沉淀蛋白质的常用方法
蛋白沉淀方法
蛋白沉淀方法蛋白沉淀是蛋白质分离与纯化的一种常用方法，通过加入化学物质使目标蛋白质与其它蛋白质或者杂质分离，并沉淀于溶液底部或者浮于溶液表面。
本文将从蛋白沉淀的原理、化学物质的选择、实验操作、蛋白沉淀后处理等方面进行介绍。
一、蛋白沉淀的原理蛋白质的沉淀是基于化学物质与蛋白质之间的物理或者化学相互作用，包括：1. 盐析沉淀在高浓度盐溶液中，蛋白质远离其同样带电的水分子，而形成大分子团聚，从而沉淀。
在酸性环境下，大多数蛋白质通过质子化而失去电荷，降低了疏水性，从而沉淀。
在碱性环境下，蛋白质通常解离出一个氨基酸残基的羧基，从而带有负电荷，易于被阳离子与之形成沉淀。
4. 有机溶剂沉淀如乙醇、丙酮、甲醇等，可与蛋白质形成复合物，使其聚合而沉淀。
以上几种原理可单独或结合使用，根据情况进行选择。
二、化学物质的选择常用的盐类有氯化铵、硫酸铵、硫酸钠等。
浓度通常在10-60%之间，具体浓度根据具体实验条件进行选择。
2. 酸类常用的酸包括二元酸、有机酸等。
浓度为0.1-1M之间，酸性度通常为pH 4-6。
3. 碱类常用的有机溶剂包括乙醇、丙酮、甲醇等。
浓度通常为50-90%之间，根据实验要求进行选择。
三、实验操作1. 样品制备待分离的蛋白质必须经过预处理，通常包括离心、裂解、过滤等步骤。
裂解方式可以使用生理盐水、水、甲醇等，使蛋白质从细胞中释放出来。
过滤可以使用滤纸、滤膜、分子筛等方式，去除杂质。
2. 化学物质的加入将选择好的化学物质加入样品中，此时需注意化学物质前后也要进行科学操作，如一些电解质类物质可能带有杂质，需要先进行过滤；有机溶剂可能会引起蛋白质的变性，需加入适量的缓冲液进行保护。
将混合物小心地混合均匀后，离心使混合物分层，此时目标蛋白沉在沉淀层，上清液中还有一些蛋白，需要将其过滤或沉淀以去除杂质。
4. 纯化将沉淀分解，得到的产物通过离心、层析等步骤进行纯化，最终得到目标蛋白。
沉淀后需要进行洗涤，以去除杂质，保证目标蛋白的纯度和酶效。
四种蛋白纯化方法
四种蛋白纯化方法1. 溶液沉淀法溶液沉淀法是一种常用的蛋白纯化方法，适用于从复杂的混合物中分离目标蛋白。
该方法基于蛋白质在不同条件下的溶解度差异，通过添加盐类或有机溶剂来诱导蛋白质的沉淀。
步骤：1.样品制备：将待纯化的样品经过初步处理，如细胞破碎、组织切割等，得到含有目标蛋白的混合物。
2.溶解度测试：在不同条件下（如pH、温度、盐浓度等）测试目标蛋白质的溶解度，并确定最适合其沉淀的条件。
3.沉淀：根据前一步骤确定的最佳条件，向样品中添加盐类或有机溶剂，使目标蛋白质发生沉淀。
可以通过离心将沉淀物与上清液分离。
4.溶解：将沉淀物重新溶解在适当的缓冲液中，得到纯化后的目标蛋白。
优点：•简单易行，不需要复杂的设备和操作。
•适用于从复杂混合物中纯化目标蛋白。
缺点：•可能会导致非特异性沉淀，使得纯化后的蛋白含有杂质。
•沉淀方法对蛋白质的溶解度要求较高，不适用于所有蛋白。
2. 凝胶过滤法凝胶过滤法是一种基于分子大小的蛋白纯化方法，适用于分离不同分子量范围的蛋白。
该方法利用孔径可调的凝胶柱或膜来分离目标蛋白和其他小分子。
步骤：1.样品制备：将待纯化的样品经过初步处理，如细胞破碎、组织切割等，得到含有目标蛋白的混合物。
2.凝胶柱选择：根据目标蛋白的分子量范围选择合适孔径的凝胶柱或膜。
3.样品加载：将样品加载到凝胶柱上，并使用缓冲液进行洗涤，以去除小分子。
4.蛋白洗脱：通过改变缓冲液的组成或pH值，使目标蛋白从凝胶柱上洗脱下来。
5.收集纯化蛋白：将洗脱得到的蛋白收集起来，即可得到纯化后的目标蛋白。
优点：•可以根据分子量范围选择合适的凝胶柱，实现高效分离。
•纯化后的蛋白质纯度较高。
缺点：•操作相对复杂，需要一定的专业知识和技术。
•只适用于分子量差异较大的目标蛋白。
3. 亲和层析法亲和层析法是一种基于生物分子间特异性相互作用的蛋白纯化方法，适用于富含目标蛋白的混合物。
该方法利用目标蛋白与特定配体之间的亲和力进行分离和纯化。
蛋白质沉淀的方法
蛋白质沉淀的方法
蛋白质沉淀是一种通过加入沉淀剂使溶液中的蛋白质沉淀下来的方法，以下是几种常用的蛋白质沉淀方法：
1. 盐析法：通过加入高浓度的盐溶液，如氯化铵或氯化铵硫酸铵混合溶液，使溶液中的蛋白质沉淀下来。
由于盐浓度的变化会改变蛋白质的溶解度，从而使蛋白质沉淀出来。
2. 酸沉淀法：通过加入弱酸，如醋酸或盐酸，使溶液中的蛋白质变性，从而导致蛋白质沉淀。
酸沉淀法常用于从乳液、血清或细胞裂解液中提取蛋白质。
3. 醇沉淀法：通过加入有机溶剂，如乙醇或异丙醇，使溶液中蛋白质与水产生排斥作用，从而使蛋白质沉淀下来。
醇沉淀法常用于从水溶性蛋白质中提取。
4. 聚合物沉淀法：通过加入聚合物，如聚乙二醇，在溶液中形成络合物，从而使蛋白质沉淀。
聚合物沉淀法常用于从复杂的样品中分离蛋白质。
5. 冷冻沉淀法：通过将溶液在低温下冷冻，使蛋白质变性和聚集，然后离心沉淀。
冷冻沉淀法常用于从细胞裂解液或组织提取物中分离蛋白质。
这些方法可以根据实验需求和样品类型进行选择和优化，以获得最佳的蛋白质沉淀效果。
蛋白质沉淀方法及特点。
蛋白质沉淀方法及特点。
盐析沉淀蛋白质的原理是：降低了蛋白质的溶解度，从而会使得蛋白质凝聚，最终从
溶液中析出。
蛋白沉淀法其实就是实验室进行一种毒物分析的过程中而对生物的样品进行
预前处理的一种比较常见而且常用的方式。
盐析是指在蛋白质水溶液中加入中性盐，随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。
中性盐是强电解质，溶解度又大，在蛋白质溶液中，一方面与蛋白质争夺水分子，破坏蛋
白质胶体颗粒表面的水膜；
另一方面又大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而并使水中蛋白质颗粒蓄积而结晶划出。
常用的中性盐存有硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等，但以硫酸铵为最少。
获得的蛋白质通常更
添活，一定条件下又可以再次熔化，故这种结晶蛋白质的方法在拆分、铀，储藏、提纯蛋
白质的工作中应用领域甚广。
蛋白质沉淀
蛋白质沉淀(Protein Precipitation)浓缩方法原理及详细解析在生化制备中，沉淀主要用于浓缩目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。
在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂：1．盐析法多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。
2．有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。
