卵黄抗体生产和应用技术培训课件
免疫鸡卵黄抗体的形成
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VS
抗体的释放
在卵黄被吸收和利用的过程中，抗体也会 随之释放到鸡的血液中，提供额外的免疫 保护。
04
免疫鸡卵黄抗体形成的优化策略
免疫原的优化
01
02
03
抗原改进
优化免疫原的性质和结构 ，提高其免疫原性，以产 生更强的免疫反应。
免疫剂量
研究免疫剂量的最佳方案 ，以确定在产生高抗体滴 度的同时，又能避免免疫 原的过度刺激。
抗体在医药与农业等领域的应用拓展
要点一
抗体药物的开发
要点二
农业上的应用
利用卵黄抗体开发新型抗体药物，如单克隆抗体、抗体片 段等，用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病等疾病。
研究卵黄抗体在农业上的应用，如提高作物抗病性、增强 动物免疫力等，为农业可持续发展提供新的解决方案。
06
免疫鸡卵黄抗体形成案例分析
案例一
抗体多样性的研究
卵黄抗体具有高度多样性，不同抗体可能具 有不同的特性和用途。因此，深入研究抗体 多样性的产生机制和开发应用具有重要意义 。
抗体功能的多样性研究
抗体的免疫调节作用
研究卵黄抗体的免疫调节作用，揭示其在免 疫应答中的重要角色，为免疫治疗和疫苗设 计提供新的思路。
抗体的抗菌、抗病毒作用
研究卵黄抗体对抗菌、抗病毒的作用，探索 其在防治感染性疾病方面的应用潜力。
免疫鸡卵黄抗体的形成
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目录
• 免疫鸡卵黄抗体概述 • 免疫鸡卵黄抗体的制备过程 • 免疫鸡卵黄抗体的形成机制 • 免疫鸡卵黄抗体形成的优化策略 • 免疫鸡卵黄抗体形成的研究展望 • 免疫鸡卵黄抗体形成案例分析
01
免疫鸡卵黄抗体概述
卵黄抗体生产及应用技术ppt课件
IgY纯化分三步： 第一步是粗提，将含有IgY的水溶性蛋白与水不溶的脂类和脂蛋白分别，即除去脂
质；方法有超滤、有机溶剂萃取、以及PEG、SDS沉淀脂蛋白等，经粗提的上清液 或水溶液中IgY含量占蛋白质的15%； 第二步用硫酸葡聚糖钠等进一步沉淀，提纯出纯度大于80%的IgY，此时的IgY要低 温或冻干保管；
3. IgY具有较强的抗热、抗酸、抗离子强度和一定的抗酶分解才干〔相对于IgG〕， 提纯后IgY在适宜条件储存10年滴度没有损失〔Olovson等，1993〕，幼畜可以口 服，经维护处置后成年动物也可以口服，提纯后可以肌注〔孙希琪，1995〕 ；
DA和FDA以为卵黄抗体是GRAS〔generally regarded as safe〕且已允许商业消 费用于人；
2.大肠杆菌导致仔猪腹泻及抗大肠杆菌菌毛IgY阻止其在小肠粘膜上 附着，体外粘着抑制实验支持这一假设〔Yokoyama等,1992〕。
3.李国平等〔2002〕证明：仔猪出生后头36小时内口服IgY不被分解， 和注射效果无差别。卵黄抗体与菌毛抗原的亲和力远远超越母乳 及高免血清中抗体与抗原的亲和力，对控制此病极为有利 。
续〔3〕
6.消费卵黄抗体典型的免疫程序〔Li-Chan等，2000〕： (1)首免，胸肌注射0.5～1mg/羽弗氏完全佐剂等体积乳化抗原； (2)首免后第3、5、7和25周用弗氏不完全佐剂乳化抗原进展2～4次加强免疫，剂量
逐渐放大1～2倍。这种多次注射加强剂量的抗原使之产生较高自动获得性免疫的 过程，称之为“超免疫作用〞。
3.经济、高效的分别纯化技术是关键。 4.缺陷及需求处理的问题。 5.开展趋势。
天行健之卵黄抗体
4、使用IgY技术生产免疫球蛋白，可以减少对动物的应激，减少对动物的副反应，提高动 物的福利。
河南天行健生物科技有限公司
Henan Tianxingjian biological technology co.,LTD.
