实验3植物叶片活细胞和叶绿体的分离提取及观察
叶绿体色素的提取与分离、理化性质及含量测定 3
叶绿体色素提取分离与理化性质及含量测定▪（一）实验目的及意义▪（二）实验原理▪（三）实验步骤▪（四）实验报告实验目的和意义▪绿色植物的光合作用是在叶绿体中的叶绿体色素中进行的，了解叶绿体色素的组成、性质及测定对于理解光合作用的本质很有帮助。
▪因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在作物育种、科学施肥、看叶诊断中有着广泛的应用叶绿体在细胞中运动视频叶绿体在细胞中的分布与结构类囊体膜的结构及功能实验原理植物叶绿体色素是吸收太阳光能，进行光合作用的重要物质。
它一般由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
实验原理▪色素分离的方法有多种，纸层析是最简便的一种。
当溶剂（有机推动剂）不断从纸上流过时，由于混合物（叶绿素提取液）中各种成分在固定相（滤纸纤维素所吸附的水分）和流动相（有机推动剂）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。
▪叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。
实验原理▪叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。
叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。
叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。
▪叶绿素中的镁可以被氢离子所取代而成褐色的去镁叶绿素。
去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。
实验步骤(1)▪根据朗伯一比尔定律，某有色溶液的吸光度D与其中溶液浓度C和液层厚度L成正比，即：▪D＝KCL▪D：吸光度，即吸收光的量，C：溶液浓度, K：为比吸收系数（吸光系数），L：液层厚度，通常为1cm.▪如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
实验三 叶绿体色素的提取、分离和性质分析
五、注意事项
分离色素用的圆形滤纸， 分离色素用的圆形滤纸，在中心打 的小圆孔，周围必须整齐， 的小圆孔，周围必须整齐，否则分 离的色素不是一个同心圆。 离的色素不是一个同心圆。
每次改变波长后，要用 每次改变波长后，要用95%乙醇重新调 乙醇重新调 零。
六、实验结果
画图说明叶绿体色素纸层析结果， 画图说明叶绿体色素纸层析结果，并解 释原因。 释原因。 解释叶绿素的荧光现象。 解释叶绿素的荧光现象。 解释光对叶绿素的破坏作用现象。 解释光对叶绿素的破坏作用现象。 解释叶绿体色素分子的替代作用现象。 解释叶绿体色素分子的替代作用现象。
实验五 叶绿体色素的提取、 叶绿体色素的提取、分离及性质
一、实验目的
掌握叶绿体色素的提取方法； 掌握叶绿体色素的提取方法； 掌握纸层析法分离叶绿体色素的原 理和步骤； 理和步骤； 掌握叶绿体色素的部分理化性质。 掌握叶绿体色素的部分理化性质。
二、实验原理
（一）叶绿体色素： 叶绿体色素： 叶绿素a 叶绿素a 1.叶绿素 叶绿素 叶绿素b 叶绿素b
新鲜的菠菜叶片。 新鲜的菠菜叶片。 95%乙醇 、CaCO3、醋酸铜结晶、浓 乙醇 醋酸铜结晶、 盐酸、汽油。 盐酸、汽油。 量筒，滤纸，大培养皿一只， 量筒，滤纸，大培养皿一只，小培养皿 一只，长滴管，剪刀。 一只，长滴管，剪刀。
四、实验步骤
1、 叶绿体色素提取： 、 叶绿体色素提取： 将菠菜叶片擦净， 剪碎， 将菠菜叶片擦净，去中脉后取 10g剪碎，加少许碳酸钙和石英砂， 擦净 剪碎 加少许碳酸钙和石英砂， 再分次加入 分次加入10mL酒精研磨，过滤，定容至50ml，分装于4个试管内。 酒精研磨，过滤，定容至 ，分装于 个试管内。 加入 酒精研磨 个试管内
标明各层成 分名称和判 断依据。
植物细胞分离实验报告
植物细胞分离实验报告实验目的本次实验的主要目的是通过采用玫瑰叶片作为实验材料，利用质外提取法和细胞外提取法，分离植物细胞，并观察植物细胞的结构。
实验材料和仪器- 材料：新鲜的玫瑰叶片、无菌蒸馏水、乙醇、碘酒- 仪器：显微镜、离心机、试管、移液管、玻璃片实验步骤步骤一：质外提取法1. 取一片新鲜的玫瑰叶片，用无菌蒸馏水将其冲洗干净。
2. 将玫瑰叶片切碎，并放入一个试管中，加入少量无菌蒸馏水。
3. 使用活力纤维素酶溶液，将玫瑰叶片浸泡在37C恒温水浴中，保持30分钟。
4. 轻轻倒出试管中的溶液，用离心机以3000转/分钟的速度离心5分钟。
5. 去除上层液体，用无菌蒸馏水洗涤沉淀3次。
6. 加入碘酒，用显微镜观察沉淀中细胞的结构。
步骤二：细胞外提取法1. 取一片新鲜的玫瑰叶片，用无菌蒸馏水将其冲洗干净。
2. 将玫瑰叶片切碎，并放入一个试管中，加入少量无菌蒸馏水。
3. 使用活力纤维素酶溶液，将玫瑰叶片浸泡在37C恒温水浴中，保持30分钟。
4. 轻轻倒出试管中的溶液，用离心机以3000转/分钟的速度离心5分钟。
5. 去除上层液体，将沉淀转移到一片干净的玻璃片上。
6. 用显微镜观察细胞的结构。
实验结果与观察经过质外提取法处理的玫瑰叶片样品，在显微镜下观察到细胞壁、细胞质和细胞核等结构清晰可见。
细胞壁呈现为一层薄而均匀的透明物质，细胞质内含有大量的细胞器，如叶绿体、线粒体等。
细胞核位于细胞质中心，呈现圆形或椭圆形，内含有染色体等成分。
而经过细胞外提取法处理的玫瑰叶片样品，则观察到了仅有细胞质的结构。
细胞壁被溶解，细胞质内的细胞器呈现出更为明显的特征，如叶绿体的绿色色素和线粒体的椭圆形结构。
实验分析与讨论通过本次实验，我们成功地利用质外提取法和细胞外提取法，分离了玫瑰叶片中的植物细胞，并观察到了它们的结构特征。
在质外提取法中，我们使用活力纤维素酶溶液将细胞壁溶解，使细胞质得以完整地保留。
