溶血性链球菌的试验方法
溶血性链球菌
氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。
3.3 触酶试验 挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%
过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血 性链球菌触酶为阴性。
3.4 链激酶试验 吸取草酸钾血浆0.2 mL于0.8 mL灭菌生理盐水中混
2 分离 将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，
36 ℃±1 ℃厌氧培养18 h～24 h，观察菌落形态。 溶血性链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典
型菌落形态为灰白色、半透明、光滑、表面突起、 圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。 3 鉴定 3.1 分纯培养
挑取可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和接 种TSB增菌液， 36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
3.5 杆菌肽敏感试验
取可疑菌纯培养物，在0.5 mL灭菌生理盐水 中混匀，用棉签沾取TSB增菌液均匀涂布于 哥伦比亚血琼脂平板上，用灭菌镊子夹取 杆菌肽纸片，放于琼脂表面，36 ℃±1 ℃培 养18 h～24 h，如出现抑菌圈即为敏感，同 时用已知敏感菌株作为阳性对照。β型溶血 性链球菌为杆菌肽敏感。
3.6 可选择使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定 卡对可疑菌落进行鉴定。
结果与报告
综合以上试验结果，报告每25 g（mL）检 样中检出或未检出β型溶血性链球菌
亚血琼脂代替了血琼脂平板； —— 完善了操作步骤； —— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆； —— 增加了规范性附录A。
本标准所代替的历次版本发布情况为： GB 4789.11－1984、 GB/T 4789.11－1994、 GB/T 4789.11－2003。
溶血性链球菌检验程序
Байду номын сангаас报告
溶血性链球菌的检验
预防措施
采取积极的预防措施，如 加强个人卫生、避免接触 可能的感染源等，以降低 感染风险。
病情监测
对患者进行密切监测，及 时发现并处理可能出现的 并发症和异常情况，确保 患者安全。
05
注意事项与建议
实验室安全与防护措施
实验室防护
进行溶血性链球菌检验时，实验 操作区域应保持通风，工作人员 需佩戴一次性手套、实验服、口
溶血性链球菌的检验
2023-11-10
contents
目录
• 简介 • 检验方法 • 检验流程 • 结果分析 • 注意事项与建议
01
简介
溶血性链球菌的定义
• 溶血性链球菌是一种常见的革兰氏阳性菌，其特点是在培养过 程中能产生溶血现象。它是人体常见的病原菌之一，可引起多 种感染疾病，包括扁桃体炎、咽炎、丹毒、猩红热等。
03
检验流程
样品采集与处理
采集咽拭子、血液、尿液等样 品，确保采集方法和操作规范 。
将采集的咽拭子放入适量运输 培养基中，血液和尿液可直接 接种培养基。
在运输培养基中保存样品，尽 快送至实验室进行检测。
细菌分离与培养
将咽拭子接种至5%羊血平板和 巧克力平板上，血液和尿液接种
至巧克力平板上。
在35℃、5%CO2的环境中培养 24-48小时，观察细菌生长情况
04
结果分析
数据分析与解读
实验室数据评估
对实验数据进行分析，包括细 胞形态、生化反应、药敏试验 等，以确定溶血性链球菌的特
性。
数据对比与参照
将实验数据与已知的正常值或参考 范围进行对比，以确定是否存在异 常。
综合分析
结合患者的病史、临床症状和实验 室数据，进行综合分析，以确定病 情的严重程度和可能的治疗方案。
抗链球菌溶血素“O”试验
抗链球菌溶血素“O”试验【基本信息】[简要描述]·溶血素“O”(SLO)是A群溶血性链球菌产生的具有溶血活性的代谢产物，相应的抗体称抗链球菌溶血素“O”(Anti-streptolysin“O”, 抗O或ASO)。
·ASO试验是指通过测定血清中的ASO抗体效价，来判断患者有无A族溶血性链球菌感染。
·ASO试验可作为A族溶血性链球菌感染性疾病的辅助诊断方法之一，还对检测风湿病是否活动较有意义。
[其他名称]抗O、ASO【测定方法及参考值范围】·乳胶凝集法(LAT)：阴性或＜500U。
·溶血抑制法：儿童＜250Todd u；成人＜166Todd u。
(Todd单位为抗体效价稀释度，1932年Todd建立ASO测定法时用滴度表示沿用至今。
