细胞支原体污染的图片、危害、表现和怎么办
细胞培养中支原体污染
细胞培养中的支原体污染的预防及处理Mycoplasma国内主要有三种译名，医学文献译为“支原体”（分枝原体，枝原体，类菌质体），动物医学文献译为“霉形体”或“支原体”，台湾、香港则译为微浆菌。
支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。
自然界分布广泛，种类多，有80余种，分为两个属：一为支原体属（Mycoplasma），有几十个种；另一为脲原体属（Ureaplasma），仅有一种。
与人类感染有关的主要是肺炎支原体和解脲脲原体。
支原体无细胞壁，多呈不规则球状、长丝状，可分枝，营寄生共生或腐生。
一般侵害对象为动植物，可造成多种疾病。
细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题。
国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和菜氏无胆甾原体（idlawii），为牛源性。
国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。
支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（某些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染，等等。
体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、补体）。
对于天然培养基，污染主要来源于取材过程及生物材料本身，应当严格选材，严格操作。
对于合成培养基，污染主要来源于配制过程，配制所用的水，器皿应十分洁净，配制后应严格过滤除菌。
由于体外培养细胞自身没有抵抗污染的能力，而且培养基中的抗生素抗污染能力有限，因而培养细胞一旦发生污染多数将无法挽回。
支原体污染后，因为它们不会使细胞死亡可以与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感觉，实则细胞手到多方面潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，抑制细胞生长等。
细胞支原体污染怎么办？该怎么处理？
甲：细胞里突然出现小黑点，问君能有几多愁?乙：珍贵的细胞萎靡不振，扔了重买?相顾无言，惟有泪千行。
丙：细胞转染效率极低，实验结果遥遥无期，我的课题前功尽弃!但见泪恨湿，不知心恨谁!细胞培养中，最怕的就是生物污染，支原体污染就是其中的一种。
支原体这种微小的微生物，是细胞培养中令人头疼的大问题。
支原体结构也比较简单，多数呈球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。
支原体污染可能来自培养基、血清或实验操作者，会影响细胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。
支原体感染不易察觉，因此对培养细胞定期进行支原体检测就非常重要。
污染实验室培养细胞的支原体主要有八种，但还没有哪种检测方法能够单枪匹马把这八种支原体都检测出来。
支原体非常顽强，通常用于细胞培养的绝大多数抗生素都对其无效。
例如青霉素主要作用于细菌细胞壁，但支原体没有细胞壁因此就不受影响。
无懈可击的细胞培养技术始终是预防支原体感染的最佳方式，另外及时找出受到支原体感染的培养物也很重要，这样才能在感染扩散前快速采取有效措施。
支原体污染在细胞培养中实际上是比较常见的，可达30%甚至更高。
支原体污染时细胞表现为长得不好，也不死亡，同时，培养基又是清亮的，时间长达一周也没有什么变化，这时基本上可以判断出是支原体污染了。
定期检测支原体感染会使培养细胞慢慢枯萎，因此对培养细胞定期进行支原体检测非常重要。
一般来说每1至3个月就应该进行一次支原体检测。
将定期支原体检测常规化坚持下去，是细胞培养实验室应对支原体感染的关键。
预防支原体污染的建议：细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和器材要保证无菌;在细胞培养基中加入适量的抗生素。
支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有：抗生素处理抗血清处理抗生素加抗血清和补体联合处理支原体最突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如内酰胺类、万古霉素等完全不敏感;对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。
支原体感染危害及预防措施
支原体感染危害及预防措施支原体感染是一种常见的细菌感染疾病，可引起多种疾病，包括肺炎、气管支气管炎和生殖道感染等。
具有很高的传染性，容易通过空气飞沫和密切接触传播。
本文将介绍支原体感染的危害及预防措施。
一、支原体感染的危害支原体感染的危害主要体现在以下几个方面：1. 呼吸道感染：支原体感染可引起呼吸道疾病，如肺炎、支气管炎等。
在感染后，患者常常出现咳嗽、咳痰、咽痛等症状，严重时可导致呼吸困难，严重影响日常生活。
2. 生殖道感染：支原体感染还可引起生殖道疾病，如尿道炎、宫颈炎等。
女性患者可能会出现白带异常增多、异味以及阴道瘙痒等症状，严重时可引起盆腔炎症。
3. 眼部感染：支原体感染还可导致结膜炎，患者可能会出现眼红、眼痒、流泪等症状，严重时可影响视力。
4. 关节炎：一些支原体感染还可引起关节炎，患者可能会出现关节红、肿、疼痛等症状，影响关节活动能力。
二、支原体感染的预防措施对于支原体感染，我们可以采取以下措施进行预防：1. 加强个人卫生：保持良好的个人卫生习惯，包括勤洗手、勤换洗衣物、保持室内空气流通等，有助于减少病菌的传播。
2. 避免密切接触：尽量避免与已经感染支原体的人密切接触，特别是在其症状明显时。
避免使用他人的个人物品，并注意避免与呼吸道有感染的人分享餐具和杯子。
3. 良好的饮食习惯：保持良好的饮食习惯，注意均衡饮食，增加对抵抗力的养护。
多食用富含维生素和矿物质的新鲜蔬菜水果，同时远离辛辣刺激性食物，有助于提高免疫力。