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卵黄抗体
中文名称：卵黄抗体 英文名称：vitelline antibody 定义：
*灌装
*灭活剂配制
检测
疫苗瓶灭菌
胶塞灭菌
铝盖灭菌
压盖
*
标签 贴签
纸箱 包装
灭活 灭活检测
免疫原制 备
负压10000级 正压10000级 负压区 局部100级
成品检验
入库
河南天行健生物科技有限公司
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体
6、卵黄抗体（IgY）在动物疾病诊断方面的应用
7、卵黄抗体（IgY）在公司的开发应用
河南天行健生物科技有限公司
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卵黄抗体IgY的形成
★ 禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊 的控制。
E-mail: txjswkj@ 全国免费电话：400-6780-567
兽用卵黄抗体的研究与应用
酶 锫
３ 动物疾病诊 断中的应用 ． ２
由于卵黄抗体不激活哺乳动物的补体系统， 不与 蛋白 Ａ Ｇ和 Ｆ 受体相结合， 、 ｃ 具有特异性强 、 灵敏度 高的特点 ， 以在动物疾病免疫诊断中具有重要的意 所 义 。据报道 Ｉ 已在琼 脂扩散 试验 、 ｇ Ｙ 乳胶凝 聚试验 、 荧
污染 、 无残 留、 药效持续时间长等特点 ， 可有效替代
抗生 素 ， 在畜牧保 健领域有 广 阔的应用前景 。
４ 展 望
羔羊和小 白鼠轮状病毒腹泻等动物传染病的预防和
治疗 ， 并取 得 了显著 的效果 。 高云英等制 备 的鸡 抗猪
自发 现 卵黄抗 体 以来 ，众 多 的科 研人 员对 卵 黄
大肠杆菌高免 Ｉ 经预防、 ｇ Ｙ， 攻毒试验， 发现其对仔猪
免疫保护率可达 ９ ％以上， ０ 攻毒保护率 ９％以上。 ８
抗体 的结构 、 生理功能及应用作 了广泛深入 的研究， 取得了可喜的成绩 。特别是近年来提倡绿色食品， 限制抗生素 的大量使用 ，由于卵黄抗体是 一种安 全、 高效 、 无公害的生物制品， 不存在药物残留和耐 药性的问题 ， 而且卵黄抗体液 是蛋 白质 、 本身具有 促生长作用 ，非 常符合我 国畜牧业生产发展 的实 际， 因此 在 动 物 疾 病 的 预 防 、 断 和治 疗 方 面 将 具 诊
３１ 动物 疾病预 防 中的应 用 ．
用， 不存在药物残留和耐药性 的问题 ， 而且卵黄抗体 液是蛋白质 ， 有促生长作用 。 多价抗体微生态制剂是 特异性免疫球蛋 白与益生菌两种活性物质有机组合 的固体制剂 ，能充 分发 挥免 疫球蛋 白的特异性 免疫
功 能 与 益 生 菌 的 非特 异 性 免 疫 及 相 应 生 理 促 进 功 能 ， 到预 防和治疗 感染 性疾 病 的作 用 ， 达 而且具 有无
卵黄抗体制备及应用
抗鸡球虫卵黄抗体制备及初步应用作者：钱玮霖指导老师：徐前明（安徽农业大学植保学院合肥 230061）摘要：本项目旨在研制抗鸡球虫卵黄抗体，为防治鸡球虫病提供一种新的手段。
利用对临床所分离的球虫，经超声波裂解制备粗抗原，然后将所得抗原分别于弗氏完全佐剂和不完全佐剂混合，经肌肉注射方式对鸡蛋进行免疫，收集免疫后的卵黄；采用饱和硫酸铵法分离卵黄中的抗体，并用聚乙二醇浓缩获得较高浓度的抗体；采用凝集试验确定其抗体水平，并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法进行抗体纯度分析；最后将所分离的抗鸡球虫卵黄抗体用于鸡感染球虫保护试验。
结果表明：（1）临床所分离得球虫多为混合感染，达3种以上；（2）蛋鸡经免疫后，经凝集试验可证实其抗体水平可达1:28，SDS-PAGE电泳显示：纯化后抗体大小为67.0kD 和23kD，且纯度较高。
基于上述情况，认为本试验制备出抗鸡球虫卵黄抗体方法并初步阐明了其抗鸡球虫的基本功能。
关键词：鸡球虫病；卵黄抗体；保护试验引言鸡球虫病广泛存在于养鸡业中，常造成大批死亡，其死亡率可最高达80％，且病愈鸡生长严重受阻，抵抗力降低，易继发其他疾病。
