常见病原菌的灭菌抑菌保藏原理及方法..
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菌种保藏的原理和方法.ppt
2.沙土管干燥保藏法（略）
3.真空冷冻干燥保藏法
是目前常用的较理想的一种方法。其基本原理是在较低温度 下，（-18℃），快速地将细胞冻结，并且保持细胞完整，然后 在真空中使水分升华。在这样的环境中，微生物的生长和代谢 都暂时停止，不易发生变异。一般可保存5~10年左右。
4.液氮保藏法
是适用范围最广的微生物保藏法，其保存期最长。因为液氮的温度 可达-196℃，远远低于菌种新陈代谢作用停止的温度（-130℃）， 故此时代谢活动已停止。保藏期一般为2~3年，长的可达9年之久。
种时，先将原种制成若干管液氮菌种作为长期保藏用菌种，然后 再制一批冷冻保藏菌种作为用户分发用。约经5年后，假定第一 代（原种）的冷冻干燥保藏菌种已分发完毕，就再打开一支液氮 保藏原种制备大量冷冻保藏菌种，这样下去，至少在20年内，凡 获得该菌种的用户，至多只是原种的第二代，从而保证了保藏菌 种与分发菌种的高质量标准。
保藏斜面活化斜面来自2、复壮：使微生物活性恢复的同时，恢复其优良的生产性能。
保藏斜面 平板分离（自然分离，剔除退化菌种） 活化斜面
六、菌种保藏机构
菌种保藏机构的任务是：在广泛收集生产和科研菌种、菌株的基 础上，把它们妥善保藏，使之达到不死、不衰、不乱和便于交换使 用的目的。国际上很多国家都设立了菌种保藏机构。
▲ I FO（发酵研究所，日本大阪. Institute for Fermentation, Osaka, Japan ） ▲ NCTC（国家典型菌种保藏中心,英国伦敦. National Collection of Type Culture. London, United Kingdom） ▲ NRRL（Northern Utilization Research and Development Division, U.S Department of Agriculture. Peoria, U.S.A. 美国农业 部、北方开发利用研究部，美国皮奥里亚市）
病原菌的灭菌、抑菌的原理
液体中的病原菌或一般的杂菌， 同时不致严重损害其质量的消耗方法。
间歇灭菌法
此法适用于不耐热培养基的灭菌。
利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微 生物，包括芽胞。
煮沸灭菌法
采用在100℃下煮沸数分钟的方法，一般用 于日常的饮用水消毒。
高压蒸汽灭菌法
在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压 力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅 内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下， 锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以 很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢
湿热灭菌法
各种灭菌方法的原理
火焰灼烧法：灼烧是最彻底、最简便、最迅 速、最可靠的灭菌方法，适宜于对不易被火 焰损伤的物品、金属、玻璃及瓷器等进行灭 菌。灭菌时，只需将物品在火焰中加热20s， 或将灭菌的物品迅速通过火焰3～4次即可。
热力灭菌的原理是：加热可破坏蛋白质和核 酸中的氢键，故导致核酸破坏，蛋白质变性 或凝固，酶失去活性，微生物因而死亡 。
湿热灭菌法
是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭 菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容 易使蛋白质变性或凝固，所以该法的灭菌效 率比干热灭菌法高，是药物制剂生产过程中 最常用的灭菌方法。
低温灭菌
环氧乙烷灭菌 穿透力强，灭菌广，彻底。缺点是环氧乙烷 的使用流程均需监控，灭菌后得解析时间长 低温等离子体灭菌 与上者相仿，但穿透力，灭菌范围都不及环 氧乙烷。优点是灭菌流程无任何污染物质。 低温甲醛蒸汽灭菌
病原菌的灭菌、抑菌原理
抑菌
抑制细菌和真菌的生长繁殖的方法。常用的 抑菌剂是一些抗生素，能可逆性抑制细菌的 繁殖，但不直接杀死细菌。
灭菌
采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一 切微生物永远失去其生长繁殖能力的措施。
间歇灭菌法
此法适用于不耐热培养基的灭菌。
利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微 生物，包括芽胞。
煮沸灭菌法
采用在100℃下煮沸数分钟的方法，一般用 于日常的饮用水消毒。
高压蒸汽灭菌法
在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压 力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅 内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下， 锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以 很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢
湿热灭菌法
各种灭菌方法的原理
火焰灼烧法：灼烧是最彻底、最简便、最迅 速、最可靠的灭菌方法，适宜于对不易被火 焰损伤的物品、金属、玻璃及瓷器等进行灭 菌。灭菌时，只需将物品在火焰中加热20s， 或将灭菌的物品迅速通过火焰3～4次即可。
热力灭菌的原理是：加热可破坏蛋白质和核 酸中的氢键，故导致核酸破坏，蛋白质变性 或凝固，酶失去活性，微生物因而死亡 。
湿热灭菌法
是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭 菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容 易使蛋白质变性或凝固，所以该法的灭菌效 率比干热灭菌法高，是药物制剂生产过程中 最常用的灭菌方法。
低温灭菌
环氧乙烷灭菌 穿透力强，灭菌广，彻底。缺点是环氧乙烷 的使用流程均需监控，灭菌后得解析时间长 低温等离子体灭菌 与上者相仿，但穿透力，灭菌范围都不及环 氧乙烷。优点是灭菌流程无任何污染物质。 低温甲醛蒸汽灭菌
病原菌的灭菌、抑菌原理
抑菌
抑制细菌和真菌的生长繁殖的方法。常用的 抑菌剂是一些抗生素，能可逆性抑制细菌的 繁殖，但不直接杀死细菌。
灭菌
采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一 切微生物永远失去其生长繁殖能力的措施。
菌种保藏及活化讲解