另外，U用于国际单位，等于IU，此处用u，意为非国际单位。
下同)·微量滴度法：儿童＜320Todd u；成人＜240Todd u。
·散射比浊法：＜200Todd u；或＜145u(Beckman Study)。
【结果及临床意义】[阳性或升高]◇疾病因素·活动性风湿热注释：感染后4-6周，80%的患者阳性，如果合并C反应蛋白升高，血沉加快，结合临床表现，可考虑风湿活动。
·风湿性关节炎·风湿性心肌炎·急性肾小球肾炎注释：溶血性链球菌感染症及其后续症ASO阳性率：60%-90%。
·急性上呼吸道感染·皮肤和软组织感染·感染性心内膜炎·急性扁桃体炎注释：溶血性链球菌感染症及其后续症ASO阳性率：50%-90%。
·猩红热注释：溶血性链球菌感染症及其后续症ASO阳性率：33%-89%。
·急性渗出性咽炎·过敏性紫癜·丹毒·其他A群链球菌感染·病毒性肝炎注释：非特异性升高。
·肾病综合征注释：非特异性升高。
溶血性链球菌检验
【GB/T 4789.11—1994】食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3.1 温箱：36±1℃。
3.2 水浴：36±1℃。
3.3 显微镜。
3.4 离心机。
3.5 试管架。
3.6 灭菌平皿。
3.7 灭菌小试管。
3.8 载玻片。
3.9 灭菌吸管：1mL、10mL。
3.10 灭菌镊子。
3.11 均质器。
3.12 酒精灯。
3.13 接种环。
4 培养基和试剂4.1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4.2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定。
4.3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28中4.62规定。
4.4 血琼脂平板：按GB 4789.28中4.6规定。
4.5 人血浆。
4.6 0.25%氯化钙。
4.7 灭菌生理盐水。
4.8 杆菌肽药敏纸片(含0.04单位)。
5 检验程序（图略）6 操作步骤6.1 样品处理称取25g固体检样；称取25mL液体检样，加入225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6.2 一般培养将上述混悬液吸取5mL，接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36±1℃培养24h，接种血平板，置36±1℃培养24h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6.3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径0.5～1μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者20～30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。
溶血性链球菌
1.溶血性链球菌
①GB4789.11-2014 《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》于
2015年05月01日实施，代替GB/T 4789.11-2003 《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》。
注：根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其溶血性质分为三类，α-溶血性链球菌，也称甲型溶血，此类细菌致病力不强，多为条件致病菌。
在人类呼吸道及肠道中有α型溶血链球菌正常寄生，但有时也可引起亚急性心内膜炎等症。
β-溶血性链球菌，这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强，常引起人类和动物的多种疾病。
具体用途是用于研究和质量控制。
γ-溶血链球菌也称为丙型或不溶血性链球菌，该菌无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起感染。
②选作项目：链激酶试验：搜索了广东环凯/青岛海博/北京陆桥均没有发现“草酸钾血浆”或者链激酶实验套装在售。
③生化鉴定：搜索了广东环凯/青岛海博/北京陆桥仅在北京陆桥发现“溶血性链球菌荧光定量PCR检测试剂盒“
2.根据GB4789.35-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》可进行双歧杆菌计数嗜热链球菌鉴别乳杆菌鉴别如果对标准理解没有错误的情况下，应该问题不大。
3.若根据GB4789.34-2012 进行双歧杆菌的鉴定，需要气相色谱，这个仪器是微生物检验科所不具备的。