4. 健康生活方式：保持良好的生活习惯，适度运动，保证充足的睡眠，提高身体素质和免疫力，降低感染的风险。
5. 定期健康检查：定期进行健康体检，如定期进行妇科、泌尿科等相关检查，早期发现和治疗感染，有助于避免并发症的发展。
总结起来，支原体感染是一种常见的细菌感染疾病，具有较高的传染性。
为了预防该疾病的发生，我们应该加强个人卫生意识，避免与感染者密切接触，保持良好的饮食习惯和生活方式，定期进行健康体检等。
细胞培养中的支原体污染
生物特性：
无细胞壁，形态呈高度多形性，可为圆形、丝状或梨形，其直径仅有 0.13～0.18μm，是目前发现的最小细胞，并且变形能力大，故能通过滤菌 器。 革兰氏染色不易着色或呈阴性。 胞膜中含有胆固醇或其他甾醇，这种特性使支原体膜更具柔顺性，对于物 理因素，如压力、渗透压、脱水的抵抗力很大。 多数支原体适合在偏碱性条件下生存（pH值7.6~8.0），对酸耐受性差。
原体是没有作用的。
支原体污染应对策略
新一代支原体抗生素M-Plasmocin 其含有两种杀菌成分,一种成分通过干扰核糖体的翻译功能而使蛋白合 成受阻。另一种成分则通过干扰复制叉的形成而阻止DNA的复制。 可以强效对抗支原体及相关的无胞前对抗支原体最理想的 方法。
支原体污染来源
工作环境的污染
操作者本身的污染（包括操作者操作不当以及某些支原 体在人体是正常菌群） 实验器材的污染 培养基等试剂的污染
被污染细胞造成的交叉污染
制备细胞的原始组织或器官的污染
支原体污染的类型
口腔支原体(M.orale) 精氨酸支原体(M.arginini) 猪鼻支原体(M. hyorhinis) 发酵支原体(M.fermentans)
梨支原体(M. pirum)
莱氏无胆甾原体(idlawi）
支原体污染有时易被忽视！
1.培养液可不发生混浊
2.细胞病理变化轻微或不显著
3.细微变化也可由于传代，换液而缓解。 4.个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从 培养器皿脱落
但支原体污染对细胞的影响却是极大的！！！
1、影响细胞的生长状态及形态 支原体可使培液中支持细胞生长的营养物质含量减少，造成细胞生长缓慢甚至 停止；另外还会导致细胞微管解聚，引起细胞一系列病变，表现为细胞收缩、 贴壁细胞脱落、裂解等。
细胞污染 图片
白色念珠菌污染革兰氏染色阳性中间长梭型的是正在分裂的念珠菌生命经纬网友布兰卡的观点为：我个人感觉，操作之前酒精擦手消毒非常重要，因为环境再差，无菌台里一般是没问题的，但是，污染往往在这里操作时发生，因此，个人手的卫生非常重要，白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类（尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着），我认为绝大多数污染是我们自己带进去的，因此，如果环境不是太差，那就找找自身的原因。
生命经纬网友dsh1205的观点为：灭菌水,是否有必要我也不太肯定。
其实这一点是很容易办到的，有总比没有好。
多注意一些可能的因素，对细胞总是有力的。
被污染总是很麻烦的，细胞长得不好不说，还影响实验进程。
我认为有两个环节很重要，操作台及温相。
我们操作前、后都要紫外杀菌30min，而且保持操作台通风设施正常。
我们的温相好像从来没有用酒精擦过，更没用紫外照射。
我们开温相时，先清洁剂洗手，在酒精擦手，范围与手术洗手差不多，时间一般在几秒内。
另外，我自己将瓶放回相中时，还对瓶体进行酒精擦洗。
当然还有给细胞换液也要注意了，吸管尽量不要深入瓶内，要深入瓶内的最好先在酒精灯上烧一烧等等。
HepG2细胞，荧光染色检测支原体支原体污染检测在上面的支原体检测图片里没大片的针状点，但不敢肯定个别细胞核外的小点是不是支原体，可是要有也不应该就这么几个啊？（细胞一共培养了40小时）生命经纬网友bianmin8024认为：这么大面积的污染，你可以看看是不是做这批细胞时操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。
其实我觉得在每次试验前，最好简略写一下操作步骤做到心中有数。
这样可以避免实验中的忙乱。
既然现在已经污染了，就全部更换你的器皿。
培养箱的水没有必要用无菌水，但最起码要是蒸馏水。
以上图片细胞系念珠菌污染处理办法：扔掉，善后办法，养成良好的无菌操作的习惯，拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。
支原体感染的危害
支原体感染的危害支原体是一类寄生病原体，主要通过呼吸道传播，引起支原体感染。
该病原体可以感染人类的多个器官和系统，对人体健康产生严重的危害。
本文将详细介绍支原体感染的危害，并提出预防和治疗建议。
一、呼吸系统危害支原体感染最常见的危害之一是对人体呼吸系统的侵害。
感染可引起呼吸道炎症，包括喉炎、气管炎、支气管炎和肺炎等。
患者常常出现咳嗽、咳痰、呼吸困难等症状。
严重的支原体感染可导致肺部感染并引发肺炎，对老年人、婴儿和免疫功能较弱的患者尤为危险。
二、生殖系统危害除了呼吸系统，支原体感染也可危害人体的生殖系统。
在女性中，支原体感染可以引起宫颈炎、子宫内膜炎和盆腔炎等疾病。
这些炎症可能导致不孕、流产和早产等问题，对生育能力造成严重威胁。
而在男性中，支原体感染与前列腺炎和尿道炎等疾病相关，也会对生育能力造成不利影响。
三、关节和心血管系统危害支原体感染还可对关节和心血管系统造成危害。
一些研究发现，支原体感染与风湿性关节炎、类风湿性关节炎和心内膜炎等疾病相关。
这些病症会导致关节疼痛、关节肿胀和心脏功能异常等症状，给患者的生活和健康带来极大困扰。
四、眼部感染危害支原体感染亦可危害人体的眼部。
结膜炎是常见的眼部疾病，由支原体引起的结膜炎常伴有眼结膜充血、眼痛、畏光等症状。
此外，支原体感染还与角膜炎和泪鼻管炎等病症相关。
五、其他系统危害除了以上列举的系统，支原体感染还可能对消化系统、中枢神经系统和循环系统等带来一定危害。
消化系统可能出现腹痛、腹泻等问题，中枢神经系统可能表现为头痛、乏力等症状，而循环系统可能出现心悸、胸痛等异常。
预防和治疗建议针对支原体感染的危害，以下是一些预防和治疗建议：1. 提高个人卫生意识，保持良好的生活习惯，勤洗手、多通风，避免接触患者的呼吸道分泌物。
2. 加强呼吸道感染的防范，避免密集场所和人群，尽量佩戴口罩。