这样可以更直接地观察到细胞质中的细胞器结构，并通过观察细胞核的位置和形态，了解细胞的生长状态和分裂能力。
叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定
植物生理学实验报告实验题目：叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定姓名班级学号一、实验原理和目的目的：1.练习叶绿素提取和分离的方法2.进一步了解叶绿素色素成分提取、分离原理：1、溶解性。
叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取2、吸附性。
滤纸对Chlb、Chla、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。
二、实验器具和步骤材料:新鲜植物叶片器具：研钵一个，漏斗一个，刻度试管两支，剪刀一把，长滴管一个，培养皿(直径9cm)一个，圆形滤纸（11cm和7cm)各一张，滤纸条一张试剂：95%乙醇，石油醚步骤：1.色素提取（乙醇粗提液）a.取新鲜叶片洗净擦干，去中脉称1g左右剪碎于研钵b.研钵中加3-5ml95%乙醇研磨成匀浆过滤于刻度试管残渣用少许乙醇冲洗一并过滤定容至10ml2.荧光观察将乙醇提取液试管放于太阳光下观察反射光和透射光下的颜色现象：透射光下呈绿色，反射光下呈红色为叶绿素荧光3.色素萃取（石油醚提取液）取乙醇提取液5ml与另一支试管加2ml石油醚摇荡静止片刻上层深绿色为石油醚提取液4.色素分离a.将（11cm)圆滤纸中间剪一小圆孔取滤纸条捻成紧实芯一端插入圆滤纸中心（孔缘与纸芯紧贴且露出少许，最好相平）用长滴管吸少许石油醚提取液滴于纸芯上端待风干后再滴加几次b.将盛有石油醚的内盖（不要过满）放于培养皿中央将插上纸芯的滤纸放在培养皿上纸芯下端浸入石油醚迅速盖好培养皿。
c.推动剂前缘接近滤纸边缘时取出滤纸，风干可见分离色带，用铅笔标出各种色素位置和名称三、实验数据和作业四、数据分析研磨叶片不充分，提取的叶绿体色素溶液浓度稀，荧光现象不明显分离色带较少的原因：提取的叶绿素的浓度稀胡萝卜素叶黄素。
叶绿体色素的提取、分离及含量测定
叶绿体色素的提取、分离及含量测定实验目的叶绿素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重要组分，约占到叶绿体色素总量的75%左右。
叶绿素在光合作用中起到吸收光能、传递光能的作用(少量的叶绿素a还具有光能转换的作用)，因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关，在一定范围内，光合速率随叶绿素含量的增加而升高。
另外，叶绿素的含量是植物生长状态的一个反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低温、大气污染、元素缺乏都可以影响叶绿素的含量与组成，并因之影响植物的光合速率。
因此叶绿素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的光合生理与逆境生理具有重要意义。
实验原理从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
纸层析是其中最简单的一种。
当溶剂不断地从层析滤纸上流过时，由于混合色素中各种成分在两相(即流动相和固定相)间具有不同的分配系数，它们的移动速度不同，使样品中的各种成分得到分离。
强光可以破坏离体的叶绿素，因为植物体内本来有还原酶，可以破坏光产生的强氧化物质。
而离体的叶绿素提取液中不含有还原酶，光产生的强氧化物质会破坏叶绿素。
叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b，二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定在663nm和645nm（分别是叶绿素a和叶绿素b在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和叶绿素b的浓度。
A663=82.04Ca+9.27Cb（1）A645=16.75Ca+45.60Cb（2）公式中Ca为叶绿素a的浓度，Cb为叶绿素b浓度（单位为g/L），82.04和9.27分别是叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸收系数（浓度为1g/L，光路宽度为1cm时的吸光度值）；16.75和45.60分别是叶绿素a和叶绿素b在645nm下的比吸收系数。
实验三 叶绿体的分离、提取、观察
实验三叶绿体的分离、提取、观察2011.03.23班级：姓名：一．试验目的1．学习使用差速离心方法分离获取叶绿体。
2．理解叶绿体的分离与保存环境。
3．叶绿体的形态观察、测量、叶绿体悬液的荧光现象观察。
二．实验原理1．叶绿体是植物叶肉细胞内重要的细胞器，是植物光合作用的场所。
分离提取得到的活体叶绿体，既能进行光合作用速率测定，也能进行叶绿体色素的分离提取。
2．差速离心法常用于获取细胞中的某一物质，其原理是在一定转速条件下，不同密度大小的物质沉降速度不一样，最终使有密度差异的物质得以分离。
三．实验用具1．材料与试剂：菠菜叶、0.35mol/L NaCL、95%乙醇、石英砂。
2．器具：离心机、天平、量筒、研钵、玻棒、纱布等四．实验步骤1．选用生长健壮的菠菜叶片洗净后去除中脉，然后放入0—4 ℃冰箱或冰瓶中预冷。
2．取叶片经滤纸吸干水后，称取5g剪成碎片，于10—15 mL0.35mol/L氯化钠溶液中，置于研钵中，加少量石英砂，手工快速研磨，(注意不要用力过猛，也不必研磨过细)。
3．研磨后将匀浆用2层新纱布过滤，滤液盛于烧杯中。
4．将滤液装入预冷过的离心管，经天平平衡后，以1200r/min离心2min，弃去沉淀。
5．上清液再经3000 r/min离心5 min ，倾去上清液，沉淀即为叶绿体。
6．沉淀用2 mL 0.35mol/L氯化钠溶液悬浮，备用。
7．用滴管取少量悬浮液于载玻片上，加盖玻片后，吸水纸吸去多余的溶液，置显微镜下镜检观察。