每年，全世界因为鸡球虫病造成的损失高达数十亿美元[1]。
因此，鸡球虫病是养鸡业中危害最严重的疾病之一。
在我国，特别是在南方地区，由于气温高、湿度大，这种环境利于球虫卵囊的孢子发育，本病常常呈暴发性流行，危害更加严重。
然而，目前对鸡球虫病的防治措施绝大部分多依赖于药物的预防和治疗上,即化学合成药物和抗生素两大类，自从1936年首次出现专用抗球虫药以来，已报道的抗球虫药达40余种，但是因为球虫对药物极易产生抗药性，大量使用化学药物势必会造成严重的药物残留问题等，这也是当今养禽业所遇到最棘手的问题之一。
上述问题存在，为临床防治鸡球虫病提出紧迫任务。
卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。
《抗体的制备与应用》PPT课件说课讲解
Day
0
Resting B cell
2
4
Antibody
6
forming cell
(plasma cell)
8
Antibody Structure and Function
Structure of immunoglobulins
Basic structure
Heavy chain and Light chain（重链和轻链） Variable region and Constant region（可变区和恒定区） Other structures
❖ 基因工程抗体的分类
1、全抗体
❖（1）嵌和抗体（chimeric antibody） ❖（2）人源化抗体（humanized antibody）
2、小分子抗体
❖（1）Fab ❖（2）ScFv ❖（3）单域抗体 ❖（4）分子识别单位
3、其它抗体
❖ 多价微型抗体
双链抗体（diabody） 微型抗体(minibody) 三链抗体(triabody)
株难、不稳定、产量低、人体不能随意免疫 3、现代免疫学和分子生物学技术的推动 4、基因工程抗体的优点
❖ 基因工程抗体的优点：
易于获得稀有抗体; 人抗鼠抗体反应（Human anti－
mouse antibody reaciton, HAMAR） 低; 小分子抗体：渗透力强、HAMAR低、 亲和性高、靶向性高、组织非特结合少 等。
4. （三）用于疾病的治疗
5. 抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反应的防治 6. 抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗 7. 抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗
单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题
1. 单克隆抗体的特异性
卵黄抗体的应用
的分布于平皿培养基上。各纸片 中 心 距 离 不 小 于 ２４ 毫 升 ， 纸 片 距 平皿内缘应大于 １５ 毫升。直径 ９０ 毫升的平皿可贴 ７ 张纸片（一般可
将其切面直接均匀涂布于另一块 营养琼脂平板上。稍作干燥后， 贴 上待试的药敏试纸。将以上两块 平 板 置 于 ３７℃培 养 １２￣２４ 小 时 。
３．１ 培养基
４ 小时， 使抗菌药预扩散， 然后再
培 养 基 的 成 分 、含 量 、ＰＨ 值 、 放 ３７℃温箱中培养 ， 可 以 推 迟 细
琼 脂 的 厚 度 、硬 度 和 表 面 湿 度 等 ， 菌的生长而得到较大的抑菌圈。
１／２。然后， 找到第二点划线至平皿 的 １／２， 依 次 划 线 ， 直 至 细 菌 均 匀
略 停 ， 取 药 敏 片 贴 到 平 皿 培 养 基 料 经 常 规 消 毒 药 浸 泡 消 毒 后 ， 无 养皿 ， 倾注培养基 １８￣２０ 毫 升 为 边缘见不到细菌明显生长为限。
表 面 。 为 了 使 药 敏 片 与 培 养 基 紧 菌 操 作 ， 用 接 种 环 取 心 、肝 、脾 、 宜 。 培 养 基 内 应 尽 量 避 免 有 抗 菌
细菌涂布到平皿培养基上。具体 见表 １。多黏菌素抑菌圈， 在 ９ 毫
方 法 ： 用 灭 菌 接 种 环 取 适 量 细 菌 米 以 上 为 高 敏 ， ６￣９ 毫 米 为 低 敏 ，
