生物制药专业综合实验讲义
医学生物制药实验课件
质量控制
1 严格监测
2 标准操作规范
3 持续改进
在生产过程中进行多个关卡 的严格检测，确保产品的质 量和安全性。
制定和执行严格的操作规范， 遵循国家和国际质量管理标 准。
不断改进质量管理体系，提 高产品质量和生产效率。
制药流程
1
策划
根据实验目的和资源状况，制定实验方案和流程。
2
准备
准备实验所需的试剂、材料和设备，并确保实验环境适宜。
3
操作
按照实验方案进行精确的实验操作和验结果，分析数据，得出结论和进一步的研究方向。
关键技术
基因工程
利用基因工程技术，改造细菌 和其他生物体，生产具有特定 功能的蛋白质。
医学生物制药实验课件
欢迎来到医学生物制药实验课件！本课程将带你走进实验室，探索生物制药 的奥秘，让你体验真实的实验过程和最新的科研成果。
生物制药实验室
仪器与设备
试剂与材料
现代化的实验室设备和先进的生物
精心选择的试剂和材料是成功进行
技术让生物制药实验更加高效准确。 生物制药实验的关键。
专业团队
由医学生物制药领域的专业团队指 导，确保实验进行得到切实可行。
发酵工艺
利用发酵技术，将基因工程改 造的生物体大规模培养，生产 生物制药产品。
纯化技术
通过纯化技术，从发酵产物中 提取和纯化目标蛋白质，保证 产品的纯度和质量。
主要产品
抗体药物
疫苗
由重组的抗体制造的药物可用于治
生物制药领域制造的疫苗可以有效
疗多种疾病，如癌症和炎症性疾病。 预防多种传染病。
激素
通过生物制药技术生产的激素类药 物可用于处理内分泌系统相关问题。
生物药物分析实验课讲义。
实验胃蛋白酶片的测定实验目的：掌握以胃蛋白酶测定法测定胃蛋白酶片中胃蛋白酶的效价。
实验原理：精密称取本品适量，加盐酸溶液制成每1mL中约含0.2-0.4个单位的溶液，照胃蛋白酶测定法，测定胃蛋白酶的效价。
实验部分：1.材料与设备血红蛋白试液、三氟醋酸溶液、盐酸溶液紫外可见分光光度计2.操作步骤1）. 供试品溶液的制备取本品5片，置研钵中，加盐酸溶液少许，研磨均匀，移至250mL量瓶中，加上述盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密称取适量，用上述盐酸溶液稀释制成每1mL中约含0.2-0.4个单位的溶液，作为供试品溶液。
2）. 对照品溶液的制备精密称取酪氨酸对照品适量，加盐酸溶液稀释制成每1mL中约含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
3）供试品的测定取大小相同的试管6支，其中3支精密加入对照品溶液1mL，另3支精密加入供试品溶液1mL，置37℃±0.5℃水浴中，保温5分钟，精密加入预热至37℃±0.5℃的血红蛋白试液5mL，摇匀，并准确计时，在37℃±0.5℃水浴中反应10分钟，立即精密加入5%三氟醋酸溶液5mL，摇匀，滤过，取续滤液备用。
另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5mL，置37℃±0.5℃水浴中保温10分钟，再精密加入5%三氟醋酸溶液5mL，其中一支加供试品溶液1mL，另一支加上述盐酸溶液1mL，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照紫外-可见分光光度法，在275nm的波长处测定吸光度，按下列公式计算，即得。
注意事项：思考题：实验三磷酸腺苷二钠片总核苷酸含量测定实验目的：掌握以胃蛋白酶测定法测定胃蛋白酶片中胃蛋白酶的效价。
实验原理：精密称取本品适量，加盐酸溶液制成每1mL中约含0.2-0.4个单位的溶液，照胃蛋白酶测定法，测定胃蛋白酶的效价。
实验部分：1.材料与设备血红蛋白试液、三氟醋酸溶液、盐酸溶液紫外可见分光光度计2.操作步骤1）. 供试品溶液的制备取本品5片，置研钵中，加盐酸溶液少许，研磨均匀，移至250mL量瓶中，加上述盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密称取适量，用上述盐酸溶液稀释制成每1mL中约含0.2-0.4个单位的溶液，作为供试品溶液。
生物制药讲稿(完美版)
生物制药技术
流星雨工作室荣誉出品
前言
关于生物技术(Biotechnology)也叫做生物工程(Bioengineering)是当代新技术革命主 要领域之一，它的兴起是由于 70 年代中期基因工程的出现，到目前已在各国迅猛发展，不 仅提供了不少新的产业，并对人类社会所面临的许多问题起着重要作用。就学科内容来说， 生物技术是以基因工程为主导，以发酵工程为基础，还包括酶工程、细胞工程、生化工程， 随着生物科学的发展，有衍生出第二代、第三代的蛋白质工程、抗体工程、海洋生物技术等。 就产业来说，它涉及制药工业、化学工业、食品工业、环境保护、农作物育种与病虫害防治、 能源开发等。
生物技术既是新兴领域，19 世纪以来发展迅速，又有着悠久的历史，公元前几千年， 人们就开始酿酒和制醋。
本门课程主要讲述生物技术在制药工业中的应用，重点是基因工程、抗体工程、酶工程 以及细胞工程在制药工业中的应用。
编者 2006-10-11
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长沙理工大学生物与食品工程学院生物工程专业讲义
生物制药讲义-精简版
第一章绪论一、概述化学药物、生物药物与中草药是人类防病、治病的三大药源。