4.总之，从实验条件上，药品检验实验室是否可以用于保健食品的检测，尚不明确；从人员看，微生物检验科实验人员均没有上述检验项目的检验经验。
从检测标准看，除自学外，微生物检验科检验人员均没有相关标准的学习经历。
从仪器设备材料看，溶血性链球菌检验缺少相关试剂及仪器。
溶血性链球菌的检验
细菌培养与鉴定
1
将样本接种于选择性培养基上进行培养，如血 平板、巧克力平板等。
2
根据菌落形态、革兰染色、氧化酶试验等指标 对细菌进行初步鉴定。
3
采用生化试验、血清学试验等方法对细菌进行 进一步鉴定。
血清学试验与结果分析
采用抗链球菌激酶(ASO)等血清学试验检测患者血清中的 抗体水平。
根据抗体滴度及临床诊断标准，对溶血性链球菌感染进行 诊断和分型。
评估疾病风险
通过对溶血性链球菌的检验，可评估疾病的风险程度， 从而为预防和控制疾病提供依据。
指导公共卫生措施
通过对溶血性链球菌的检验，可指导公共卫生措施的实 施，如开展宣传教育、加强消毒隔离等，以预防和控制 疾病的传播。
05
溶血性链球菌检验的未来发展趋势
检测技术的改进与创新
分子生物学技术
随着分子生物学技术的不断发展，基于PCR、基因测序等技术的检测方法将更加灵敏、特 异，有助于更准确地诊断溶血性链球菌感染。
2023
溶血性链球菌的检验
目录
• 溶血性链球菌简介 • 溶血性链球菌的检验方法 • 溶血性链球菌的检验流程 • 溶血性链球菌检验的临床意义 • 溶血性链球菌检验的未来发展趋势
01
溶血性链球菌简介
溶血性链球菌的特性
1 2
革兰氏阳性
溶血性链球菌是一种革兰氏阳性的细菌，这意 味着它具有细胞壁，并且可以被某些抗生素所 杀死。
制定统一的检测方法标准和操作流程，提高不同实验室之间的可比性和结果的准 确性。
规范化
规范实验室操作流程，确保检测结果的可靠性。建立规范的质控体系，对实验室 的检测结果进行严格的质量控制。
检测结果的多参数综合分析与应用
多参数综合分析
溶血性链球菌的检验
溶血性链球菌在自然界分布较广，可存在于水、空气、 尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中，按其在血平板 上溶血能力分类，可分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血 性链球菌、丙型溶血性链球菌和亚甲型溶血性链球菌。 与人类疾病有关的大多属于乙型溶血性链球菌，其血清 型90%属于A族链球菌，常可引起皮肤和皮下组织的化 脓性炎症及呼吸道感染，还可通过食品引起猩红热、流 行性咽炎的爆发性流行。因此，检查食品是否有溶血性 链球菌具有现实意义。
4.链激酶试验
致病性乙型溶血性链球菌能产生激酶素（即溶纤维蛋白酶），此酶能激 活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋 白。
吸取草酸钾血浆0.2ml，加0.8ml灭菌生理盐水，混匀，再加入18h24h，36度培养的链球菌培养物0.5ml及0.25%氯化钙0.25ml，振荡摇 匀，置于36度水浴中10min，血浆混合物自行凝固，然后观察凝固块重 新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h不溶解即为阴性。
食品学院
3、透明质酸酶：又称扩散因子，能分解细胞间质的透明 质酸，故能增加细菌的侵袭力，使病菌易在组织中扩散。 4、链激酶：又称链球菌纤维蛋白溶酶，能使血液中纤维 蛋白酶原变成纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织中的扩散 作用，该酶耐热，100℃50分钟仍可保持活性。 5、脂磷壁酸（LTA）：与细菌粘附于宿主细胞表面有关， 大多数LAT位于细胞膜和肽聚糖之间，通过肽聚糖孔伸展 至细菌细胞表面，人类口腔粘膜和皮肤上皮细胞、血细胞 等细胞膜上均有LAT的结合位点。
食品学院
5.杆菌肽敏感试验 挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子 夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上， 于36度培养18-24h，如有抑菌带出现即为阳性，同时用 已知阳性菌株作为对照。
aso试验实验报告实验分析
aso试验实验报告实验分析实验名称：ASO（抗链球菌溶血素O）试验实验分析实验目的：ASO试验是一种用于检测人体血清中抗链球菌溶血素O抗体水平的实验，主要用于辅助诊断风湿热和链球菌感染。
通过分析血清中ASO抗体的浓度，可以评估个体是否近期或曾经感染过A组β溶血性链球菌。
实验原理：ASO试验基于抗原-抗体反应的原理。
A组β溶血性链球菌在体内感染后，机体会产生特异性的抗体来对抗这种细菌。
通过测定血清中ASO抗体的浓度，可以间接反映链球菌感染的情况。
