类风湿因子(RF)测定标准操作程序SOP文件
上海捷门生物技术有限公司RF检测试剂盒说明书
上海捷门生物技术有限公司RF检测试剂盒说明书
类风湿因子（RF）科研检测试剂盒组成结构：
1、血清：操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
1000×g离心10分钟，取上清液。
5、类风湿因子（RF）科研检测试剂盒保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。
尽可能的不要使用溶血或高血脂血。
如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。
不要在37℃或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
类风湿因子（RF）科研检测试剂盒注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间X好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，X好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请
X后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
实验二、ASO、 RF的检测(精)
与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与血清中相应
抗体（RF、ASO）发生凝集反应。
变性IgG（Ag） 胶乳颗粒 RF（Ab） ASO（Ab） 间接凝集试验
链球菌溶血素“O”（Ag）
间接凝集试验
二、试剂及器材
RF胶乳试剂盒（RF胶乳试剂、阴/阳性对照等）
ASO胶乳试剂盒（ASO胶乳试剂、阴/阳性对照等） 待检血清，加样枪，TIP头，废物杯（84消毒液） 等。
间接凝集试验
1
2
3
RF
4
-
+
1、标记2、加血清（20源自μl）、阴阳性对照（1d）3、加胶乳试剂（1d）
4、观察结果
四、结果判断
阴性（-）：无凝集 阳性（+）：凝集 本次实验结果
待检血清RF___，ASO___。
间接凝集试验
五、注意事项
1.使用前摇匀试剂，无肉眼可见的絮状物出现，方 可使用； 2.加试剂和阴、阳性对照，保证液滴大小一致（约 50 μl ）； 3.离心获得新鲜血清标本，贮存于2-8℃，48h内使 用，时间过长须冰冻贮存； 4.阴阳性对照经检测HBsAg\HCV\HIV均为阴性，但 仍须像病人样品一样小心处理； 5.不同批号试剂盒中的胶乳液，阴阳性对照不能混 用； 6.正确使用移液枪（看视频）。
实验二
ASO/RF的检测
间接凝集反应—间接凝集试验
主讲：胡荣
RF （类风湿因子）：一种抗变性IgG的抗体。
ASO （抗链球菌溶血素“Ｏ”）：抗链球菌溶 血素“O”的抗体。
变性IgG（Ag） 链球菌溶血素“O”（Ag） RF（Ab） ASO（Ab）
间接凝集试验
一、原理
羧化聚苯乙烯胶乳颗粒具有很强的吸附蛋白 质的能力，借此将抗原（变性IgG、溶血素“O”）
实验二、ASO、 RF的检测(精)
与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与血清中相应
抗体（RF、ASO）发生凝集反应。
变性IgG（Ag） 胶乳颗粒 RF（Ab） ASO（Ab） 间接凝集试验
链球菌溶血素“O”（Ag）
间接凝集试验
二、试剂及器材
RF胶乳试剂盒（RF胶乳试剂、阴/阳性对照等）
ASO胶乳试剂盒（ASO胶乳试剂、阴/阳性对照等） 待检血清，加样枪，TIP头，废物杯（84消毒液） 等。
间接凝集试验
间接凝集试验
三、操作
1.冰箱中取出试剂，核对阴、阳性对照，平衡至室温； 2.准备所需反应孔（3孔:标本\阴性\阳性），标记； 3.用移液枪在反应孔中加入20 μl（RF）或50 μl
（ASO）血清，阴/阳性对照孔分别加阴阳性对照液
1d；
4.各反应孔加1d胶乳试剂（用前颠倒混匀）；
5.轻摇混匀，2min观察结果。
实验二
ASO/RF的检测
间接凝集反应—间接凝集试验
主讲：胡荣
RF （类风湿因子）：一种抗变性IgG的抗体。
ASO （抗链球菌溶血素“Ｏ”）：抗链球菌溶 血素“O”的抗体。
变性IgG（Ag） 链球菌溶血素“O”（Ag） RF（Ab） ASO（Ab）
间接凝集试验
一、原理
羧化聚苯乙烯胶乳颗粒具有很强的吸附蛋白 质的能力，借此将抗原（变性IgG、溶血素“O”）
间接凝集试验
1
2
3
RF
4
-
+
1、标记
2、加血清（20 μl）、阴阳性对照（1d）
3、加胶乳试剂阴性（-）：无凝集 阳性（+）：凝集 本次实验结果
待检血清RF___，ASO___。
间接凝集试验
五、注意事项
类风湿因子(RF)测试：原理,步骤,解释和临床意义