3. 在性生活中使用安全套，并与长期性伴侣进行性病筛查。
4. 如出现上述危害的症状，及时就医并告知医生病史，接受相关检查和治疗。
细胞污染及处理方法
（常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）
若细胞状态极差，尽早处理掉细胞，并找出污染源，对培养箱，生物安全柜，细胞房进行消毒处理。
2、真菌污染
培养基：有的培养液清亮，不变色；
成像：
处理方法：
在操作的过程中，一定要小心操作动作，轻柔缓慢，切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。这个拯救细胞还是主要针对无路可退的时候。污染还是重在预防！！！！！
细胞房
培养箱每两周更换一次水（高压过的双蒸水），条件允许的每两周可以用酒精擦洗一遍培养箱；
地面每两到三天用新洁尔灭拖洗一遍，桌面等同样用新洁尔灭擦洗一遍；
细胞污染及处理方法总结
洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。
所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。
霉菌污染多来自空气,所以做实验时说话聊天,或瓶口敞开时间太长,还有培养箱开关频繁是主要原因,还是多找自身原因.
4、支原体污染
支原体污染后，不会立即使细胞死亡，可以与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感觉，实则细胞收到多方面潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，抑Байду номын сангаас细胞生长等。
9）.加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。
细胞污染图片解析
白色念珠菌污染革兰氏染色阳性中间长梭型的是正在分裂的念珠菌生命经纬网友布兰卡的观点为：我个人感觉，操作之前酒精擦手消毒非常重要，因为环境再差，无菌台里一般是没问题的，但是，污染往往在这里操作时发生，因此，个人手的卫生非常重要，白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类（尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着），我认为绝大多数污染是我们自己带进去的，因此，如果环境不是太差，那就找找自身的原因。
生命经纬网友dsh1205的观点为：灭菌水,是否有必要我也不太肯定。
其实这一点是很容易办到的，有总比没有好。
多注意一些可能的因素，对细胞总是有力的。
被污染总是很麻烦的，细胞长得不好不说，还影响实验进程。
我认为有两个环节很重要，操作台及温相。
我们操作前、后都要紫外杀菌30min，而且保持操作台通风设施正常。
我们的温相好像从来没有用酒精擦过，更没用紫外照射。
我们开温相时，先清洁剂洗手，在酒精擦手，范围与手术洗手差不多，时间一般在几秒内。
另外，我自己将瓶放回相中时，还对瓶体进行酒精擦洗。
当然还有给细胞换液也要注意了，吸管尽量不要深入瓶内，要深入瓶内的最好先在酒精灯上烧一烧等等。
HepG2细胞，荧光染色检测支原体支原体污染检测在上面的支原体检测图片里没大片的针状点，但不敢肯定个别细胞核外的小点是不是支原体，可是要有也不应该就这么几个啊？（细胞一共培养了40小时）生命经纬网友bianmin8024认为：这么大面积的污染，你可以看看是不是做这批细胞时操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。
其实我觉得在每次试验前，最好简略写一下操作步骤做到心中有数。
这样可以避免实验中的忙乱。
既然现在已经污染了，就全部更换你的器皿。
培养箱的水没有必要用无菌水，但最起码要是蒸馏水。
以上图片细胞系念珠菌污染处理办法：扔掉，善后办法，养成良好的无菌操作的习惯，拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。
细胞常见污染图片与鉴别
细胞常见污染图片与鉴别
赛默飞世尔科技（中国）有限公司
ThermoFisher Scientific
图1. 洋葱佰克霍尔德菌污染洋葱佰克霍
尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，
广泛存在于土壤及水中，因引起洋葱患病而得
名，是医院感染病原菌之一。
图2. 白色念珠菌污染常见的细胞污染之一，左侧为倒置显微镜下视图，右侧为革兰氏染色图片，其中，长梭型的是处于分裂期的链珠菌
图3.链球菌革兰氏染色
图4. 真菌感染
图5. 支原体污染煎蛋状和其他形状，左侧：电镜照片(×30k)；右侧：电镜照片（×12k）
图6. 霉菌（丝霉）污染培养基呈淡紫色，或不变色，但会变得粘稠，一般是来自实验服，并且具有季节性，像现在这种长蘑菇的季节很容易污染这种菌类。
图7. 细菌污染倒置显微镜下无法看到细菌的结构（需油镜），污染晚期培养基呈黄色。
当快，源自小鼠毛发中。
源自小鼠的皮肤。
细胞培养常见污染
整理总结：细胞培养中的第一大害——————————污染★★★lwf991229(金币+3,VIP+0):不错,很详细,不过有的图片打不开~~污染是细胞培养第一大害！预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。
小木虫还没有相关帖子，故而整理和虫子们分享，让我们一起来繁荣小木虫，虫子们觉得好请顺手回个贴！本页图片太多，个别打不开请刷新一下就好了。
细胞污染的类型一、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染。
一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。
即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。
最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。
培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变而呈现黄色。