可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。
测量叶绿体的长轴和短轴，分别测量5~10个叶绿体，求其平均值。
8．称取叶片5g剪成碎片，加10—15 mL95%乙醇及少量石英砂，于研钵中快速研磨，然后2层纱布过滤，取滤液，将其装入离心管，以2500r/min离心3min，收集上清液于试管中。
9．叶绿体荧光现象的观察：用强的柱状光源照射盛装叶绿素提取液的试管，然后顺着光源方向观察提取液颜色，并和对着光管观察是的情况进行比较。
植物生理学实验报告叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定
植物生理学实验报告叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定引言：叶绿体是植物细胞中的一个重要细胞器，其中主要存在着叶绿素等色素，它们在光合作用中起着重要的作用。
研究叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定，对于了解光合作用的机理以及研究植物生理生化过程具有重要意义。
本实验旨在通过实验手段提取叶绿体色素，进行色素的分离、理化性质的研究和叶绿素含量的测定。
材料与方法：材料：菠菜叶片、研钵、磨杵、丙酮、乙醇、石油醚、叶绿素提取液、测色皿、高锰酸钾溶液、浓硫酸。
方法：1.取适量菠菜叶片放入研钵中，加入适量丙酮，用磨杵捣碎成糊状。
2.将捣碎的菠菜糊状物转移到玻璃漏斗中，用石油醚冲洗3次，使叶绿体附着物进一步析出。
3.将漏斗中的上清液收集，并加入适量乙醇，振摇混合，使叶绿素慢慢析出。
4.将释放出的叶绿体颗粒通过离心机离心沉淀10分钟，收集沉淀。
5.取收集到的叶绿体沉淀，加入适量叶绿素提取液，用乳钙酸钠解离剂进行叶绿素含量的测定。
6.将其中一部分叶绿体溶液加入高锰酸钾溶液，观察颜色变化。
7.将其余叶绿体溶液与浓硫酸混合，观察颜色变化。
结果与讨论：通过上述方法，我们成功地提取并分离出菠菜叶片中的叶绿体色素。
加入石油醚可以去除一部分杂质，使叶绿体进一步纯化。
加入乙醇可以使叶绿素从叶绿体中溶出。
通过离心沉淀，我们收集到了叶绿体的沉淀物。
叶绿体的提取液与高锰酸钾溶液反应后呈现蓝色或紫色，这是由于高锰酸钾通过氧化反应将一些具有现菌酮结构的物质氧化为合成叶绿素的前体物质所引起的。
这种反应也证实了叶绿体的存在。
叶绿体溶液与浓硫酸混合后呈现蓝绿色，这是由于浓硫酸通过剥离叶绿体周围的蛋白质和其他有机物质，将叶绿素分子释放出来，产生颜色变化。
叶绿素的含量测定是通过与乳钙酸钠解离剂反应来进行的。
乳钙酸钠解离剂能够与叶绿体中的叶绿素结合，并形成稳定的叶绿素-乳钙酸钠络合物。
这种络合物通过光密度的测定，可以根据比色法来测量叶绿素的含量。
叶绿体的分离实验报告
一、实验目的1. 学习叶绿体的分离方法。
2. 观察叶绿体的形态和结构。
3. 了解叶绿体在植物细胞中的分布。
二、实验原理叶绿体是植物细胞中进行光合作用的细胞器，主要分布在植物的叶片细胞中。
叶绿体含有叶绿素等色素，能够吸收光能并将其转化为化学能。
本实验通过研磨植物叶片，利用叶绿体在水中溶解度低、在丙酮中溶解度高的特性，将叶绿体从细胞中分离出来。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如菠菜叶）。
2. 实验仪器：研钵、研杵、蒸馏水、丙酮、载玻片、盖玻片、显微镜、酒精灯、镊子等。
四、实验步骤1. 取新鲜植物叶片，用剪刀剪成小块。
2. 将叶片放入研钵中，加入适量蒸馏水。
3. 用研杵充分研磨叶片，使细胞破裂，叶绿体释放出来。
4. 将研磨液过滤，去除叶片碎片。
5. 取少量过滤液，加入等体积的丙酮，充分混合。
6. 静置一段时间，待叶绿体在丙酮中沉淀。
7. 用镊子取出沉淀，滴在载玻片上。
8. 将载玻片放在显微镜下观察叶绿体的形态和结构。
五、实验结果与分析1. 观察到载玻片上的叶绿体呈绿色，呈扁平的椭球形或球形。
2. 叶绿体在显微镜下具有明显的网状结构，其中包含类囊体、叶绿素等成分。
3. 通过比较实验前后叶绿体的形态和结构，可以判断叶绿体在植物细胞中的分布。
六、实验讨论1. 实验过程中，为什么加入丙酮可以使叶绿体沉淀？答：叶绿体在水中溶解度低，在丙酮中溶解度高，加入丙酮可以使叶绿体从溶液中沉淀出来。
2. 实验过程中，为什么研磨叶片时需要加入蒸馏水？答：蒸馏水可以破坏细胞结构，使叶绿体释放出来，同时保持实验液的清洁。
3. 实验过程中，为什么需要过滤研磨液？答：过滤可以去除叶片碎片，保证实验结果的准确性。
4. 实验过程中，为什么需要观察叶绿体的形态和结构？答：通过观察叶绿体的形态和结构，可以了解叶绿体的基本特征，进一步了解其在植物细胞中的分布和功能。
七、实验结论本实验成功分离出植物叶片中的叶绿体，并观察到叶绿体的形态和结构。
叶绿体特征研究实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解叶绿体的基本结构、功能和生理特性。
2. 掌握叶绿体色素的提取、分离和鉴定方法。
3. 学习使用显微镜观察叶绿体的形态和分布。
二、实验原理叶绿体是植物细胞中的一种重要细胞器，负责光合作用，将光能转化为化学能，为植物生长提供能量。
叶绿体主要由类囊体、基质和基质蛋白组成，其中类囊体是光合作用的主要场所。
叶绿体中含有多种色素，如叶绿素、类胡萝卜素等，这些色素对光的吸收和传递起着重要作用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如菠菜、甘蓝等）、酒精、碳酸钙、石英砂、蒸馏水、滤纸、剪刀、研钵、漏斗、三角瓶、烧杯、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管等。
2. 实验仪器：显微镜、研钵、漏斗、三角瓶、烧杯、剪刀、研钵、滤纸、载玻片、盖玻片、滴管等。
四、实验步骤1. 叶绿体色素的提取与分离（1）取新鲜植物叶片1克，洗净、擦干，去掉中脉，剪碎，放入研钵中。