类风湿因子（RF）测试：原理，步骤，解释和临床意义类风湿因子（RF）是与个体自身免疫球蛋白反应的自身抗体。
这些抗体通常针对人IgG的Fc片段。
RF已与三种主要的免疫球蛋白类别相关：IgM，IgG和IgA。
在这些中，最常见的是IgM和IgG。
关节间隙中免疫复合物的形成导致补体的活化和破坏性炎症，从而引起类风湿关节炎（RA）如其名称所示，RF特别适用于类风湿关节炎的诊断和监测。
类风湿关节炎（RA）是一种慢性炎症性疾病，主要影响关节和关节周围组织。
在诊断出类风湿关节炎的病例中，有60-80％的人检出了类风湿因子。
但是，有时在系统性红斑狼疮（SLE）患者的血清中和某些非风湿性疾病中也可以检测到。
在正常的老年人口中也可以观察到升高的值。
测试原理有许多方法可用于测试RF。
最常用的血清学方法是基于乳胶凝集试验。
由于RF是针对IgG分子Fc部分的IgM类抗体，因此可以通过其凝集涂有IgG分子的乳胶颗粒的能力来检测。
使用的试剂是聚苯乙烯胶乳颗粒在甘氨酸盐水溶液中的悬浮液，pH值为8.6±0.1，并涂有人丙种球蛋白。
定性方法程序1. 将所有试剂和标本置于室温。
2. 将一滴阳性对照和40ul患者血清分别放入幻灯片上的圆圈中。
3. 轻轻地在每个要测试和控制的样品圆上添加一滴RF乳胶试剂。
4. 使用单独的涂药棒/搅拌棒将反应混合物散布在特定区域的整个区域。
5. 在旋转摇床上将载玻片前后倾斜2分钟，使混合物缓慢旋转。
6. 2分钟后在明亮的人造光下观察凝集。
解释胶乳颗粒的凝集被认为是阳性反应，表明类风湿因子的存在处于可检测的显着水平。
阳性结果：乳胶颗粒悬浮液会在两分钟内发生凝集，表明RF水平超过18 IU / ml。
阴性结果：乳胶颗粒悬浮液在两分钟内没有凝集。
半定量法1. 使用等渗盐水以定性方法1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128等方式制备阳性样品的系列稀释液，如下所示：1. 对于每个要测试的样品，将100 µL的0.9％盐水加入1至5的试管中。
检验科生化类风湿因子RF测定的标准操作规程
检验科生化类风湿因子测定的标准操作规程【目的】体外检测血清类风湿因子(RF)含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理类风湿因子试剂是大小均一的聚苯乙烯乳胶颗粒悬液，颗粒表面包被有抗人γ球蛋白，样本中类风湿因子与之结合后，发生凝聚反应，并产生浊度改变。
该浊度与样本中类风湿因子浓度成正比。
通过测定600nm处吸光度值的变化，即可测得样本中类风湿因子的浓度。
二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司RF试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂1（R1）叠氮化钠 0.1%磷酸盐缓冲液 13 mmol/L试剂2（R2）叠氮化钠 0.1%抗人γ球蛋白致敏胶乳颗粒抗原2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征校准品对测定进行校准。
2.2校准间隔2.2.1试剂批号变更时，使用与试剂配套使用的复星长征校准品对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。
2.2.2室内质量控制出现问题时使用与试剂配套使用的复星长征校准品对测定进行校准并确认问题得到解决后方可对临床病人样本进行测定。
类风湿实验报告
一、摘要本研究旨在通过对患者进行类风湿因子（RF）检测，分析其临床意义，为临床诊断和治疗提供依据。
本次实验共检测了100例疑似类风湿关节炎患者的血清样本，通过ELISA法检测RF水平，结合临床表现及实验室其他指标，对类风湿关节炎进行诊断和鉴别诊断。
二、实验目的1. 通过检测类风湿因子（RF）水平，为临床诊断类风湿关节炎提供依据。
2. 分析RF检测结果与其他实验室指标的相关性，为临床诊断提供参考。
3. 探讨RF检测在类风湿关节炎鉴别诊断中的作用。
三、实验方法1. 样本收集：选取100例疑似类风湿关节炎患者，收集其血清样本，并记录患者的一般资料、临床表现及实验室检查结果。
2. 试剂与仪器：采用ELISA法检测RF水平，所用试剂为美国Biolegend公司生产的RF检测试剂盒。
仪器包括酶标仪、洗板机、移液器等。
3. 实验步骤：（1）按照试剂盒说明书进行操作，配制工作液。
（2）将血清样本和标准品分别加入相应的孔中，进行孵育。
（3）加入酶标抗体，再次孵育。
（4）加入底物，进行显色反应。
（5）终止反应，测定吸光度（OD）值。
4. 数据分析：采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析，比较不同组别RF水平及与其他实验室指标的相关性。
四、结果1. 类风湿因子（RF）检测结果：100例疑似类风湿关节炎患者中，RF阳性率为60%，其中IgM型RF阳性率为50%，IgG型RF阳性率为30%，IgA型RF阳性率为20%。
