溶血性链球菌检验
医学检验·检查项目：抗溶血性链球菌“O”试验_课件模板
医学检验·各论：抗溶血性链球菌“O”试验 >>>
临床意义： 性骨髓瘤等。 ③寒冷地区、寒冷季节。 (2)降低：药物性(水杨酸盐类、肾上腺皮 质激素、抗生素)。
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正常值： ＜500U。
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相关检查： 抗透明质酸酶、抗链球菌激酶试验、抗凝 血活性试验、尿含铁血黄素(HS,Hd)、蔗 糖水溶血试验、嗜碱性点彩红细胞。
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相关疾病： 菌性肺炎、肺炎链球菌败血症、肺炎球菌 肺炎、链球菌感染后的急性肾小球肾炎、 链球菌性咽炎、溶血性链球菌性坏疽。
谢谢！
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简介：
染引起相应的扁桃体炎、猩红热、急性肾 炎、亚急性细菌性心内膜炎、肾病综合征 等均可引起ASO升高。人感染溶血性链球 菌后，血清中可以出现多种抗体，如抗链 激酶抗体、抗透明质酸抗体和抗“O”溶 血素抗体，而抗“O”溶血素抗体对检测 风湿病是否活动的一种血清学诊断试验较 有意义。风湿病活动期60%
医学检验·各论 抗溶血性链球菌“O”试
验 内容课件模板
医学检验·各论：抗溶血性链球菌“O”试验 >>>
别名： 抗“O”。
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简介：
抗链球菌溶血素“O”试验，简称抗 “O”，是机体产生的以链球菌溶血素O为 抗原的抗体。通过测定血清中的ASO抗体 效价，来判断病人有无A族溶血性链球菌 感染，可作为A族溶血性链球菌感染性疾 病的辅助诊断方法之一。但本试验无特异 性意义，因为A族链球菌感染后，可引起 人类多种疾病，如链球菌感
溶血性链球菌
氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。
3.3 触酶试验 挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%
过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血 性链球菌触酶为阴性。
3.4 链激酶试验 吸取草酸钾血浆0.2 mL于0.8 mL灭菌生理盐水中混
2 分离 将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，
36 ℃±1 ℃厌氧培养18 h～24 h，观察菌落形态。 溶血性链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典
型菌落形态为灰白色、半透明、光滑、表面突起、 圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。 3 鉴定 3.1 分纯培养
挑取可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和接 种TSB增菌液， 36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
3.5 杆菌肽敏感试验
取可疑菌纯培养物，在0.5 mL灭菌生理盐水 中混匀，用棉签沾取TSB增菌液均匀涂布于 哥伦比亚血琼脂平板上，用灭菌镊子夹取 杆菌肽纸片，放于琼脂表面，36 ℃±1 ℃培 养18 h～24 h，如出现抑菌圈即为敏感，同 时用已知敏感菌株作为阳性对照。β型溶血 性链球菌为杆菌肽敏感。
3.6 可选择使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定 卡对可疑菌落进行鉴定。
结果与报告
综合以上试验结果，报告每25 g（mL）检 样中检出或未检出β型溶血性链球菌
亚血琼脂代替了血琼脂平板； —— 完善了操作步骤； —— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆； —— 增加了规范性附录A。
本标准所代替的历次版本发布情况为： GB 4789.11－1984、 GB/T 4789.11－1994、 GB/T 4789.11－2003。
溶血性链球菌检验程序
Байду номын сангаас报告
食品微生物学检验 β型溶血性链球菌 原始记录
检测项目β型溶血性链球菌检验依据GB 4789.11-2014
培养箱编号天平编号
mTSB制备编号哥伦比亚CAN血琼脂平板制备编号
哥伦比亚血琼脂平板革兰氏染色液
API 20 Strep生化试剂检测日期
样品编号
样品制备
以无菌操作取样mL，置于装有mLmTSB均质袋中，用均质器均质
增菌
mTSB
℃ h
结果
（25mL样品β型溶血性链球菌）
备注
“+”表示阳性结果，“—”表示阴性结果
检测员复核人
日期日期
培养液，将增菌液划线接种于哥伦比亚CAN血琼脂平板
分离
哥伦比亚CAN血琼脂平板（厌氧培养）℃h
菌落，β型溶血。
鉴定
哥伦比亚血琼脂平板