（2）加入少量石英砂、碳酸钙粉和2-3 mL 95%乙醇，研磨至糊状。
（3）再加入2-3 mL 95%乙醇，继续研磨，直至形成均匀的糊状物。
（4）将糊状物倒入漏斗中，用滤纸过滤，收集滤液。
（5）将滤液倒入三角瓶中，加入少量碳酸钙粉，充分搅拌，静置一段时间。
（6）取少量滤液，滴在滤纸上，用铅笔轻轻画出滤液滴的形状，作为色素带的标记。
2. 叶绿体色素的鉴定（1）观察滤纸上的色素带，记录各色素带的颜色、宽度和位置。
（2）将滤纸上的色素带与标准色素带进行对比，确定各色素带的成分。
3. 叶绿体的观察（1）取新鲜植物叶片，制作临时装片。
（2）将装片置于显微镜下，观察叶绿体的形态、大小、分布和数量。
五、实验结果与分析1. 叶绿体色素的提取与分离实验中，从新鲜植物叶片中成功提取了叶绿体色素，并分离出叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素等色素。
2. 叶绿体色素的鉴定通过观察滤纸上的色素带，并与标准色素带进行对比，确定各色素带的成分。
实验结果与理论相符。
3. 叶绿体的观察在显微镜下观察到叶绿体呈椭球状，分布在细胞质基质中，数量较多。
实验3叶绿体色素的提取、分离及理化性质的测定
实验3叶绿体⾊素的提取、分离及理化性质的测定实验三叶绿体⾊素的提取、分离及理化性质的测定【实验原理】叶绿体⾊素⼜称光合⾊素，在⾼等植物中可分为叶绿素和类胡萝⼘素两⼤类，前者包括叶绿素a（蓝绿⾊）和叶绿素b（黄绿⾊），后们类囊体膜上的蛋者包括胡萝⼘素（橙⾊）和叶黄素（黄⾊），它与⽩质结合形成⾊素蛋⽩复合体，不溶于⽔，易溶于酯，因此可⽤丙酮、⼄醇、⽯油醚等有机溶剂进⾏提取。
叶绿体⾊素的分离有多种⽅法，本实验仅介绍纸层析法。
层析的基本原理：在分离过程中，由⼀种流动相（即⼀种液体或⽓体）带动着试样经过固定相（⼀种⽀持物，如纸）向外扩散，由于试样在两相中的溶解度不同和固定相对试样中不同成分的吸附程度有别，当⽤适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过⼀定时间层析后，可使试样中的各种组分得到分离，在做纸层析时，由于纸对光合⾊素中各种⾊素分⼦的吸附程度不同，以及这些⾊素分⼦在溶剂四氯化碳（推进剂）中溶解度也有差异，以致溶剂带动⾊素分⼦向四周移动时，各种⾊素分⼦沿纸扩散的速度也就不同，使混合⾊素分离，出现不同颜⾊的环。
将提取的叶绿素溶液置于光下，在透射光呈绿⾊，在反射光下呈这现象称为荧光现象。
在反射光下叶绿素溶液之所以呈樱桃红⾊，种发态，激发态的叶樱桃红⾊，是因为叶绿⾊分⼦吸收光能后处于激状绿素分⼦很不稳定，当它回到基态时，将所获得的能量以辐射能的形式发射出红光量⼦。
叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光、⾼温等的破坏，特别是当叶绿素与蛋⽩质分离以后，破坏更快，⽽类胡萝⼘素则较稳定。
叶绿素中的镁可以被H＋所取代⽽成褐⾊的去镁叶绿素，后者遇铜后，其中的氢（H＋）⼜被铜（Cu2＋）取代，形成了铜代叶绿素，便由褐⾊转变成蓝绿⾊，铜代叶绿素很稳定，且⽐原来的绿⾊还要稳定些，在光下也不易被破坏。
设备试剂】【材料、与1. 材料新鲜的菠菜或⼩⽩菜等其他绿⾊植物叶⽚。
2. 设备电⼦天平、研钵、烧杯、量筒、培养⽫、刻度试管、试管夹、试管架、酒精灯、剪⼑、圆形滤纸、⼩漏⽃等。
叶绿体的分离纯化及荧光观察
叶绿体的分离纯化及荧光观察叶绿体是植物细胞中的一种细胞器，它是进行光合作用的主要场所。
叶绿体具有一定的自复制能力，可以独立分离出来，纯化叶绿体样品可以方便地进行进一步的实验研究。
本文将详细介绍叶绿体的分离、纯化以及荧光观察的方法。
一、叶绿体的分离1.实验材料准备为了分离叶绿体，我们需要充足的植物组织样品。
可以选择新鲜的叶片或者细胞培养物作为实验材料。
同时，需要准备好一系列试剂，例如缓冲液、葡萄糖、EDTA、PEG等。
2.组织破碎和提取液的准备首先，将植物组织样品冷冻在液态氮中，然后用超声波处理器将样品破碎。
接下来，将破碎的样品用缓冲液溶解，加入适量的葡萄糖和EDTA。
将溶解后的样品在低温条件下离心，然后取出上清液。
3.叶绿体的沉淀将提取液中的上清液用PEG逐渐沉淀叶绿体。
首先加入PEG溶液，并轻轻搅拌。
然后，将样品在低温条件下离心，离心后会出现一个绿色的沉淀。
这个沉淀就是叶绿体。
4.叶绿体的洗涤和纯化将叶绿体的沉淀用缓冲液洗涤数次，然后用离心将叶绿体沉淀下来。
最后，将沉淀的叶绿体用缓冲液悬浮，即可得到纯化的叶绿体样品。
二、叶绿体的荧光观察1.荧光探针的准备为了观察叶绿体的荧光，我们需要准备好合适的荧光探针。
通常使用的探针有二苯基苯酚（DPBF）和二聚(4-乙基-5-（4-甲基吡啶氧基）-2-溴脱氧葡萄糖（DAB）等。
2.荧光探针的添加将纯化的叶绿体置于含有荧光探针的溶液中，静置一段时间。
荧光探针会与叶绿体中的一些分子发生作用，从而产生荧光。
3.荧光观察使用荧光显微镜观察叶绿体的荧光。
将样品放置于荧光显微镜下，设置合适的激发波长和观察波长。
然后观察荧光显微镜中的图像，即可看到叶绿体的荧光。
4.结果分析通过观察叶绿体的荧光，可以得到关于叶绿体活性和光合作用效率的信息。
例如，如果观察到荧光强度较高，可以推测叶绿体的光合作用效率较低。
总结：叶绿体的分离、纯化及荧光观察是研究植物生物学和光合作用的重要方法之一、通过正确的操作流程和合适的实验材料，可以得到纯化的叶绿体样品，并通过荧光观察了解叶绿体的活性和光合作用效率。
实验一：叶绿体的提取和荧光观察
叶绿体的提取和荧光观察一、实验目的：1. 学习分离制备叶绿体的方法，了解制备细胞器的一般程序，观察光镜下叶绿体的形态。
2. 学习和掌握离心机的原理和基本使用方法。
3. 学习荧光显微镜的使用方法及其应用。
二、实验原理及分析：细胞器分离的过程包括两个主要阶段：破碎细胞和细胞组分的分离。
细胞内各种结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同介质和不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。