生物药物是指运用生物学、医学、生物化学等的研究成果，从生物体、生物组织、细胞体液等，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术和药学等学科的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。
生物药物主要包括生化药物与生物制品及其相关的生物医药产品。
第二章生物药物概论第一节生物药物的来源、特性、分类与制备一、来源二、生物药物的特性1、药理学特性（1）治疗的针对性强：治疗的生理、生化机制合理，疗效可靠；（2）药理活性高（3）毒副作用小，营养价值高（4）生物副作用常有发生：免疫反应、过敏反应2、在生产、制备中的特殊性（1）原料中的有效物质含量低：杂质种类多且含量高，因此提取、纯化工艺复杂。
（2）稳定性差：活性部位、空间构象（3）易腐败，产生热原或致敏物质（4）注射用药有特殊要求3、检验上的特殊性由于生物药物具有特殊的生理功能，因此生物药物不仅要有理化检验指标，更要有生物活性检验指标。
三、生物药物的分类1、按药物的化学本质和化学特性来分（1）氨基酸及其衍生物类药物；（2）多肽和蛋白质类药物；（3）酶和辅酶类药物：（4）核酸及其降解物和衍生物类药物；（5）糖类药物：以粘多糖为主粘多糖是一类胞外生物大分子物质，是动物体内蛋白多糖分子中的糖链部分。
此类成分具有多种药理活性，包括抗凝血、降血脂、抗病毒、抗肿瘤及抗放射性等作用。
主要药用粘多糖：甲壳质，硫酸软骨素，肝素，透明质酸（6）脂类药物：主要有脂肪和脂肪酸类、磷脂类、胆酸类、固醇类、卟啉类等；（7）细胞生长因子类：是人类或动物各类细胞分泌的具有多种生物活性的因子。
如干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子等四大系列十几种细胞因子（8）生物制品类：细胞生长因子类细胞因子系在体内或体外对效应细胞的生长、增殖和分化起调控作用的一类物质。
这类物质的化学本质主要是蛋白质和多肽，其他结构物质也有存在。
生物制药实验
实验一生物药物原料的选择、处理与保存一、目的要求1、了解各种不同生物药物原料的来源。
2、学习并掌握各种原料的选择原则、处理及保存方法。
二、基本原理生物药物原料以天然的生物材料为主，包括人体、动物、植物、微生物和各种海洋生物等。
生物药物的提取与分离方法因为原材料、药物的种类和性质的不同而有很大差异。
因此在选择时应注意选择有效成分含量高、原料新鲜、来源丰富、杂志含量少的原料，还要选择最佳采集时间。
原料的处理依原料的种类不同而不同。
动物原料采集后要立即处理，去除结缔组织、脂肪组织等，并迅速冷冻储存；植物原料确定后，要择时采集并就地去除不用的部分，将有用部分干燥，保鲜处理；微生物原料收集时，要及时将菌细胞与培养液分开，进行保鲜处理。
原料的保存方法主要有三种：冷冻法、有机溶剂脱水法和防腐剂保险法。
本实验着重介绍有机溶剂脱水法。
有机溶剂脱水法：植物、动物组织中常含有较多的脂肪和微生物，该类物质不仅容易氧化酸败，导致原料变质，而且还会影响纯化操作和制品收率。
因此，将动植物原料置于脂溶性有机溶剂（丙酮、乙醚等）中进行脱脂、脱水，制成丙酮干粉，长期保存。
三、器材剪刀、研钵、离心机、表面皿、冰箱冷丙酮四、操作步骤1、取植物组织（芹菜叶片）适量（10-20 g），用水洗净，甩干。
2、用剪刀剪碎，放入研钵，加5倍体积的冷丙酮，研磨成浆糊状。
3、将上述研磨物转入50 mL离心管，于-20℃静置30 min。
4、取出，于4℃下4000 rpm离心20 min。
5、倒去上清液，将沉淀转到表面皿中，室温自然风干，制成丙酮干粉，可在4℃下长期保存。
五、实验报告1、各种不同生物药物原料的选择原则是什么？2、不同生物药物原料的处理及保存方法有哪几种？实验二植物药物制备技术实验——大蒜SOD的提取一、目的要求1、了解酶类药物的特性和功能2、掌握超氧化物歧化酶（SOD）的提取过程。
二、基本原理超氧化物歧化酶（SOD）是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶，可催化超氧阴离子（O2-）进行歧化反应，生成氧和过氧化氢：2 O2- + H2 = O2 + H2O2。
生物制药专业综合实验讲义
生物技术制药实验课程实习讲义人表皮生长因子（hEGF）在大肠杆菌中的表达与纯化生物与制药工程学院制2016年6月2日目录第一节引言................................ 错误！未定义书签。
1.1表皮生长因子(EGF)概述 (2)1.2 表皮生长因子(EGF)的结构与性质 (3)1.3 EGF的生物学效应及应用 (4)1.4 本实验课程设计的目的与内容 (5)第二节 EGF基因的合成与转化表达 (6)1.实验原理 (6)2.实验材料与方法 (7)2.1 实验材料及仪器 (7)2.1.1 试剂材料及试剂 (7)2.1.2 仪器设备 (8)2.2 实验方法 (8)2.2.1 试剂及培养基配制方法 (8)2.2.2目的基因hEGF的设计与合成 (9)2.2.4 电泳检测质粒DNA (10)2.2.5大肠杆菌感受态细胞的制备 (11)2.2.6转化重组质粒进感受态大肠杆菌BL21(DE3） (12)2.2.7检测转化是否成功 (12)2.2.8双酶切并检测 (12)2.2.9 EGF基因的PCR扩增验证 (13)2.2.10 目的基因的诱导表达及基因表达产物的SDS-PAGE检测 (14)第三节 EGF表达蛋白的纯化与检测.............. 错误！未定义书签。