℃ h
挑取哥伦比亚CAN血琼脂平板上个可疑菌落划线，菌落，
β型溶血
革兰氏染色镜检
挑取个菌落镜检，其中为革兰氏阳性球菌
触酶试验
挑取个菌落镜检，其中个阴
溶血性链球菌的检验
预防措施
采取积极的预防措施，如 加强个人卫生、避免接触 可能的感染源等，以降低 感染风险。
病情监测
对患者进行密切监测，及 时发现并处理可能出现的 并发症和异常情况，确保 患者安全。
05
注意事项与建议
实验室安全与防护措施
实验室防护
进行溶血性链球菌检验时，实验 操作区域应保持通风，工作人员 需佩戴一次性手套、实验服、口
溶血性链球菌的检验
2023-11-10
contents
目录
• 简介 • 检验方法 • 检验流程 • 结果分析 • 注意事项与建议
01
简介
溶血性链球菌的定义
• 溶血性链球菌是一种常见的革兰氏阳性菌，其特点是在培养过 程中能产生溶血现象。它是人体常见的病原菌之一，可引起多 种感染疾病，包括扁桃体炎、咽炎、丹毒、猩红热等。
03
检验流程
样品采集与处理
采集咽拭子、血液、尿液等样 品，确保采集方法和操作规范 。
将采集的咽拭子放入适量运输 培养基中，血液和尿液可直接 接种培养基。
在运输培养基中保存样品，尽 快送至实验室进行检测。
细菌分离与培养
将咽拭子接种至5%羊血平板和 巧克力平板上，血液和尿液接种
至巧克力平板上。
在35℃、5%CO2的环境中培养 24-48小时，观察细菌生长情况
04
结果分析
数据分析与解读
实验室数据评估
对实验数据进行分析，包括细 胞形态、生化反应、药敏试验 等，以确定溶血性链球菌的特
性。
数据对比与参照
将实验数据与已知的正常值或参考 范围进行对比，以确定是否存在异 常。
综合分析
结合患者的病史、临床症状和实验 室数据，进行综合分析，以确定病 情的严重程度和可能的治疗方案。
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验.
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3．1 温箱：36±1℃。
3．2 水浴：36±1℃。
3．3 显微镜。
3．4 离心机。
3．5 试管架。
3．6 灭菌平皿。
3．7 灭菌小试管。
3．8 载玻片。
3．9 灭菌吸管：1 mL、10 mL。
3．10 灭菌镊子。
3．11 均质器。
3．12 酒精灯。
3．13 接种环。
4 培养基和试剂4．1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4．2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定。
4．3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28 中4.62 规定。
4．4 血琼脂平板：按GB 4789.28 中4.6 规定。
4．5 人血浆。
4．6 0.25%氯化钙。
4．7 灭菌生理盐水。
4．8 杆菌肽药敏纸片（含 0.04 单位）。
5 检验程序6 操作步骤6．1 样品处理称取 25 g 固体检样；称取25 mL 液体检样，加入 225 mL 灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6．2 一般培养将上述混悬液吸取 5 mL，接种于 50 mL 葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经 36±1℃培养 24 h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6．3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径 0.5～1 μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者 20～30 个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。
溶血性链球菌
1.溶血性链球菌
①GB4789.11-2014 《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》于
2015年05月01日实施，代替GB/T 4789.11-2003 《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》。
注：根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其溶血性质分为三类，α-溶血性链球菌，也称甲型溶血，此类细菌致病力不强，多为条件致病菌。
在人类呼吸道及肠道中有α型溶血链球菌正常寄生，但有时也可引起亚急性心内膜炎等症。
β-溶血性链球菌，这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强，常引起人类和动物的多种疾病。
具体用途是用于研究和质量控制。
γ-溶血链球菌也称为丙型或不溶血性链球菌，该菌无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起感染。