分别在平皿边缘相对四点涂菌， 无抑菌圈为不敏。
以第一点开始划线涂菌至平皿的
２ 药敏试验的改良方法
培养。每隔 ６ 小时观察 １ 次， １２ ￣
鸡 室转到新建鸡舍室内较 潮， 曾用炉子烤过， 白天
传 又打开窗户在中午通 风， 没过两天出现呼吸
鼻 道现象， 但呼吸不困难， 可 以 听 见 “呲 呲 ” 甩 鼻
卵黄抗体IgY在猪生产中的应用
卵黄抗体IgY在猪生产中的应用摘要：卵黄抗体(Yolk Immunoglobulin，IgY)是蛋鸡受特定抗原刺激后体内会产生特异性并被转移和贮存在卵黄中的免疫球蛋白。
用鸡卵黄大量生产和制备多克隆抗体是近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。
IgY可作为替代抗生素的新型绿色饲料添加剂。
本文就免疫鸡卵黄抗体在猪生产中的应用作一综述。
关键词卵黄抗体；猪生产；应用卵黄抗体作为一种新型绿色添加剂有其自身的优势：①卵黄抗体产量高，Anders(1993)推算认为一只蛋鸡每周的抗体产量相当于9～10只小白兔的抗体产量；②鸡蛋的生产成本较低，收集和提纯方便，大规模提取抗体的技术已经成熟；③产生有效免疫反应所需抗原量小；④IgY的化学性质稳定，具有一定的耐热、耐酸、耐碱及耐高渗性能，对胃蛋白酶具有良好的抵抗能力；⑤由于种系发生距离相差很大，禽类IgY与哺乳动物免疫球蛋白之间不会发生交叉血清学反应；⑥不激活哺乳动物的补体系统，不与类风湿因子或Fc受体相结合，避免在免疫检测过程中产生假阴性或假阳性结果；⑦对肠道正常菌群无副作用，也不存在抗药性和药物残留问题。
IgY 本身是一种优质的蛋白源，有促生长作用。
1．卵黄抗体(IgY)1.1 IgY抗体结构IgY大分子的结构与哺乳动物免疫球蛋白类似。
Warr等(1995)[1]通过分子结构分析认为IgY 是哺乳动物体内IgG 和IgM 的进化前体。
IgY 中Cυ3和Cυ4区与哺乳动物IgG 的Cγ2和Cγ3具有同源性；Cυ2是IgY的枢纽区，而它在IgY 中没有得到充分进化。
IgY中这种不发达的枢纽区造成了Fab部分的低活性，而这进而可能是IgG 与IgY某些差异的原因。
与IgG一样，IgY的Fc片断是绝大部分生物受动器功能的作用部位。
IgY-Fc部分包括2条碳氢链，而IgG 只有一条。
IgG在重链上含有3个功能域而IgY的重链含有4个功能域，而且IgY缺少铰链区。
1.2 IgY进入卵黄的机制禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。
卵黄抗体生产工艺流程
卵黄抗体生产工艺流程一、引言卵黄抗体是指通过免疫技术从动物体内提取出来的抗体，具有广泛的应用前景。
卵黄中富含大量的抗体，因此成为抗体生产的理想来源。
本文将介绍一种常用的卵黄抗体生产工艺流程，以供参考。
二、卵黄抗体生产工艺流程1. 动物免疫选择一种合适的动物（如兔子）作为免疫动物。
然后，根据需要的抗体种类和用途，选择相应的抗原进行免疫。
将抗原与适当的佐剂混合后，通过皮下注射或腹腔注射的方式进行免疫。
在免疫过程中，需要控制免疫动物的养护条件，确保动物的健康状况和免疫效果。
2. 卵黄收集免疫后，通过定期采集免疫动物的卵黄来获取抗体。
通常在免疫后的第三周开始收集卵黄，每隔一段时间收集一次。
收集卵黄时，需要注意卫生条件，避免污染和交叉感染。
3. 卵黄抗体提取将收集到的卵黄放入离心管中，离心分离卵黄中的固体成分。
然后，将卵黄液与适当的缓冲液混合，进行固液分离。
固体成分中含有大量的抗体，可以通过洗涤和离心的方式进一步提取纯化。
4. 抗体纯化将提取得到的卵黄抗体溶液进行过滤和洗涤，去除杂质和不需要的物质。
然后，利用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等技术，对抗体进行纯化。
这些技术可以根据抗体的特性和需求进行选择和组合，以达到最佳的纯化效果。
5. 抗体浓缩经过纯化后的抗体溶液通常比较稀释，需要进行浓缩处理。
常用的方法有超滤、溶液浓缩等。
通过这些方法，可以将抗体溶液的浓度提高，从而方便后续的使用和保存。
6. 抗体检测对浓缩后的抗体进行质量检测，确保抗体的纯度和活性。