3.1 实验原理 (19)3.2 可溶性6xHis重组蛋白纯化实验方法 (20)3.3 6xHis重组蛋白包涵体纯化与复性 (21)第一节引言1.1表皮生长因子(EGF)概述生长因子在人体中的信号传导部分起着关键的作用，它可通过与细胞表面的蛋白质受体结合，参与细胞的各种生命活动。
生长因子可以是维生素，碱基，多肽等。
所研究的表皮生长因子( Epidemal growth factor，EGF)，就是一种人机体细胞合成的一种多肽。
在生物体内，每个细胞的生长状态不同，在不同组织中的细胞的表皮生长因子参与生长、增值、死亡等过程。
生物技术制药实验讲义新
生物技术制药实验讲义新Biotechnological Pharmaceutics龙岩学院生物科学与技术系生物技术教研室编2008年9月编写说明自1982年第一个基因工程产品-人胰岛素投入市场以来，生物技术制药得到迅速发展，医药生物技术已成为整个生物技术中发展最快、效益最好、影响最大的重要分支。
生物药物的种类和数量迅速增加，对人类的健康、疾病治疗产生很大的影响，并产生了巨大的社会效益和经济效益。
《生物技术制药实验》是为生物技术专业高年级本科学生开设的一门设计及研究性实验，课程的主要内容包括:基因工程菌的构建、基因工程菌的发酵培养条件的工艺的优化、工程菌发酵产物的检测、工程菌发酵产物的提取、分离与纯化、鉴定。
通过本课的教学，强化实验技能训练，使学生掌握生物技术新药的设计思路，学会以基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程等现代生物技术研制生物药物的基本原理和方法，从而使学生更进一步加深理解和巩固所学的生物技术制药课程的理论知识。
本讲义编写的宗旨是简明、实用，结合了本实验室的实际条件，实验尽量避免使用昂贵的仪器和材料。
本讲义可供本科生、专科生使用，可根据理论课程的实际教学进程安排实用项目。
目录基因工程菌发酵生产丙酮酸盐的综述实验一丙酮酸盐的发酵培养基的配置和产量的测定实验二丙酮酸盐高产菌株的快速筛选实验三丙酮酸盐的液体发酵及其工艺条件的优化实验四丙酮酸盐的提取与纯化参考书基因工程菌发酵生产丙酮酸盐的综述1、丙酮酸盐项目介绍1.1 课题研究背景丙酮酸(Pyruvic acid)，又称α-氧代丙酸，为无色至淡黄色液体，呈醋酸香气和愉快酸味，是重要的α-氧代羧酸之一。
丙酮酸不仅在生物能量代谢中具有十分重要的作用，而且是多种有用化合物的前体，制药工业用于酶法合成L-色氨酸、L-酪氨酸、L-多巴;合成L-半胱氨酸、L-亮氨酸、维生素B6和B12等。
生化研究用于伯醇及仲醇的检定;转氨酶的测定;是脂肪族胺的显色剂等。
《生物医药实验技术课件》
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生物学实验中的DNA/RNA获得。
介绍PCR的种类及选择策略，复杂样本的
PCR放大技巧和PCR扩增的质控。
3
电泳和蛋白质分离
说明电泳的原理和操作步骤，蛋白质质 量评估、样品处理，以及电泳与瞬时电 场技术的比较。
抗体制备和应用技术
抗体产生和分类
介绍抗体产生的条件和分类， 包括抗体的组成、孵育和处 理方式。
介绍对培养基上的菌落形态进行 分析和筛选的方案。
筛选抗生素
说明各种筛选抗生素的方法，包 括生物药解析、蛋白质超表达和 代谢检测等。
化学合成和抗生素治疗的 未来
讨论化学药物合成和未来抗生素 治疗方案，说明目前的生物制剂 和化学制剂长处以及课程安排等。
生物医药实验技术的发展趋势和前景
1
药品研发和治疗
讨论如何在药品研发和治疗中利用生物
序列比对和结构预测
介绍利用序列比对识别功能元 件和修订基因的流程、基于医 学策略来预测蛋白质的结构， 并将新的分析技术应用于代谢 途径和多肽探针的识别。
性状分析和机器学习
说明数据挖掘技术、人工神经 网络和机器学习模型的应用， 并进行药代特性分析。
探究新型抗生素的制备和筛选方法
培养基上菌落形态的分析
生物医药实验技术课件
本课程介绍生物医药实验技术的基本方法和应用前景，帮助学生打基础，深 入了解相关领域的知识。
生物医药实验技术概述
细胞分离与特 性鉴定
讲解细胞分离技术和 细胞存活率的测试方 法，介绍特殊条件下 单个细胞的提取和毒 素检测方法。
基因测序和基 因编辑
介绍各种关键技术， 并强调一些重要的实 验室安全措施。将讨 论如何将结果与解剖 和生理数据结合使用。
生物医药产业和商业发展
生物药剂学与药物动力学实验讲义电子版
生物药剂学与药物动力学实验实验一片剂溶出度的测定实验目的1．了解溶出度测定在药物评价中的意义和应用。
2．掌握片剂溶出度测定的方法。
3 熟悉溶出度测定结果的分析和统计学评价力法[实验提示]溶出度(dissolution)系指药物从片剂、胶囊剂或颗粒剂等固体制剂在规定溶出介质中溶出的速度和程度。
固体口服制剂中药物能否被吸收是药物能否发挥临床效应的英关键，而药物从制剂中镕出的速度和程度则是影响吸收的重要因素，这与药物的起效时间、药效强度和持续时间都有密切关系。
对一些难溶性的药物和消出速度慢的药物来说，药物从固体制剂中溶解、释放速度慢，溶出速度成为吸收的限速过程。
因此，溶出度的测定对固体口服制剂的内在质量的评价具有重要的意义。
对于同一药物不同配方口服固体制剂溶出度的测定比较．还可以反映出药物与赋形剂和制剂工艺之间的关系，探索溶出度、生物利用度和临床效应之间的关系，为口服固体制剂配方筛选、工艺优化以及质量控制指标与方法的建立提供有力的凭证。
1965年，《美国药典USP(ⅩⅦ）》首先收载溶出度/释放度测定方法；国内自20世纪70年代中期开始进行溶出度/释放度研究，《中国药典（2000版）》中要求进行溶出度/释放度检查的品种已达183个。