②选作项目：链激酶试验：搜索了广东环凯/青岛海博/北京陆桥均没有发现“草酸钾血浆”或者链激酶实验套装在售。
③生化鉴定：搜索了广东环凯/青岛海博/北京陆桥仅在北京陆桥发现“溶血性链球菌荧光定量PCR检测试剂盒“
2.根据GB4789.35-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》可进行双歧杆菌计数嗜热链球菌鉴别乳杆菌鉴别如果对标准理解没有错误的情况下，应该问题不大。
3.若根据GB4789.34-2012 进行双歧杆菌的鉴定，需要气相色谱，这个仪器是微生物检验科所不具备的。
4.总之，从实验条件上，药品检验实验室是否可以用于保健食品的检测，尚不明确；从人员看，微生物检验科实验人员均没有上述检验项目的检验经验。
从检测标准看，除自学外，微生物检验科检验人员均没有相关标准的学习经历。
从仪器设备材料看，溶血性链球菌检验缺少相关试剂及仪器。
溶血性链球菌的检验
细菌培养与鉴定
1
将样本接种于选择性培养基上进行培养，如血 平板、巧克力平板等。
2
根据菌落形态、革兰染色、氧化酶试验等指标 对细菌进行初步鉴定。
3
采用生化试验、血清学试验等方法对细菌进行 进一步鉴定。
血清学试验与结果分析
采用抗链球菌激酶(ASO)等血清学试验检测患者血清中的 抗体水平。
根据抗体滴度及临床诊断标准，对溶血性链球菌感染进行 诊断和分型。
评估疾病风险
通过对溶血性链球菌的检验，可评估疾病的风险程度， 从而为预防和控制疾病提供依据。
指导公共卫生措施
通过对溶血性链球菌的检验，可指导公共卫生措施的实 施，如开展宣传教育、加强消毒隔离等，以预防和控制 疾病的传播。
05
溶血性链球菌检验的未来发展趋势
检测技术的改进与创新
分子生物学技术
随着分子生物学技术的不断发展，基于PCR、基因测序等技术的检测方法将更加灵敏、特 异，有助于更准确地诊断溶血性链球菌感染。
2023
溶血性链球菌的检验
目录
• 溶血性链球菌简介 • 溶血性链球菌的检验方法 • 溶血性链球菌的检验流程 • 溶血性链球菌检验的临床意义 • 溶血性链球菌检验的未来发展趋势
01
溶血性链球菌简介
溶血性链球菌的特性
1 2
革兰氏阳性
溶血性链球菌是一种革兰氏阳性的细菌，这意 味着它具有细胞壁，并且可以被某些抗生素所 杀死。
制定统一的检测方法标准和操作流程，提高不同实验室之间的可比性和结果的准 确性。
规范化
规范实验室操作流程，确保检测结果的可靠性。建立规范的质控体系，对实验室 的检测结果进行严格的质量控制。
检测结果的多参数综合分析与应用
多参数综合分析
溶血性链球菌的检验
溶血性链球菌在自然界分布较广，可存在于水、空气、 尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中，按其在血平板 上溶血能力分类，可分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血 性链球菌、丙型溶血性链球菌和亚甲型溶血性链球菌。 与人类疾病有关的大多属于乙型溶血性链球菌，其血清 型90%属于A族链球菌，常可引起皮肤和皮下组织的化 脓性炎症及呼吸道感染，还可通过食品引起猩红热、流 行性咽炎的爆发性流行。因此，检查食品是否有溶血性 链球菌具有现实意义。
4.链激酶试验
致病性乙型溶血性链球菌能产生激酶素（即溶纤维蛋白酶），此酶能激 活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋 白。
吸取草酸钾血浆0.2ml，加0.8ml灭菌生理盐水，混匀，再加入18h24h，36度培养的链球菌培养物0.5ml及0.25%氯化钙0.25ml，振荡摇 匀，置于36度水浴中10min，血浆混合物自行凝固，然后观察凝固块重 新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h不溶解即为阴性。
食品学院
3、透明质酸酶：又称扩散因子，能分解细胞间质的透明 质酸，故能增加细菌的侵袭力，使病菌易在组织中扩散。 4、链激酶：又称链球菌纤维蛋白溶酶，能使血液中纤维 蛋白酶原变成纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织中的扩散 作用，该酶耐热，100℃50分钟仍可保持活性。 5、脂磷壁酸（LTA）：与细菌粘附于宿主细胞表面有关， 大多数LAT位于细胞膜和肽聚糖之间，通过肽聚糖孔伸展 至细菌细胞表面，人类口腔粘膜和皮肤上皮细胞、血细胞 等细胞膜上均有LAT的结合位点。
食品学院
5.杆菌肽敏感试验 挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子 夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上， 于36度培养18-24h，如有抑菌带出现即为阳性，同时用 已知阳性菌株作为对照。
溶血性链球菌检验
洗至冲下的水呈无色为止。
• 乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，
用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流
出的乙醇不出现紫色为止，大约需要20 ~
30s。立即用自来水冲洗乙醇约30s，用吸