在等渗溶液中进行组织匀浆、分离，叶绿体的分离采用差速离心或密度梯度离心法进行。
荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观察的一种技术。
某些物质在—定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
三、实验材料：菠菜叶片四、实验步骤：1. 菠菜叶片洗净吸干。
称取20克，剪成小块；加入40ml完全介质，在研钵中充分研磨。
2.浆状物用双层纱布过滤；3. 汁液置于离心管中，1100 rpm(200g)离心5Min；4. 弃去沉淀，取上清液1900 rpm(600g)离心12Min；5. 弃去上清液，沉淀加入15ml A液，轻轻吹打悬浮；6. 悬浮液600g离心12Min；7. 弃去上清液，取沉淀，悬浮于A液中；8.普通光学显微镜下观察；9. 荧光显微镜下观察1〕荧光镜下紫外直接观察；2〕滴加吖啶橙后观察五、实验结果及分析：在普通显微镜下，叶绿体呈现出绿色椭球形，为正常结构。
可能因为差速离心得到的样品不纯，还观察到一些组织碎片。
叶绿体分离的实验报告
一、实验目的1. 了解叶绿体的基本结构和功能。
2. 掌握叶绿体分离的方法和原理。
3. 通过实验观察叶绿体的形态和大小，分析其生理活性。
二、实验原理叶绿体是植物细胞中进行光合作用的重要细胞器，其主要功能是吸收光能，将光能转化为化学能，并储存于有机物中。
叶绿体呈椭球形或球形，具有双层膜结构，内部含有类囊体和基质。
本实验采用差速离心法分离叶绿体，通过调整离心速度和离心时间，使不同大小的叶绿体分别沉淀下来。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶片2. 仪器：高速离心机、研钵、移液器、显微镜、载玻片、盖玻片、滤纸、吸水纸、蒸馏水、无水乙醇、丙酮、碳酸钙、碘液四、实验步骤1. 叶绿体提取（1）取新鲜菠菜叶片，用蒸馏水洗净，晾干。
（2）将叶片剪碎，放入研钵中，加入少量碳酸钙粉末和适量蒸馏水。
（3）研磨叶片，直至叶片完全破碎。
（4）用纱布过滤提取液，收集滤液。
2. 叶绿体分离（1）将滤液转移至离心管中，用无水乙醇和丙酮混合液（体积比1:1）调整滤液pH值至7.0。
（2）将离心管置于高速离心机中，以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
（3）将上清液转移至另一离心管中，以5000r/min离心15分钟，收集沉淀。
（4）将沉淀用少量蒸馏水重悬，再次以5000r/min离心15分钟，收集沉淀。
3. 叶绿体观察（1）将收集到的叶绿体沉淀用载玻片覆盖，滴加碘液，轻轻压平。
（2）用显微镜观察叶绿体的形态和大小。
五、实验结果与分析1. 叶绿体形态和大小通过显微镜观察，发现分离得到的叶绿体呈椭球形或球形，大小不一，直径约2-5微米。
2. 叶绿体生理活性通过观察叶绿体在碘液中的颜色变化，发现叶绿体呈绿色，说明其具有光合作用的相关生理活性。
六、实验讨论1. 本实验中，叶绿体分离过程中可能会受到细胞碎片和杂质的影响，影响实验结果的准确性。
因此，在实验过程中应尽量减少细胞碎片和杂质的产生。
2. 叶绿体分离过程中，离心速度和离心时间的选择对实验结果有一定影响。
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验目的1. 掌握叶绿体色素的提取和分离方法；2. 了解叶绿体色素的成分和结构特点；3. 通过实验观察，加深对叶绿体结构和功能的理解。
实验原理叶绿体是植物细胞中的一种独特细胞器，因为其含有叶绿素而呈现绿色。
叶绿体是光合能量的主要场所，能够将光能转化为化学能，进而为生物体提供能量。
叶绿体中含有多种色素，如叶绿素、类胡萝卜素等。
其中，叶绿素是最重要的色素，其分子结构由一个类胡萝卜素环（porphyrin环）和一个酰基侧链（phytyl侧链）组成。
叶绿素在光合作用中起着重要的作用，它能够吸收光线，将光能转化为化学能，进而提供生物体所需的营养。
叶绿体中的色素可以通过酒精沉淀的方法进行提取和分离。
酒精沉淀方法是根据不同色素在不同酒精浓度下的溶解度差异来进行色素分离的。
在实验操作中，首先要将植物组织用液氮或手动研磨方法研磨成细碎的粉末，然后将其置于离心管中，加入一定比例的酒精，并放置在温水浴中摇匀，使颜料完全溶解。
接着，将混合液离心，待沉淀出现后将上层液体倒出，待沉淀干燥后即可得到色素提取物。
实验步骤1. 准备材料。
首先准备好新鲜的菠菜叶片、冰醋酸和95%酒精；2. 研磨植物组织。
将菠菜叶片用液氮或手动研磨器研磨成细碎的粉末；3. 加入酸性试剂。
将研磨后的菠菜叶片粉末加入1ml冰醋酸，使其均匀分散；4. 加入酒精。
向组织粉末中缓慢加入5ml 95%酒精，搅拌均匀；5. 离心。
将混合液置于离心管中，进行离心30分钟；6. 取上层液体。
取离心后上层液体，避免沉淀、残渣的干扰；7. 干燥。
将取出的上层液体放置在冷暗处自然晾干；8. 分析。
对干燥后得到的叶绿体色素进行观察和分析。
实验结果实验分析本次实验使用了经典的酒精沉淀法对叶绿体中的色素进行提取和分离。
酒精沉淀法是比较简单、有效的提取方法，但是在实验中需要注意操作细节，比如酒精的浓度需要控制好，否则会影响色素的分离效果。
叶绿体中的色素具有不同的波长吸收谱，通过对其吸收谱的分析，可以确定叶绿体中各种色素的相对量和种类组成。
叶绿体分离的实验报告
叶绿体分离的实验报告叶绿体分离的实验报告引言：叶绿体是植物细胞中的一种重要细胞器，其主要功能是进行光合作用，将光能转化为化学能，为植物提供能量。
叶绿体分离是一种常用的实验方法，通过分离叶绿体，可以更好地研究其结构和功能。
本实验旨在探究叶绿体分离的方法和步骤，并观察叶绿体的形态和特征。
材料与方法：1. 鲜嫩的植物叶片：本实验选择了菠菜叶片作为实验材料，因其叶绿体含量丰富。
2. 0.5% EDTA溶液：用于破坏叶片细胞壁，释放叶绿体。
3. 0.4 M 蔗糖溶液：用于制备蔗糖梯度离心液。