2. RF水平与其他实验室指标的相关性：（1）RF水平与红细胞沉降率（ESR）呈正相关（r=0.78，P<0.01）。
（2）RF水平与C反应蛋白（CRP）呈正相关（r=0.65，P<0.01）。
（3）RF水平与抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP）呈正相关（r=0.45，P<0.05）。
3. 类风湿关节炎诊断与鉴别诊断：（1）根据RF检测结果，结合临床表现及实验室其他指标，共确诊类风湿关节炎患者40例。
血清类风湿因子(RF)的检测
血清类风湿因子(RF)的检测1.目的规范类风湿因子(RF)检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理样本中RF与胶乳颗粒超敏化的变性的人IgG抗体反应，出现凝集反应，在波长660nm处检测其吸光度的变化，其变化程度与样本中的RF含量成正比。
5. 标本采集与处理5.1标本类型：标本最好不要溶血。
留取标本后请尽快分离血清/血浆。
5.2标本稳定性：血清标本在2-8℃稳定48天,或-20℃可稳定6个月。
6. 试剂6.1试剂：本科使用金斯尔试剂盒，即用式液体试剂。
试剂内主要成分如下：规格: R1 3×20ml R2 1×20ml6．2试剂准备试剂为液体双试剂，开瓶即可使用。
6．3试剂稳定性原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12个月。
试剂开瓶载机2～8℃稳定28天。
7.仪器参数设定AU2700参数设定：金斯尔试剂仪器参数具体参加试剂厂家提供的相应仪器的参数说明书.8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
8.1.2仪器经过大保养后。
8.1.3挪动仪器的安装地点。
8.1.4更换试剂批号。
8.1.5室内质控失控。
8．2 AU2700金斯尔试剂系统的校准：8.2.1 准备：金斯尔配套校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期。
8.2.3保存位置：2号冰箱。
8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的相应位置放定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。
9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控品(批号:45612/45613)。
9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。
类风湿因子液体试剂盒(免疫透射比浊法)使用指南
本试剂盒用于体外定量测定人血清或血浆类风湿因子。
【产品信息】货号试剂盒规格170229910021 试剂1 5×25ml＋试剂2 1×25ml 170229910730 试剂1 4×20ml＋试剂2 2×8ml 170209910059 5×1ml TruCal RF (类风湿因子校准品)5个不同浓度水平的校准品【摘要】类风湿因子(RF)是一类自身抗体，包括所有类型的免疫球蛋白。
它们是抗变性或聚合IgG分子Fc片段的抗体[1]。
诊断所检测的RF主要是IgM类RF，用来检出各种类风湿疾病，是炎症的起源[2]。
大约70％～80%的类风湿性关节炎(RA)患者RF为阳性，但是并不特异，因为RF浓度的升高还出现在非类风湿疾病中。
在无RA临床症状的高龄人群中，阳性率达到大约10%[3]。
检测RF为鉴别诊断风湿疾病提供了重要的信息[4]。
另外，RA中的高浓度RF值常和疾病的进行性临床发展有关。
但是RF的阳性结果必须结合临床或其他检验结果予以证实。
【方法】免疫透射比浊终点测定法。
【原理】使用热聚合IgG和样品中的类风湿因子进行抗原-抗体反应，形成抗原-抗体复合物，进行透射比浊终点测定。
【试剂】在测定时的各组分和浓度试剂1（R1）：磷酸缓冲液pH 7.4 40 mmol/L试剂2（R2）：热聚合人IgG 适量试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻！注意事项1. 试剂中含叠氮钠（0.95g/L），不可入口，避免接触皮肤及粘膜。
2. 应采取必要的预防措施使用试剂。
废液处理参照各地方法规要求。
试剂准备试剂为即用式。
未提供的实验所需物品9 g/L氯化钠溶液一般的实验室仪器设备【标本】血清，肝素或EDTA血浆。
不要使用含氟化钠的血样收集瓶。
稳定性：20-25℃保存可稳定1天2-8℃保存可稳定3天-20℃保存可稳定4周不可使用已被污染的标本。
类风湿因子RF测定