也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。
所以，每天应仔细观察。
污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
一般细菌污染进程很快，大约污染一两天后肉眼就能显著观察到。
二、真菌污染真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。
最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。
培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。
念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间（发生卵圆形物体污染的几率很大）。
个体细小，有增多趋势。
镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。
真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
三、支原体污染支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。
支原体污染后的处理方法
组织细胞培养工作中，可以从以下几方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。
当细胞被支原体污染后若由于材料的特殊性必须保留可以采用一定的抗生素进行处理，对支原体最有抑制活性抗生素是四环素类、大环内酯类等。
目前，市场上已有了新一代支原体抗生素M-Plasmocin，能有效的杀灭支原体，又不影响细胞本身的代谢，而且处理过的细胞不会重新感染支原体。
另外，配合支原体检测试剂盒可以帮助尽快发现支原体的污染。
去医院买一瓶静脉滴注用的”环丙沙星注射液“，国产的很便宜，在超净台内打开，可直接往培养瓶里加，混匀，终浓度为10ug/ml，细胞连续用药两周，即OK。
也可试20，10，5，高中低三个浓度，慎重些。
本实验室多人试过，效果很好，且一瓶静脉滴注用的”环丙沙星注射液“，稀释量很大，能用于大量大量的细胞，经济实惠，最穷的人也用的起。
《细胞培养的微生物污染排除》一、抗生素除菌法：用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体1．抗生素制备：均可用PBS配成250×浓缩液－20℃备用，使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》117页表6－2。
2．处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3天后，吸除培养液，再加入含BM-2的1640培养液培养4天，如此连续三个轮回。
3．检测：用33258荧光染色镜检（每个轮回末应检测一次）。
4．培养：清除支原体后的细胞，在不加上述抗生素的培养液中，再传代培养3～4次。
5．镜检：如清除不彻底可再进行处理至纯净为止（一般3个轮回即能被完全消除）。
BM-1和BM-2与CIP（4-氟，2-羟基喹啉）联合应用亦可，即先用含BIP培养液培养12天后，再按上述方法处理。
二、加温除菌法：把受污染的细胞置41℃中作用5～10小时。
三、动物体内接种除菌法：把受支原体污染的肿瘤细胞接种在同种动物皮下或腹腔中，借动物免疫系统消灭支原体，而肿瘤细胞却能在体内继续生长，待一定时间后，从体内取出细胞再进行培养繁殖。
细胞支原体污染的影响、检测方法及清除方法
细胞支原体污染的影响、检测方法及清除方法支原体简介支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。
支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。
支原体是在1898年发现的，又称人形支原体，是一种简单的原核生物。
其大小介于细菌和病毒之间。
结构也比较简单，多数呈球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。
支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。
菌落小（直径0.1~1.0mm），在固体培养基表面呈特有的"油煎蛋"状。
无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。
支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。
支原体污染对细胞的影响1、影响细胞的生长状态及形态支原体可使培液中支持细胞生长的营养物质含量减少，造成细胞生长缓慢甚至停止；细胞状态变差，生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生浑浊。
会导致细胞微管解聚，引起细胞一系列病变，表现为细胞收缩、贴壁细胞脱落、裂解等。
细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全死亡。
2.影响细胞的代谢和功能（1）培液中的精氨酸被支原体大量消耗，引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍；（2）支原体活动使培养基成分发生改变（如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质），影响细胞代谢；（3）支原体吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，影响细胞信号传递；（4）支原体消耗细胞的核苷库—染色体异常。
3、其他此外，支原体污染还会影响一些病毒在细胞中的产量、使恶性细胞致癌能力下降、影响淋巴细胞分化等。
细胞支原体污染
细胞支原体污染较长一段时间，一直觉得细胞培养有点问题，无缘无故的出现细胞代谢异常现象，培养基内小渣渣变多，看不到细菌污染，看不到培养基浑浊，但可以感觉到细胞状态不行，即使是单层没有复层时也一样，当时考虑支原体污染，查了一些有关支原体污染的内容，由于细胞状态可以在换新鲜培养基的时候转变过来，而自己的实验也是需要在换培养基后进行，故而疏忽了可恶的支原体污染，今天决定解决这个问题。