3．等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。
但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。
4．非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子。
5．生成盐复合物沉淀用于多种化合物，特别是小分子物质的沉淀。
6．热变性及酸碱变性沉淀法用于选择性的除去某些不耐热及在一定PH值下易变性的杂蛋白。
第一节盐析法一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。
在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。
盐析法分为两类，第一类叫Ks分段盐析法，在一定PH和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液；第二种叫Kb分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。
一．影响盐析的若干因素1．蛋白质浓度高浓度蛋白溶液可以节约盐的用量，但许多蛋白质的b 和Ks常数十分接近，若蛋白浓度过高，会发生严重的共沉淀作用；在低浓度蛋白质溶液中盐析，所用的盐量较多，而共沉淀作用比较少，因此需要在两者之间进行适当选择。
用于分步分离提纯时，宁可选择稀一些的蛋白质溶液，多加一点中性盐，使共沉淀作用减至最低限度。
一般认为2.5%-3.0%的蛋白质浓度比较适中。
2．离子强度和类型一般说来，离子强度越大，蛋白质的溶解度越低。
在进行分离的时候，一般从低离子强度到高离子强度顺次进行。
每一组分被盐析出来后，经过过滤或冷冻离心收集，再在溶液中逐渐提高中性盐的饱和度，使另一种蛋白质组分盐析出来。
蛋白质的沉淀的方法
蛋白质的沉淀的方法
1. 酸性沉淀法：在酸性条件下，将蛋白质和特定的金属离子（如铜离子）配合形成不溶性的复合物沉淀。
2. 盐析法：利用不同浓度的盐解离水合壳，使蛋白质沉淀。
3. 醇沉淀法：在高浓度的乙醇或异丙醇中加入蛋白质，使其沉淀。
4. 离子交换层析法：利用离子交换树脂对蛋白质进行分离纯化，蛋白质在不同离子浓度下与树脂发生离子交换，使蛋白质从树脂上洗脱。
5. 大小分离法：根据蛋白质分子的大小、形态、电荷等特性，利用凝胶过滤、离心等方法进行分离。
6. 两亲性层析法：利用特殊的分子筛材料（如聚合物、聚丙烯酰胺凝胶）对蛋白质进行分离，以蛋白质分子的亲水性和疏水性的不同性质进行分离。
硫酸铵盐析法沉淀蛋白质
硫酸铵盐析法沉淀蛋白质
硫酸铵盐析法是一种分离纯化蛋白质的常用方法，它是利用硫酸铵的沉淀能力将蛋白质从溶液中分离出来。
本文将详细介绍硫酸铵盐析法的原理、步骤和注意事项。
一、硫酸铵盐析法的原理
硫酸铵是一种常用的沉淀剂，它在水中溶解度随温度的升高而增加。
利用这个特性，可以通过逐渐加入硫酸铵，使蛋白质逐渐从水溶液转移到硫酸铵溶液中，最终沉淀出来。
硫酸铵盐析法的原理是蛋白质和硫酸铵形成复合物，使溶液中蛋白质的溶解度降低，从而沉淀出来。
二、硫酸铵盐析法的步骤
1.制备蛋白质溶液：将需要分离纯化的蛋白质加入缓冲液中，使其溶解。
2.加入硫酸铵：逐渐加入一定比例的硫酸铵至蛋白质溶液中，搅拌均匀。
3.离心：将混合液离心，使蛋白质沉淀。
4.洗涤：用冷硫酸铵水洗涤沉淀，去除杂质。
5.再溶解：用适量的缓冲液再次溶解沉淀的蛋白质。
三、硫酸铵盐析法的注意事项
1.硫酸铵的加入应逐渐进行，以免过饱和而导致蛋白质不完全沉淀。
2.离心速度和时间应根据所用离心机的不同而确定。
3.洗涤次数应足够多，以免残留的硫酸铵对蛋白质产生影响。
4.蛋白质的再溶解要充分，以保证蛋白质的活性和稳定性。
5.硫酸铵盐析法不能用于分离具有相似结构的蛋白质，因为它们的沉淀能力相似。
四、总结
硫酸铵盐析法是一种简单有效的蛋白质分离方法，适用于大多数蛋白质的纯化。
它的优点是操作简单，成本低廉，同时可以同时去除杂质和离子。
但是，硫酸铵盐析法也有其局限性，比如不能分离具有相似结构的蛋白质。
因此，在选择分离方法时，应根据实验要求和蛋白质的特性来确定最适合的方法。
13种蛋白质的浓缩方法及应用过程
13种蛋白质的浓缩方法及应用过程浓缩蛋白质是生物化学和生物工程领域中的常见实验操作，它可以分离和浓缩蛋白质的目标分子，提高下游实验的灵敏度和检测效果。
下面将介绍13种常见的蛋白质浓缩方法及其应用过程。
1.直接加浓缩液法：这种方法是将蛋白质溶液直接加入浓缩液中，在高浓度的浓缩液中使蛋白质沉淀，然后通过离心将上清液倒掉，留下蛋白质沉淀。
该方法适用于蛋白质浓度较低、浓缩液和蛋白质之间无明显相互作用的情况。
2.乙醇沉淀法：将蛋白质溶液中加入适量的冷乙醇，使蛋白质沉淀，然后通过离心将上清液倒掉，留下蛋白质沉淀。
该方法适用于大多数蛋白质的浓缩，但对于糖蛋白等极性蛋白质效果较差。
3.磷酸铵沉淀法：将蛋白质溶液中加入磷酸铵，并通过逐渐增加磷酸铵浓度的方式使蛋白质沉淀。
然后通过离心将上清液倒掉，留下蛋白质沉淀。
该方法适用于对蛋白质溶液中的杂质进行除去和蛋白质浓缩。
4.透析法：将蛋白质溶液置于透析袋或膜中，溶液中的小分子物质可以通过透析膜，而蛋白质则被滞留在透析袋或膜中。
通过不断更换新的缓冲液，透析蛋白质的杂质，达到蛋白质的浓缩效果。
5.正交两步纯化法：通过两步纯化的方法，即先使用亲和层析等手段分离目标蛋白质，再使用乙醇沉淀等方法进行浓缩。
该方法可获得高纯度和高浓度的目标蛋白质。
6.冰醋酸沉淀法：将蛋白质溶液中加入适量的冰醋酸，使蛋白质沉淀，然后通过离心将上清液倒掉，留下蛋白质沉淀。
该方法适用于大多数蛋白质的浓缩，但对于糖蛋白等极性蛋白质效果较差。
7.膜超滤法：利用膜的过滤作用，将蛋白质溶液在压力作用下通过膜，小分子物质通过膜孔，而蛋白质则被滞留在膜上，从而实现蛋白质的浓缩。
8.离心滤膜浓缩法：将蛋白质溶液加入装有滤膜的离心管中，通过离心作用剥离溶液中的液相，使蛋白质滞留在滤膜上。
最后通过逆离心将蛋白质从滤膜上洗脱下来，达到浓缩的目的。
9.聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩法：将蛋白质溶液经过聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后将蛋白质从凝胶上切割下来，再使用电泳缓冲液洗脱蛋白质。
peg沉淀法原理
peg沉淀法原理引言PEG（Polyethylene Glycol）沉淀法是一种常用的蛋白质沉淀方法，被广泛应用于生物化学、分子生物学和生物药物研究领域。