类风湿因子RF测定1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2原理RF是针对自身的变性IgG分子结晶片段的一种自身抗体。
本试剂将人微球蛋白胶合于胶乳微粒，与待测样本中的RF 发生免疫反应，引起微粒的凝集，导致反应体系浊度增加，该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。
与通过同样处理的标准液比较，即可计算出样本中的RF。
3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4试剂4.1试剂：本科使用浙江伊利康生物技术限公司的试剂盒. （浙食药监械（准）字2014第2400384号YZB/浙2314-40-2014）4.1.1试剂盒组成如下:R1三羟甲基氨基缓冲液：20mmol/L叠氮钠：0.95g/LR2：类风湿因子致敏胶乳液：适量叠氮钠：0.95g/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用和毒性，请勿直接接触皮肤及眼睛。
一旦接触，即用大量清水冲洗。
请勿吞服。
4.2 校准品：使用浙江伊利康生物技术限公司提供的RF校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
SOP标准操作程序 RF
SOP标准操作程序类风湿因子(RF)测定试剂盒1 实验原理：病人样品，标准液或质控中的类风湿因子(RF)与包被有人γ-球蛋白的胶乳颗粒发生免疫反应，形成免疫复合物产生混浊。
病人样品产生的浊度与标准液中类风湿因子(RF)标准产生的浊度来比较，进行计算。
2 标本的收集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2. 抗凝剂：血清、肝素或EGTA血浆，标本最好不要溶血。
留取标本后请尽快分离血球血浆。
2.3 标本的稳定性：在室温条件下（15～25℃）可以稳定一周。
3 材料:3.1 材料：无需配制，开瓶即用，540nm试剂的空白吸光度超过1.5ABS试剂失效。
工作液：R1与R2按9：1混合,2-8℃可稳定20天。
标准品用1ml蒸馏水复溶，2-8℃稳定一个月。
3.2 试剂的贮存：3.2.1.当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。
3.2.2. 开盖后放于仪器中可以稳定30天。
3.2.3 开盖后避免污染。
3.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
4 类风湿因子(RF)测定试剂盒（日立7600生化分析仪）册或《7600A使用说明书》中查到。
5 计算：采用多点定标法，用RF标准液的吸光度值与相应的RF浓度作图，绘制标准曲线，从标准曲线上查得血清样品的RF浓度。
RF标准液浓度(IU/ml)见标签。
6 试剂性能概要采用科美公司规定的参数进行测定，线性范围（或可报告范围）0-160U/L。
7 超出线性范围（或可报告范围）的处理如样本中（RF）的浓度大于160U/L 时，需对样本进行稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。
8 方法的局限性抗干扰能力：胆红素≤20mg/dl,血红蛋白≤10g/L,甘油三酯≤1000mg/dl对测定无干扰。
一些药物等可能会产生干扰。
9 其他必须说明的内容9.1 标准度稀释时，应严格按照说明书浓度进行。
9.2 胶乳试剂在使用前应轻轻摇匀。
9.3 所有的试剂已进行乙肝表面抗原，丙肝抗体和抗艾滋病毒抗体检测（FDA方法），结果阴性。
类风湿因子(RF)测定标准操作程序SOP文件
见ROCHE MODULAR P生化分析仪作业指导书。
7参考范围
1-14IU/mL。
8线性范围
本法线性范围为7-120IU/mL，不准确度允许范围 ±3SD，不精密度CV=4.25%，灵敏度为2.4IU/ml。
9注意事项
9.1胶乳试剂在使用前应摇匀。
9.2血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
血清及肝素-Li, EDTA抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性：20－25℃24小时
4－8℃3天
-20℃4周
4试剂
4ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ1试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定90天
R2：打开后机上稳定90天
准备：直接使用。
4.2校准物
免疫比浊法
2测定原理
血清类风湿因子（RF）与试剂中的结合由抗RF抗体的人体γ-球蛋白的胶乳颗粒相结合，与之发生凝集形成不溶性免疫复合物，RF的浓度与胶乳颗粒的凝集形成的浊度成正比。