4. 离心管和离心机：用于离心分离叶绿体。
5. 高速离心管：用于收集纯化后的叶绿体。
实验步骤：1. 取一片新鲜的菠菜叶片，并用去离子水清洗干净，去除表面的杂质。
2. 将叶片切碎，放入离心管中，并加入适量的0.5% EDTA溶液。
3. 将离心管放入冰箱中静置20分钟，使叶绿体充分释放。
4. 取出离心管，用玻璃棒轻轻搅拌叶片，使细胞破裂，释放叶绿体。
5. 将离心管置于冰上，使用低速离心机以3000 rpm离心10分钟，沉淀下来的为叶绿体。
6. 将上清液倒掉，用去离子水洗涤沉淀2-3次，以去除杂质。
7. 加入适量的0.4 M 蔗糖溶液，将离心管置于高速离心机中，以12000 rpm离心20分钟，使叶绿体沉积在梯度液体中。
8. 将上清液倒掉，离心管内的梯度液体分为不同层次，叶绿体沉积在较低的层次中。
9. 使用移液管将叶绿体取出，放入高速离心管中。
10. 使用高速离心机以15000 rpm离心10分钟，将叶绿体沉淀下来。
11. 倒掉上清液，收集纯化后的叶绿体。
结果与讨论：通过本实验，我们成功地分离出了菠菜叶片中的叶绿体。
观察分离后的叶绿体，可以发现其呈现绿色，具有椭圆形状，大小约为2-5微米。
叶绿体在显微镜下呈现出明显的双膜结构，其中内膜形成了许多类似硬币的结构，称为类囊体。
类囊体中含有叶绿素，是进行光合作用的关键结构。
此外，叶绿体内还含有DNA和一些酶，用于合成光合作用所需的物质。
叶绿体的分离和观察实验报告 生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》
叶绿体的分离和观察实验报告生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》
一、实验目的
1.
学会提取和分离叶绿体中色素的方法。
2.
比较、观察叶绿体中四种色素：理解它们的特点及与光合作用的关系
二、实验原理
光合色素主要存在于高等植物叶绿体的基粒片层上，而叶绿体中的色素能溶于有机溶剂
中。
故要提取色素，要破坏细胞结构，破坏叶绿体膜，使基粒片层结构直接与有机溶剂接
触，使色素溶解在有机溶剂中。
叶绿体中的色素有四种，不同色素在层析液(脂溶性强的有机溶剂)中的溶解度不同，
因而随层析液的扩散速度也不同。
三、材料用具
取新鲜的绿色叶片、定性滤纸、烧杯、研钵、漏斗、纱布、剪刀、小试管、培养皿、毛细吸管、量筒、有机溶剂、层析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸钙。
四、实验过程（见书Ｐ54）
1.提取色素：
2.制备滤纸条：
3.色素分离，纸层析法。
（不要让滤液细线触及层析液）
4.观察：
层析后，取出滤纸，在通风处吹干。
观察滤纸条上出现色素带的数目、颜色、位置和宽窄。
结果是：4条色素带从上而下依次是：胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶绿素b(黄绿色)。
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五、讨论
1.滤纸条上的滤液细线为什么不能接触到层析液？
2．提取和分离叶绿体中色素的关键是什么？。
叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验报告
叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验目的：1、通过植物细胞叶绿体的分离与纯化，了解细胞器分离与纯化的原理和方法2、熟悉荧光显微镜的使用方法，观察叶绿体的自发荧光和间接荧光实验原理：差速离心法用于分离大小不同的物体。
在差速离心中细胞器沉降的顺序为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体、醉后为核糖核蛋白复合体。
密度梯度离心法是用一定的介质在离心管内形成连续的密度梯度，将细胞悬浮液或匀浆置于介质的顶部，通过离心力的作用使细胞或细胞器分层、分离，最后不同密度的细胞或细胞器位于与自身密度相同的沉降区带中。
叶绿体是一种比较大的细胞器，利用差速离心即可分离收集，然后用密度梯度离心纯化，便可用于各种研究。
实验用品：新鲜菠菜、提取缓冲液、蔗糖溶液、0.01%吖啶橙、离心机、电子天平、荧光显微镜、剪刀、研钵、移液管、漏斗、滴管、10ml离心管实验步骤：1、选取新鲜嫩绿菠菜叶，去叶梗及粗脉，洗净擦干，称30克放于150ml 0.35M.Nacl溶液中2、将液、叶同装入组织捣碎机中，匀浆3-5分钟，转速5000r/min3、将匀浆用纱布（6层）过滤于500ml烧杯中4、取滤液4ml在1000r/min下离心2min5、取上层清液在3000r/min下离心5min（沉淀为叶绿体和细胞核混合物）6、将沉淀用2-3mlMnacl液悬浮7、取一滴悬液滴片，加盖玻片后显微镜下观察8、另取一滴悬液滴片，再滴加一滴0.01%吖啶橙染料，混匀，盖上盖玻片，在荧光显微镜下观察实验结果：普通显微镜下，叶绿体呈橄榄形，绿色，高倍镜下可看到基粒（深绿色小颗粒）。
荧光显微镜下，叶绿体自发荧光为“火红色”，次生荧光为“橘红色”分析与讨论：1、捣碎叶片式时时间不宜过长，否则会破坏叶绿体2、用荧光显微镜找到物象后，要先拍照后观察，因为荧光会逐渐变弱。
黄瓜中的叶绿体实验报告
一、实验目的1. 学习观察叶绿体的形态和结构；2. 掌握叶绿体色素的提取和分离方法；3. 了解黄瓜叶片中叶绿体的分布情况。
二、实验原理叶绿体是植物细胞中特有的细胞器，是进行光合作用的重要场所。
叶绿体中含有丰富的叶绿素，具有吸收光能、转化光能和释放氧气等作用。
本实验通过观察黄瓜叶片中的叶绿体，了解其形态和结构，并提取和分离叶绿体中的色素。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜黄瓜叶片、无水乙醇、碳酸钙、石英砂、滤纸、毛细管、显微镜等；2. 仪器：研钵、剪刀、漏斗、三角瓶、电热套、烘箱、载玻片、盖玻片、显微镜等。