在新药口服固体制剂的研究中，对药物的溶出/释放行为考察已成为不可缺少的内容。
经过近半个世纪的发展．溶出度的测定方法已经比较成熟，测定设备也趋于标准化和自动化，使该实验的科学性、灵敏度、重现性和实用性都大幅度提高。
《中国药典》最新版“溶出度测定法”收载了二种方法，并对其仪器装置、测定方法、结果判断都做了详细规定。
本实验选用常用的、与体内试验有较好相关性的方法之一转篮法(即《中国药典》溶出度法“第一法”)测定甲、乙两厂不同配方甲硝唑片在规定时间点的溶出度，通过威布尔概率拟合求算T50、Td、m、3个参数．并采用方差分析对实验结果进行统计评价。
【方法与步骤】(一)不同厂家出产的甲硝唑片的含量测定分别取不同厂家出产的甲硝唑片10片，准确称量．研碎磨细，精密称取相当于一片量的细粉（W含），加约600ml人工胃液搅拌使其溶解，移入1000ml容量瓶中，定容。
生药学实验讲义
生药学实验讲义实验一显微制片方法介绍菌类、蕨类及裸子植物生药的鉴定一、目的要求1．了解显微制片的基本方法。
2．掌握灵芝、茯苓、猪苓的鉴定方法二、仪器、试剂及材料1、仪器显微镜、解剖针、载玻片、盖玻片2、试剂蒸馏水、水合氯醛试液、稀甘油、5%KOH、甘油醋酸试液3、药材灵芝、茯苓、猪苓、绵马贯众、麻黄茯苓粉末、猪苓粉末、灵芝菌盖纵切片、绵马贯众、麻黄横切的永久装片三、实验内容：1、观察灵芝的干燥品。
2、取茯苓、猪苓粉末，加水合氯醛加热透化，加稀甘油，制片，镜检，观察并绘图。
四、思考题1、比较茯苓与猪苓异同点。
实验二蓼科和毛茛科生药的鉴定一、目的要求1、掌握大黄、黄连的性状特征。
2、掌握大黄横切面组织特征与粉末特征图。
3、掌握黄连的粉末特征图。
4、熟悉黄连的横切面组织图。
二、仪器、试剂及材料1．仪器显微鉴别常用实验器具。
2．试剂蒸馏水、水合氯醛试液、稀甘油3．药材大黄、黄连。
横切片：大黄、黄连永久切片粉末：大黄、黄连三、实验内容：1、观察大黄、黄连、的组织横切片，并绘黄连横切面简图。
2、观察大黄、黄连粉末显微，并绘其粉末图。
四、思考题1、比较三种黄连在来源、产地、性状和显微特征上的区别。
2、如何鉴别大黄与黄连的粉末药材。
实验三樟科和木兰科生药的鉴定一、目的要求1．掌握肉桂、厚朴的性状特征。
2．掌握厚朴、肉桂粉末的显微特点。
二、仪器、试剂及材料1．仪器显微鉴别常用实验器具。
2．试剂蒸馏水、水合氯醛试液、稀甘油3．药材肉桂、厚朴。
横切片：肉桂、厚朴永久切片粉末：肉桂、厚朴三、实验内容：1、观察肉桂、厚朴的组织横切片，并绘厚朴横切面简图。
2、观察肉桂、厚朴粉末显微，并绘其粉末图。
四、思考题1、如何鉴别肉桂与厚朴的粉末药材。
实验四豆科和芸香科生药的鉴定一、目的要求1．掌握甘草、黄芪、陈皮、川黄柏和关黄柏药材的性状特征。
2．掌握甘草、黄柏的粉末鉴别特征。
二、仪器、试剂及材料1．仪器显微鉴别常用实验器具。
2．试剂蒸馏水、水合氯醛试液、稀甘油3．药材甘草、黄芪、川黄柏、关黄柏、陈皮。
生物制药实验讲义
目录实验一芦丁的提取精制与鉴定实验二精制芦丁的含量测定实验三发酵法生产丝氨酸实验四青霉素抑菌圈的观察及青霉素效价的测定实验五崩解时限检查时间安排：16周星期四上午：丝氨酸产生菌培养基、金黄色葡萄球菌所需培养基配制、灭菌等16周星期五下午：丝氨酸产生菌第一代接种17周星期一下午：丝氨酸产生菌第二代接种，金黄色葡萄球菌第一代接种17周星期三上午：丝氨酸产生菌离心，崩解时限检查17周星期三下午：建立丝氨酸产生菌静息培养系统，金黄色葡萄球菌第二代接种17周星期四整天：芦丁提取，金黄色葡萄球菌离心及青霉素抑菌圈观察青霉素效价测定（混合倒板、管碟法）17周星期五上午：绘制芦丁标准曲线，及自己提取芦丁含量测定17周星期五下午：丝氨酸显色反应实验一芦丁的提取精制与鉴定芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutinoside），在植物界广泛存在，其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，可作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物Sophora japonica 的未开放花蕾，具有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。
除此之外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Quercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、6-而乙基氨基芦丁等。
槐花米中芦丁的含量高达12%~16%,另含少量皂苷。
芦丁水解后得到槲皮素，皂苷水解后可得到白桦酯醇（Betulin）及槐花二醇（Sophoradiol）。
芦丁为淡黄色细小针状结晶，含三个结晶水，熔点177~178℃。
；芦丁溶于热水（1:200），难容于冷水（1:8000）；溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100）；热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。
易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。
其结构如下图：一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