先查了一下资料：细胞支原体污染的一般情况及预防措施细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时，会严重的影响实验的结果。
而细菌、真菌等之微生物污染时，较易自培养基等的外观变化察觉。
但是若受到支原体之污染时，细胞之外观较无明显变化，但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。
各国细胞库支原体污染的统计表，如下：国家受支原体污染(%) 报告年度USA－FDA 15 1993(past 30 years)USA－ATCC 15-20 1992Japan－(IFO，RIKEN，JCR 80~30~22 1981 1987-19931998Germany－DSM 36 1990-1994Argentina 65 1987Israel 32 1986-1993China 95 1990造成支原体高污染率的原因：1、支原体size 0.1~0.8 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um）2、支原体污染时，没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化3、过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式4、细胞流通间缺乏品管，造成实验室间的相互污染5、研究或操作人员忽略污染问题支原体污染的来源：1、已受污染的细胞2、操作人员的疏失3、已受污染的培养基、血清4、操作环境不良、实验器具不洁等由于支原体为人体口腔中之正常菌丛，实验室之操作人员的污染亦可能为污染源，须十分注意。
而万一细胞已受支原体污染时，最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃，以免污染其它洁净的细胞株。
细胞培养时遇到支原体污染怎么办
细胞培养时遇到支原体污染怎么办前言：细胞培养物被支原体污染是极普遍的问题，面对支原体污染给细胞培养带来的巨大难题，世界各国开始重视，并相继建立了细胞库，对细胞质量进展控制，效果显著，支原体污染的问题得以限制。
目前已知能污染细胞的支原体有20多种以上，其中95％以上的支原体污染是口腔支原体。
目前已知的主要污染源是动物血清、胰酶和已污染培养物的气溶胶，例如，猪鼻支原体通过胰酶，在消化细胞时进入细胞培养物，并造成污染。
在原代细胞与传代细胞的检测中，原代细胞与传代细胞分离出支原体的频率是有明显差异的，传代次数越多的细胞，污染支原体的可能性就越大，这也是多次与动物血清、胰酶和已污染培养物的气溶胶接触后造成的，在原代细胞中，污染率低于4%，而传代细胞的污染率则高达57%~92%。
支原体的介绍支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞微生物，分为两个属：一为支原体属（Mycoplasma），有几十个种；另一为脲原体属（Ureaplasma），仅有一种。
革兰染色为阴性，但不易着色，一般用Giemsa染色，染成淡紫色。
支原体在自然界分布广泛，无细胞壁，直径为0.1-0.3μm，且形态易变，极易通过除菌过滤器。
大部分支原体繁殖速度比细菌慢，适宜生长温度为35℃，适合于偏碱条件下生存（pH7.6—8.0），对酸耐受性差，对75%乙醇、煤酚皂溶液敏感。
对热比较敏感在细胞培养过程中如果在显微镜下发现破碎的细胞很多，需要频繁换液才能维持传代培养的时候，即应怀疑支原体污染。
细胞培养过程中遇到的支原体95%都来自于以下四种支原体：口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、莱氏无胆甾支原体，其中莱氏无胆甾支原体为牛源性。
细胞受支原体污染严重（1）据统计世界范围内大约有15%-35%的细胞培养物遭受了支原体污染。
（2）从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。
（3）欧洲药典规定对细胞治疗产品需要进行严格的支原体检测。
细胞培养污染图片及甲醛熏蒸
甲醛加高锰酸钾熏蒸操作法：
1.准备、计算、称取甲醛与高锰酸钾量：10ml甲醛溶液中加入高锰酸钾
3－5g；
2.取一不锈钢容器，容积大小应为甲醛量的3－4倍； 3.在容器内加入全量的高锰酸钾，用纱布或滤布将容器口蒙住；
4.将容器放入空调送风口，快速倒入全量的甲醛溶液，关上空调机组门；
5.启动空调，关闭新风口，循环运行1－2小时，（视甲醛的反应速度）； 6.关闭空调，取出容器，空调及房间密闭8小时以上； 7.生产前4小时，打开空调，关闭回风阀进行空调全排风运行，直至空 调无甲醛气味后，空调按常规操作运行。（除甲醛时，可在空调送风口加 入适量的氨水，以快速中和残留甲醛） 操作中注意事项：甲醛加入高锰酸钾中，会迅速产生高温至溶液沸腾， 因此容器应大并应做好防护工作，以免混合的棕红色溶液溅出而污染机组。
细胞培养污染图片
2010.12.6
中间长梭形是正在分裂的念珠菌
真菌污染
真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒
性作用而使细胞脱落死亡。
细菌污染
培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后 细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。
支原体污染电镜照片（x30K），煎蛋形状
入高锰酸钾，搅拌均匀；再加入甲醛；加入甲醛后人立即离开，密闭房间。
注意顺序：是将甲醛倒入高锰酸钾溶液内。 ⑤消毒时间一般为20-30分钟。
⑥消毒后要打开门窗通风换气。 这里说的甲醛就是40%的甲醛溶液，也就是
福尔马林，一般包装上写的是37%。
检测你的细胞是否有支原体污染
检测你的细胞是否有支原体污染告诉你们这一桌年夜饭都是我做的哦（得意脸）。
一般实验做的好的人，做饭也不会太差。
今年跟大家分享的最后一个帖子就是怎么检测细胞支原体污染。