四、实验步骤1. 叶绿体观察（1）取黄瓜叶片，洗净，擦干；（2）将黄瓜叶片放入研钵中，加入少量碳酸钙和石英砂；（3）用研杵研磨叶片，使其充分破碎；（4）将研磨好的叶片过滤，得到叶绿体悬浊液；（5）将悬浊液滴在载玻片上，盖上盖玻片；（6）在显微镜下观察叶绿体的形态和结构。
2. 叶绿体色素提取与分离（1）取黄瓜叶片，洗净，擦干；（2）将叶片剪成小块，放入研钵中；（3）加入无水乙醇和碳酸钙，研磨叶片；（4）将研磨好的叶片过滤，得到叶绿体色素提取液；（5）取滤纸条，插入提取液中，使滤纸条充分湿润；（6）将滤纸条放在烘箱中烘干；（7）在滤纸条上滴加少量叶绿体色素提取液，使滤纸条再次湿润；（8）将滤纸条放入层析液中，待色素分离；（9）取出滤纸条，晾干，观察色素带。
五、实验结果与分析1. 叶绿体观察结果在显微镜下观察黄瓜叶片中的叶绿体，可见叶绿体呈椭圆形或球形，内部含有叶绿素，呈绿色。
2. 叶绿体色素提取与分离结果在层析实验中，叶绿体色素主要分为四个带：叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素。
其中，叶绿素a和叶绿素b呈蓝绿色，胡萝卜素和叶黄素呈黄色。
六、实验结论1. 黄瓜叶片中的叶绿体呈椭圆形或球形，内部含有叶绿素，呈绿色；2. 叶绿体色素主要包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素；3. 通过本实验，掌握了叶绿体观察和色素提取与分离的方法。
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五、实验方法和步骤
1．取材：取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后，除 取材：取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后， 叶梗及粗脉，剪成0.5x0.5cm小块。 0.5x0.5cm小块 叶梗及粗脉，剪成0.5x0.5cm小块。 匀浆：将称取60g 60g叶片小块放入组织捣碎机套 2．匀浆：将称取60g叶片小块放入组织捣碎机套 筒内，加入200ml SNT溶液 匀浆20 溶液， 20秒 筒内，加入200ml SNT溶液，匀浆20秒(最高 速度)制成匀浆液。 速度)制成匀浆液。 过滤：将匀浆液经四层纱布过滤， 400目尼 3．过滤：将匀浆液经四层纱布过滤，或400目尼 龙网过滤，滤液分装离心管，平衡。 龙网过滤，滤液分装离心管，平衡。
三、实验用具和试剂
1/3000中性红染液 中性红染液: ③ 1/3000中性红染液: 称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液 0.5中性红溶于 溶液， 称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液， 稍加热（30~400C）使之很快溶解， 稍加热（30~400C）使之很快溶解，用滤纸过 装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀， 滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀， 失去染色能力。 失去染色能力。 临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml 1%中性红溶液1ml， 临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml， 加入29ml Ringer溶液混匀 装入棕色瓶备用。 溶液混匀， 加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。 ④ 香柏油 材料： 3．材料：新鲜菠菜
叶肉细胞
细胞核
活细胞及细胞核
叶绿体
绘图参考
提示： 提示：下次实验为 实验五 细胞膜的通透性 实验六 细胞凝集反应
六、实验结果
1．在普通光学显微镜下，在悬浮液1滴片中可以看到含细胞核 在普通光学显微镜下，在悬浮液1 和大量叶绿体的叶肉细胞 叶肉细胞（ 和大量叶绿体的叶肉细胞（形态为球形或椭圆形的原生质 体）。 在普通光学显微镜下，在悬浮液2滴片中可以看到细胞核 2．在普通光学显微镜下，在悬浮液2滴片中可以看到细胞核 形态为球形）。 （形态为球形）。 在普通光学下，在悬浮液1 滴片中性红染色可以鉴别活细 3．在普通光学下，在悬浮液1、2滴片中性红染色可以鉴别活细 胞及细胞核（中性红是液泡系特殊的活体染色剂， 胞及细胞核（中性红是液泡系特殊的活体染色剂，在细胞处 于生活状态时，中性红只将液泡染成红色， 于生活状态时，中性红只将液泡染成红色，而细胞质及细胞 核不着色。如果细胞死亡，红色会弥散在整个细胞中）。 核不着色。如果细胞死亡，红色会弥散在整个细胞中）。 在普通光学显微镜下，在悬浮液3滴片中可以看到叶绿体 4．在普通光学显微镜下，在悬浮液3滴片中可以看到叶绿体 叶绿体为绿色椭圆形， （叶绿体为绿色椭圆形，在高倍镜下可以看到叶绿体内部含 有较深的绿色小颗粒，即基粒）。 有较深的绿色小颗粒，即基粒）。
四、实验内容
1．组织匀浆液的制备（组织捣碎法）。 组织匀浆液的制备（组织捣碎法）。 细胞及细胞器（细胞核、叶绿体等） 2．细胞及细胞器（细胞核、叶绿体等）的分 纯化（离心分离法）。 离、纯化（离心分离法）。 细胞、细胞核、叶绿体的镜检（根据形态、 3．细胞、细胞核、叶绿体的镜检（根据形态、 大小、分布位置、数量识别法）。 大小、分布位置、数量识别法）。 分离细胞活性的鉴别（ 4．分离细胞活性的鉴别（中性红活体染色 法）。
二、实验原理
细胞器的分离是研究细胞器的结构、 细胞器的分离是研究细胞器的结构、功能和化学 组成的技术基础，保持分离的细胞器的纯度、 组成的技术基础，保持分离的细胞器的纯度、结 构完整及其生理、生化活性是本实验的三大要素。 构完整及其生理、生化活性是本实验的三大要素。 细胞核是植物细胞中最大、最重要的细胞器， 细胞核是植物细胞中最大、最重要的细胞器，使 细胞各种生命活动的指挥中心。 细胞各种生命活动的指挥中心。叶绿体是植物细 胞进行光合作用，将光能转变成化学能的重要细 胞进行光合作用， 胞器。由于它们的重要功能， 胞器。由于它们的重要功能，所以它们一直是细 胞生物学、遗传学、 胞生物学、遗传学、和分子生物学研究的重要对 利用离心技术可分离、纯化细胞、 象。利用离心技术可分离、纯化细胞、细胞核和 叶绿体。 叶绿体。