生物制药综合实验讲义
实验一银杏叶总黄酮的提取及测定1 实验目的（1）掌握银杏叶中黄酮的提取方法；（2）掌握银杏叶中黄酮的含量测定。
2 实验原理近几年来，随着对黄酮类化合物研究的日益深入与重视，黄酮类化合物提取技术的发展也得到了促进。
目前提取黄酮类化合物的方法主要包括有机溶剂浸提法、超声波提取法、超临界流体萃取法、微波提取法和酶提取法等。
本实验采用有机溶剂浸提法提取银杏叶总黄酮，运用芦丁法测定银杏叶总黄酮含量。
3 实验材料、试剂和主要仪器3.1 实验材料与试剂银杏叶，芦丁标准品，无水乙醇，NaNO2，Al(NO3)3，NaOH。
3.2主要仪器移液枪，圆底烧瓶，水浴锅，旋转蒸发仪，布氏漏斗，容量瓶，10 ml刻度管，酶标仪。
4 实验步骤4.1银杏叶黄酮的提取称量2 g银杏叶放入圆底烧瓶中，加入100 ml 80%乙醇于圆底烧瓶中，于80℃下热回流提取2h，用漏斗过滤，弃渣留滤液，滤液用旋转蒸发仪浓缩并转入100 ml容量瓶中，用30%的乙醇定容，摇匀，供检测使用。
4.2芦丁标准曲线的绘制用80%乙醇配制0.03%（0.3 mg/ml）的芦丁标准储备液。
分别吸取刚配制好的芦丁标液0.0，15.6，31.3，62.5，125，250，500 μl置于7个1.5 ml EP管中，用80%的乙醇补足至0.5 ml，依次编号0~6，加入30 μl NaNO2（5%），摇匀静置6 min后加入30 μl A1(NO3)3 （10%），摇匀静置6 min后再加入400 μl NaOH （4%），混匀，用80%乙醇补至1 ml，静置l5~20 min，以0号试管为空白，用酶标仪在510 nm波长处测定吸光度，以吸光度(A)为横坐标，芦丁浓度(μg/ml)为纵坐标，绘制标准曲线。
4.3总黄酮含量的测定做2个样，取适量提取液置于1.5 ml EP管中，用80%乙醇补充至0.5 ml，加入30 μl NaNO2（5%），摇匀静置6 min后加入30 μl A1(NO3)3（10%），摇匀静置6 min后再加入400 μl NaOH（4%），混匀，用80%乙醇补至1 ml，静置l5~20 min，以0号试管为空白，用酶标仪在510 nm波长处测定吸光度。
《生物制药技术》实验指导-实验一
《生物制药技术》实验指导-实验一第一篇：《生物制药技术》实验指导-实验一《生物制药技术》实验指导实验一金霉素链霉菌培养基的制备（验证型）实验目的：1、学会培养基的配制2、掌握灭菌方法。
实验原理：金霉素链霉菌（Streptomyces aureofaciens）亦称“金色链霉菌”，放线菌门(Actinobacteria)，放线菌纲(Actinobacteria)，放线菌目(Actinomycetales)，链霉菌科(Streptomycetaceae)，链霉菌属(Streptomyces)。
在固体培养基上产生金色色素，故名。
其菌落为草帽型, 菌落直径一般为3～5毫米, 表面较平坦, 中间有隆起。
菌落开始为白色，长孢子后变青色。
在显微镜下可以看到短杆状的菌丝。
抗菌素工业上用以生产金霉素。
放线菌是一类介于细菌与真菌之间的单细胞微生物。
放线菌在土壤中分布最多，大多数生活在含水量较低、有机质丰富和微碱性的土壤中。
多数情况下，泥土中散发出的“泥腥味”就是由放线菌中链霉菌产生的土腥素造成的。
放线菌大都好氧，属于化能异养，菌丝纤细，分枝，常从一个中心向周围辐射生长。
因其生长具辐射状，故名放线菌。
放线菌能像真菌那样形成分枝菌丝，并在菌丝末端产生外生的分生孢子，有些种类甚至形成孢子囊，因而曾被误认是真菌。
但其菌落较小而致密，不易挑取。
不少菌种在医药、农业和工业上广泛应用，可产生抗菌素，现已发现和分离出的由放线菌产生的抗生素多达4 000多种，其中，有50多种抗生素已经广泛地得到应用，如链霉素、红霉素、土霉素、四环素、金霉素、卡那霉素、氯霉素等用于临床治疗人的多种疾病；有些可生产蛋白酶、葡萄糖异构酶；有的用于农业生产，如灭瘟素、井冈霉素、庆丰霉素等。
四环素类抗生素是由链霉菌生产或经半合成制取的一类广谱抗生素。
抗菌谱极广，包括革兰氏阳性和阴性菌、立克次体、衣原体、支原体和螺旋体。
品种主要包括金霉素、四环素和土霉素。
四环素早在1948年即开始用于临床，至今已有50余年历史。
生药学实验讲义2013.8.22
定标 拍摄测微尺图片（拍摄时注意尽量保持测微尺水平）——图片保存——打开 保存的测微尺图片——打开保存的测微尺图片，点击工具栏上的图标 —— 点击添加按钮——画线，计算实际距离（多次测量）——保存入库 数据测量及标注 设定倍数（单击工具箱中的定标）——选择定标号（当前倍率改为 “是”）——打开图片文件——测量
七、实验结果及计算
样品中挥发油的含量（ｍｌ／ｇ） ＝油层－二甲苯 ×100％ 样品的重量 结论：参照药典与之比较是否合格
八、作业：写报告，记录结果并讨论实验
过程中出现的问题及体会
实验三 根和根茎类生药的鉴定（一）
一、实验目的与要求 1.掌握根类生药甘草、人参的性状与显微特征。 2.掌握临时制片的方法。 3.熟悉双子叶植物根类生药性状及显微鉴别点。 4.认识所列的生药标本。 二、实验内容
（3）测定大黄粉末中簇晶和淀粉粒的直径。 选最大、最小和常见的中等大小的簇晶和 淀粉粒各五粒，进行测量。最后取平均值 作为淀粉粒和簇晶的直径最大、最小和范 围。 2.观察所列生药标本 绵马贯众、虎杖、大黄、黄连、升麻、北 豆根、延胡索、川芎、苍术、白术等
三、作业 1.绘大黄粉末组织的显微特征图。 2.记录标化的结果和簇晶、淀粉粒的直径测 定结果。
实验一 显微制片与测量