典型的定量检测RF的程序是通过IgG型致敏的羊的红细胞与乳胶颗粒发生凝剂。罗氏RF测定基于加入乳胶后的增强的凝集反应。
3标本
9.3仅应用于体外诊断。
10抗干扰能力：
10.1标准：回收率在90％－110％之间。
10.2黄疸：黄胆指数达到60时不会有明显干扰。（直接和间接胆红素浓度约为60mg/dl）
10.3溶血：溶血指数达到1000时不会有明显干扰。（血红素浓度约1000mg/dl）
10.4脂血：乳糜指数达到1000时不会有明显干扰。（甘油三酯浓度约为2000mg/dl）
来源：ROCHE配套校准物，符合WHO标准64/2,具体如下：
类风湿因子(RF)测定(胶乳凝集法)作业指导书
类风湿因子（RF）测定（胶乳凝集法）作业指导书1.原理RF是一种主要发生于类风湿性关节炎患者体内的抗人变性IgG抗体，可与IgG的Fc段结合。
将变性IgG包被于聚乙苯烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时,即发生肉眼可见的凝集。
2.标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清2.3 标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：2-8°C保存不应超过24小时，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、脂血或严重溶血标本不宜作此项检测。
6.试剂6.1 试剂名称：类风湿因子测定试剂6.2 试剂生产厂家：西班牙BioSystems S.A.6.3 包装规格：60Test/Kit6.4 试剂盒组成：RF胶乳悬液，阳性对照血清，阴性对照血清。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。
7.操作步骤7.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C）。
7.2 分别吸取50μl阳性对照和阴性对照血清均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。
7.3 吸取50μl待测血清均匀铺加在纸卡的另一圆圈中。
7.4 加胶乳试剂50μl于上述血清中。
7.5 处分混匀后立即摇动反应板，2分钟内于直射阳光下观察。
8.结果判断：出现明显凝集者为阳性。
9.质量控制：每次测定均做阴阳对照，阴性对照不出现凝集物，阳性对照出现明显凝集。
10. 参考范围：阴性11. 临床意义：RF是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体。
RF阳性常见于类风湿关节炎患者和自身免疫性疾病患者。
少数健康人也会出现阳性结果。
12. 操作性能：灵敏度、特异性高。
13. 方法局限性：检测出的RF主要为IgM类。
14. 注意事项14.1试剂的使用：在大于10°C室温条件下进行；使用前必需充分混匀。
手工免疫检验项目标准操作程序
SOP_13-6 手工免疫检验项目标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：免疫学检验项目。
三、操作人员：检验科授权工作人员。
四、项目内容：抗链球菌溶血素“O ”(ASO) 类风湿因子(RF) 梅毒（TP ）抗链球菌溶血素“O ”(ASO)【方法】快速胶乳法。
【用途】血清中ASO 的测定，用于链球菌感染的诊断。
【原理】高滴度的病人血清被适量的溶血素中和了正常水平的抗体后还有多余ASO ，这些多余的抗体即与ASO 胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。
ASO 胶乳试剂系羚化聚苯乙烯胶乳与溶血素“O ”共价交联的产物。
【试剂】以1g ／L 叠氮钠防腐。
1．溶血素“0”溶液2瓶：每瓶可测定100人次，用时摇匀。
2．ASO 胶乳试剂2瓶：每瓶可测定100人次，用时摇匀。
3．阳性控制血清1瓶：已稀释灭活，可直接使用。
4．阴性控制血清1瓶：已稀释灭活，可直接使用。
【操作】1．血清标本用生理盐水1：15稀释(血清0．1ml+生理盐水1．4m1)。
2．在反应板(和妊娠诊断胶乳试剂使用的相同)各格子上分别滴加稀释待检血清1滴(约50 l)以及阳性和阴性控制血清1滴，再各滴加溶血素“0”溶液1滴，轻轻摇动1分钟，使其充分混匀，均匀分布于方格内。
3．每格各滴加ASO 胶乳试剂1滴，轻轻摇动3分钟(室温为18～20℃)，将反应板平放在实验桌上，有清晰凝集者为阳性，不出现清晰凝集者为阴性，阴性者的ASO ≤250IU ／ml 。
4．阳性者的1：15稀释血清，进一步稀释为1：30和1：60，再重复步骤2和3，出现凝集的血清稀释度和ASO 滴度问的关系大致如下：【附注】1．ASO胶乳加入后，轻轻摇动到本说明指定的时间时应立即记录结果，超过规定时间后再出现的凝集不列为阳性。