可达-196℃，远远低于菌种新陈代谢作用停止的温度（-130℃），
故此时代谢活动已停止。保藏期一般为2~3年，长的可达9年之久。
5.悬液保藏法（略） 6.低温保藏法
四、菌种保藏的共同注意点
• 1、严格的无菌操作； • 2、用于保存的微生物在生长前必须处于
它生长良好的状态； • 3、保藏过程中要防止退化的发生（不同
一种良好的菌种保藏方法，首先应保持原菌优良性状长期 稳定，同时还应该考虑方法的通用性、操作的简便性和设备 的普及性。具体的方法很多，现把多种方法按类排列后作一 综合性表解，以便读后有一全面了解。
1、斜面保藏法和穿刺保藏法
（1）斜面保藏法：是一种短期、过渡的保藏法，用新鲜斜面 接种后，置最适条件下培养到菌体或孢子生长丰满后，放在4℃
胰蛋白胨
10g
酵母提取物 5g
氯化钠
10g
固体培养基需加入琼脂粉18g（夏季）或 15g（冬季），高压灭菌，备用。
2、将培养皿、锥形瓶、枪头、离心管等高压 灭菌。
3、氨苄青霉素、卡那霉素过滤除菌分装放在 1.5ml离心管内，—20℃保存。
4、
（三）操作步骤：
1、菌株活化: 在无菌操作下
(1). 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之 前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻 触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完 全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央 轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3培养基为止 （I 区）。
(2). 旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未 接种的区域（II 区）。
(3).重复步骤(2)的动作完成 III 区与 IV 区
(4). 灼烧接种环，将接种环归位。
故此时代谢活动已停止。保藏期一般为2~3年，长的可达9年之久。
5.悬液保藏法（略） 6.低温保藏法
四、菌种保藏的共同注意点
• 1、严格的无菌操作； • 2、用于保存的微生物在生长前必须处于
它生长良好的状态； • 3、保藏过程中要防止退化的发生（不同
一种良好的菌种保藏方法，首先应保持原菌优良性状长期 稳定，同时还应该考虑方法的通用性、操作的简便性和设备 的普及性。具体的方法很多，现把多种方法按类排列后作一 综合性表解，以便读后有一全面了解。
1、斜面保藏法和穿刺保藏法
（1）斜面保藏法：是一种短期、过渡的保藏法，用新鲜斜面 接种后，置最适条件下培养到菌体或孢子生长丰满后，放在4℃
胰蛋白胨
10g
酵母提取物 5g
氯化钠
10g
固体培养基需加入琼脂粉18g（夏季）或 15g（冬季），高压灭菌，备用。
2、将培养皿、锥形瓶、枪头、离心管等高压 灭菌。
3、氨苄青霉素、卡那霉素过滤除菌分装放在 1.5ml离心管内，—20℃保存。
4、
（三）操作步骤：
1、菌株活化: 在无菌操作下
(1). 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之 前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻 触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完 全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央 轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3培养基为止 （I 区）。
(2). 旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未 接种的区域（II 区）。
(3).重复步骤(2)的动作完成 III 区与 IV 区
(4). 灼烧接种环，将接种环归位。
常见病原菌的灭菌抑菌保藏原理及方法..PPT39页
常见病原菌的灭菌抑菌保藏 原理及方法..
31、别人笑我太疯癫，我笑他人看不 穿。(名 言网) 32、我不想听失意者的哭泣，抱怨者 的牢骚 ，这是 羊群中 的瘟疫 ，我不 能被它 传染。 我要尽 量避免 绝望， 辛勤耕 耘，忍 受苦楚 。我一 试再试 ，争取 每天的 成功， 避免以 失败收 常在别 人停滞 不前时 ，我继 续拼搏 。
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
33、如果惧怕前面跌宕的山岩，生命 就永远 只能是 死水一 潭。 34、当你眼泪忍不住要流出来的时候 ，睁大 眼睛， 千万别 眨眼!你会看到 世界由 刻变得 清澈明 晰。盐 。注定 要融化 的，也 许是用 眼泪的 方式。
35、不要以为自己成功一次就可以了 ，也不 要以为 过去的 光荣可 以被永 远肯定 。
31、别人笑我太疯癫，我笑他人看不 穿。(名 言网) 32、我不想听失意者的哭泣，抱怨者 的牢骚 ，这是 羊群中 的瘟疫 ，我不 能被它 传染。 我要尽 量避免 绝望， 辛勤耕 耘，忍 受苦楚 。我一 试再试 ，争取 每天的 成功， 避免以 失败收 常在别 人停滞 不前时 ，我继 续拼搏 。
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
33、如果惧怕前面跌宕的山岩，生命 就永远 只能是 死水一 潭。 34、当你眼泪忍不住要流出来的时候 ，睁大 眼睛， 千万别 眨眼!你会看到 世界由 刻变得 清澈明 晰。盐 。注定 要融化 的，也 许是用 眼泪的 方式。
35、不要以为自己成功一次就可以了 ，也不 要以为 过去的 光荣可 以被永 远肯定 。
常见微生物的菌种保藏及原理
常见微生物的菌种保藏及原理微生物指的是在显微镜下可见的微小生物（如细菌、真菌等）。
由于微生物在各种环境中具有重要的应用价值，如食品加工、制药、环境修复等，因此对微生物菌种的保藏具有重要意义。
目前常见的微生物菌种保藏方法主要包括冷冻保存、干燥保存、冷冻干燥保存和液氮保存等。
下面将介绍这些保存方法的原理及其在微生物保藏中的应用。
一、冷冻保存冷冻保存是最常见且简单的微生物保藏方法之一、其原理是通过降低菌种的生长和代谢速度来延缓细胞死亡，从而使菌种长时间保存。
常见的冷冻保存方式有两种：低温保存和液氮保存。
1.低温保存低温保存常用的温度为-80℃。
将微生物菌种培养物加入附加剂（如甘油、蔗糖）后，迅速冷冻至-80℃，然后保存在低温冰箱中。
这种方法简单易行，并且不需要特殊仪器设备，适用于大多数微生物菌种的保存。
2.液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方法，常用温度为-196℃。
液氮保存可以在较长时间内保持微生物菌种的细胞完整性和代谢活性。
液氮保存通常需要配备专门的液氮保存设备，如液氮罐和液氮冷冻器。