常用的检测方法包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫印迹（Western blot）等。
这些检测方法可以检测抗体的特异性和结构完整性，保证抗体的质量。
7. 抗体应用经过检测合格的抗体可以用于各种实验和应用中。
例如，可以用于免疫组化、免疫印迹、免疫沉淀等实验技术中。
此外，抗体还可以用于生物药物研发、疾病诊断和治疗等领域。
三、结论卵黄抗体生产工艺流程是一个复杂的过程，需要严格控制各个环节，以确保最终产品的质量和效果。
卵黄抗体及其在仔猪生产中的应用
１ 概述
１１ ｇ ． Ｙ的形成 Ｉ
禽 类的体液免疫 系统是 由法氏囊控
在低于 ７ ５℃条 件 下 ，ＩＹ具 有 良 从而导 致病原丧 失致病性。ＩＹ能够 黏 ｇ ｇ
制的。 当机体受到外界特 异性 抗原 （ 尤 好 的热稳定性 ，对酸碱具有一定 的耐受 附 在特 定病原的细胞壁上 ，改变病 原的 ｇ ＩＹ也能 黏 其 是灭活抗原 ）的刺激后 ，诱 发一 系列 力。ＩＹ对 胃蛋 白酶具有 良好的抵抗能 完 整性 ，抑制病原 的生长 ； ｇ 的免疫应答反应 ，激 发 Ｂ细胞分化成能 力。对胰蛋 白酶非常敏 感，经 １ ｈ酶解 附 在特 定病原菌的菌毛上 ，排 斥细 菌黏 分泌特异性抗体 的浆细胞 ，并分泌大量 处理 ，ＩＹ的抗原结 合活性几乎完 全丧 附于肠道黏膜的上皮细胞 ，抑 制病 原菌 ｇ 的特异性抗体进入血 液中。在产蛋禽体 失。ＩＹ具有很好 的耐受反复 冻融 的特 的定殖 。大肠埃希菌 、沙 门菌等病 原首 ｇ 内 ，血液 中的特异性抗体 逐渐移行到卵 性 ，即 使 经 过 ５次 反 复 冻 融 ，其 抗 原 结 先需要黏附干动物肠道黏膜细 胞上才能 巢 ，并在卵黄中蓄积。
作者 简介 ： 杨营 （９ ６ ，女 ，满族 ，硕士 ，研 究方向 ： １８ ～） 动物 营养与饲料科 学。 ・ 通讯作者 ： 边连全 （９ ５ ） １５ 一 ，男，硕士，教授 ，博士生导 师，研 究方向 ： 猪的营养与饲料。
黏附 因子与小肠黏膜 的结 合。用分离提
纯的特异性 菌毛抗 原，制备抗产肠毒素
基金项 目： 辽宁省 重大项 目 昌图瘦 肉型猪优质瘦 肉猪选 育及标准化健康养殖产业化示范基地 （０ １１０ ６ 一 ２ １２ ５ １） 沈阳市科技攻 关项 目 —优质 高产抗逆瘦 肉型种猪 系统选育技 术研 究与应用 （１— — — ０ 。 Ｆ １ １９ ５ ０ ） ０
免疫鸡卵黄抗体的形成
通过遗传育种技术，培育出产卵量大、抗体产量高的免疫鸡品种， 提高抗体提取的产量。
免疫方案优化
研究最佳的免疫方案，包括抗原剂量、免疫途径、免疫次数等，以 提高卵黄抗体的产生效率。
卵黄抗体稳定性与保存的研究
01
卵黄抗体稳定性机 制研究
深入探讨卵黄抗体在鸡卵中的稳 定性机制，为提高抗体稳定性提 供理论依据。
亲和层析
利用抗原与抗体之间的特异性结合，通过亲和层析柱分离纯化抗体。
凝胶过滤层析
将卵黄抗体通过凝胶过滤层析柱，根据抗体的大小进行分离纯化。
卵黄抗体的质量检测
免疫电泳
将卵黄抗体进行电泳分离，观察其迁移率，判断抗体 的纯度和类型。
蛋白质浓度测定
通过测定卵黄抗体的蛋白质浓度，评估其浓度和纯度 。
生物活性检测
特性
卵黄抗体具有高度的特异性，能 够与相应的抗原结合，具有治疗 和预防疾病的作用。
卵黄抗体的应用领域
疾病治疗
卵黄抗体可用于治疗某些感染性 疾病和自身免疫性疾病，如霍乱 、沙门氏菌感染等。
疫苗佐剂
卵黄抗体可以作为疫苗佐剂，增 强疫苗的免疫效果，提高接种人 群的免疫保护水平。
食品安全
卵黄抗体可用于检测食品中的病 原微生物，保障食品安全和消费 者健康。
抗体运输
分泌的抗体通过血液循环系统运输到全身各处，发挥免疫效应。
03
免疫鸡卵黄抗体的提取与纯化
卵黄抗体的提取
离心法
将免疫鸡的卵黄进行离心处理，分离出 上清液和蛋黄膜，取上清液进行抗体提 取。
VS
酶解法
使用特定的酶处理卵黄，使抗体从蛋黄膜 中释放出来，再通过离心分离得到抗体。
卵黄抗体的分离与纯化
被激活的B淋巴细胞进行快速有丝分 裂，形成大量具有相同抗体基因型的 B淋巴细胞克隆。
卵黄抗体及其应用
时 ,出现肉眼可见白色沉淀线 ,为阳性反应 。强 阳性反应时 ,24 小时后就可见到沉淀线 ,判定 试验鸡群发生了法氏囊病 。