支原体感染的细胞样子在细胞培养过程中支原体污染经常出现且不易消除，95%以上是由口腔支原体造成（所以细胞培养戴口罩是很必要的，感觉你再怎么小心对待你的细胞都不为过）。
1.支原体污染初期, 在高倍显微镜下（400倍），虽然细胞无明显变化，但是在细胞膜周围或细胞间隙可以发现细小黑色颗粒。
2.细胞培养时间延长, 尽管培养液不浑浊（一般细菌污染培养液会变浑浊）, 但培养液pH值变化明显然后颜色变黄（虽然一般的细胞培养培养基也会变黄，但是速度要慢很多）。
3.在支原体感染较重的时候可以引起细胞变形。
4.如果你们实验室没有常规杀除支原体的操作，那么我相信只要你们在用细胞培养标本去送RNA-seq、LncRNA测序、CirRNA测序时，公司给出的结果都会有支原体污染。
下图是nature杂志给出的如果用细胞系做的实验，需要提供无支原体污染的证据（果子老师，重新ATCC购买细胞哦）Nature.jpg因此在细胞培养过程中进行支原体检测与防治十分必要。
今天先跟大家分享支原体怎么检测，也就是你怎么检测你的细胞有无支原体污染。
常见的支原体检测方法有直接培养法和间接法。
直接培养法这个方法其实对于不做支原体研究的人来说基本用不上，这里就不细讲。
如果需要可以留言交流。
间接法1. DNA荧光染色法在免疫荧光那一期没有具体介绍活细胞怎么做免疫荧光。
这里稍微讲讲活细胞怎么染核。
活细胞可以用Hoechst染色。
可将DNA标示，此种染色方式也可以用来辨识DNA，意思就是细胞内有DNA的都可以识别出来，在正常细胞中就是细胞核及线粒体可以被识别。
那支原体污染时的染色是什么样的呢？首先，支原体有自己的基因组，所以，如果有支原体污染的情况，会在细胞表面或者培养基中发现有小点或者碎片状的荧光，有时候会形成连续的一圈。
细胞出现小黑点是什么,支原体污染怎么办
细胞出现小黑点是什么，支原体污染怎么办炎炎夏日，细胞污染严重，它们正在被这越来越热的天气“折磨”。
你会慢慢发现细胞出现了一些不知何物的小黑点那些讨厌的小黑点到底是什么呢？今天我们就来说道说道吧~1.细胞碎片细胞生长状态不好，吹打过多或者多次吹打导致碎片，加大血清浓度，降低离心速度养两代试试。
碎片一般会离心出去。
这就是细胞碎片2.黑胶虫黑胶虫污染，黑胶虫一般小而且密。
“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞生长就会受到影响直至死亡。
3.支原体污染支原体污染不易发现，很多细胞即使支原体污染，在没有出现猛烈爆发时细胞形态也不会有明显的变化，因此支原体污染经常被人们所忽视。
但是支原体污染对细胞的伤害比人们想象的要大得多，会直接对您的实验结果产生影响，包括以下几个方面：①严重降低细胞的基因转导效率:无论是病毒载体还是脂质体介导的基因转导，细胞都会因为支原体的污染而导致效率低下。
②严重影响细胞的功能表型:支原体严重影响细胞的分化方向，扰乱细胞的增殖、活力与代谢水平，造成实验中极其不稳定的细胞表型结果。
那么出现这些情况之后细胞怎么“自救”呢对于细胞支原体污染，向已经污染支原体的细胞中加入汉恒自主研发特效抗支原体试剂SaveIt™ 后，再用PCR检测培养细胞的支原体，电泳图如下。
结果显示，加入汉恒生物抗支原体试剂后，污染的支原体被有效清除。
虽然有试剂可以帮我们清除支原体，但是既然存在支原体污染那就说明别的地方是存在污染可能性的，例如生物安全柜，工作台，培养箱等等，对于这些情况，我们又可以怎么去解决呢？“喷一喷”汉恒生物SaveIt™抗支原体喷雾预防支原体污染效果显著，可用于生物安全柜、超净工作台、CO2培养箱、显微镜等常用仪器以及细胞房门把手等易污染的死角的消毒中，只需轻轻一喷，就可让您远离支原体污染带来的烦恼。
所以汉恒生物不仅有细胞“自用”的抗支原体试剂，还有“外用”的抗支原体喷雾。
细胞培养念珠菌污染处理方法
细胞培养常见污染的判别及应对措施2011-01-02 10:19:04| 分类：实验| 标签：污染无菌细胞培养基灭菌|字号大中小订阅一、避免细胞培养污染的措施：污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好！注意以下几点，大部份的污染是可以避免的：1. 每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面和不消毒的器械（如移液枪等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处；使用无菌台后，再用酒精擦台面，紫外照20分！2. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
4. 提取组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）。
5. 注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。
6. 操作时一定按照实验室的要求，切忌粗心大意。
7. 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。
二、常见的细胞培养污染：下面是几种细胞培养过程中常见的污染：1. 支原体污染：传说中的黑焦虫，长得暴快。
24小时就满视野都是了。
污染源大多数情况下是培养用血清。
图1 支原体污染的光镜检测（圆圈所示，×10倍）图2 支原体污染的光镜检测（×20倍）图3 支原体污染的荧光检测图4 支原体污染的电镜检测（×30k，煎蛋状和其他形状）图5 支原体污染的电镜检测2. 念珠菌污染：似乎无处不在，而且顽固得很。
长得暴快（12h就能在细胞上面密布）。
培养液澄清。
低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。
图6 念珠菌污染的光镜检测（低倍镜）图7 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图8 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图9 念珠菌污染的检测（革兰氏染色阳性）这么大面积的污染，你可以看看是不是操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。
支原体感染危害及预防PPT