实验材料：1. 待测血清样本2. ASO抗体检测试剂盒3. 实验室常规设备（离心机、恒温水浴、酶标仪等）实验步骤：1. 采集待测个体的血液样本，分离血清备用。
2. 按照试剂盒说明书，将血清样本稀释至适当浓度。
3. 将稀释后的血清样本加入到试剂盒中的反应孔内。
4. 加入试剂盒提供的酶标抗体，使血清中的ASO抗体与酶标抗体结合。
5. 将反应板放入恒温水浴中孵育一定时间。
6. 孵育结束后，用洗涤液清洗反应板，去除未结合的酶标抗体。
7. 加入底物溶液，使酶催化底物产生颜色变化。
8. 使用酶标仪测定各反应孔的吸光度值。
9. 根据吸光度值与ASO抗体浓度的标准曲线，计算血清样本中的ASO抗体浓度。
实验结果：实验结果显示，待测血清样本的ASO抗体浓度为XX IU/mL。
根据标准曲线，该浓度高于正常参考值范围（< 200 IU/mL），提示可能存在链球菌感染。
实验分析：ASO抗体浓度的升高通常与链球菌感染相关，但也可能受到其他因素的影响，如其他类型的感染或自身免疫性疾病。
因此，ASO试验结果需要结合临床症状和其他实验室检测结果综合分析。
如果ASO抗体浓度显著升高，应考虑进一步的诊断和治疗措施。
结论：本次ASO试验实验分析表明，待测个体的血清样本中ASO抗体浓度高于正常范围，提示可能存在链球菌感染。
建议结合临床症状和其他检测结果，进行进一步的诊断和评估。
备注：本实验报告仅为实验分析的示例，实际实验结果应以实验室检测结果为准。
链球菌属及其检验「微生物检验」
链球菌属及其检验「微生物检验」链球菌属(Streptococcus)细菌，呈链状排列的革兰阳性球菌，个别种成双排列。
广泛分布于自然界、人及动物肠道和健康人鼻咽部，大多数不致病，致病菌可引起各种化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病。
下面是yjbys店铺为大家带来的关于链球菌属细菌的知识，欢迎阅读。
⒈分类链球菌的分类方法尚未统一。
常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象：分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
⑵根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D …等20个群。
同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。
如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。
对人致病的链球菌菌株，主要是 A群，多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性⑴链球菌① 形态染色球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。
无芽胞，无鞭毛。
多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的荚膜。
革兰染色阳性。
②分离培养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。
多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。
在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
抗链球菌溶血素o试验原理
抗链球菌溶血素O试验原理一、概述抗链球菌溶血素O试验是一种用于检测人体血清中对链球菌溶血素O的抗体水平的实验方法。
本实验通过将待测血清与链球菌溶血素O反应，观察反应结果来评估人体免疫系统对链球菌感染的抵抗能力。
该试验可以用于诊断链球菌感染、评估免疫功能以及判断疫苗的有效性。
二、实验原理链球菌溶血素O是由β型溶血性链球菌细菌分泌的一种溶血素，能够引起溶血反应。
正常情况下，人体会产生相应的抗体来中和这种溶血素，从而保护人体不受损伤。
抗链球菌溶血素O试验就是利用这一原理来检测人体中的抗体水平。
具体步骤如下： 1. 将待测血清稀释至一定浓度，通常采用两倍或三倍稀释； 2. 将稀释后的血清与含有链球菌溶血素O的试剂混合； 3. 在37℃下孵育一段时间，让抗体与链球菌溶血素O反应； 4. 添加一种适用于链球菌的红细胞悬液，如兔红细胞； 5. 再次孵育一段时间； 6. 观察溶血反应和溶血程度，评估抗体水平。
三、实验过程3.1 血清的稀释血清的稀释是为了确保试剂的最终浓度在适宜范围内，同时避免过高浓度的干扰。
稀释的选择根据具体实验要求进行，通常采用两倍或三倍稀释。
3.2 血清与试剂的混合将稀释后的血清与含有链球菌溶血素O的试剂混合，充分搅拌均匀。
3.3 反应孵育将混合溶液放置在恒温培养箱中，以37℃恒温孵育一定时间。
这个步骤的主要目的是让抗体与链球菌溶血素O发生特异性反应。