该方法通过添加PEG溶液使蛋白质发生沉淀，并利用PEG与蛋白质之间的作用力实现蛋白质的分离和纯化。
PEG沉淀法的原理PEG沉淀法利用PEG与蛋白质之间的作用力实现沉淀，其原理主要涉及PEG与水相之间的相互作用和PEG与蛋白质之间的相互作用。
PEG与水相之间的相互作用PEG是一种在水中可溶解的高分子化合物，它的溶解度随着分子量的增加而减小。
当PEG溶液浓度较高时，PEG之间存在分子间的相互作用力，这种作用力使得PEG 分子形成团簇，从而促进蛋白质的沉淀。
PEG与蛋白质之间的相互作用PEG可以与蛋白质形成氢键、疏水作用和静电作用等相互作用。
这些相互作用会改变蛋白质的溶解性，使其发生沉淀。
具体来说，PEG与蛋白质之间的相互作用可以通过以下几种方式实现：1.氢键作用：PEG的羟基与蛋白质分子上的氨基、羧基等官能团之间可以形成氢键。
这种氢键作用可以改变蛋白质的构象和溶解度，从而促使蛋白质发生沉淀。
2.疏水作用：PEG分子具有疏水性，可以与蛋白质中的疏水区域相互作用。
这种疏水作用会改变蛋白质的溶解度，使其发生沉淀。
3.静电作用：PEG分子上的氧原子带有负电荷，可以与蛋白质分子上的正电荷相互作用。
这种静电作用可以改变蛋白质的溶解度，从而促使蛋白质发生沉淀。
综上所述，PEG沉淀法利用PEG与水相之间的相互作用和PEG与蛋白质之间的相互作用，实现蛋白质的分离和纯化。
PEG沉淀法的步骤PEG沉淀法的具体操作步骤主要包括样品制备、PEG溶液制备、混合沉淀和沉淀收集等。
步骤一：样品制备首先，需要将待沉淀的蛋白质样品制备好。
通常情况下，样品是一种蛋白质提取物或纯化后的蛋白质溶液。
步骤二：PEG溶液制备其次，需要制备含有一定浓度的PEG溶液。
PEG的浓度通常在10%至30%之间，具体浓度的选择需要根据待沉淀蛋白质的特性和实验要求而定。
硫酸铵梯度沉淀蛋白质的方法和原理
硫酸铵梯度沉淀蛋白质的方法和原理硫酸铵梯度沉淀法是一种常用的分离纯化蛋白质的方法，它基于蛋白质在不同浓度的硫酸铵溶液中的溶解度不同的原理，通过逐渐加入不同浓度的硫酸铵溶液，使蛋白质逐渐沉淀并分离出来。
该方法可以有效地去除杂质、富集目标蛋白质，并且操作简便、成本较低，因此被广泛应用于生物化学、分子生物学等领域。
方法硫酸铵梯度沉淀法的基本步骤如下：1. 制备样品：样品可以是细胞裂解液、组织提取液或纯化后的蛋白质溶液。
如果样品含有大量的沉淀物或杂质，需要先进行初步的清洁和富集，例如离心、过滤等。
2. 制备硫酸铵梯度：将一定量的硫酸铵加入一定量的水中，得到一定浓度的硫酸铵溶液。
然后逐渐加入更高浓度的硫酸铵溶液，直到达到目标浓度。
通常可以按照20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的浓度逐级加入。
3. 溶解样品：将样品加入第一级硫酸铵溶液中，充分溶解，并搅拌均匀。
4. 沉淀蛋白质：将含有样品的硫酸铵溶液离心，使蛋白质沉淀在离心管底部。
5. 收集蛋白质：将离心管中的上清液弃掉，保留蛋白质沉淀。
然后将蛋白质沉淀溶解在一定量的缓冲液中，得到纯化后的蛋白质溶液。
原理硫酸铵梯度沉淀法的原理基于蛋白质在不同浓度的硫酸铵溶液中的溶解度不同。
一般来说，蛋白质在低浓度的硫酸铵溶液中溶解度较高，而在高浓度的硫酸铵溶液中溶解度较低。
因此，在逐渐加入不同浓度的硫酸铵溶液时，蛋白质会逐渐沉淀并分离出来。
此外，硫酸铵还可以通过改变蛋白质的电荷性质，使其与其他杂质或蛋白质分离。
优点和缺点硫酸铵梯度沉淀法具有以下优点：1. 操作简便：硫酸铵梯度沉淀法的操作步骤简单，不需要复杂的设备和技术。
2. 成本低廉：硫酸铵是一种常用的化学试剂，价格较为低廉，因此硫酸铵梯度沉淀法的成本相对较低。
3. 富集效果好：硫酸铵梯度沉淀法可以有效地富集目标蛋白质，并去除大部分的杂质和其他蛋白质。
然而，硫酸铵梯度沉淀法也存在一些缺点：1. 不适用于所有蛋白质：不同的蛋白质在不同浓度的硫酸铵溶液中的溶解度不同，有些蛋白质在硫酸铵溶液中容易发生聚集和凝固，因此不适合用硫酸铵梯度沉淀法富集。
沉淀蛋白质的方法和原理
沉淀蛋白质的方法和原理蛋白质啊，那可是生命活动中极为重要的大分子呢！就好像是建筑大厦的基石一样重要。
要想沉淀蛋白质，方法还不少哩！比如说盐析法，就好像是给蛋白质来了一场特别的“洗礼”。
通过加入适量的盐，比如硫酸铵之类的，就可以让蛋白质乖乖地沉淀下来。
这就好比在一个热闹的集市上，突然来了一场细雨，有些人就会找地方躲起来一样，蛋白质在盐的作用下，也会聚集起来沉淀下去。
你说神奇不神奇？还有有机溶剂沉淀法，这就像是给蛋白质喝了一杯“迷魂汤”。
一些有机溶剂，比如乙醇、丙酮等，能让蛋白质改变原来的状态，然后沉淀出来。
就好像原本活蹦乱跳的小孩子，突然被什么吸引住了注意力，变得安静下来一样。
另外，还有等电点沉淀法呢。
每个蛋白质都有自己的等电点，当环境的酸碱度达到这个点时，蛋白质就会像找到了归属一样沉淀下来。
这就好比每个人都有自己特别喜欢的地方，到了那里就会觉得特别安心。
那这些方法背后的原理又是什么呢？其实啊，就是改变蛋白质周围的环境，让它们没办法再自由自在地“玩耍”啦！盐析法是通过改变离子强度，影响蛋白质的溶解度；有机溶剂沉淀法是破坏了蛋白质与水之间的相互作用；等电点沉淀法呢，则是利用了蛋白质自身的特性。
你想想看，蛋白质在溶液里本来好好的，突然环境变了，它们能不做出反应吗？就好像你原本在一个舒适的房间里，突然温度变了，或者光线变了，你是不是也会有感觉呀？这些沉淀蛋白质的方法在实际应用中可重要啦！比如在生物制药领域，要把有用的蛋白质分离出来，就得靠这些方法。
还有在食品工业中，要提取某些蛋白质来制作美味的食品，也得用到它们呢。
所以啊，别小看这些方法，它们可是有着大用处呢！它们就像是一把把神奇的钥匙，可以打开蛋白质世界的大门，让我们更好地了解和利用这些奇妙的大分子。
沉淀蛋白质，就像是一场和蛋白质的“游戏”，我们要找到合适的方法和策略，才能让它们乖乖就范。
这不仅需要我们对各种方法的熟练掌握，更需要我们对蛋白质的深入理解。
蛋白质沉淀的方法
蛋白质沉淀的方法蛋白质沉淀是生物化学实验中常见的步骤，它可以帮助我们从混合物中分离出目标蛋白质。
在实验室中，有多种方法可以用来沉淀蛋白质，下面将介绍几种常见的方法及其操作步骤。
一、盐析法。
盐析法是一种常用的蛋白质沉淀方法，它利用蛋白质在高盐浓度下沉淀的特性来实现分离。
具体操作步骤如下：1. 将待沉淀的蛋白质溶液加入适量的盐溶液中，使盐浓度达到蛋白质的盐饱和度。
2. 静置一段时间，让蛋白质在高盐浓度下沉淀。
3. 用离心机将混合物进行离心，将沉淀的蛋白质分离出来。
二、醋酸铵沉淀法。
醋酸铵沉淀法是另一种常用的蛋白质沉淀方法，它利用蛋白质在醋酸铵高浓度下沉淀的特性来实现分离。
具体操作步骤如下：1. 将待沉淀的蛋白质溶液加入适量的醋酸铵溶液中，使醋酸铵浓度达到蛋白质的饱和度。