阳性控制血清应在本说明指定的时间内出现清晰凝集，但不能将阳性控制血清出现凝集的时间视为判断结果的时间界限。
类风湿因子(RF)定量测定试剂盒标准操作程序
类风湿因子（RF）定量测定标准操作程序1.摘要本试剂盒适用于体外临床检验，用于测定人血清中类风湿因子的浓度。
RF的测定对类风湿性关节炎的诊断有一定的参考价值。
2.适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清、血浆中RF的浓度。
3.职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定RF浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物生产的类风湿因子定量测定试剂盒采用的是免疫透射比浊法。
5.原理试剂中的人IgG包被于聚苯乙烯粒子上，样本中RF与试剂中包被于聚苯乙烯粒子上的人IgG结合，形成不溶性免疫复合物，该免疫复合物由于包被的聚苯乙烯粒子而使浊度进一步放大，在人IgG足量的情况下，其浊度与人血清中RF含量成正比，与相同条件下操作的校准品比较，通过剂量/反应曲线求出样品中RF的含量。
6.仪器AU5811自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：MOPSO缓冲液（PH7.4）、0.2M、NaN3、包被人IgG的聚苯乙烯粒子7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
R1、R2：打开后冷藏于分析仪中可稳定28天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用上海科华生物工程股份有限公司试剂盒内提供的标准品对自动分析仪进行校准。
由a、b、c、d四只组成，浓度见说明书。
按照公司标准品使用要求，使用前用0.5ml的生理盐水复溶，待完全混合均匀后（约30分钟）再使用。
校准后，仪器自动对校准品吸光度通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：使用罗氏公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控，加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
类风湿因子多重微珠免疫法检测试剂盒说明书
类风湿因子多重微珠免疫法检测试剂盒说明书（多重微珠免疫法检测类风湿因子RF IgM抗体）产品编号：A91001M简介：宙斯（Zeus）科技公司的AtheNA Multi-Lyte 类风湿因子检测试剂盒是定性或半定量地检测类风湿因子的IgM抗体。
本试剂盒用于类风湿性关节炎的诊断。
本试剂盒用于体外诊断。
背景：类风湿性关节炎（RA）是一种慢性病，往往会发展为关节炎。
RA是一种高度变异疾病，从轻微持久的病症到破坏性的多发性关节炎伴随系统性脉管炎（1）。
这种病症据估计在人群中1-2%的发生率（2），而且妇女发病的可能性是男性的两倍（1）。
早期病症的临床特征包括淋巴结病、厌食、虚弱、疲劳和晨僵或疼痛（1，3）。
和RA有关的标志物通过实验室检测得到。
常见的有类风湿因子RF、抗核抗体ANA、免疫复合物等（3）。
检测血清中的RF IgM对诊断RA较为重要而且可以帮助疾病预后诊断（6）。
RF是一类免疫球蛋白，是和人（或其他属种的）IgG的Fc部分发生反应的抗体（1，4）。
RF是一种多克隆抗体，与IgG的多数部位发生反应。
分为三个主要免疫球蛋白IgM、IgG和IgA，而IgE RF也有提及（5）。
IgM和IgG是最常见的，在诊断为RA的病人中大约75%为IgM RF（4）。
另外RF与一些细菌性或病毒性感染有关，如肝炎或单核细胞及一些慢性感染如结核杆菌、寄生虫性疾病、亚急性细菌性心内膜炎和癌症（1）。
同时在年龄大于65岁的人群中约有15%的人RF水平有上升（4）。
AtheNA Multi-Lyte TM抗核抗体类风湿因子检测系统检测原理：宙斯公司的AtheNA Multi-Lyte类风湿因子检测系统用来检测人血清中类风湿因子的IgM抗体。
整个检测步骤包括两步温育过程。
1、待测血清（经过稀释）与复合悬浮微珠在孔中温育。
复合悬浮微珠为不同荧光编码的聚苯乙烯微粒（polystyrene microspheres); 不同颜色的微粒上结合有不同的抗原。
大白鼠类风湿因子(RF)说明书
大白鼠大白鼠类风湿因子类风湿因子(RF)酶联免疫酶联免疫分析分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围检测范围：： 96T0.1 U/L -40 U/L使用目的使用目的：：本试剂盒用于测定大白鼠血清、血浆及相关液体样本中类风湿因子(RF)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大白鼠类风湿因子(RF)水平。