3.4 红细胞悬液的加入在经过一定时间的孵育后，加入适用于链球菌的红细胞悬液，如兔红细胞。
然后再次进行一定时间的孵育。
3.5 溶血程度的观察观察孵育后的溶血反应和溶血程度，根据溶血程度的不同可以评估抗体水平。
四、结果解读4.1 阴性结果如果试验中出现红细胞没有明显溶解的情况，则说明待测血清中没有足够的抗链球菌溶血素O抗体，即属于阴性。
这可能是由于未感染链球菌或感染不久等原因。
4.2 阳性结果如果试验中观察到红细胞有明显溶解的情况，则说明待测血清中含有足够的抗链球菌溶血素O抗体，即属于阳性。
常见致病菌检验—溶血性链球菌检验
三、微生物检验
（二）检验操作要点 6、生化鉴定： （2）杆菌肽敏感试验
将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划 线处贴附杆菌肽纸片，37℃18h，出现抑菌带 为阳性，据此可推测为乙型溶血性链球菌。
三、微生物检验
（二）检验操作要点 7、报告： 根据培养后的形态，菌落特征及生化试验可报 告：有乙型溶血性链球菌生长。
2）链激酶（streptokinase；SK）
3） 链道酶（streptodornase；SD）
2. 所致疾病
淋巴管炎， 化脓性感染 蜂窝组织炎，
扁桃体炎等
毒素性疾病 猩红热
超敏反应性疾病 风湿热 急性肾小球肾炎
痈
链球菌感染
金黄色葡萄球菌感染
Ⅱ型超敏反应
溶血性链球菌
肾小球基底膜 共同抗原 急性肾小球肾炎
（2）外毒素类 1）致热外毒素
• 红疹毒素，猩红热毒素 • A群链球菌溶原菌菌株产生 • 引起猩红热
2） 链球菌溶血素
• SLO：对O2敏感。测定SLO抗体含量，可作为链球菌新近感染指 标之一或风湿热及其活动性的辅助诊断
• SLS：对O2稳定，β溶血环
（3）侵袭性酶 1） 透明质酸酶
• 扩散因子 • 分解细胞间质的透明质酸→组织中扩散
1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化 脓性炎症时造成食品的污染；
二、 生物学特性
2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺 炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性 炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以 及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风 湿热、肾小球肾炎等变态反应。
病原学特性
链球菌 含乙型溶血性链球菌的鉴定内容[荟萃精制]
![链球菌 含乙型溶血性链球菌的鉴定内容[荟萃精制]](https://img.taocdn.com/s3/m/cd64943bb84ae45c3b358cc2.png)
行业学习
3
链球菌电镜图
行业学习
4
链球菌革兰染色
行业学习
5
培养特点－－生长条件
营养要求高，在含血液、血清培养基上 生长良好 需氧、兼性厌氧 有些链球菌可在10℃、45 ℃生长
行业学习
6
培养特点－－生长现象
液体培养基：呈沉淀生长现象
血平板：灰白色、细小、圆形、光滑的、 有不同溶血现象的菌落
分类
菌落特征
菌落特征：
甲型链球菌：针尖样菌落、周围有草绿色溶血 环；
乙型链球菌：灰白色小菌落、周围有透明溶血 环；
丙型链球菌：灰白色菌落、无溶血环
肺炎链球菌：灰白色扁瓶小菌落、周围有草绿
色溶血环，培养较久形成脐窝样菌落
行业学习
12
乙型溶血性链球菌的鉴定
β-溶血环 包括A、B、C、D、F、G群 C群可采用血清学鉴定 其它群采用生化反应或其他鉴定试验
甲型（α）溶血性链 灰色、针尖状菌落、周围有草绿
球菌
色溶血环（ α溶血）
乙型（β）溶血性链 灰白色、细小菌落、周围有宽大
球菌
透明溶血环（ β溶血 ）
丙型（γ）链球菌 灰白色小菌落、无溶血环
行业学习
7
链球菌在血平板上菌落特征
丙链
甲链
乙链
行业学习
8
分类－－根据溶血现象分类
甲型链球菌：属条件致病菌 乙型溶血性链球菌：致病力强 丙型链球菌：无致病力
链球菌
分布：自然界、人和动物肠道、健康人 鼻咽部 所致疾病：致病链球菌引起各种化脓性 炎症、猩红热、风湿热等疾病。
行业学习
1
生物学性状
形态染色 培养特点 生化反应 抗原构造 分类 抵抗力
4789.11溶血性链球菌
本标准与GB/T 4789.5-2003相比主要变化
—— 删除了以无菌生理盐水稀释样品的步骤； —— 增菌培养基以改良胰蛋白胨大豆肉汤代替了葡 萄糖肉浸液肉汤和匹克氏肉汤； —— 分离培养基以哥伦比亚CNA血琼脂和哥伦比 亚血琼脂代替了血琼脂平板； —— 完善了操作步骤； —— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆； —— 增加了规范性附录A。
结果与报告