支原体感染的卫生 - 经常洗手，特别是在接触公共
场所后。 - 不挖鼻子，避免用手接触眼睛
、口鼻等易感染部位。
支原体感染的预防
预防方法二：注意环境卫生 - 室内通风保持良好，避免
空气污染。 - 定期清洁、消毒常用物品
和环境，减少病原体传播。
支原体感染的预防
预防方法三：正确使用避孕措 施
- 使用安全的避孕方法，减 少性传播感染的可能性。
- 定期进行性传播感染的筛 查和医学检测。
总结
总结
支原体感染危害广泛，但通过 正确的预防措施可以减少感染 风险。
保持个人卫生、注意环境卫生 以及正确使用避孕措施是有效 预防支原体感染的关键。
总结
我们每个人都应积极参与预防工作 ，共同构建健康的社会环境。
谢谢您的 观赏聆听
喉咙痛等呼吸系统疾病的发生 。
- 长期慢性感染可能引发支 气管炎、肺炎等严重疾病。
支原体感染的危害
危害二：影响生殖健康 - 支原体感染可引起女性盆
腔炎症，造成不孕、流产等问 题。
- 对男性而言，感染可导致 睾丸炎症，影响生育健康。
支原体感染的危害
危害三：导致眼部感染 - 如果支原体感染扩散至眼
部，可能引起结膜炎、角膜炎 等问题。
支原体感染危 害及预防PPT
目录 引言 支原体感染的危害 支原体感染的预防 总结
引言
引言
支原体感染是一种常见的传染病， 引起了广泛的关注。 本PPT旨在介绍支原体感染的危害 以及预防措施，以增加大家的认识 和防护意识。
支原体感染的 危害
支原体感染的危害
危害一：引发呼吸系统疾病 - 支原体感染可导致咳嗽、
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细胞支原体污染的图片、危害、表现和怎么办（2016年10月16日）一、细胞支原体污染的图片我们首先来认识一下，细胞支原体污染与非污染的图片有什么区别。
如上图所示，左侧为未经支原体清除试剂处理的人Hela细胞,经DAPI染色后，除了细胞核为蓝色外，细胞质也有大量的絮状核酸物质被染成蓝色，这些处于细胞质的核酸物质就是支原体DNA，说明细胞支原体污染非常严重。
而右侧为经过本公司的支原体清除试剂2处理7天的Hela细胞，经DAPI 染色后，除了细胞核为蓝色外，细胞质没有任何絮状核酸物质被染成蓝色，说明支原体已经被清除。
（版权声明：上图来自上海易色医疗科技有限公司网站。
）二、细胞支原体污染的危害和表现细胞支原体污染的危害（1）培养的细胞被支原体污染后，几乎可以改变细胞的所有功能，其可以导致细胞染色体的异常和损伤，改变细胞的代谢、生长、形状、附着，影响病毒的扩增能力和产量等等。
例如，Miller CJ等人通过Microarray的研究表明：支原体污染严重改变被污染细胞的基因表达谱 [1, 2]，支原体污染后与无污染的同一细胞系相比，表达差异达2倍以上的基因就有200多个！！！（详细数据请见参考文献1）。
Edward Burnett 和 Liz Penn认为：被支原体污染的细胞系已经不是原来的细胞系，而是另外一个细胞系了 [3]！此外，严重的支原体污染将彻底摧毁一株细胞系。
从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。
相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。
总之，在细胞系上进行生物医学方面的科学研究，如果不能保证所用的细胞系无支原体污染（Mycoplasma-free），则所得出的结论是极端不可靠甚至是完全错误的！可以想象：全球范围内，每年因支原体污染导致白白浪费的科研经费的数量是多么的巨大，有人估计至少高达数十亿美金！细胞支原体污染的危害（2）1. 细胞生物学：支原体污染将直接导致最常用的MTT细胞毒性实验结果的严重错误！●结果：由于支原体对MTT的额外还原作用，对阿霉素（Doxorubicin, 一种抗肿瘤药物）的抗性，支原体污染和非污染的细胞二者相差15倍！（Due to an additional reduction of tetrazolium by mycoplasmas, contaminated cells appeared up to 15 fold resistant to doxorubicin.）●参考文献：Falsification of tetrazolium dye (MTT) based cytotoxicity assayresults due to mycoplasma contamination of cell cultures. Anticancer Res. 1999 Mar-Apr; 19(2A):1245-8.2. 免疫学：支原体污染本身将可以直接诱导树突状细胞的成熟！这对于目前国内外普遍开展的人体免疫细胞的肿瘤治疗将是灾难性的。
●结果：（1）The capacity of these cell lines to induce DC maturation was due totheir contamination by mycoplasma. Our results reveal that DC are able to sense mycoplasma infection and mature as they do in response to most viruses and bacteria.（2）Further investigation demonstrated that the changes in DC phenotype and functions were due to the presence of mycoplasmas in these two cell lines;eradication of mycoplasmas completely abolished the observed effects, and importantly, pure mycoplasmas in the absence of tumor cell supernatants were able to produce the same effects.●参考文献：（1）Dendritic cell maturation is induced by mycoplasma infection butnot by necrotic cells. Eur. J. Immunol. 2000.30: 705–708。