治疗作用 当鸡群发生新城疫或法氏囊病时 ,可立即 皮下注射卵黄抗体 1 毫升～2 毫升 ,肉鸡可口 服卵黄抗体 2 毫升 ,能阻止病毒进入细胞 ,形成 再感染 ,中和病毒数量 ,经 2 小时就可发现鸡群 精神好转 ,食欲增加 ,粪便恢复正常 。这是目前 治疗新城疫 、法氏囊病的特效药物 。 预防作用 卵黄抗体的使用 ,在免疫学理论中可成为 被动免疫 。当免疫缺陷 、疫苗缺乏及免疫失败 时 ,可利用卵黄抗体注射 ,口服替代主动免疫接 种 ,发挥抗病作用 。 抗体效价 卵黄抗体的优劣标准是用 HA 和 HI 试验 测定的稀释倍数称为效价 ,log2 的指数越大 ,效 价越高 ,通常把 1 :64 效价称为高免卵黄抗体 , 其半衰期为 4 天左右 ,因此用卵黄抗体替代主 动免疫时间在 2 周～4 周 ,应科学选择使用日 期 。注意半衰期 ,计算保护期 ,当降到临界线 时 ,应及时补充 。 保存与运输 为方便使用 、生产 ,须冷冻保存和运输 ,因 卵黄抗体是生物制品 ,温度高会失效 ,应分装在 - 18 ℃条件下保存 ,运输时应特别注意温度变 化 ,冷藏包装运输 。 使用方法 (1) 解冻 : 常见包装有 500 毫升 、250 毫升 和 100 毫升瓶装 ,须放在新鲜井水中 ,浸泡 2 小 时～4 小时以上 ,反复振摇 。肉眼可看见瓶内
和保护期 。 (3) 对水后应呈混悬液 ,不要添加电解质 ,
破坏其结构 ,使抗体失效 。 (4) 饮用抗体前 ,应控制饮水两小时 。 (5) 使用抗体后不要产生依赖思想 ,还要做
好卫生管理和消毒工作 。
防疫专刊
中国畜牧报/ 2002 年/ 06 月/ 16 日/ 第 005 版/
卵黄抗体的特性和应用
生产量
可 测量 性
单克隆抗体
免 疫 抑 制
诊 断
治 疗
小鼠或 家兔产量有 限 可长期大量高产 ’相对 困难 容 易并实用 已被 制 备 还须发展 ， 仅有 ２例报告
几 个 产 品 正 在 开发 对 异 种 移 植 可 能 是 有 用 的
约 只 有 １ ５ｄ 远 低 于 初 乳 抗 体 的 ｌ ． ， ８ ２～ １ 。此 ４ｄ
免 疫 沉 淀
蛋 白 Ａ或 Ｇ， 抗原基质 抗原基质 纯化不易 ｐ —Ｏ７。稳 定 Ｈ３ １ ，０Ｃ ｐ ，５Ｃ 定 Ｈ４ ９ ６ 。 稳 较Ｉ ｇ Ｙ疏 水性弱 Ｆ ｃ片断是疏水的 由于铰链 区结构
良好 而 不 沉 淀
以有 效 的 降低 仔 猪 腹 泻 的 发 生 ， 仔 猪 的 成 活 率 使
交反 蒌薯 釜差 妻 器鏊差 果 。 对 引 起 仔 猪 腹 泻 的 大 肠 菌 的 高 免 卵 黄 抗 体 叉应 耆 鏊爰 曹葬曩爰球 非和离 菩案暴 亲分 釜主 舂羹去黄 研 究 结 果 表 明 ，用 高 免 卵 黄 抗 体 给 仔 猪 服 用 ， 善除卵 中 可
亲和纯化 稳定性 疏水性
免 答 抗 的望 不 竺 源 因 系 生 同 营 应 原 而 影 性 种 发 不 而 强 物 疫 有 冀 利响 同 ” 增
亲和力成熟机 制 体 细胞 高变 假一 ｖ基 因转 变 亲 和 力 良好 （Ｏ～～ Ｏ 。 ） 良好 １ １ Ｍ 产量 数微克 １ ｌ％特异性 数克 ２ ～Ｏ ％～ ｌ％ Ｏ （ 月产量／ 只动物） 抗体 （ 小鼠获 家兔） 特异性抗体
将 其 称 为 免 疫 球 蛋 白 Ｙ（ ｕ ｏ ｌ ｕｉＹＩＹ） 间 还 是 有 区 别 的 。 先 是 分 子 量 不 同 ，ｇ 的 分 Ｉ ｍｍ ｎ ｇ ｂ ｌ ｏ ｎ ｇ 。 首 ＩＹ
卵黄抗体的制作
卵黄抗体的制作 This manuscript was revised by the office on December 10, 2020.卵黄抗体的制作卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。
目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。
制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。
待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。
卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。
是母体血液中小分子抗体IgG通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。
保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。
这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。
沉淀系数7S，分子量，含糖%。
现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。
具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。
由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。
卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。
卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。
高免血清及卵黄抗体的制备技术
高免血清及卵黄抗体的制备技术免疫血清1.动物的选择可作为免疫用的动物多为哺乳类和禽类，主要有家兔、绵羊、马、猪、驴、豚鼠和鸡等，其中实验常用家兔、绵羊、鸡和豚鼠。
选择动物时要注意以下几个方面：a.抗原与动物种系动物性抗原的免疫原性，随动物种系远近而有差别。
近缘动物的蛋白质免疫原性弱，反之则强。
因此选择动物时应选用亲缘关系较远的动物。
b.免疫血清的用量所需要的免疫血清，如是经常大量地使用，选择免疫动物时则应选择大动物；如所需的免疫血清量不大，则以选择小动物为宜。
c.动物的个体状态用于免疫的动物必须是适龄、健壮、无感染的动物。
免疫过程中应特别注意营养和卫生管理。
注射抗原1个月后，动物仍无良好的抗体反应，或在规定注射日程后抗体效价不高，可再注射l～2次，若仍不佳者立即弃去．2.抗原制备与接种制造抗血清，根据产品不同,所用抗原、制法亦有所不同。
病毒性抗血清，一般是用本动物的含毒组织作抗原，首先把强毒接种本动物，使其发病，采取其含毒性组织作为抗原，注射于免疫动物。
细菌性血清，是用抗原性好的强毒或弱毒菌种，接种于规定培养基内，于37℃培养，细菌发育良好者，以纯粹检验后用作抗原。
抗原接种：动物在免疫过程中分为基础免疫及高度免疫。
基础免疫一般是注射疫苗，然后连续多次注射强毒进行高度免疫，每次注射剂量，要随着注射次数的增加而增加。
接种抗原的次数和剂量，应根据制造抗血清的品种和动物健康情况加以调整。
为了获得效价高的抗血清，动物饲养条件必须保持良好。
3.血清抗体的检测免疫程序接近结束时，测定血清的抗体效价，如果效价已达规定的要求，即可视作免疫成功，开始采血。
若经试血，血清效价不合格，则可继续增加注射抗原次数或剂量，如再试血仍不合格，应将动物淘汰。
测定免疫血清效价是及时掌握采血时机的重要步骤。
常用的有环状沉淀反应(包括抗原稀释法和抗体稀释法)和双向琼脂扩散试验。
用琼脂扩散试验测定血清效价时，如果在抗原孔与抗体孔之间出现沉淀线者，即为阳性。
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（三）IgY结构特点
1.分子量160～180kDa，稍大于IgG（ 160kDa ）； 2.多一稳定区而少一铰链区（铰链区有较多脯氨酸，具
有韧性，与抗体分子构型变化有关）；
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这种差异没有影响IgY的抗原-抗体结合特性和结 合能力，结合价也是2（Warr等, 1995），然而对于pH、 温度及蛋白水解等引起构象变化的环境条件，IgY比 IgG稳定；
DA和FDA认为卵黄抗体是GRAS（generally regarded as safe） 且已允许商业生产用于人；
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（1.五鸡蛋）储I存g在Y纯+4℃化条件、下活6个性月I测gY活定性及损失保很存小。用做
