 素着色的结构本身为酸性,具有嗜碱性。
有橘黄G、刚果红、俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。
(4)醌亚胺类:含有两个发色团,一个是印胺基(-N=)、一个 是醌型苯环,如硫堇、美蓝、甲苯胺蓝O、硫酸尼罗蓝、中性红和 碱性藏红花O、焦油紫等。
(5)苯甲烷染料:发色团是醌型苯环,如孔雀缘、浅绿、碱性品 红、酸性品红、结晶紫和甲基缘等。
(6)山叮染料:发色团是醌型苯环,如派罗宁和伊红Y等。
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六、染色前后处理
(二)染色后的处理
1.脱水 95%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5min→100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5min。 2.透明 二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5min透明。 3.封固 通常用中性树胶或加拿大树胶加盖玻片封固。
精选ppt课件2021
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七、染色的注意事项
1.切片脱蜡应彻底。
2.常规染色、特殊染色等,组织要进行固定处理,做酶 反应的组织固定更应严格。凡用含升汞固定液固定的组织, 切片脱蜡后,应经脱汞处理,同时要慎防切片脱落。
5.多种染色
选用两种以上的染料的染色,如Mosson三色染色法。
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六、染色前后处理
(一)染色前处理 1.脱蜡至水

病理组织切片技术课件

病理组织切片技术课件

取材
取材是病理组织切片制作的第一步,也是至关重要的一步。 取材时,应选择具有代表性的组织,并注意避免组织自溶和 腐败。同时,要确保取材器械的清洁和消毒,以避免污染和 交叉感染。
取材时,应根据不同的病理类型和病变情况,选择适当的取 材方法和取材量。对于小块病变组织,应尽量取全;对于大 块病变组织,应根据病变特点和部位,选择具有代表性的部 分取材。
固定
固定是病理组织切片制作中不可缺少的一步,其目的是使组织保持其生前的状态 ,防止组织自溶和腐败。常用的固定方法有:甲醛固定法、乙醇固定法和混合固 定法等。
固定液的浓度和固定时间对固定效果有很大影响。一般来说,固定液的浓度越高 、固定时间越长,固定效果越好。但固定时间过长会导致组织变硬,影响切片质 量。因此,应根据具体情况选择适当的固定液和固定时间。
切片质量
切片的质量直接影响到显 微镜观察的结果,因此制 备过程中需要保证切片的 平整、均匀和无气泡。
切片技术分类
01
02
03
04
石蜡切片
将样品包埋在石蜡中,然后进 行切片和染色,是最常用的切
片技术之一。
冰冻切片
将样品快速冷冻后进行切片, 主要用于快速病理诊断。
苏木素-伊红染色
对切片进行染色,以便在显微 镜下观察细胞的形态和结构。
脱水
脱水是病理组织切片制作中非常重要的一步,其目的是去 除组织中的水分,为后续的浸蜡和包埋做准备。常用的脱 水方法有:自然干燥法和人工脱水法等。
脱水液的选择和使用对脱水效果有很大影响。一般来说, 脱水液的浓度越高、脱水时间越长,脱水效果越好。但脱 水时间过长会导致组织变脆,影响切片质量。因此,应根 据具体情况选择适当的脱水液和脱水时间。
H&E染色

组织切片的染色—冷冻切片HE染色-完整版PPT课件

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注意事项: 5.多例多块组织同时需做冰冻切片时,可各自放于不同的支承器上,
于冷冻台上冻起来,然后依据不同的编号,依序切片,这样做既 不费时也不会乱。
6.放置组织冰冻前,应视组织的形状及走势来放置,如果胡乱放置, 就不能收到很好的效果。
注意事项: 7.组织块不须经各种固定液固定,尤其是含水的固定液。临床快速冰
5~10秒 2~5秒 1分钟 2~5秒 2~3秒 2~5秒
冷冻切片HE染色
操作流程: 7.促蓝液 8.流水冲洗 9.0.5%的伊红水溶液 10.水洗 11.80%的乙醇 12.பைடு நூலகம்5%的乙醇
2~5秒 5~10秒 2~5秒 1~2秒 1~2秒 1~2秒
冷冻切片HE染色
操作流程: 13.无水乙醇 14.苯酚二甲苯(1:3) 15.二甲苯(Ⅰ) 16.二甲苯(Ⅱ) 17.二甲苯(Ⅲ) 中性树胶封固
2~5秒 2~5秒 2~5秒 2~5秒 2~5秒
冷冻切片HE染色
染色结果:细胞核蓝色,细胞质和纤维红色。 注意事项: 1.乙醚-乙醇液是由乙醚和95%的乙醇各50ml,再加冰醋酸5滴混匀而
成,应密封保存。 2.冷冻切片HE染色操作要求时间短,因此,各种试剂要经常更换新液。
注意事项: 3.如果使用 Harris苏木精染液,应尽可能用新液;如果使用改
良 Lillie-Mayer苏木精染液则需存放1周后才用。
4.防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净,需经常用毛笔挑除 切片残余和用柔软的纸张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸 擦一次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方,如果有残余的 包埋剂粘于刀或板上,将会破坏甚至撕裂切片,便切片不能完整 切出。。
当切片时如果发现冰冻过度时可将冰冻的组织连同支承器取出来在室温停留片刻再行切片或者用口中哈气或者用大拇指按压组织块以此来软化组织再行切片