虽然保存设备和条件较为复杂，但是液氮保存方法适用于保存需求较严格的微生物菌种。
二、干燥保存干燥保存是通过去除菌种的水分来实现菌种长时间保存的一种方法。
常见的干燥保存方法主要有两种：常温干燥保存和真空冷冻干燥保存。
1.常温干燥保存常温干燥保存是将微生物菌种培养物均匀涂布于无菌玻璃片或滤纸上，然后在室温下进行干燥。
干燥后的微生物菌种可以直接保存，也可以以泡脱水的方式进行保存。
常温干燥保存适用于耐受干旱的微生物菌种。
2.真空冷冻干燥保存真空冷冻干燥保存是将微生物菌种培养物在真空条件下进行冷冻干燥。
首先，将菌种培养物在低温下冷冻，然后在低压下去除水分。
真空冷冻干燥保存可以保持菌种的细胞完整性和代谢活性。
这种方法适用于保存需求较严格的微生物菌种。
三、液氮保存液氮保存是将微生物菌种培养物冷冻在液氮温度下进行保存的方法。
如前所述，液氮保存要求采用极低温的液氮温度（-196℃）进行保存。
常见病原菌的灭菌、抑菌方法 及原理
消毒就是消除毒害，这里的“毒害”就是 指传染源或致病菌的意思，英文中的“disinfection”也是“消除传染”的意思。所以， 消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀 死物体表面或内部一部分对人体有害的病 原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。 例如一些常用的对皮肤、水果、饮用水进 行药剂消毒的方法；对啤酒、牛奶、果汁 和酱油等进行消毒处理的巴氏消毒法，等 等。
有害微生物的控制措施
杀灭法
抑制法
消毒（部分杀灭， 仅杀灭病原体）
灭菌（彻底杀灭 一切微生物）
防腐 化疗 （抑制霉腐微生物） （抑制宿主体内 的病原菌）
杀菌
溶菌
灭菌
化学灭菌法
生物灭菌法
物理灭菌法
气体灭菌法
液体灭菌法
抗生素
噬菌体
细菌素
高温灭菌法 辐射灭菌法 超声波灭菌法 微波灭菌法
激光灭菌法
静高压灭菌法
防腐就是利用某种理化因素完全抑制霉 腐微生物的生长繁殖，从而达到防止食品 等发生霉腐的措施。
化疗即化学治疗。它是利用具有高度选择毒力 (selectivetoxicity，即对病原菌具有高度毒力而对宿 主无显著毒性)的化学物质来抑制宿主体内病原微 生物的生长繁殖，借以达到治疗该传染病的一种 措施。用于化疗目的的化学物质称化学治疗剂 (chemotherapeutant)。最重要的化学治疗剂如各 种抗生素、磺胺类药物和中草药中的有效成分等。
高温灭菌法
干热灭菌法
湿热灭菌法
火焰灼烧法
烘箱内热 空气灭菌法
常压下
加压下
巴氏消毒法 （杀死病菌）
煮沸消毒法 低温间歇灭菌法 常规加压 灭菌法 （杀繁殖体） （杀死芽孢）
连续加压 灭菌法
低温维持法
常见病原菌的灭菌和抑菌的方法
低病原菌的传播。
基因编辑技术
03
利用基因编辑技术，修改病原菌的基因，以阻止其繁殖和传播。
社会和环境影响
抗菌药物的排放
抗菌药物的排放会对环境造成影响，需要采取措施减少其排放。
抗菌残留物的危害
抗菌残留物可能会对人体健康造成潜在危害，需要加强对其安全 性的研究和监测。
公众意识
提高公众对病原菌传播和防控的认识，加强个人卫生习惯的培养， 以降低病原菌的传播风险。
化学灭菌法
气体灭菌
使用环氧乙烷、甲醛等化学气体，通过熏蒸方式杀死病原菌。适用于医疗器械、塑料制品等的消毒。
液体消毒剂
使用酒精、次氯酸钠等液体消毒剂，通过浸泡或擦拭方式杀死病原菌。适用于皮肤、手术器械等消毒 。
04 抑菌方法
物理抑菌法
温度控制
通过加热、冷冻等手段改 变温度，抑制病原菌的生 长和繁殖。
耐药性的问题已经成为全球公共卫生领域的重大挑战，需要国际合 作来解决。
新型抗菌药物研发
针对耐药性病原菌，需要研发新型抗菌药物，以保持其有效性。
新技术的研发和应用
新型灭菌技术
01
利用紫外线、等离子体、高温等新型灭菌技术，以减少对环境
的污染和破坏。
抗菌材料
02
研发具有抗菌功能的材料，如抗菌涂料、抗菌纺织品等，以降
生物抑菌法
益生菌
抗体
通过补充益生菌，调节肠道微生物平 衡，抑制病原菌的生长。
利用特异性抗体与病原菌结合，阻止 其附着和繁殖。
噬菌体
利用噬菌体特异性地感染和杀死特定 病原菌。
05 灭菌和抑菌的挑战与未来 发展
耐药性的问题
抗生素滥用
过度使用抗生素会导致病原菌产生耐药性，降低抗生素的有效性。
常见微生物的菌种保藏及原理ppt课件
要使用菌种时,从液氮罐中取出安瓿瓶,并迅速放到35～40℃温 水中,使之冰冻熔化,以无菌操作打开安瓿瓶,移接到保藏前使用 的同一种培养基斜面上进行培养.从液氮罐中取出安瓿瓶时速度 要快,一般不超过1min,以防其他安瓿瓶升温而影响保藏质量.并 且取样时一定要戴专用手套以防止意外爆炸和冻伤
（三）、菌种保藏的方法
1、斜面低温保藏法 2、石蜡油封藏法 3、砂土管保藏法 4、麸皮保藏法 5、冷冻真空干燥保藏法 6、液氮超低温保藏法
1、斜面低温保藏法
将菌种接种在适宜的斜面培养基上,待菌种生长完全后,置于4℃ 左右的冰箱中保藏,每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面 培养基上,生长后继续保藏,如此连续不断.此法广泛适用于细菌、 放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜 用冷冻干燥保藏的菌种.放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保 存6个月左右,无芽孢的细菌可保存1个月左右,酵母菌可保存3个 月左右.如以橡皮塞代替棉塞,再用石蜡封口,置于4℃冰箱中保藏, 不仅能防止水分挥发、能隔氧,而且能防止棉塞受潮而污染.这 一改进可使菌种的保藏期延长.
该法的优点是简便易行,容易推广,存活率高,故科研和生产上对 经常使用的菌种大多采用这种保藏方法.其缺点是菌株仍有一定 程度的代谢活动能力,保藏期短,传代次数多,菌种较容易发生变 异和被污染.
2、石蜡油封藏法
此法是在无菌条件下,将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入 培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上,石蜡油层高出 斜面顶端lcm,使用的液体石蜡要求优质无毒, 化学纯规格,其灭菌条件是：150～170℃烘箱内灭菌lh；或121℃ 高压蒸汽灭菌60～80min,再置于80℃的烘箱内烘干除去水分.
（一）、菌种保藏的目的
微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚 至死亡,因而常常造成菌种的衰退,并有可能使优良菌 种丢失.菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原 有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不 被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需 要.