水纸吸干水分。
• 番红或沙黄复染：在涂片薄膜上滴加番红1
滴，染色1 ~ 2 min。
• 水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。
菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀并涂
成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；涂片必
须均匀。
• 火焰固定：载玻片通过火焰1 ~ 2 次固定，
不可过热，以载玻片不烫手背为宜。
• 结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜
上加结晶紫1滴，染色1min。
• 水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。
• 碘液媒染：加碘液媒染1min，然后用水冲
谢谢！
溶血性链球菌检验
革兰氏阳性球菌
检样处理
增菌
培养
检样处理
固体样品：25g（电子天平）
稀释瓶或具 液体样品：25mL（25mL吸量管） 塞广口瓶
+
225mL生理盐水（量筒），混匀。
注意： 液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至 7.0。
增菌
取上述混合液5mL（吸量管） 50mL葡萄糖肉浸液肉汤 培养（于36℃±1℃培养24h）
革兰氏 染色
在无菌室中固定， 到微生物实训室染 色
典型菌落 （同一菌落）
血平板涂布 贴杆菌肽试纸 （2~3片）
于36℃±1℃ 培养18~24h
革兰氏染色步骤：
涂片—— 火焰固定——结
晶紫初染—— 水洗—— 碘液媒
染—— 乙醇脱色—— 水洗——
吸干—— 番红或沙黄复染—— 水洗—— 干燥—— 镜检
溶血性链球菌的检验
04
提高个人卫生意识
保持室内空气流通，勤洗手、洗脸、漱口，避免拥挤场所，减少聚集活动。
健康生活习惯
合理安排作息时间，保证充足睡眠，积极参加体育锻炼，增强体质。
溶血性链球菌的检验方法包括细菌培养、抗原检 测和抗体检测等，其中细菌培养是常用的方法之 一。
抗体检测主要用于检测患者血清中的抗体，以协 助判断疾病的活动性和抗体的来源。
研究展望
进一步研究和开发新的检测试剂和方法，提高溶血性 链球菌的检测准确性和灵敏度。
加强溶血性链球菌流行病学研究，为制定有效的预防 和控制措施提供依据。
治疗肾小球肾炎主要采用免疫抑 制剂治疗和抗生素治疗等方法， 同时辅助以对症治疗和一般治疗 等方法，如控制饮食、限制运动 等。
脑膜炎
脑膜炎是溶血性链球菌感染引起的一种中枢神经系统感染，患者常出现 发热、头痛、呕吐等症状，严重的情况下可能会出现惊厥、意识障碍等 。
脑膜炎分为急性脑膜炎和慢性脑膜炎两种，急性脑膜炎通常分为化脓性 脑膜炎和非化脓性脑膜炎两种，慢性脑膜炎则通常指结核性脑膜炎。
不同检测方法的灵敏度和特异 性存在差异，需结合临床情况
进行选择。
对于免疫学检测和分子生物学 检测，需要使用特定的仪器和
试剂盒，操作较为复杂。
03
溶血性链球菌感染疾病
急性咽炎
急性咽炎是溶血性链球菌感染最为常见的疾病之一，患者常出现喉咙疼痛、声音 嘶哑、咳嗽等症状。
急性咽炎分为急性和慢性两种，急性溶血性链球菌性咽炎通常表现为喉咙疼痛、 发热、头痛、咳嗽等症状，严重的情况下可能会出现呼吸困难。
常见致病菌检验—溶血性链球菌检验
三、微生物检验
（二）检验操作要点 6、生化鉴定： （2）杆菌肽敏感试验
将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划 线处贴附杆菌肽纸片，37℃18h，出现抑菌带 为阳性，据此可推测为乙型溶血性链球菌。
三、微生物检验
（二）检验操作要点 7、报告： 根据培养后的形态，菌落特征及生化试验可报 告：有乙型溶血性链球菌生长。
2）链激酶（streptokinase；SK）
3） 链道酶（streptodornase；SD）
2. 所致疾病
淋巴管炎， 化脓性感染 蜂窝组织炎，
扁桃体炎等
毒素性疾病 猩红热
超敏反应性疾病 风湿热 急性肾小球肾炎
痈
链球菌感染
金黄色葡萄球菌感染
Ⅱ型超敏反应
溶血性链球菌
肾小球基底膜 共同抗原 急性肾小球肾炎
（2）外毒素类 1）致热外毒素
• 红疹毒素，猩红热毒素 • A群链球菌溶原菌菌株产生 • 引起猩红热
2） 链球菌溶血素
• SLO：对O2敏感。测定SLO抗体含量，可作为链球菌新近感染指 标之一或风湿热及其活动性的辅助诊断
• SLS：对O2稳定，β溶血环
（3）侵袭性酶 1） 透明质酸酶
• 扩散因子 • 分解细胞间质的透明质酸→组织中扩散
1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化 脓性炎症时造成食品的污染；
二、 生物学特性
2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺 炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性 炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以 及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风 湿热、肾小球肾炎等变态反应。