病理制片和染色技术PPT课件

病理制片和染色技术PPT课件
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2、AAF液 配制 : 纯酒精85ml+醋酸 5ml+甲醛10ml
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5)尽可能避免使组织膨胀或收缩。 6)能使细胞内的成分(蛋白质)凝固或 沉淀下来。 7)增加细胞内含物的折光程度,易于鉴 别。增加媒染作用和染色能力。 8)使组织变硬,适于制片,但又不使材 料太坚硬而松脆。 9)使组织充分固定,便于保存。
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第二节
介绍几种常见固定液
第2页/共186页
第一章 病理技术的应用范围
第3页/共186页
➢帮 助 临 床 查 明 死 因 ( 原 因 不 明 的 死 亡 ) ➢手 术 后 病 变 标 本 , 以 明 确 诊 断 ( 临 床 活检) ➢提供教学、科研的资料
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第一节 组织制片的概述
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组织制片技术的应用,从1665 年由HOOk发现细胞开始,已有300 多年的历史。最早应用冰冻切片;随 后又进一步利用石蜡的硬度,以石蜡 包埋组织,制成石腊切片;后来又利 用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质 的韧性,以其包埋组织而制作切片。
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6、丙酮
丙酮又名醋酮或本酮,极易挥发、 易燃的无色液体,能与水、醇、氯仿、 醚及多种溶液混合。
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特性:
1)它可以作固定剂,又可作脱水剂,穿 透速度快,可使蛋白质沉淀凝固,2毫米 以下的组织固定半小时至1小时即可。 2)可引起组织较强的收缩使之变硬,对 核固定不佳。 3)对某些酶的固定很好,如碱性磷酸酶、 酸性磷酸酶等。 4)丙酮一般多与氯化汞、甲醛混合液使 用,先用低浓度丙酮再经高浓度丙酮固定 以减少组织收缩和过度硬化。
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四、染色剂
2.按主要红、甲苯胺蓝、美蓝和孔雀绿等。
(2)胞质染色剂:
伊红、淡绿、橘黄G、酸性品红和苦味酸等。
(3)脂质染色剂:
苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑、硫酸尼罗蓝和油红等。
四、染色剂
3.按染色剂分子中的发色团分
(1)亚硝基类:发色团为亚硝基(-NO),如萘酚缘-B。
三、染色原理
变色反应和正色反应
变色反应:染色反应最后目的物所呈现的颜色和染色 剂当初的颜色不同。如:黏液用甲苯胺蓝可染成红色, 而其余组织则染成不同色调的蓝色。
正色反应:染色反应最后目的物所呈现的颜色和染色 剂的颜色相同。如:酸性品红总是将组织染成不同色 调的红色;淡绿染成不同色调的绿色。
四、染色剂
(5)苯甲烷染料:发色团是醌型苯环,如孔雀缘、浅绿、碱性品 红、酸性品红、结晶紫和甲基缘等。
(6)山叮染料:发色团是醌型苯环,如派罗宁和伊红Y等。
(7)蒽醌染料:此类染色剂含有色原蒽醌,如茜素和胭脂虫酸。
(8)噻唑类 (9)喹啉类
使用极少
四、染色剂
4.按染色剂的化学性质分
(1)酸性染色剂:
(一)染色剂染色的化学基础
染色剂分子能够显示颜色的基因,称为发色团。 主要的发色团有:
-N=N, -N=O, C=O, C=C
偶氮基
亚硝基 羰基 烯基
含有发色团的苯环化合物,称为色原。
苯+发色团=色原
染色剂分子中还需具备促使染色剂与组织细胞相结合 的基因,这样基因又称为助色团。
如—NH2 —COOH —OH —SO3H
三、染色原理
分化剂
在退行性染色中,附在组织细胞上多余的染色剂需用 某些特定的溶液把目的物以外的部分脱去,从而使目 的物与周围组织形成鲜明的对比,同时使目的物本身 的色泽也深浅适当。
这种选择性地除去多余染色剂的过程称为“分化”, 所使用的溶液即“分化剂”。有酸性分化剂 、氧化分 化剂 、媒染分化剂