（三）、菌种保藏的方法
1、斜面低温保藏法 2、石蜡油封藏法 3、砂土管保藏法 4、麸皮保藏法 5、冷冻真空干燥保藏法 6、液氮超低温保藏法
1、斜面低温保藏法
将菌种接种在适宜的斜面培养基上,待菌种生长完全后,置于4℃ 左右的冰箱中保藏,每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面 培养基上,生长后继续保藏,如此连续不断.此法广泛适用于细菌、 放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜 用冷冻干燥保藏的菌种.放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保 存6个月左右,无芽孢的细菌可保存1个月左右,酵母菌可保存3个 月左右.如以橡皮塞代替棉塞,再用石蜡封口,置于4℃冰箱中保藏, 不仅能防止水分挥发、能隔氧,而且能防止棉塞受潮而污染.这 一改进可使菌种的保藏期延长.
该法的优点是简便易行,容易推广,存活率高,故科研和生产上对 经常使用的菌种大多采用这种保藏方法.其缺点是菌株仍有一定 程度的代谢活动能力,保藏期短,传代次数多,菌种较容易发生变 异和被污染.
2、石蜡油封藏法
此法是在无菌条件下,将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入 培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上,石蜡油层高出 斜面顶端lcm,使用的液体石蜡要求优质无毒, 化学纯规格,其灭菌条件是：150～170℃烘箱内灭菌lh；或121℃ 高压蒸汽灭菌60～80min,再置于80℃的烘箱内烘干除去水分.
（一）、菌种保藏的目的
微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚 至死亡,因而常常造成菌种的衰退,并有可能使优良菌 种丢失.菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原 有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不 被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需 要.
5菌种保藏的原理和方法
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方法。
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（六）液氮保藏法
原理：低温 悬浮介质： 10%甘油或5%的二甲亚砜 机理：甘油或二甲亚砜可进入细胞，并通过降低强烈的
脱水作用而保护细胞。 甘油—般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。 适用菌种：适用于所有微生物、动植物细胞保藏。 保藏期：置液氮内（-196 ℃ ），保存5-10年。 特点：保藏期最长，但保藏费用高，仅用于保存经济价
4 菌种保藏的原理和方法
菌种保藏原理及条件 菌种保藏的方法 菌种保藏的注意事项 菌种保藏机构
1
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一、菌种保藏原理
原理：
根据菌种的生理生化特性，人为创造条件使菌 体的代谢活动处于休眠的状态。
条件：
挑取优良纯种，最好是休眠体（孢子、芽孢等）
创造一个最有利于休眠的环境条件，如：降低培 养基营养成分、低温、干燥、隔氧及添加保护剂 等方法。
2
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二、菌种保藏的方法
斜面保藏法 穿刺保藏法 固体曲保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法
3
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（一）斜面保藏法
原理：低温 方法： 将培养好的斜面菌种，置于4-5℃冰箱保存，定期
移植到新的斜面培养基上继续保藏。 一般保存期3-6个月。 注意事项: 冰箱的温度； 培养基水分蒸发情况（用橡皮塞代替棉塞）。 优点：简便，适合于实验室中菌种的短期保藏。 缺点：短期内多次传代，易引起菌种变异、退化，染菌
过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质，
可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载 体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
7
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（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整， 然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。
菌种保藏的三大原理
菌种保藏的三大原理
菌种保藏的三大原理包括：冻存、干燥保藏和液氮保藏。
1. 冻存：将菌种培养物在低温条件下迅速冷冻保存。
冻存一般使用液氮或深冷冰箱等低温设备进行，通过快速降温减少细胞内冻结结晶的形成，以减少冻结对细胞的损伤。
冻存适用于大多数细菌和真菌。
2. 干燥保藏：将菌种培养物在无水或低湿度条件下进行干燥保存。
干燥保藏可以通过直接晾干或使用干燥剂等方法实现。
干燥保藏可以有效地抑制微生物生长和代谢，并减缓其老化速度。
干燥保藏适用于许多细菌、真菌和酵母等微生物。
3. 液氮保藏：将菌种培养物在低温液氮中进行保存。
液氮保藏是最常用的长期菌种保藏方法之一，可以将菌种长期保存数十年甚至更久。
液氮保藏利用液氮的低温和绝缘性质，有效防止细胞内的代谢反应和酶活性，并减缓噬菌体感染、遗传变异和突变等现象。
液氮保藏适用于许多微生物，包括细菌、真菌、酵母等。
这三种保藏方法可以根据具体菌种的特点和需求选择使用，以确保菌种的长期保存和使用。
菌种保藏方法范文
菌种保藏方法范文菌种保藏是指将具有特定遗传性状的菌种保持在一定的条件下存活和保存，以便于后续的研究和利用。
菌种保藏的目的是保持菌种的稳定性、纯度和活力。
下面将对常见的菌种保藏方法进行详细介绍。
1.冷冻保藏法：冷冻保藏法是最常见和常用的菌种保存方法之一、该方法是将菌种在适宜的培养基上生长至适宜的阶段，然后通过添加甘油或其他保护剂来增加菌种的耐冻存活力，并放入低温环境下冷冻保存。
通常使用-20℃或更低的温度进行保存。
这种方法简单易行，成本较低，在短时间内能够保持菌株的复原性很好。
2.干燥保藏法：干燥保藏法又称为脱水保藏法，是将菌种长时间保存于干燥状态中。
先将菌种培养至适宜的生长阶段，然后用无菌方法将菌种制成干燥菌粉，放入干燥瓶中密封保存。
常见的干燥剂有二氧化硅凝胶、无水CaCl2等。
干燥保藏法保存的菌种潜伏期长，比较安全可靠，但复苏的条件较为苛刻。
3.液氮保藏法：液氮保藏法又称为低温保存方法，是将菌种保存在液态氮中。