一、实验目的与要求
生药学实验讲义
生药学实验讲义漯河医学高等专科学校目录实验室守则 3 实验一生药中常见的化学成分的理化鉴定（一） 4 实验二生药中常见的化学成分的理化鉴定(二) 5 实验三根类生药 6 实验四根茎类生药7 实验五皮类生药8 实验六茎木类生药9 实验七植物细胞基本结构10 实验八植物的组织11 实验九根的组织构造12 实验十双子叶植物茎的初生构造和次生构造单子叶植物、裸子植物茎的构造13 实验十一叶的构造14 实验十二花的组织构造15 实验十三果实的内部组织构造16 实验十四种子的内部组织构造17 实验十五菌类、裸子植物的性状显微鉴定18 实验十六双子叶植物根及根茎类生药的显微及显微理化鉴定19 实验十七单子叶植物根及根茎类生药的显微及显微理化鉴定20 实验十八皮类生药的显微及显微理化鉴定21 实验十九花类生药的显微及显微理化鉴定22 实验二十果实种子类生药的显微及显微理化鉴定23 实验二十一全草及其他类类生药的显微及显微理化鉴定24 实验二十二动物类和矿物类生药的性状鉴别25 实验二十三户外见习26 实验二十四附院药房见习27 附录一常用试剂配置法28 附录二层离法常用显色剂29 附录三显微镜测量法30 附录五显微镜的构造与使用31 附录六生物绘图32实验室守则一、实验注意事项：1．根据教学进程，温习与本次实验有关的课堂讲授内容。
2．仔细阅读本次实验的内容，要求弄懂实验的原理与方法。
3．准备好各种自备的实验用品，如铅笔、橡皮、直尺、报告纸等。
二、实验过程中的几点要求：1．遵守实验室规则，保持实验室安静。
2．实验认真，观察仔细，观察应当与思考结合起来，应当手、眼、脑三者并用。
3．由于实验时间有限，实验时应当善于安排自己的工作，注意力应当集中在主要问题上，不要用过多时间去钻研细小的次要问题，一时解决不了的次要问题，可留课外时间去解决o4．在实验过程中，应当随时注意观察到的现象，测量或称量的数据，计算结果等写在报告纸上，养成能随时作出准确、清淅、整齐的记录而不需要重抄的良好习惯。
“生物技术制药”教案讲义
（二）生物药物的历史与发展：
1. 生物药物的历史：
生物药物是一类既古老又年轻的药物。 公元前597年就使用类似植物淀粉酶制剂 ——“麴”。 用羊靥（包括甲状腺的头部肌肉）治疗甲状腺肿，用紫河车（胎盘）作
强壮剂，用羚羊角治中风，用鸡内金治遗尿及消食健胃。（神农） 用乌贼肾和鲍鱼汁治疗“血枯”。（ 《黄帝内经》） 海藻酒治疗瘿病（地方性甲状腺 肿）。（公元4世纪，葛洪著《肘后良方》）
由多种氨基酸、糖类、脂类、维生素、微量元素等各 种成分组成的经口或鼻饲为病人提供营养的代餐制剂。
② 多肽及蛋白质类药物
活性多肽是由多种氨基酸按一定顺序连接起来的多肽链化合物，分 子量一般较小，多数无特定空间构象。
多肽在体内的浓度很低，但活性很强，调节机体重要生理功能。 多肽类药物：
催产素﹑加压素、ACTH、降钙素﹑胰高血糖素、松弛素等； 下丘脑激素：促甲状腺素释放激素、生长激素释放激素等； 消化道激素（促进或抑制胃酸分泌）：如胰泌素、胃泌素等。
名称 胱氨酸
临床应用 抗过敏、肝炎及白细胞减少症
蛋氨酸
防治肝炎、肝坏死、脂肪肝
精氨酸、鸟氨酸 肝昏迷
谷氨酸
肝昏迷、神经衰弱、癫痫
复方氨基酸制剂：主要为重症患者提供合成蛋白质的原料，以补充消化 道摄取之不足。
水解蛋白注射液 复方氨基酸注射液
要素膳
由天然蛋白经酸解或酶解制成的复方制剂。
由多种结晶氨基酸根据需要按比例配制而成。
（三）经典遗传学
1. 孟德尔的遗传规律：分离规律和自由组合规律；
2. Morgan创立了遗传的染色体理论：
将代表某一特定性状的基因，同某一特定的染色体 联系起来，创立了遗传的染色体理论。
（四） 分子生物学
13-14-1生药学实验讲义
根及根茎类药材-人参（生晒参、红参、糖参）、甘草、何首乌、麦冬、大黄、黄连、川芎、苍术的鉴定【实验目的】1.掌握人参（生晒参、红参、糖参）、甘草、何首乌、麦冬、大黄、黄连、川芎、苍术生药及饮片的性状鉴别特征2.掌握人参、甘草、何首乌、麦冬、黄连（根茎）、川芎（根茎）、苍术（根茎）横切片的组织构造特征及显微鉴别特征【实验材料】1.药材与饮片：人参、甘草、何首乌、麦冬、大黄、黄连、川芎、苍术药材饮片。
2.石蜡横切片：人参、甘草、何首乌、麦冬、黄连（根茎）、川芎（根茎）、苍术（根茎）3.药材粉末：人参、甘草、何首乌、麦冬、大黄、黄连【仪器与试剂】1.光学显微镜、载玻片、盖玻片、单面刀片、镊子、酒精灯、培养皿、纱布、小玻棒、擦镜纸、滤纸条、试管（10ml）、小玻璃漏斗2.水合氯醛试液、稀甘油、蒸馏水【实验内容】一、性状鉴定观察人参、甘草、何首乌、麦冬药材饮片的性状特征，比较其异同点。
观察要点：形态、药材表面、色泽、质地、气味、断面。
二、显微鉴定1.分别取人参、甘草、何首乌、麦冬根、黄连根茎、苍术根茎、川芎根茎横切片置于显微镜下，观察组织构造特征。
人参、甘草、何首乌、麦冬观察要点：木栓层、皮层、内皮层、异型维管束（云锦花纹）、树脂道、草酸钙晶体、韧皮部、形成层、木质部和维管束的特征，尤其注意单子叶植物麦冬的根毛、根被、黏液细胞及草酸钙针晶、分泌细胞、石细胞、内皮层、中柱鞘、韧皮部、木质部和髓。
黄连根茎、苍术根茎、川芎根茎横切片观察要点：比较观察黄连根茎横切片中石细胞的分布与数目、韧皮纤维、根迹、叶迹维管束、髓等情况；观察苍术根茎横切面中石细胞环带、大型油室、木纤维束、射线、薄壁细胞中的菊糖等情况；观察川芎根茎横切面中油室、木纤维、根迹维管束等情况2.粉末观察：取人参、甘草、何首乌、麦冬粉末少许，用蒸馏水装片，镜检淀粉粒。