用纯化的大白鼠类风湿因子(RF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入类风湿因子(RF)，再与HRP 标记的类风湿因子(RF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的类风湿因子(RF)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大白鼠类风湿因子(RF)浓度。
试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（80 U/L ） 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6显色剂B 液6ml ×1/瓶12密封袋1个标本标本要求要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
40 U/L 5号标准品 150µl 的原倍标准品加入150µl 标准品稀释液 20 U/L 4号标准品 150µl 的5号标准品加入150µl 标准品稀释液 10 U/L 3号标准品 150µl 的4号标准品加入150µl 标准品稀释液 0.5 U/L 2号标准品 150µl 的3号标准品加入150µl 标准品稀释液 0.25 U/L1号标准品150µl 的2号标准品加入150µl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
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5仪器
ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6操作
见ROCHE MODULAR P生化分析仪作业指导书。
7参考范围
1-14IU/mL。
8线性范围
本法线性范围为7-120IU/mL，不准确度允许范围 ±3SD，不精密度CV=4.25%，灵敏度为2.4IU/ml。
9注意事项
9.1胶乳试剂在使用前应摇匀。
9.2血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.3仅应用于体外诊断。
10抗干扰能力：
10.1标准：回收率在90％－110％之ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
10.2黄疸：黄胆指数达到60时不会有明显干扰。（直接和间接胆红素浓度约为60mg/dl）
10.3溶血：溶血指数达到1000时不会有明显干扰。（血红素浓度约1000mg/dl）
10.4脂血：乳糜指数达到1000时不会有明显干扰。（甘油三酯浓度约为2000mg/dl）
10.5 RF的浓度低于6000mg/dl时不会有HOOK效应。
11临床意义
RF是抗变性IgG-FC片段的自身抗体。在诊断类风湿性关节炎时检测RF是非常关键的，是阳性率最高的指标之一。另外在其它的类风湿炎症及非类风湿疾病中也可见RF，皮肌炎、SLE、其他病毒、细菌感染炎症时也增高。在临床上大于60岁的老人也可查出RF。
4.3质控物
来源：ROCHE配套质控
其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-39
类风湿因子(RF)测定
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-39
类风湿因子(RF)测定
版序：ABCD
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1测定方法
免疫比浊法
2测定原理
血清类风湿因子（RF）与试剂中的结合由抗RF抗体的人体γ-球蛋白的胶乳颗粒相结合，与之发生凝集形成不溶性免疫复合物，RF的浓度与胶乳颗粒的凝集形成的浊度成正比。
典型的定量检测RF的程序是通过IgG型致敏的羊的红细胞与乳胶颗粒发生凝剂。罗氏RF测定基于加入乳胶后的增强的凝集反应。
3标本
血清及肝素-Li, EDTA抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性：20－25℃24小时
4－8℃3天
-20℃4周
4试剂
4.1试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定90天
R2：打开后机上稳定90天
准备：直接使用。
4.2校准物
来源：ROCHE配套校准物，符合WHO标准64/2,具体如下：
S1：0.9％的NaCl
S2-6：RF定标液(货号：2172828)
贮存条件：校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
准备:直接使用。
定标频率：A试剂批号更换B由质控结果决定