通过将菌种培养至适宜生长阶段后，将其转接入试管中，用无菌方法加入等体积的冷冻保护剂（例如甘油），放入液氮中保存。
液氮的温度达到-196℃，在这种环境下菌种可以长时间保存，但需要特殊的设备和条件。
4.胶体保藏法：胶体保藏法是将菌种培养至适宜生长阶段，然后将其与无菌明胶混合均匀，制成菌胶球，通过培养基中的各种成分供应菌种的生长和维持菌株的复原性。
这种保藏方法具有较长的复苏潜伏期，并且易于携带和传递，是一种较为理想的保存方法。
5.冷冻干燥保藏法：冷冻干燥保藏法是将菌种通过冷冻干燥的方法进行保存。
首先将菌种培养至适宜生长阶段，然后用无菌方法将菌种在-40℃或更低温度下冷冻干燥，形成冷冻干燥粉末。
这种方法保存的菌种潜伏期长，但复苏条件较为苛刻。
除了以上的常见保存方法，还有一些新兴的菌种保藏方法，例如微柱保存法、冷冻解冻保存法等。
这些方法在不同的实验室和研究领域可能有着不同的适用性和优势。
综上所述，菌种保藏方法有多种多样，每一种方法都有其自身的特点和适用范围。
微生物菌种保藏原理与方法
1 简易保藏法
定期移植时间间隔： 一般不产芽孢的细菌约2周至1个月； 放线菌、酵母菌和丝状真菌4~6个月； 石蜡油封法一般可保藏1年。 优缺点：操作简单，可随时观察菌种生长状况，
但较费时费力，因经常移植传代，微生物物易 发生变异。
1.1斜面传代保藏法
贴标签：菌种 菌株 接种日期 接种：对数生长期后期 成熟的孢子 培养： 细菌—37℃，18~24h
收藏：面塞外包牛皮纸或用无菌橡皮塞，把菌种管直立 放置于4 ℃冰箱中。
放线菌、霉菌及产芽孢细菌一般可保2年，酵母菌及不 产芽孢细菌可保1年。
2 甘油保藏法
保护剂： 40%左右的甘油 机理：适当浓度甘油中，少量甘油分子进入细胞，
使菌种细胞在冷冻过程中缓解了其由于强烈脱水 及胞内形成冰晶而引起的破坏。 保藏温度：-20 ℃左右或-70 ℃ 特点:操作简单，保藏期长，保存期间取样测试方 便，在基因工程中常用于保存含质粒的菌株，一 般可保3~5年。
1.3石蜡油封法
石蜡油灭菌：将石蜡油装入三角瓶中，装量不超过总体 积的1/3，塞上面塞，外包牛皮纸，加压蒸汽灭菌（121 ℃ ，30min），连续灭菌2次。然后在40 ℃温箱中放置2 周或置105~110 ℃烘箱中烘2h，除去石蜡油中的水分。
培养
加石蜡油：以无菌吸管吸石蜡油加至菌种管中，加入量 以高出斜面顶端或直立柱培养基表面约1cm为宜。
该法可同时用于细菌、放线菌、丝状真菌、 （除少数不产孢子或只产生丝状体真菌外）、 酵母菌及病毒的保藏。
该方法保藏菌种范围广、保藏时间长（一般可 达10~20年），存活率高，是目前最有效的菌 种保藏方法之一。
4冷冻真空干燥保藏法
安瓿管
5液氮超低温保藏法
常见微生物的菌种保藏及原理
常见微生物的菌种保藏及原理
（ห้องสมุดไป่ตู้）、菌种保藏的目的
微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚 至死亡,因而常常造成菌种的衰退,并有可能使优良菌 种丢失.菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原 有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不 被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需 要.
（二）、菌种保藏的原理
（三）、菌种保藏的方法
1、斜面低温保藏法 2、石蜡油封藏法 3、砂土管保藏法 4、麸皮保藏法 5、冷冻真空干燥保藏法 6、液氮超低温保藏法
1、斜面低温保藏法
将菌种接种在适宜的斜面培养基上,待菌种生长完全后,臵于4℃ 左右的冰箱中保藏,每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面 培养基上,生长后继续保藏,如此连续不断.此法广泛适用于细菌、 放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜 用冷冻干燥保藏的菌种.放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保 存6个月左右,无芽孢的细菌可保存1个月左右,酵母菌可保存3个 月左右.如以橡皮塞代替棉塞,再用石蜡封口,臵于4℃冰箱中保藏, 不仅能防止水分挥发、能隔氧,而且能防止棉塞受潮而污染.这 一改进可使菌种的保藏期延长. 该法的优点是简便易行,容易推广,存活率高,故科研和生产上对 经常使用的菌种大多采用这种保藏方法.其缺点是菌株仍有一定 程度的代谢活动能力,保藏期短,传代次数多,菌种较容易发生变 异和被污染.
此法操作简便、高效、保藏期一般可达到15年以上,是目前被公 认的最有效的菌种长期保藏技术之一.除了少数对低温损伤敏感 的微生物外,该法适用于各种微生物菌种的保藏,甚至连藻类、 原生动物、支原体等都能用此法获得有效的保藏.此法的另一大 优点是可使用各种培养形式的微生物进行保藏,无论是孢子或菌 体、液体培养物或固体培养物均可采用该保藏法.其缺点是需购 臵超低温液氮设备,且液氮消耗较多,操作费用较高. 要使用菌种时,从液氮罐中取出安瓿瓶,并迅速放到35～40℃温 水中,使之冰冻熔化,以无菌操作打开安瓿瓶,移接到保藏前使用 的同一种培养基斜面上进行培养.从液氮罐中取出安瓿瓶时速度 要快,一般不超过1min,以防其他安瓿瓶升温而影响保藏质量.并 且取样时一定要戴专用手套以防止意外爆炸和冻伤
（ห้องสมุดไป่ตู้）、菌种保藏的目的
微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚 至死亡,因而常常造成菌种的衰退,并有可能使优良菌 种丢失.菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原 有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不 被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需 要.
（二）、菌种保藏的原理
（三）、菌种保藏的方法
1、斜面低温保藏法 2、石蜡油封藏法 3、砂土管保藏法 4、麸皮保藏法 5、冷冻真空干燥保藏法 6、液氮超低温保藏法
1、斜面低温保藏法
将菌种接种在适宜的斜面培养基上,待菌种生长完全后,臵于4℃ 左右的冰箱中保藏,每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面 培养基上,生长后继续保藏,如此连续不断.此法广泛适用于细菌、 放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜 用冷冻干燥保藏的菌种.放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保 存6个月左右,无芽孢的细菌可保存1个月左右,酵母菌可保存3个 月左右.如以橡皮塞代替棉塞,再用石蜡封口,臵于4℃冰箱中保藏, 不仅能防止水分挥发、能隔氧,而且能防止棉塞受潮而污染.这 一改进可使菌种的保藏期延长. 该法的优点是简便易行,容易推广,存活率高,故科研和生产上对 经常使用的菌种大多采用这种保藏方法.其缺点是菌株仍有一定 程度的代谢活动能力,保藏期短,传代次数多,菌种较容易发生变 异和被污染.