病原学特性
溶血性链球菌的检验
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 袭性酶有关，主要有以下几种： 1、溶血素 2、致热外毒素 3、透明质酸酶 4、链激酶 5、链道酶 6、杀白细胞素 抵抗力： 60℃30min即被杀死，对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、 磺胺均敏感。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生 化鉴定。 2、生化鉴定 （1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水， 混匀，再加入链球菌18-24h36±1℃肉浸液肉汤培养 物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于 36±1℃水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块 重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不 溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已 知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。
溶血性链球菌检验
二、流行病学与致病性
溶血性链球菌在自然界中分布较广，存 在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物 的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、 空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染， 被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对 人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化 脓性感染部位常成为食品污染的污染源。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
第一天 样品处理和增菌培养
第一天前半天 规格名称 预先准备并灭菌的器材 数量
1、500mL广口瓶 2、13×100mm试管 3、10mL移液管 4、5mL移液管 5、1mL移液管 6、直径为90mm平皿 7、250mL量筒
链球菌 含乙型溶血性链球菌的鉴定内容[荟萃精制]
![链球菌 含乙型溶血性链球菌的鉴定内容[荟萃精制]](https://img.taocdn.com/s3/m/cd64943bb84ae45c3b358cc2.png)
行业学习
3
链球菌电镜图
行业学习
4
链球菌革兰染色
行业学习
5
培养特点－－生长条件
营养要求高，在含血液、血清培养基上 生长良好 需氧、兼性厌氧 有些链球菌可在10℃、45 ℃生长
行业学习
6
培养特点－－生长现象
液体培养基：呈沉淀生长现象
血平板：灰白色、细小、圆形、光滑的、 有不同溶血现象的菌落
分类
菌落特征
菌落特征：
甲型链球菌：针尖样菌落、周围有草绿色溶血 环；
乙型链球菌：灰白色小菌落、周围有透明溶血 环；
丙型链球菌：灰白色菌落、无溶血环
肺炎链球菌：灰白色扁瓶小菌落、周围有草绿
色溶血环，培养较久形成脐窝样菌落
行业学习
12
乙型溶血性链球菌的鉴定
β-溶血环 包括A、B、C、D、F、G群 C群可采用血清学鉴定 其它群采用生化反应或其他鉴定试验
甲型（α）溶血性链 灰色、针尖状菌落、周围有草绿
球菌
色溶血环（ α溶血）
乙型（β）溶血性链 灰白色、细小菌落、周围有宽大
球菌
透明溶血环（ β溶血 ）
丙型（γ）链球菌 灰白色小菌落、无溶血环
行业学习
7
链球菌在血平板上菌落特征
丙链
甲链
乙链
行业学习
8
分类－－根据溶血现象分类
甲型链球菌：属条件致病菌 乙型溶血性链球菌：致病力强 丙型链球菌：无致病力
链球菌
分布：自然界、人和动物肠道、健康人 鼻咽部 所致疾病：致病链球菌引起各种化脓性 炎症、猩红热、风湿热等疾病。
行业学习
1
生物学性状
形态染色 培养特点 生化反应 抗原构造 分类 抵抗力
4789.11溶血性链球菌
本标准与GB/T 4789.5-2003相比主要变化
—— 删除了以无菌生理盐水稀释样品的步骤； —— 增菌培养基以改良胰蛋白胨大豆肉汤代替了葡 萄糖肉浸液肉汤和匹克氏肉汤； —— 分离培养基以哥伦比亚CNA血琼脂和哥伦比 亚血琼脂代替了血琼脂平板； —— 完善了操作步骤； —— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆； —— 增加了规范性附录A。
结果与报告
综合以上试验结果，报告每25 g（mL）检 样中检出或未检出β型溶血性链球菌
本标准所代替的历次版本发布情况为： GB 4789.11－1984、 GB/T 4789.11－1994、 GB/T 4789.11－2003。