综合以上试验结果，报告每25 g（mL）检 样中检出或未检出β型溶血性链球菌
本标准所代替的历次版本发布情况为： GB 4789.11－1984、 GB/T 4789.11－1994、 GB/T 4789.11－2003。
溶血性链球菌检验程序
样品25g（或mL）+ 225 mL mTSB 36 ℃±1 ℃ 18 h ~ 24 h
划线接种哥伦比亚CNA血琼脂平板 36 ℃±1 ℃
3.3 触酶试验 挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3% 过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血 性链球菌触酶为阴性。 3.4 链激酶试验 吸取草酸钾血浆0.2 mL于0.8 mL灭菌生理盐水中混 匀，再加入经36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h的可疑菌 的TSB培养液0.5 mL及0.25%氯化钙溶液0.25 mL， 振荡摇匀，置于36 ℃±1 ℃水浴中10 min，血浆混 合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不 流动）。继续36 ℃±1 ℃培养24 h，凝固块重新完 全溶解为阳性，不溶解为阴性。β型溶血性链球菌 为阳性。
18 h～24 h ，平板和TSB 36 ℃±1 ℃
溶血性链球菌检验操作规程
溶血性链球菌检验操作规程溶血性链球菌（英文简称：S. pyogenes）是一种常见的革兰氏阳性球菌，通常引起咽峡炎、皮肤感染和淋巴结炎等疾病。
准确的检测和鉴定溶血性链球菌对于诊断和治疗这些疾病至关重要。
下面是关于溶血性链球菌检验的操作规程。
一、检验前准备1. 检验人员需佩戴好防护用具，如实验手套、隔离眼镜和口罩。
2. 准备好所需的检验试剂和材料，包括培养基、琼脂培养基、草莓牛血琼脂、货架刀等。
3. 仔细核对标本的标签和信息，确保和病人信息一致。
二、标本采集和处理1. 从患者口咽部或其他可疑感染部位采集标本，如咽拭子或分泌物样本。
2. 将标本稀释或切碎，使其与培养基充分混合。
3. 使用棉签或货架刀，将混合好的标本涂抹在琼脂培养基上。
三、培养和鉴定1. 将含有标本的琼脂培养基置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
2. 观察培养基上是否有溶血环形形成，表明有溶血性链球菌的存在。
3. 将溶血环形的菌落或单个菌落划取到草莓牛血琼脂上。
4. 再次置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
5. 观察草莓牛血琼脂上生长的菌落形态和特征。
6. 进一步进行革兰染色，观察菌形和细胞特征。
四、药敏试验对已鉴定的溶血性链球菌，可以进行药敏试验以确定对何种抗生素敏感。
1. 用细菌悬浮液调整到0.5～0.6麦克法尔兰（McFarland）标准。
2. 使用含有不同抗生素的纸片置于琼脂平板上。
3. 用择菌钳将纸片粘贴于琼脂平板上。
4. 将准备的溶血性链球菌悬液均匀涂抹在琼脂平板上。
5. 将琼脂平板置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
6. 观察菌落的生长和抗生素纸片周围的抑制圈，根据直径大小判断菌株的抗药性。
五、结果判定和记录根据溶血环形、菌落形态、革兰染色和药敏试验的结果，判定溶血性链球菌的存在和鉴定结果，并将结果准确记录在检验报告中。
操作规程中的注意事项：1. 检验过程中应严格遵守无菌操作，避免交叉感染。
2. 确保检验室设备和培养基的质量，以及培养温度和时间的准确控制。
β型溶血性链球菌的测定
一、编制目的为规范本单位β型溶血性链球菌的检测编制本作业指导书。
二、适用范围本指导书适用于食品中β型溶血性链球菌的测定。
三、编制依据GB/T 4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》四、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a)恒温培养箱：36℃±1℃；b)冰箱：2℃~5℃；c)厌氧培养装置；d)天平：感量0.1g；e)均质器与配套均质袋；f)显微镜：10×～100×；g)无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头h) 三角烧瓶；i)无菌培养皿：直径90mm；j)pH计或pH比色管或精密pH试纸；k)水浴装置：36℃±1℃；l)微生物生化鉴定系统。