此法操作简便、高效、保藏期一般可达到15年以上,是目前被公 认的最有效的菌种长期保藏技术之一.除了少数对低温损伤敏感 的微生物外,该法适用于各种微生物菌种的保藏,甚至连藻类、 原生动物、支原体等都能用此法获得有效的保藏.此法的另一大 优点是可使用各种培养形式的微生物进行保藏,无论是孢子或菌 体、液体培养物或固体培养物均可采用该保藏法.其缺点是需购 臵超低温液氮设备,且液氮消耗较多,操作费用较高. 要使用菌种时,从液氮罐中取出安瓿瓶,并迅速放到35～40℃温 水中,使之冰冻熔化,以无菌操作打开安瓿瓶,移接到保藏前使用 的同一种培养基斜面上进行培养.从液氮罐中取出安瓿瓶时速度 要快,一般不超过1min,以防其他安瓿瓶升温而影响保藏质量.并 且取样时一定要戴专用手套以防止意外爆炸和冻伤
四 菌种保藏的原理和方法
如果待保藏菌种生长在斜面上，则可用含10％甘 如果待保藏菌种生长在斜面上，则可用含10％甘 油的新配制液体培养基洗涤收获。超低温冰箱的 冷冻速度一般控制在1 2℃／min。若干细菌和真 冷冻速度一般控制在1-2℃／min。若干细菌和真 菌菌种可通过此保藏方法保藏5 菌菌种可通过此保藏方法保藏5年而活力不受影响。
7．冷冻干燥法
其基本原理是在较低的温度下（－18℃），快速 （－18℃）， 其基本原理是在较低的温度下（－18℃），快速 地将细胞冻结，并且保持细胞完整， 地将细胞冻结，并且保持细胞完整，然后在真空 中使水分升华。 中使水分升华。这样菌种的生长和代谢活动处于 极低水平，不易发生变异或死亡， 极低水平，不易发生变异或死亡，因而能长期保 一般为5 10年 此法适用于各种微生物。 存，一般为5～10年。此法适用于各种微生物。 具体的做法是先将微生物制成悬浮液， 具体的做法是先将微生物制成悬浮液，与保护剂 一般为蔗糖、脱脂牛奶或血清等）混合， （一般为蔗糖、脱脂牛奶或血清等）混合，放在 安瓿管内，用低温酒精或干冰（－15℃以下）使 安瓿管内，用低温酒精或干冰（－15℃以下） （－15℃以下 之速冻，在低温下用真空泵抽干， 之速冻，在低温下用真空泵抽干，最后将安瓿管 真空熔封，低温保存备用。 真空熔封，低温保存备用。 经冻干后的菌株无需进行冷冻保藏， 经冻干后的菌株无需进行冷冻保藏，便于运输
4 砂土管保藏法
本方法是用人工方法模拟自然环境使菌种得以栖 息。适用于产孢子的放线菌、霉菌以及产芽孢的 细菌。 砂土是砂和土的混合物，砂和土的比例一般为3 砂土是砂和土的混合物，砂和土的比例一般为3： 2或1：1，将黄砂和泥土分别洗净，过筛，一般沙 用80目过筛，土用80～100目过筛。按比例混合后， 80目过筛，土用80～100目过筛。按比例混合后， 装人小试管内，装料高度约为1cm左右，121℃间 装人小试管内，装料高度约为1cm左右，121℃间 歇灭菌2 歇灭菌2～3次，灭菌后烘干，并作无菌检查后备 用。
病原菌的保藏方法
灭菌是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔 隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质 全部杀死。
灭菌的效果取决于细菌中最耐热(nai rè)的结构——芽 孢。
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灭菌(miè jūn)方法
物理(wùlǐ)方法
化学方法
射线处理
干热法
湿热法
过氧化氢
甲醛
高锰酸钾
抗菌素
火焰灼 烘烧法 烧法
紫外线 超声波
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3、滤纸(lǜzhǐ)保藏法
•
细菌和丝状真菌均可用此法保藏，可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏
14～17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要(xūyào)特殊设备。
• ①将滤纸剪成0.5cm×1.2cm的小条，装入0.6cm×8.0cm的安瓿管中，每管1～2张， 塞以棉塞，1.05kg/cm2、121.3℃，灭菌30min；②将需要(xūyào)保存的菌种，在 适宜的斜面培养基上培养，使充分生长；
间歇
巴氏
灭菌法 消毒法
煮沸 消毒
高压蒸 汽灭菌法
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抑菌
• 磺胺为化学合成的抗菌谱较广的抗菌药， 能抑制大多数革兰氏阳性菌和某些(mǒu xiē) 阴性菌
• 金霉素是广谱抗菌素， • 青霉素主要是抗革兰氏阳性菌 • 阿散酸对多种肠道疾患的致病菌有抑制作用
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灭菌(miè jūn)、抑菌的原理
为了提高乙醇的
杀菌效果，可在乙醇溶液中加入0.1%的酸或碱,
以改变细胞表面带电荷的性质而增加膜透性,提
高乙醇的杀菌效果。
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高锰酸钾灭菌的原理：高锰酸钾能使细菌酶蛋 白中的基氧化成二硫基而失去酶活性。浓度稀 释时起氧化作用杀死细菌，日常生活中通常 (tōngcháng)用作皮肤、果蔬的表面消毒剂， 在一盆清水中加几粒高锰酸钾就可起到杀菌的 作用。
灭菌的效果取决于细菌中最耐热(nai rè)的结构——芽 孢。
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灭菌(miè jūn)方法
物理(wùlǐ)方法
化学方法
射线处理
干热法
湿热法
过氧化氢
甲醛
高锰酸钾
抗菌素
火焰灼 烘烧法 烧法
紫外线 超声波