2. 静置一段时间，让蛋白质在高醋酸铵浓度下沉淀。
3. 用离心机将混合物进行离心，将沉淀的蛋白质分离出来。
三、甲醇沉淀法。
甲醇沉淀法是一种常用的有机溶剂沉淀蛋白质的方法，它利用蛋白质在甲醇中的沉淀特性来实现分离。
具体操作步骤如下：1. 将待沉淀的蛋白质溶液加入适量的甲醇中，使蛋白质在甲醇中沉淀。
2. 静置一段时间，让蛋白质充分沉淀。
3. 用离心机将混合物进行离心，将沉淀的蛋白质分离出来。
四、硫酸铵沉淀法。
硫酸铵沉淀法是一种利用硫酸铵对蛋白质的沉淀作用来实现分离的方法。
具体操作步骤如下：1. 将待沉淀的蛋白质溶液加入适量的硫酸铵溶液中，使硫酸铵浓度达到蛋白质的饱和度。
2. 静置一段时间，让蛋白质在高硫酸铵浓度下沉淀。
3. 用离心机将混合物进行离心，将沉淀的蛋白质分离出来。
以上就是几种常见的蛋白质沉淀方法及其操作步骤，希望对您有所帮助。
在进行实验操作时，要根据具体情况选择合适的方法，并严格按照操作步骤进行操作，以确保实验的准确性和可靠性。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告一、实验目的1、掌握几种常用的使蛋白质沉淀的方法。
2、理解蛋白质沉淀的原理和应用。
二、实验原理蛋白质是一种大分子化合物，在溶液中以胶体状态存在。
当溶液条件发生改变时，蛋白质的胶体稳定性被破坏，从而发生沉淀。
常见的使蛋白质沉淀的方法有以下几种：1、盐析法：在蛋白质溶液中加入大量中性盐（如硫酸铵、氯化钠等），破坏蛋白质的水化膜和电荷，使其溶解度降低而沉淀。
2、有机溶剂沉淀法：向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂（如乙醇、丙酮等），降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子间的静电引力，导致蛋白质沉淀。
3、重金属盐沉淀法：重金属离子（如汞离子、铅离子等）与蛋白质分子中的巯基等基团结合，使蛋白质变性沉淀。
4、生物碱试剂沉淀法：生物碱试剂（如苦味酸、鞣酸等）能与蛋白质分子中的碱性基团结合，生成不溶性盐而沉淀。
三、实验材料和仪器1、材料鸡蛋白溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清用蒸馏水稀释 10 倍。
10%硫酸铵溶液、饱和硫酸铵溶液、3%硝酸银溶液、01mol/L 硫酸铜溶液、5%三氯乙酸溶液、95%乙醇、1%醋酸铅溶液、10%氢氧化钠溶液、1%醋酸溶液、苦味酸饱和溶液、鞣酸饱和溶液。
2、仪器试管、试管架、滴管、玻璃棒、离心机。
四、实验步骤1、盐析法取两支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向其中一支试管中逐滴加入 10%硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀。
观察沉淀的生成情况。
向另一支试管中加入 2mL 饱和硫酸铵溶液，振荡均匀。
静置一段时间后，观察沉淀现象。
2、有机溶剂沉淀法取两支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向其中一支试管中逐滴加入 95%乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀。
观察沉淀的生成情况。
向另一支试管中加入 2mL 丙酮，振荡均匀。
静置一段时间后，观察沉淀现象。
3、重金属盐沉淀法取三支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向第一支试管中滴加 3%硝酸银溶液 2~3 滴，振荡均匀，观察沉淀的生成情况。
蛋白质的沉淀的原理是
蛋白质的沉淀的原理是
蛋白质的沉淀是实验室中常用的一种技术方法，用于从混合物中分离纯化目标蛋白质。
其原理通常基于蛋白质与其他物质（如盐或有机溶剂）发生亲和作用，形成沉淀的特性。
一种常用的蛋白质沉淀方法是加入盐溶液，如氯化铵或硫酸铵。
这些盐在一定浓度下可以减少水分子的活动性，从而导致溶液浓度的增加，使蛋白质发生沉淀。
此外，盐中的离子也可以与蛋白质的电荷相互作用，有时也可以改变蛋白质的构象，从而促使其沉淀。
另外一种常见的方法是使用有机溶剂，如醇类或酸类。
有机溶剂可以改变蛋白质和溶剂之间的相互作用力，导致蛋白质发生沉淀。
有机溶剂的选择通常取决于目标蛋白质的特性和其在不同条件下的稳定性。
除了盐和有机溶剂，一些利用沉淀效应的其他方法也被用于蛋白质的分离和纯化。
例如，可以利用凝胶过滤、聚合物交联、酸碱沉淀等技术。
这些方法基于蛋白质在特定条件下的结构和溶解特性的差异，来实现蛋白质的沉淀分离。
总之，蛋白质的沉淀利用了蛋白质和其他物质之间的亲和性、电荷作用力、构象改变等原理，通过改变溶液条件来促使蛋白质发生沉淀，从而实现蛋白质的分离和纯化。
三氯乙酸沉淀蛋白原理
三氯乙酸沉淀蛋白原理三氯乙酸（TCA）沉淀法是一种常用的蛋白质沉淀方法，常用于分离和富集蛋白质。
其原理主要是通过使用三氯乙酸将蛋白质转化为不溶性，从而使其沉淀下来。
下面将详细介绍该方法的原理及其在蛋白质研究中的应用。
首先，三氯乙酸是一种强酸，可以将蛋白质的氨基酸上的羧基质子化，使其带正电荷。
这些带正电荷的氨基酸会相互吸引，从而形成蛋白质聚集体。
同时，三氯乙酸还会降低水的溶解能力，使蛋白质在溶液中变得不稳定。
这样一来，蛋白质会发生凝固并沉淀出来。
其次，蛋白质的溶解度可以受到多种因素的影响，包括溶液的pH值、离子浓度、蛋白质浓度以及人工添加的盐类等。
在TCA沉淀法中，正是通过调节上述因素来促进蛋白质的沉淀。
一般来说，当pH值降低到低于蛋白质的等电点时，蛋白质会开始凝固。
由于三氯乙酸可使溶液的pH值降低，因此这一方法通常在较低的pH条件下进行。
在实际应用中，TCA沉淀法可以用于分离和富集目标蛋白质，去除杂质和其他干扰物。
一般而言，TCA沉淀法比较适用于富含碱性氨基酸的蛋白质，因为这些蛋白质具有较低的等电点，易于在低pH条件下沉淀。
此外，TCA沉淀法还可以去除一些亲水性物质，例如核酸、多肽等，因为这些物质在低pH条件下往往不能与蛋白质结合，从而被沉淀掉。
在某些情况下，TCA沉淀法还可以用于蛋白质的定量。
由于沉淀的蛋白质可以被溶解，并通过一定的测试方法来定量，因此可以根据溶解后的蛋白质浓度推测沉淀前的蛋白质浓度。
不过，需要注意的是，TCA沉淀法的定量结果可能受到一些因素的影响，例如沉淀后的蛋白质可能受到一定程度的降解。
总结起来，TCA沉淀法是一种常用的蛋白质沉淀方法。
其原理主要是通过使用三氯乙酸将蛋白质转化为不溶性的形式，从而使其沉淀下来。
在实际应用中，TCA 沉淀法可以用于分离和富集目标蛋白质，并去除杂质和其他干扰物。