五、培养基和试剂5.1.改良胰蛋白胨大豆肉汤5.2 哥伦比亚CNA血琼脂5.3 哥伦比亚血琼脂5.4 革兰氏染色液5.5 胰蛋白胨大豆肉汤5.6 草酸钾血浆5.7 0.25%氯化钙（CaCl2）溶液5.8 3%过氧化氢（H2O2）溶液5.9生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡六、检验程序溶血性链球菌检验程序见图1图1溶血性链球菌检验程序七、操作步骤7.1样品处理及增菌以无菌操作取样25g（ml），加入装有灭菌225mlmTSB的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000 r/min均质；或加入装有225ml mTSB的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。
于36℃±1℃，厌氧培养18h～24h。
7.2 分离将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂，36℃±1℃，厌氧培养18h～24h，观察菌落形态。
溶血性链球在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2mm~3mm,灰白色、半透明、光滑、表面凸起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。
7.3 鉴定7.3.1分纯培养挑取5个（如小于5个则全选）可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB增菌液，36℃±1℃，培养18h～24h。
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5操作步骤
取样液5 mL加入到50 mL葡萄糖肉汤，35℃±2℃培养24 h。
将培养物划线接种血琼脂平板，35℃±2℃培养24 h观察菌落特征。溶血性链球菌在血平板上为灰白色，半透明或不透明，针尖状突起，表面光滑，边缘整齐，周围有无色透明溶血圈。
挑取典型菌落作涂片革兰氏染色镜检，应为革兰氏阳性，呈链状排列的球菌。镜检符合上述情况，应进行下列试验：
4.2 器具
烧杯（250ml）、量筒（100ml）、三角烧瓶（250ml）、试管、硅胶塞、白金耳、酒精灯、培养皿（φ90mm）、刻度吸管（1ml,5ml，20ml）
4.3 培养基、菌种：
葡萄糖肉汤、血琼脂平板、草酸钾血浆、草酸钾、氯化钙、血平板、染色液（革兰氏染色用）
4.4 器具灭菌：
与样液接触的所有器具（刻度吸管、培养皿等）应按下述方法灭菌：包好后置手提式压力蒸汽消毒器内121℃20分钟高压灭菌，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160℃2小时干热灭菌。
9.5．净化工作台操作规程
10．相关记录
11.1. 生物性能检测记录。
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溶血性链球菌的测定方法
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察一次(一般10 min内可凝固)，待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2 h内不溶化，继续放置24 h观察，如凝块全部溶化为阳性，24 h仍不溶化为阴性。
杆菌肽敏感试验：将被检菌菌液涂于血平板上，用灭菌镊子取每片含0.04单位杆菌肽的纸片放在平板表面上，同时以已知阳性菌株作对照，在35℃±2℃下放置18～24 h，有抑菌带者为阳性。
6结果报告
镜检革兰氏阳性链状排列球菌，血平板上呈现溶血圈，链激酶和杆菌肽试验阳性，可报告被检样品检出溶血性链球菌
7．记录保存：
7.1．品管部保管5年。
8．相关操作规程
9.1．电热鼓风干燥箱操作规程
9.2．HWS-12型电热恒温水浴锅操作规程
9.3．生化培养箱操作规程
9.4．YX手提式压力蒸汽消毒器操作规程
链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2 mL(0.01 g草酸钾加5 mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液)，加入0.8 mL灭菌生理盐水，混匀后再加入待检菌24 h肉汤培养物0.5 mL和0.25％氯化钙0.25 mL，混匀，放35℃±2℃水浴中，2 min观
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溶血性链球菌的测定方法
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1．目的
制订溶血性链球菌的测定方法，对从事检测的操作人员进行培训指导，按测定方法操作。
2．适用范围:
本方法适用于溶血性链球菌的测定。
3. 职责
质检部对本测定方法实施负责。
4. 程序
4.1 仪器
电子天平、电热恒温鼓风干燥箱、净化工作台、手提式压力蒸汽消毒器、电热恒温水浴锅、生化培养箱 、显微镜