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3、滤纸(lǜzhǐ)保藏法
•
细菌和丝状真菌均可用此法保藏，可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏
14～17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要(xūyào)特殊设备。
• ①将滤纸剪成0.5cm×1.2cm的小条，装入0.6cm×8.0cm的安瓿管中，每管1～2张， 塞以棉塞，1.05kg/cm2、121.3℃，灭菌30min；②将需要(xūyào)保存的菌种，在 适宜的斜面培养基上培养，使充分生长；
间歇
巴氏
灭菌法 消毒法
煮沸 消毒
高压蒸 汽灭菌法
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抑菌
• 磺胺为化学合成的抗菌谱较广的抗菌药， 能抑制大多数革兰氏阳性菌和某些(mǒu xiē) 阴性菌
• 金霉素是广谱抗菌素， • 青霉素主要是抗革兰氏阳性菌 • 阿散酸对多种肠道疾患的致病菌有抑制作用
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灭菌(miè jūn)、抑菌的原理
为了提高乙醇的
杀菌效果，可在乙醇溶液中加入0.1%的酸或碱,
以改变细胞表面带电荷的性质而增加膜透性,提
高乙醇的杀菌效果。
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高锰酸钾灭菌的原理：高锰酸钾能使细菌酶蛋 白中的基氧化成二硫基而失去酶活性。浓度稀 释时起氧化作用杀死细菌，日常生活中通常 (tōngcháng)用作皮肤、果蔬的表面消毒剂， 在一盆清水中加几粒高锰酸钾就可起到杀菌的 作用。
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• 杀菌或抑菌，并无绝对界限，常常不易 区分。同一物质，浓度高时可杀菌，而 浓度低时只能抑菌，作用时间长可杀菌 ，作用时间短则只能抑菌。另外，由于 各种微生物性质的不同，同一物质对一 种微生物具有杀菌作用，而对另一种微 生物可能仅有抑菌作用。
抑菌
• 采用化学或物理方法抑制或 妨碍细菌生长繁殖及其活性 的过程。
2 甘油保藏法 • 方法步骤： • 无菌甘油的制备：80%的甘油在 121℃灭菌20min • 保藏培养物的制备：活化 纯化 性能 检测 制备菌种培养物 • 保藏菌悬液的制备：液体法 菌苔法 -20 ℃保藏 • 快速冷冻；乙醇-干冰 液氮 • 超低温保藏：-70 ℃ 一般细菌、酵母 保存期为3~5年。
灭菌
气灭菌
热 法
辐射杀菌法
紫外线（ ultraviolet ray,UV) : 260nm-266nm（最佳杀菌波 长） 杀菌原理：使DNA上相邻的T碱基通过共价 键结合成 二聚 体，干扰DNA复制与 转录，导致细菌死亡 特点： 穿透力弱 适用范围：适于空气和物 体表面消毒
滤过除菌法（filtration） 机理：用物理阻留的方法将液体或空气中的 细菌除去, 以达到除菌目的 器具：滤菌器（filter） 适用物品：不耐高温物品（血清、毒素、抗 生素）以及 空气等的除菌
热力灭菌 原理： 破坏菌体蛋白质与核酸，使其肽链断裂，蛋白 质 变性凝固，核酸解链崩解, 导致细菌死亡。
火焰灼烧
干热灭菌法
烘箱热空气灭菌
高温灭菌
常压 下 湿热灭菌消毒法
LIH法 巴氏消毒 HTST法 煮沸消毒 间歇灭菌 常规加压灭菌
加压
连续加压灭菌法
种类：
常用热力灭菌法
种类 焚烧 干 烧灼
方法 用焚烧炉燃烧 火焰烧灼
低温抑菌法
冷冻真空干燥法： 在低温状态下真空抽去水分
干燥与
用途：保存菌种
（二）化学消毒灭菌法
消毒剂杀菌机理： 1.使菌体蛋白变性和凝固 ： 酚、醇、酸硷、醛 类，重金属盐类（高浓度） 2 .干扰细菌的酶系统（酶失活）： 氧化剂、 重金属盐类（低浓度） 3. 损伤细菌细胞膜 酚类（低浓度）、表面活性 剂
2 甘油保藏法
• 期长，保存期间取样测试方便，在基因工程 中常用于保存含质粒的菌株，一般可保3~5 年。保护剂： 40%左右的甘油 • 机理：适当浓度甘油中，少量甘油分子进入 细胞，使菌种细胞在冷冻过程中缓解了其由 于强烈脱水及胞内形成冰晶而引起的破坏。 • 保藏温度：-20 ℃左右或-70 ℃ • 特点:操作简单，保藏
3干燥保藏法
• 硅胶保藏法—丝状真菌。 • 方法：制备硅胶 制备菌液 加 菌液 干燥 收藏 恢复培养 • 麸皮保藏法—产孢子的丝状真 菌。 • 制备麸皮培养基 真空干燥保藏法
• 该法集中了菌种保藏中低温、缺氧、干燥 和添加保护剂等多种有利条件，是微生物 代谢处于相对静止状态。 • 该法可同时用于细菌、放线菌、丝状真菌、 （除少数不产孢子或只产生丝状体真菌 外）、酵母菌及病毒的保藏。 • 该方法保藏菌种范围广、保藏时间长（一 般可达10~20年），存活率高，是目前最 有效的菌种保藏方法之一。
抑菌的原理
• 4、高渗：通过盐腌和糖渍等高渗措施来保 护食物，是在民间早就流传的有效防霉腐 方法。 • 5、高酸度：在我国具有悠久历史的泡菜， 就是利用乳酸菌的厌氧发酵使新鲜蔬菜产 生大量乳酸，借这种高酸度而达到抑制杂 菌和防霉腐的目的。
• 6、高纯度：用白酒或黄酒保存食品，在我 国有悠久传统，如醉蟹、醉麸、醉笋和黄 泥螺等产品，都是特色风味食品。 • 7、加防腐剂：有些食品、调味剂、饮料、 果汁或工业器材中，可加入可加入适量的 防腐剂或防霉剂来达到防霉腐的目的，如 丙酸（0.32%）或乙二酸（0.32%）来做面 包等的防腐剂。
1 简易保藏法 • 定期移植时间间隔： • 一般不产芽孢的细菌约2周至1个月； • 放线菌、酵母菌和丝状真菌4~6个月； • 石蜡油封法一般可保藏1年。 • 优缺点：操作简单，可随时观察菌种 生长状况，但较费时费力，因经常移 植传代，微生物物易发生变异。