此外，TCA 沉淀法还可以用于蛋白质的定量。
然而，需要注意的是，在使用TCA沉淀法时需要根据样品特性和实验目的进行条件优化，以获得最佳的沉淀效果。
沉淀蛋白质的通用方法(TCA,乙醇,丙酮沉淀蛋白操作技巧步骤)
沉淀蛋白质的常用方法（TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤）TCA-DOCFor precipitation of very low protein concentration1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent).2) Vortex and let sit for 30min at 4oC.3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4oC (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed between washes].5) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of theacidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Normal TCATo eliminate TCA soluble interferences and protein concentration1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20oC and then 15min 4oC; or longer time at 4oC without the –20oC step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low.(preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1NNaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acetone PrecipitationTo eliminate acetone soluble interferences and protein concentration 1) Add to 1 volume of protein solution 4 volumes of cold acetone. Mix and keep at least 20min –20oC. (Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Add to 1 volume of protein solution 9 volumes of cold Ethanol 100%. Mix and keep at least 10min.at –20oC. (Suggestion: leave ON).2) Spin 15min 4oC in microcentrifuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Wash pellet with 90% cold ethanol (keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed.4) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air to eliminate any ethanol residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.TCA-DOC/AcetoneUseful method to concentrate proteins and remove acetone and TCA soluble interferences1. To one volume of protein solution add 2% Na deoxycholate (DOC) to 0.02% final (for 100 μl sample, add 1 μl 2% DOC).2. Mix and keep at room temperature for at least 15 min.3. 100% trichloroacetic acid (TCA) to get 10% final concentration(preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).4. Mix and keep at room temperature for at least 1 hour.5. Spin at 4oC for 10 min, remove supernatant and retain the pellet. Dry tube by inversion on tissue paper.6. Add 200 μl of ice cold acetone to TCA pellet.7. Mix and keep on ice for at least 15 min.8. Spin at 4oC for 10 min in microcentrifuge at maximum speed.9. Remove supernatant as before (5), dry air pellet to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.10. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acidified Acetone/MethanolUseful method to remove acetone and methanol soluble interferences like SDS before IEF1) Prepare acidified acetone: 120ml acetone + 10μl HCl (1mM final concentration).2) Prepare precipitation reagent: Mix equal volumes of acidified acetone and methanol and keep at -20oC.3) To one volume of protein solution add 4 volumes of cold precipitation reagent. Mix and keep ON at -20oC.4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).5) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone or methanol residue (smell tubes).TCA-Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Dilute 10-25μl samples to 100μl with H2OAdd 100μl of 20% trichloroacetic acid (TCA) and mix (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).2) Leave in ice for 20min. Spin at 4oC for 15 min in microcentrifuge at maximum speed.3) Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue (pellet may be difficult to see).4) Wash pellet with 100μl ice-cold ethanol, dry and resuspend in sample buffer.5) In case there are traces of GuHCl present, samples should be loaded immediately after boiling for 7 min at 95°C6) (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)PAGE prep TM Protein Clean-up and Enrichment Kit - PIERCEThe PAGEprep? Kit enables removal of many chemicals that interfere with SDS-PAGE analysis: guanidine, ammonium sulfate, other common salts, acids and bases, detergents, dyes, DNA, RNA, and lipids.PIERCE: #26800 - PAGE prep TM Protein Clean-up and EnrichmentKit (pdf)Chloroform Methanol PrecipitationUseful method for Removal of salt and detergents1) To sample of starting volume 100 ul2) Add 400 ul methanol3) Vortex well4) Add 100 ul chloroform5) Vortex6) Add 300 ul H2O7) Vortex8) Spin 1 minute @ 14,0000 g9) Remove top aqueous layer (protein is between layers)10) Add 400 ul methanol11) Vortex12) Spin 2 minutes @ 14,000 g13) Remove as much MeOH as possible without disturbing pellet14) Speed-Vac to dryness15) Bring up in 2X sample buffer for PAGEReference: Wessel, D. and Flugge, U. I. Anal. Biochem. (1984) 138, 141-143蛋白质浓缩——方法很全1130徐炉李2011-05-28 14:35楼主蛋白质浓缩——方法很全- 丁香园论坛-医学/药学/生命科学论坛蛋白质浓缩方法总结一个简便的方法你可以试试：找一透析袋，底部扎紧，袋口扎一去底的塑料或玻璃试管，将待浓缩的液体从管口灌入透析袋中，将整个装置挂在冰箱中，或者用电风扇吹，液体干后可再继续加入，直至样品浓缩至所需体积。
蛋白质沉淀的五种方法
蛋白质沉淀的五种方法
蛋白质沉淀是从混合物中分离出纯的蛋白质的重要方法之一。
它们通常是从细胞或组
织样品中提取并纯化蛋白质，可以用于许多生物学和医学研究。
在本文中，我们将介绍五
种不同的蛋白质沉淀方法，包括酒精沉淀法、氯化铵沉淀法、三氯醋酸沉淀法、钙离子助
沉淀法和靛酚绿沉淀法。
1. 酒精沉淀法
酒精沉淀法是一种简单、快速的蛋白质沉淀方法。
将蛋白质混合物加入70%的乙醇中，使蛋白质与乙醇沉淀。
可以用离心将沉淀分离出来，然后用退火干燥。
这种方法适用于少
量的样品，但是乙醇浓度要掌握好，过少不利于沉淀效果，过多可能导致蛋白质变性。
2. 氯化铵沉淀法
氯化铵沉淀法是一种比较常用的蛋白质沉淀方法，选择它的优点是速度快、操作简单
且收率高。
混合物加入预先饱和的氯化铵溶液中，产生蛋白质和氯化铵沉淀。
它们可以
通过离心分离和洗涤以去除其余的盐和杂质，再将沉淀蛋白质用洗涤液中再溶解出来。
4. 钙离子助沉淀法
5. 靛酚绿沉淀法
靛酚绿沉淀法适用于一种特殊的蛋白质，它使用靛酚绿染料结合，将其沉淀下来。
混合物加入靛酚绿中，沉淀蛋白质，离心分离和洗涤来去除多余杂质，最后用甲醇洗涤液
中清洗。
具体步骤和其它沉淀法类似。
总之，蛋白质沉淀是从混合物中分离出高纯度蛋白质的重要方法之一。
在选择适当的
方法时，需要考虑样品的性质、沉淀效果、效率和操作难度等因素。
这里的几个方法都比
较常见，选择时需要结合自己的实验条件进行考虑。
盐析法沉淀蛋白质的原理是
盐析法沉淀蛋白质的原理是
盐析法（Salting out）是一种常用的蛋白质沉淀方法，它利用
高浓度的盐溶液聚集蛋白质分子，使其从溶液中沉淀出来。
其原理是由于盐的存在，溶液中的盐离子与蛋白质分子发生离子相互作用，改变了溶液中蛋白质的溶解度。
具体来说，高浓度的盐溶液中所含盐离子与蛋白质分子形成离子云，这种排斥作用导致亲水性蛋白质的水合层损失，从而使蛋白质变得不溶于水，从溶液中析出。
通常盐析法使用氯化铵或硫酸铵这样的盐类，因为它们能在水溶液中离解出氯离子或硫酸根离子。
在进行盐析法实验时，一般会将含有蛋白质的溶液与适量的高浓度盐溶液混合，随后通过离心将蛋白质沉淀收集下来。
此时，蛋白质在盐浓度高的条件下沉淀，而杂质物质则可能保持在上清液中。
蛋白质的沉淀形态和沉淀程度可能受多种因素影响，如盐浓度、温度和pH值等。
盐析法是一种常用的分离和富集蛋白质的方法，尤其适用于大分子量、亲水性较低的蛋白质。