用水合氯醛透化，稀甘油装片，观察草酸钙晶体、导管等组织构造特征。
观察要点：淀粉粒的形态、簇晶的大小及棱角的钝锐，晶纤维、方晶、木栓细胞的特点、导管的种类、树脂道、棕色细胞、黏液细胞、针晶、石细胞、通道细胞、柱晶的形态。
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生物技术制药实验课程实习讲义人表皮生长因子（hEGF）在大肠杆菌中的表达与纯化生物与制药工程学院制2016年6月2日目录第一节引言................................ 错误！未定义书签。
1.1表皮生长因子(EGF)概述 (2)1.2 表皮生长因子(EGF)的结构与性质 (3)1.3 EGF的生物学效应及应用 (4)1.4 本实验课程设计的目的与内容 (5)第二节 EGF基因的合成与转化表达 (6)1.实验原理 (6)2.实验材料与方法 (7)2.1 实验材料及仪器 (7)2.1.1 试剂材料及试剂 (7)2.1.2 仪器设备 (8)2.2 实验方法 (8)2.2.1 试剂及培养基配制方法 (8)2.2.2目的基因hEGF的设计与合成 (9)2.2.4 电泳检测质粒DNA (10)2.2.5大肠杆菌感受态细胞的制备 (11)2.2.6转化重组质粒进感受态大肠杆菌BL21(DE3） (12)2.2.7检测转化是否成功 (12)2.2.8双酶切并检测 (12)2.2.9 EGF基因的PCR扩增验证 (13)2.2.10 目的基因的诱导表达及基因表达产物的SDS-PAGE检测 (14)第三节 EGF表达蛋白的纯化与检测.............. 错误！未定义书签。
3.1 实验原理 (19)3.2 可溶性6xHis重组蛋白纯化实验方法 (20)3.3 6xHis重组蛋白包涵体纯化与复性 (21)第一节引言1.1表皮生长因子(EGF)概述生长因子在人体中的信号传导部分起着关键的作用，它可通过与细胞表面的蛋白质受体结合，参与细胞的各种生命活动。
生长因子可以是维生素，碱基，多肽等。
所研究的表皮生长因子( Epidemal growth factor，EGF)，就是一种人机体细胞合成的一种多肽。
在生物体内，每个细胞的生长状态不同，在不同组织中的细胞的表皮生长因子参与生长、增值、死亡等过程。
目前，表皮生长因子已得到广泛应用。
在许多公司已经开始研发甚至是生产出EGF，多种疾病的诱发原因很多，我们可以用EGF来进行详细的诊断。
之后致病的查出原因，给病人减少心理的压力，带来一线生机。
在经过强烈的光刺激后，尤其是激光，人们的眼部会有很大的损伤，最严重的就是眼角膜损伤，无法修复。
人体在经过紫外线的照射下皮肤的损伤以及高温、蒸气、火等造成的皮肤大面积与原来的不一样的皮肤。
对于这些伤害，我们可使用含有可促进人体表皮细胞的新陈代谢EGF的药膏或者是化妆品，使皮肤变得如初[1]。
在最早研究表皮生长因子的时候就只是证明是多肽，还没有命名。
是由Cohen在1960年，在提取神经生长因子时，意外发现除此种物质以外的一种多肽[2]。
多个科学家对其充满好奇心，在之后的十年内，Savage真正的研究清楚，命名此种多肽为表皮生长因子[3]。
1.2 表皮生长因子(EGF)的结构与性质不同的生物中，表皮生长因子的蛋白一级结构不同。
研究表明家族成员一般在多于50个氨基酸，而少于80个氨基酸，与我们所熟悉的胰岛素一样，表皮生长因子是由前体加工成的成熟的多肽，在具有生物活性[4]。
如人体中的表皮生长因子是由53个氨基酸组成[5]。
整个hEGF分子由两个结构域组成。
残基1～33，形成N一端结构域；34～53为C一端结构域；成熟hEGF 的序列位于单链多肽的C 一末端附近，由53个氨基酸残基组成，并且其C一端和N一端分别由Arg ／Asp ／Arg ／His邻接，故成熟的EGF分子，可以经专一性Arg内肽酶的作用，从前体释放[6]。
二级结构上存在着反平行β片层结构是EGF骨架的常见结构，N一端和C一端在整个三维结构中不会发生什么变动，维持此结构的是由三个二硫键[7]（由于6个半胱氨酸的存在），因此分子在一定的条件下生物活性表现“顽强”[8]。
我们知道同一种酶在不同的生物中有不同的生物效应，同时不同的酶在不同的生物中会有相同的生物效应，hEGF也会有此种现象。
hEGF-β和 hEGF-γ是hEGF的两种形式，在分子结构和同源性中相似度高，在蛋白中一级结构中即使是在C末端的某个位置上仅仅只有一个Arg的差别，当它们作用于不同细胞中的同一个受体，在生物体中的作用是一样的[9]。
与许多古细菌中的酶一样如生活在温泉中古细菌，人体表皮生长因子在100℃煮沸达到30 min，仍然能保持结构、活性等稳定性；许多蛋白质在具有强列的催化效率的酶如胰蛋白酶作用下肽链被断掉，而表皮生长因子耐它的消化[10]。
EGF在狭小的活性微环境中，由于常见的丙氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸[11]会提供作用基团，表皮生长因子才能与受体结合反应。
多肽具有N端和C端，有的在生物活性中不起作用，有的是至少有一段起作用，据研究表明，表皮生长因子结构的两端在细胞的生长中都很重要。
1.3 EGF的生物学效应及应用细胞通过在信号传导的过程中有多种方式包括直接或间接的接触。
自分泌或旁分泌是hEGF作用的方式，在生物体内它亦可以与其他的因子结合作用于细胞。
EGF生物效应很多，如下所述：1.来源于人体的不同种组织的上皮细胞为了适应人体的需要，从基因上赋予它很高分裂效率。
EGF在其中起着关键性的作用。