（2）Mycoplasma-mediated alterations of in vitro generation and functions of human dendritic cells. J Biomed Sci. 2005;12(1):31-46.3. 神经生物学：支原体污染本身可以直接降解淀粉样多肽Amyloid-beta (Abeta)！●结果：These data show that mycoplasmas degrade Abeta and thus may represent asignificant source of variability when comparing extracellular Abeta levels in different cell lines.●参考文献：（1）Amyloid-beta peptide degradation in cell cultures by mycoplasmacontaminants. BMC Res Notes. 2008 Jun 30;1:38.（2）Neuroprotective effects of Mycoplasma hyorhinis against amyloid-β-peptide toxicity in SH-SY5Y human neuroblastoma cells are mediated by calpastatinupregulation in the mycoplasma-infected cells. Neurochem Int. 2011 Mar;58(4):497-503.4. 生物化学：支原体污染可以直接影响L-arginine的代谢！●结果：This demonstrates that infection with M. hyorhinis leads to different effectson gene regulation of the murine and human iNOS gene. Our study underlines the importance of routine checking of cell cultures for mycoplasma contamination, particularly in studies on NO-mediated effects or inflammatory processes.●参考文献: Impact of Mycoplasma hyorhinis infection on L-arginine metabolism:differential regulation of the human and murine iNOS gene. Biol Chem. 2005 Oct;386(10):1055-63.5. 病理学：支原体污染可以直接刺激前列腺素E2（Prostaglandin E2）的产生！●结果：Mycoplasma fermentans (MF) also stimulated PGE(2) production. Theco-infection of mycoplasma and Chlamydia resulted in an additive effect in the production of PGE(2). Thus it is important to use host cells and Chlamydia free of mycoplasma contamination for the analysis of Chlamydia-induced prostaglandin production.●参考文献:Production of prostaglandin E2 in monocytes stimulated in vitro byChlamydia trachomatis, Chlamydophilapneumoniae, and Mycoplasma fermentans. MicrobPathog. 2004 Sep;37(3):155-61.三、细胞支原体污染的比例据Corning公司报道，世界各国的细胞系都有不同程度的支原体污染,可以说支原体污染是细胞培养领域的一个世界性问题 [4]。
表1是美国ATCC、FDA、以及其他两家细胞检测机构的支原体污染统计数据。
表2是世界各国的细胞系污染比例。
目前，世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。
表1，细胞支原体污染统计结果，数据来自参考文献 [4]参考文献：1. Miller CJ, Kassem HS, Pepper SD, Hey Y, Ward TH, Margison GP.Mycoplasma infection significantly alters microarray gene expression profiles.Biotechniques. 2003 Oct;35(4):812-4.2. Aldecoa-Otalora E, Langdon W, Cunningham P, Arno MJ. Unexpected presenceof mycoplasma probes on human microarrays. Biotechniques. 2009 Dec;47(6):1013-5.3. Edward Burnett and Liz Penn, European Collection of Cell Culture(ECACC®). Mycoplasma Detection and Elimination. Don Finley, Market Segment Manager, Sigma® Life Science. Biofiles, Vol. 8, No. 184. John Ryan (2008). "Understanding and Managing Cell Culture Contamination".Corning Incorporated. p. 24.四、细胞支原体污染怎么处理发现培养的细胞被支原体污染，将污染的细胞高压蒸汽灭菌，然后丢弃是最好的选择，这样可以避免细胞的交叉污染。