通过改变盐的浓度，可以调节蛋白质的溶解度，从而实现对蛋白质的分离、纯化和富集。
tca沉淀蛋白的步骤
tca沉淀蛋白的步骤TCA沉淀蛋白的步骤引言：TCA（三氯乙酸）沉淀法是一种常用的蛋白质沉淀方法，通过沉淀蛋白质可以达到分离、富集和纯化蛋白质的目的。
本文将介绍TCA 沉淀蛋白的步骤及相关注意事项。
一、样品制备1.1 选择合适的样品：样品可以是细胞提取物、组织提取物或其他含有蛋白质的溶液。
1.2 样品浓度调整：为了获得较好的沉淀效果，样品的浓度应适中，通常在0.5-5 mg/mL之间。
1.3 样品处理：如果样品中含有酶活性，可以在样品制备过程中加入抑制剂（如PMSF）来保护蛋白质的完整性。
二、TCA沉淀2.1 加入TCA：将1 mL的样品加入10% TCA溶液中，比例通常是1:4（样品：TCA溶液）。
2.2 混匀：轻轻地旋转样品管或反复倒置，使样品和TCA溶液充分混合。
2.3 孵育：将混合液在4℃下孵育30分钟，促使蛋白质与TCA结合形成沉淀。
2.4 离心：使用高速离心机将样品离心10分钟，以沉淀蛋白质。
三、洗涤沉淀3.1 去除上清液：将上清液完全倒掉，避免上清液中的杂质污染沉淀。
3.2 加入冷醋酸酐溶液：向沉淀中加入5%冷醋酸酐溶液，使蛋白质沉淀更加纯净。
3.3 混匀：轻轻地旋转样品管或反复倒置，使沉淀和冷醋酸酐溶液充分混合。
3.4 离心：使用高速离心机将样品离心10分钟，以去除醋酸酐和杂质。
四、蛋白质溶解4.1 加入蛋白质溶解液：向蛋白质沉淀中加入适量的蛋白质溶解液，如SDS-PAGE样品缓冲液。
4.2 混匀：轻轻地旋转样品管或反复倒置，使蛋白质沉淀溶解。
4.3 离心：使用高速离心机将样品离心5分钟，以去除残留的杂质。
4.4 收集上清液：将上清液转移到新的离心管中，以便后续的实验使用。
五、存储和分析5.1 存储：将蛋白质溶液存储在-20℃的冷冻离心管中，避免蛋白质的降解和失活。
5.2 浓度测定：使用合适的蛋白质浓度测定方法（如Bradford法），确定蛋白质的浓度。
5.3 SDS-PAGE分析：将蛋白质溶液进行SDS-PAGE电泳，以确定蛋白质的分子量和纯度。
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沉淀蛋白质的常用方法（TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤）2010-08-18 15:19TCA-DOCFor precipitation of very low protein concentration1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxy cholate, detergent).2) Vortex and let sit for 30min at 4oC.3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4oC (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4oC.Be careful, use gloves!!!).4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice repellet samples 5min at full speed between washes].5) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Normal TCATo eliminate TCA soluble interferences and protein concentration1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20oC and then 15min 4oC; or longer time at 4oC without the –20oC step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low.(preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4oC.Be careful, use gloves!!!).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acetone PrecipitationTo eliminate acetone soluble interferences and protein concentration1) Add 1 volume of protein solution to 4 volumes of cold acetone. Mix and keep at least 20min –20oC. (Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Add to 1 volume of protein solution 9 volumes of cold Ethanol 100%. Mix and keep at least 10min.at –20oC. (Suggestion: leave ON).2) Spin 15min 4oC in microcentrifuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Wash pellet with 90% cold ethanol (keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed.4) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air to eliminate any ethanol residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.TCA-DOC/AcetoneUseful method to concentrate proteins and remove acetone and TCA soluble interferences1. To one volume of protein solution add 2% Na deoxycholate (DOC) to 0.02% final (for 100 μl sample, add 1 μl 2% DOC).2. Mix and keep at room temperature for at least 15 min.3. 