溶血性链球菌检验程序
样品25g（或mL）+ 225 mL mTSB 36 ℃±1 ℃ 18 h ~ 24 h
划线接种哥伦比亚CNA血琼脂平板 36 ℃±1 ℃
3.3 触酶试验 挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3% 过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血 性链球菌触酶为阴性。 3.4 链激酶试验 吸取草酸钾血浆0.2 mL于0.8 mL灭菌生理盐水中混 匀，再加入经36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h的可疑菌 的TSB培养液0.5 mL及0.25%氯化钙溶液0.25 mL， 振荡摇匀，置于36 ℃±1 ℃水浴中10 min，血浆混 合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不 流动）。继续36 ℃±1 ℃培养24 h，凝固块重新完 全溶解为阳性，不溶解为阴性。β型溶血性链球菌 为阳性。
18 h～24 h ，平板和TSB 36 ℃±1 ℃
溶血性链球菌检验操作规程
溶血性链球菌检验操作规程溶血性链球菌（英文简称：S. pyogenes）是一种常见的革兰氏阳性球菌，通常引起咽峡炎、皮肤感染和淋巴结炎等疾病。
准确的检测和鉴定溶血性链球菌对于诊断和治疗这些疾病至关重要。
下面是关于溶血性链球菌检验的操作规程。
一、检验前准备1. 检验人员需佩戴好防护用具，如实验手套、隔离眼镜和口罩。
2. 准备好所需的检验试剂和材料，包括培养基、琼脂培养基、草莓牛血琼脂、货架刀等。
3. 仔细核对标本的标签和信息，确保和病人信息一致。
二、标本采集和处理1. 从患者口咽部或其他可疑感染部位采集标本，如咽拭子或分泌物样本。
2. 将标本稀释或切碎，使其与培养基充分混合。
3. 使用棉签或货架刀，将混合好的标本涂抹在琼脂培养基上。
三、培养和鉴定1. 将含有标本的琼脂培养基置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
2. 观察培养基上是否有溶血环形形成，表明有溶血性链球菌的存在。
3. 将溶血环形的菌落或单个菌落划取到草莓牛血琼脂上。
4. 再次置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
5. 观察草莓牛血琼脂上生长的菌落形态和特征。
6. 进一步进行革兰染色，观察菌形和细胞特征。
四、药敏试验对已鉴定的溶血性链球菌，可以进行药敏试验以确定对何种抗生素敏感。
1. 用细菌悬浮液调整到0.5～0.6麦克法尔兰（McFarland）标准。
2. 使用含有不同抗生素的纸片置于琼脂平板上。
3. 用择菌钳将纸片粘贴于琼脂平板上。
4. 将准备的溶血性链球菌悬液均匀涂抹在琼脂平板上。
5. 将琼脂平板置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
6. 观察菌落的生长和抗生素纸片周围的抑制圈，根据直径大小判断菌株的抗药性。
五、结果判定和记录根据溶血环形、菌落形态、革兰染色和药敏试验的结果，判定溶血性链球菌的存在和鉴定结果，并将结果准确记录在检验报告中。
操作规程中的注意事项：1. 检验过程中应严格遵守无菌操作，避免交叉感染。
2. 确保检验室设备和培养基的质量，以及培养温度和时间的准确控制。
溶血性链球菌检验
培养特性 ---血平板
❖ 血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明， 表面光滑，有乳光，直径约0.5～0.75 mm， 为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌 周围有2～4 mm界限分明、无色透明的溶 血圈
溶血性链球菌检验
分布
❖ 溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于 水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口 腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气 飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污 染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类 进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性 感染部位常成为食品污染的污染源。引起化 脓性感染、中毒性感染、超敏反应性疾病
分类
根据链球菌溶血现象
❖ 甲型()溶血性链球菌：菌落周围有1-2mm宽的草绿色溶血 环(甲型溶血),溶血环中的红细胞并未完全溶解，多为条件致 病菌
❖ 乙型()溶血性链球菌：菌落周围形成一个2-4mm宽、界限 分明、完全透明的无色溶血环 (乙型溶血),溶血环中的红细
杆菌肽敏感试验