(2)硝基染料:发色团是硝基(-NO2),如苦味酸。 (3)偶氮类:发色团为偶氮基(-N=N-),属于这一类的染色剂
有橘黄G、刚果红、俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。
(4)醌亚胺类:含有两个发色团,一个是印胺基(-N=)、一个 是醌型苯环,如硫堇、美蓝、甲苯胺蓝O、硫酸尼罗蓝、中性红和 碱性藏红花O、焦油紫等。
氨基
羧基 羟基 磺酸基
四、染色剂
(二)染色剂的分类
1.按来源分 2.按主要用途分 3.按染色剂分子中的发色团分 4.按染色剂的化学性质分
四、染色剂
1.按来源分
(1)天然染色剂:
苏木素、胭脂红、地衣红和番红花。
(2)合成染色剂:
从煤焦油中提取的苯衍生物。 无机化合物,如硝酸银、氯化金、磺、锇酸和高锰酸钾等。
例如,细胞核(尤其是核内的染色质) 主要由核酸组成,是酸性的组成成分,故 和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强,易于 着色。细胞质含碱性物质,故和酸性染色 剂(伊红)的亲和力很大,易于着色。
三、染色原理
进行性染色和退行性染色
进行性染色:组织成分着色由浅至深,当达到所 需要的强度时,终止染色。
此种方法无需“分化”,例如,卡红染色。
媒染剂:通常是双价或三价金属如铝、铁的硫酸盐或 氧化物。媒染剂在染色中起着架桥作用,既能与染料 结合又能与组织相结合,达到了促进染色的效果。
三、染色原理
促染剂
用以加强染料和组织细胞结合能力的物质称为促染剂 促染剂如化学反应中的催化剂,少量存在就有明显的
促染作用。它们的作用机制也许是降低表面张力或是 改变了染液的pH值。
染色是制片过程中的一个重要环节
二、染色的目的
将染料配制成溶液 将组织切片浸入染色剂内 经一定的时间,组织或细胞及其他异常的
成分被染上不同深浅的颜色 对光产生不同的折射率 便于在光镜下观察。
三、染色原理
染色的物理作用
(1)毛细管作用及渗透作用
染色剂与组织细胞没有牢固的结合
(2)吸收作用:又称溶解学说。
色原-助色团-Na→[色原-助色团]+Na+。常用的如伊红、酸性品 红、苦味酸、橘黄G、刚果红、水溶性苯胺蓝和淡绿等酸性染 料常用以染细胞质等碱性成份。
(2)碱性染色剂:
色原-助色团-Cl→[色原-助色团]++Cl。常用的如苏木素、卡红、 次甲基蓝、甲苯胺蓝、硫堇和美蓝等碱性染料常用以染细胞核 等酸性成份。
组织吸收染色剂,牢固的结合。 组织的着色与溶液的颜色相同。
三、染色原理
(3)吸附作用
是固体物质的特性,即较大的物体能从周围溶液(染 液)中吸附一些小颗粒(化合物或离子)到自身的特性。 细胞中各种蛋白质或胶体有不同的吸附面,因此能选 择性地吸收不同的离子,即某种蛋白质对某种染色剂 有吸附作用,而对别种染色剂无吸附作用,这就可以解 释鉴别染色现象。
组织切片染色技术
学习目标
掌握:染色、常规染色的概念;HE 染色的基本步骤。
熟悉:染色的目的、原理;常用染色 术语;染色前后的处理;苏木素-伊 红染色液的配制。
了解:染色的注意事项。
第一节 染色概述
一、染色的概念
就是利用染料在组织切片上给予颜色,使 其与组织或细胞内的某种成分发生作用, 经过透明后通过光谱吸收和折射,使其各 种微细结构能显现不同颜色,这样在显微 镜下就可显示出组织细胞的各种成分。
退行性染色:是先把组织浓染过度,超过所需的 程度,然后再用某些溶液脱去多余的染色剂,以 达到适当的深度,并使不应着色的组织细胞脱色。
这个步骤称为“分化”。
三、染色原理
直接染色,间接染色和媒染剂
直接染色:染色无需第三种物质参加,染色剂和组织 即可直接结合着色。
间接染色:单独染料本身的水溶液或酒精溶液,几乎 不能与组织细胞结合或结合的能力很弱,必须有第三 种成分——媒染剂参与,才能使染色剂与组织细胞有 效地结合起来。
三、染色原理
染色的化学作用
染色剂按性质可分为酸性、碱性和中性染色 剂,而动、植物的细胞内一般也可区分为酸性 (阴离子)和碱性(阳离子)部分。
当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳离子 时,就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地 结合,当酸性染色剂溶液中的有色部分成为阴 离子时,就能与细胞内的阳离子(碱性部分)较 牢固地结合。
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