100% trichloroacetic acid (TCA) to get 10% final concentration (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4oC.Be careful, use gloves!!!).4. Mix and keep at room temperature for at least 1 hour.5. Spin at 4oC for 10 min, remove supernatant and retain the pellet. Dry tube by inversion on tissue paper.6. Add 200 μl of ice cold acetone to TCA pellet.7. Mix and keep on ice for at least 15 min.8. Spin at 4oC for 10 min in microcentrifuge at maximum speed.9. Remove supernatant as before (5), dry air pellet to eliminate anyacetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.10. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acidified Acetone/MethanolUseful method to remove acetone and methanol soluble interferences like SDS before IEF1) Prepare acidified acetone: 120ml acetone + 10μl H Cl (1mM final concentration).2) Prepare precipitation reagent: Mix equal volumes of acidified acetone and methanol and keep at -20oC.3) To one volume of protein solution add 4 volumes of cold precipitation reagent. Mix and keep ON at -20oC.4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).5) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone or methanol residue (smell tubes).TCA-Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Dilute 10-25μl samples to 100μl with H2OAdd 100μl of 20% trichloroacetic acid (TCA) and mix (prepa ration of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4oC.Be careful, use gloves!!!).2) Leave in ice for 20min. Spin at 4oC for 15 min in microcentrifuge at maximum speed.3) Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue (pellet may be difficult to see).4) Wash pellet with 100μl ice-cold ethanol, dry and resuspend in sample buffer.5) In case there are traces of GuHCl present, samples should be loaded immediately after boiling for 7 min at 95°C6) (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)PAGE prepTM Protein Clean-up and Enrichment Kit - PIERCEThe PAGE prep? Kit enables removal of many chemicals that interfere with SDS-PAGE analysis: guanidine, ammonium sulfate, other common salts, acids and bases, detergents, dyes, DNA, RNA, and lipids.PIERCE: #26800 - PAGE prepTM Protein Clean-up and Enrichment Kit (pdf)Chloroform Methanol PrecipitationUseful method for Removal of salt and detergents1) To sample of starting volume 100 ul2) Add 400 ul methanol3) Vortex well4) Add 100 ul chloroform5) Vortex6) Add 300 ul H2O7) Vortex8) Spin 1 minute @ 14,0000 g9) Remove top aqueous layer (protein is between layers)10) Add 400 ul methanol11) Vortex12) Spin 2 minutes @ 14,000 g13) Remove as much MeOH as possible without disturbing pellet14) Speed-Vac to dryness15) Bring up in 2X sample buffer for PAGEReference: Wessel, D. and Flugge, U. I. Anal. Biochem. (1984) 138, 141-143哈哈,我做过这个论文哈!1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响？在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。