5．悬浮：分别收集沉淀，用少量的SNT溶液 悬浮：分别收集沉淀，用少量的SNT溶液 SNT 分别将沉淀1 悬浮。 分别将沉淀1、2、3悬浮。 镜检： 6．镜检： 取悬浮液1 分别做滴片镜检。 ① 取悬浮液1、2分别做滴片镜检。 然后加几滴中性红染色5 10min， 然后加几滴中性红染色5-10min，盖 上盖玻片镜检。 上盖玻片镜检。 取悬浮液3做滴片盖上盖玻片， ② 取悬浮液3做滴片盖上盖玻片，用油镜 观察。 观察。
三、实验用具和试剂
1．仪器：组织捣碎机、高速冷冻离心机、托盘天平、 仪器：组织捣碎机、高速冷冻离心机、托盘天平、 普通光学显微镜、剪刀、培养皿、250ml烧杯 烧杯、 普通光学显微镜、剪刀、培养皿、250ml烧杯、量 玻璃漏斗、移液管、离心管、滴管、滤纸、 筒、玻璃漏斗、移液管、离心管、滴管、滤纸、 纱布一大块或400目尼龙网、载玻片、盖玻片。 400目尼龙网 纱布一大块或400目尼龙网、载玻片、盖玻片。 SNT溶液 0.4M蔗糖 溶液： 蔗糖、 2．试剂：① SNT溶液：0.4M蔗糖、0.01M NaCl 试剂： ② 0.05M Tris-HCL缓冲液 ： Tris-HCL缓冲液 Tris（ 0.2M Tris（三羟甲基氨基甲烷） 50ml 500.1N HCL 50-55ml 两液混匀后，加蒸馏水至200ml 200ml， 两液混匀后，加蒸馏水至200ml，pH7.6
八、实验作业
1.绘制出一个完整的叶肉细胞图（内含细胞核、叶绿体） 1.绘制出一个完整的叶肉细胞图（内含细胞核、叶绿体）。 绘制出一个完整的叶肉细胞图 2.得到结构真实、完整并具生理、 2.得到结构真实、完整并具生理、生化活性的细胞器应注 得到结构真实 意哪些问题？谈谈SNT溶液中的各种成分的作用。 意哪些问题？谈谈SNT溶液中的各种成分的作用。 SNT溶液中的各种成分的作用 3.分离各种细胞器所需的相对离心力与哪些因素有关？ 3.分离各种细胞器所需的相对离心力与哪些因素有关？ 分离各种细胞器所需的相对离心力与哪些因素有关 4.对你设计的实验的成败谈谈感想，提出改进的措施。 4.对你设计的实验的成败谈谈感想，提出改进的措施。 对你设计的实验的成败谈谈感想 5.做哪些研究需要分离制备叶绿体？ 5.做哪些研究需要分离制备叶绿体？ 做哪些研究需要分离制备叶绿体
4．离心： 滤液 离心： 200× 1000rpm/分 ↓200×g（1000rpm/分）1分 ________________________ ↓ ↓ 沉淀1 上清,平衡, 沉淀1 上清,平衡,离心 含叶肉细胞） 500× 1500rpm/分 （含叶肉细胞） ↓500×g（1500rpm/分）1分 ↓ ↓ 沉淀2 含细胞核） 上清,平衡, 沉淀2（含细胞核） 上清,平衡,离心 1000× 3000rpm/分 ↓1000×g（3000rpm/分）5分 ↓ ↓ 沉淀3 上清， 沉淀3 上清，弃 含大量叶绿体） （含大量叶绿体）
二、实验原理
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心， 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离 等渗介质中进行差速离心 各种细胞器的常用方法。 各种细胞器的常用方法。颗粒在离心场中的沉降速率取决于 颗粒的大小、形状和密度， 颗粒的大小、形状和密度，也与离心力以及悬浮介质的粘度 有关。在一给定的离心场中，一定时间内， 有关。在一给定的离心场中，一定时间内，密度和大小不同 的颗粒其沉降速率不同，依次增加离心力和离心时间， 的颗粒其沉降速率不同，依次增加离心力和离心时间，能使 非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心 非均一悬浮液中的颗粒按其大小、 管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分， 管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分，最先沉淀的是 细胞，其次是细胞核，接下来是叶绿体。 细胞，其次是细胞核，接下来是叶绿体。 悬浮介质通常用缓冲的等渗溶液，它与细胞质的分散相 悬浮介质通常用缓冲的等渗溶液， 缓冲的等渗溶液 接近，在一定程度上能保持细胞器的真实结构和酶的活性 能保持细胞器的真实结构和酶的活性。 接近，在一定程度上能保持细胞器的真实结构和酶的活性。
பைடு நூலகம்
七、实验注意事项
• 得到结构真实、完整并具生理、生化活性的细 得到结构真实、完整并具生理、 胞器应注意的问题？ 胞器应注意的问题？ 1．细胞和各种细胞器的分离应在等渗溶液中 进行， 进行，以免渗透压的改变使细胞和细胞器 的受到损伤。 的受到损伤。 要注意整个实验的分离过程必须在0 2．要注意整个实验的分离过程必须在0～5℃ 的条件下进行，避免酶的失活； 的条件下进行，避免酶的失活；如果在室 温下，要迅速分离和观察。 温下，要迅速分离和观察。 离心过程中要注意离心力和离心时间。 3．离心过程中要注意离心力和离心时间。
实验四
植物叶片活细胞和叶绿体的 分离提取及观察
College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity
一、实验目的
初步掌握运用机械法分离活细胞和细胞器 的方法； 的方法； 掌握运用差速离心或密度梯度离心分离纯 化叶肉细胞，细胞核，叶绿体的方法； 化叶肉细胞，细胞核，叶绿体的方法； 掌握分离的细胞的活性鉴别方法； 掌握分离的细胞的活性鉴别方法； 熟悉叶肉细胞或原生质体、细胞核、 熟悉叶肉细胞或原生质体、细胞核、叶绿 体的形态大小。 体的形态大小。