首先人体的皮肤表层会产生脱皮现象，证明有大量的细胞死亡。
同样，皮肤的表面受到伤害在愈合的过程会结痂，新的皮肤又长出来了。
EGF在创伤修复中起着功不可没的作用，在肝脏、肠道、角膜、胃等多种组织创伤的恢复的试验研究[12]取得重大的突破，在临床上已经运用于烧伤、烫伤、创伤及外科手术伤口的愈合，使病人的痛苦少一点。
2.眼睛是我们重要的部分，眼睛的部分受到伤害特别是眼角膜，是我们最担心的。
在现实生活中，很多病人由于眼角膜的伤害再加上眼角膜的捐献者少之又少无法得到修复。
实验研究结果表明，适宜浓度的hEGF滴眼液，能通过刺激角膜上皮细胞及基质成纤维细胞的增生与迁移和促进细胞外基质与胶原纤维增生，使损伤修复速度加快，从而辅助修复角膜[13]。
3. 研究表明，多数肿瘤的发生、发展，与EGF之间存在一定的关系。
细胞中存在原癌基因和抑癌基因，癌变可能由于这些基因的突变细胞，使细胞生长不受控制。
肿瘤细胞表面的EGF受体属于多聚体受体，多个EGF的表达之后与受体结合，使细胞不停的生长，这样，与胃癌、乳腺瘤、黑色素瘤的恶性程度增加[14]。
4.是药三分毒，我们吃的要中有些药对人的胃刺激很大。
实验表明：在人的胃溃疡中受损伤的细胞与保护药硫酸铝相结合，可以使溃疡有较高浓度的内源性EGF表达，从而促进溃疡愈合[15]。
1.4 本实验课程设计的目的与内容1.实验课程设计目的：本实验课程设计重在学生自己动手设计实验，老师起辅助指导作用，旨在训练学生对专业综合知识的运用。
学生需查阅文献和数据库来设计与理解设计方案，主要考察学生对基因分子克隆、表达、发酵和蛋白分离知识的理解与应用，以培养学生的专业综合知识应用与实验动手操作能力。
2.实验课程设计内容：以表皮生长因子（EGF）为例，让学生从基因的设计入手，合成出完整的EGF基因，然后表达并纯化出该EGF蛋白。
主要内容简述如下：（1）通过NCBI数据库网站设计出完整的EGF基因，并设计出引物；（2）pET-28a衍生质粒为载体、将EGF基因转化如大肠杆菌BL21（DE3）宿主菌中，并通过双酶切和PCR挑选验证转化子；（3）诱导重组大肠杆菌表达hEGF 蛋白；（4）经超声破碎提取、SDS-PAGE电泳检测（5）采用镍柱纯化，进而获取hEGF 蛋白纯品。
第二节 EGF基因的合成与转化表达1.实验原理人源表皮生长因子（hEGF）来源大致有三个方向：一是来源于人体代谢物的提取；二是来源于化学合成；三是来源于基因工程生产技术，这也是近些年来可以大量生产获得hEGF的方法。
前两种方式得到的产品都只有很低的纯度，并不能在实际应用中发挥很大的价值。
目前已知的研究中，hEGF基因在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酵母以及动植物等宿主系统中已经成功克隆表达。
以pET 等衍生质粒为载体、以BL21(DE3)为表达宿主菌的表达系统是发展较成熟的大肠杆菌表达系统之一, 它采用T7 强启动子, 在IPTG 诱导下, 启动外源基因的高转录。
pET载体有pET32a（±）和pET28a（±）等系列。
下图1为PET28a质粒载体的物理图谱。
图1 PET28a质粒载体2.实验材料与方法2.1 实验材料及仪器2.1.1 试剂材料及试剂琼脂粉、NaCl、蛋白胨、酵母浸粉、1 mol/L NaOH溶液、双蒸水、10 mg/mlKana母液、PET-28a菌种、E.coli DE3菌种、酒精、含质粒载体的PET-28a菌液、小型质粒快速提取试剂盒（离心柱型）、Goldview、BIOWEST AGAROSE、loading buffer（6×）、Hind Ⅲ DNA Marker、TAE电泳缓冲液（1×）、0.1 mol/L CaCl2溶液、Zde I酶(10U/μl)及其10× Buffer、Xhol酶(10U/μl)及其Buffer D 10×、GenClean 柱式琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、5 U/µlTaqDNA聚合酶、PCR缓冲液（10×，含Mgcl2）、dNTP混合物、上游引物、下游引物、无菌双蒸水、1 mol/l 的异丙基硫代半乳糖苷（TPTG）、PBS（1×）、SDS-PAGE蛋白凝胶配制试剂盒：30% Acr-Bis（29:1）、1.5 M Tris-Hcl，pH 8.8、10% SDS、10% 过硫酸铵(AP)溶液、TEMED、1 M Tris-Hcl，pH6 .8；2×上样缓冲液、1× Tris-甘氨酸电泳缓冲液、考马斯亮蓝染色液、脱色液Ⅰ（45% 甲醇：10% 乙酸：45% 蒸馏水）、脱色液Ⅱ（5% 甲醇：7% 乙酸：88% 蒸馏水），双蒸水2.1.2 仪器设备试管、量筒、天平、药匙、称量纸、培养皿、高压蒸汽灭菌锅、恒温生化培养箱、涂棒、接种环、酒精灯、pH试纸、记号笔、麻绳、棉花、报纸、镊子、滴管、10 ml移液管、恒温摇床、Eppendorf管、微量移液器、枪头、高速离心机、电泳仪、电泳槽、水平凝胶电泳槽和梳子以及其制胶模块、250 ml锥形瓶、微波炉、凝胶成像系统、分光光度计、制冰机、冰盒、恒温水浴锅、超净工作台、水漂、0.2 mlPCR微量管、双面微量离心管架、PCR仪、紫外检测仪、脱色摇床、台式冷冻离心机、垂直电泳槽及配套的玻璃和密封条、梳子、1.5 ml 微量离心管、搪瓷盘2.2 实验方法2.2.1 试剂及培养基配制方法1. 卡那霉素母液（10 mg/mL）的配制：称取10 mg卡那霉素溶解于1ml无菌水中，然后采用无菌过滤器过滤后分装于Eppendorf 小管中。