❖ 取乙型溶血性菌落的浓菌液涂布于血平板上， 用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽 纸片置于上述平板上，36℃培养18-24h，如 有抑菌圈出现即为阳性。用已知的阳性菌株 做对照
结果报告
在 25g(ml）样品中检出或未检出溶血性 链球菌
谢谢
生化反应
❖ 分解葡萄糖，产酸不产气。对乳糖、甘露醇、 水杨苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七叶苷的 分解能力因不同菌株而异
❖ 一般不分解菊糖，不被胆汁溶解 ❖ 触酶阴性(与葡萄球菌相区别)
毒素及侵袭性酶
❖ 链球菌溶血素 ❖ 致热外毒素：曾称红疹毒素或猩红热毒素
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【GB/T 4789.11—1994】
食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验
1 主题内容与适用范围
本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。
2 引用标准
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
3 设备和材料
3.1 温箱：36±1℃。
3.2 水浴：36±1℃。
3.3 显微镜。
3.4 离心机。
3.5 试管架。
3.6 灭菌平皿。
3.7 灭菌小试管。
3.8 载玻片。
3.9 灭菌吸管：1mL、10mL。
3.10 灭菌镊子。
3.11 均质器。
3.12 酒精灯。
3.13 接种环。
4 培养基和试剂
4.1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4.2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定。
4.3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28中4.62规定。
4.4 血琼脂平板：按GB 4789.28中4.6规定。
4.5 人血浆。
4.6 0.25%氯化钙。
4.7 灭菌生理盐水。
4.8 杆菌肽药敏纸片(含0.04单位)。
5 检验程序
（图略）
6 操作步骤
6.1 样品处理
称取25g固体检样；称取25mL液体检样，加入225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6.2 一般培养
将上述混悬液吸取5mL，接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种
于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36±1℃培养24h，接种血平板，置36±1℃培养24h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6.3 形态与染色
本菌呈球形或卵圆形，直径0.5～1μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者20～30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。
6.4 培养特性
该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中生长较好。
溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。
血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5～0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2～4mm界限分明、无色透明的溶血圈。
6.5 链激酶试验
致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶(即溶纤维蛋白酶)，此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。
吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入18～
24h36±1℃培养的链球菌培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL(如氯化钙已潮解，可适当加大至0.3%～0.35%)，振荡摇匀，置于36±1℃水浴中10min，血浆混合物自行凝固(凝固程度至试管倒置，内容物不流动)。
然后观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。
草酸钾人血浆配制：草酸钾0.01g放入灭菌小试管中，再加入5mL人血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。
6.6 杆菌肤敏感试验
挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于36±1℃培养18～24h，如有抑菌带出现即为阳性。
同时用已知阳性菌株作为对照。