1 简易保藏法 • • • • • 定期移植时间间隔： 一般不产芽孢的细菌约2周至1个月； 放线菌、酵母菌和丝状真菌4~6个月； 石蜡油封法一般可保藏1年。 优缺点：操作简单，可随时观察菌种 生长状况，但较费时费力，因经常移 植传代，微生物物易发生变异。
• • • •
贴标签 穿刺接种：将菌种直刺入直立柱中央 培养：同传代保藏法 收藏：待菌长好后，用浸有石蜡的无 菌软木塞或橡皮塞代替面塞并塞紧， 置4 ℃冰箱中保藏，保藏0.5~1年。
1.3石蜡油封法
• 石蜡油灭菌：将石蜡油装入三角瓶中，装量不超 过总体积的1/3，塞上面塞，外包牛皮纸，加压蒸 汽灭菌（121 ℃ ，30min），连续灭菌2次。然后 在40 ℃温箱中放置2周或置105~110 ℃烘箱中烘2h， 除去石蜡油中的水分。 • 培养 • 加石蜡油：以无菌吸管吸石蜡油加至菌种管中， 加入量以高出斜面顶端或直立柱培养基表面约 1cm为宜。 • 收藏：面塞外包牛皮纸或用无菌橡皮塞，把菌种 管直立放置于4 ℃冰箱中。 • 放线菌、霉菌及产芽孢细菌一般可保2年，酵母菌 及不产芽孢细菌可保1年。
防腐
• 利用某种理化因素完全抑制霉腐微 生物的生长繁殖，即通过制菌作用 防止食品、生物制品等对象发生霉 腐的措施
化疗
• 指利用具有高度选择毒力，即对病 原菌具高度毒力而对其宿主基本无 毒的化学物质来抑制主体内病原微 生物的生长繁殖，借以达到治疗该 宿主传染病的一种措施
抑菌的方法
• • • • • • • 1、低温 2、缺氧 3、干燥 4、高渗 5、高酸度 6、高醇度 7、加防腐剂
3 干燥保藏法 • 基本原理：将微生物赖以生存的水 分蒸发掉，使细胞处于休眠和代谢 停滞状态，从而达到较长期保藏的 目的。低温条件下，保藏期可达数 年至十几年之久。 • 砂土管保藏法、明胶片保藏法、硅 胶保藏法、麸皮保藏法
3干燥保藏法
• 砂土管保藏法—产生芽孢的细菌及 形成孢子的霉菌和放线菌。 • 方法：处理砂土 装沙土管 制备菌液 加孢子液 干燥 收藏 恢复培养 • 明胶片保藏法—细菌 • 制备菌悬液 制备菌液 制备蜡纸 加菌 液 干燥 收藏 恢复培养
抑菌率≥90%产品有 较强的抑菌作用
菌种保藏基本原则
1、保藏菌种时首先要选择它们的 休眠体，如分生孢子、芽孢等，并 创造一个低温、干燥、缺氧、避光 和缺少营养的环境条件，以利于休 眠体能较长时间维持其休眠状态。 2、对于不产孢子的微生物，也要 使其新陈代谢处于最低水平，又不 会死亡，从而达到长期保藏的目的 。
常用菌种保藏方法 1 常用的简易保藏法： 斜面传代保藏法、半固体穿刺保藏法（适 用于细菌和酵母菌）、石蜡油封法 2 甘油保藏法 3 干燥保藏法 4 真空冷冻干燥保藏法 5 液氮超低温保藏法
1 简易保藏法
• 基本原理：利用低温来抑制微生物 生命活动。 • 通常将在斜面或半固体培养基上生 长良好时培养物直接放到2~10 ℃ 冰箱中保藏，当培养基营养物质消 耗殆尽后再重新移植到新的 培养 基上，故又称定期移植保藏法或传 代培养保藏法。
抑菌时间可为 2min、5min、 10min、20min相 同条件下作用时 间越长，杀菌率 越低，所以选择 最长的作用时间 来检测抑菌性能 更具有代表性
杀菌
残留消 中和剂法（化学 毒剂的 中合法） 去除方 法不同
抑菌
稀释法（酸碱平衡 法）
评价标 杀菌率≥90%，产 抑菌率≥50%~90%， 品有杀菌作用。 产品有抑菌作用， 准
1.1斜面传代保藏法
• 贴标签：菌种 菌株 接种日期 • 接种：对数生长期后期 成熟的孢子 • 培养： 细菌—37℃，18~24h 酵母—28~30 ℃ ，36~60h 放线菌和丝状真菌—28 ℃ ，4~7d • 收藏：管口面塞用牛皮纸包扎，或用融化 的固体石蜡封棉塞后置4冰箱保存。
1.2半固体穿刺保藏法
常见病原菌的灭菌、抑菌、保藏 原理及方法
消毒灭菌
基本概念 消毒（disinfection）：杀死物体上或环 境中的病原微 生物,并不一定杀死细菌 芽胞或非病原微生物的方法。 灭菌（sterilization）：杀死 物体上所 有微生物的方法(包括芽孢)。
一、消毒灭菌的方法
常用的消毒和灭菌方法可分为： 1）物理方法： 热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法 2）化学方法 3）生物灭菌法
效果 灭菌 灭菌
用途
废弃污物、尸体
接种环，试管口
干烤 热
红外线 煮沸法 湿 高压蒸
干烤箱，热空气
160-170º C 2h 电磁波热效应 100º C ， 5-10 分 钟，沸水
高压蒸气灭菌器 103.4Kpa 121.3º C×15-20 分钟
灭菌
玻璃器皿等耐高温的物
品
灭菌
消毒
医疗器械 饮水和食具 耐高温 耐湿物品
抑菌的原理
• 1、低温：利用4℃以下的各种低温（0， -20，-70，-196℃等）保藏食物等 • 2、缺氧：采用抽真空、冲氮或二氧化碳、 加除氧剂等方法来有效防止食品和粮食等 的霉腐、变质而达到保鲜的目的 • 3、干燥：采用晒干、烘干或红外线干燥等 方法对粮食、食品等进行干燥保藏 • 在密封条件下，也用生石灰，无水氯化钙 干燥
4冷冻真空干燥保藏法
安瓿管
5液氮超低温保藏法
• 将菌种保藏在超低温（-196℃~-150 ℃ ） 的液氮中，可降低变异率和长期保持原 种的性状。 • 对于冷冻干燥保藏法或其他干燥保藏有 困难的微生物，如支原体、衣原体及难 以形成孢子的小霉小型藻类或原生动物 都可用本法长期保存，这是当前保藏菌 种最理想的方法。 • 保护剂：20%甘油或10%二甲基亚砜 （DMSO）
化学因素
• 1、表面消毒剂：随浓度递增相继出现制菌 和杀菌作用，形成一个连续的作用谱 • 2、磺胺类药物：抗代谢 • 3、抗生素：在低浓度能抑制和干扰他种生 物的生命活动