食品和饲料添加剂，或兽医临床上，IgY多以全卵黄或 其水溶液的形式直接利用，或制成干粉利用。
（3）免疫途径、免疫程序、佐剂
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6.生产卵黄抗体典型的免疫程序（Li-Chan等，2000）：
(1)首免，胸肌注射0.5～1mg/羽弗氏完全佐剂等体积乳 化抗原；
(2)首免后第3、5、7和25周用弗氏不完全佐剂乳化抗原 进行2～4次加强免疫，剂量逐步放大1～2倍。这种多 次注射加强剂量的抗原使之产生较高自动获得性免疫 的过程，称之为“超免疫作用”。
分泌抗体进入血液；
3.通过血液循环和输卵管上皮层分泌滤泡，产蛋鸡将母
源抗体选择性分泌到卵黄内；
4.卵黄中Ig主要是IgG，叫IgY（IgM和IgA转移到蛋清中）；
5.小鸡通过IgY实现获得性被动免疫(猪、牛、马属通过初乳；兔 通过胎盘)；
6.卵黄中含有多种不同抗体（约200种，滴度取决于暴露程度； M.Coleman,2000)；
7.用某种病原菌免疫母鸡，可产生特异性IgY， Sugita 等（1996）用26种甲醛灭活病原菌免疫产蛋鸡，IgY 可预防多种疾病。
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(二) IgY转移时间、产量及影响产量的因 素
1.用HI、ELISA、ID检查卵黄中IgY，抗体应答形成时间
晚于血清1～2周（Theresa H P,1985；鸭腺病毒），以后与 血清测得的HI滴度一致，也有报道卵黄卵黄抗体具有 累积作用；
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5.影响IgY产量的因素包括： （1）抗原的质与量（颗粒/可溶性抗原、类毒素/菌体抗原、活菌/死菌，
免疫麻痹；高免疫原性和安全）
（2）机体方面，A包括产蛋鸡品种（来航鸡、洛岛红鸡及其杂交后代
的特异性IgY最高平均浓度有显著差异（D Carlander,2002)、B产蛋率和产蛋 间歇与IgY浓度、C蛋重及卵黄重、D营养影响免疫系统发育、免疫 机能状况和生产性能、E健康状况（SPF鸡群，起码应无免疫抑制 性疾病和垂直传播性疾病，对父母代IBD的免疫）
6.提纯方法的选择取决于IgY产量、纯度、费用要求和技 术水平。
7.常用ELISA测定IgY活性。
第二步用硫酸葡聚糖钠等进一步沉淀，提纯出纯度大于80%的IgY， 此时的IgY要低温或冻干保存；
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第三步是精提法：使用凝胶渗透层析、阴离子交换层析或超滤方法 进一步纯化，获得纯度96%～99%的IgY。
3.Akita等建立的水稀释法：先在微酸条件下用水稀释卵 黄，分离出卵黄蛋白；再用盐析、超滤、乙醇沉淀、 凝胶过滤等进一步纯化IgY。
由于缺乏铰链区，两个抗原结合片段（Fab）紧密 排列，使IgY缺少韧性及功能种类，在确定条件下沉淀 及聚合反应能力降低（Warr等，1995），这使其具有 抵抗幼龄动物胃酸屏障的能力。 3.IgY能介导过敏反应，与哺乳动物的IgE相似。
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（四） IgY相对IgG的优势
1.高度保守的哺乳动物蛋白质对禽有较强的免疫原性，且产生有效 免疫反应所需抗原量小（Danielpour.D,1993），如IGF-1，且免 疫应答快；
2.经加强免疫，卵黄中特异性IgY效价能维持数月奶至1 年；
3.一个卵黄约含100～400 mgIgY，一只产蛋鸡每年可获
得40～50gIgY（D .Carlander,2002），相当与30只家兔同期 内血清IgG 产量；
4.卵黄中抗原特异性抗体数量占IgY平均10%，范围是5% （抗胰岛素抗体）～28%（抗鼠IgG抗体），取决于免疫个体、免 疫程序及抗原的免疫原性；
2.用于诊断分析或纯化生物活性分子，或在人医临床上 则需要提高IgY纯度或提纯特异性IgY。
IgY纯化分三步：
第一步是粗提，将含有IgY的水溶性蛋白与水不溶的脂类和脂蛋白 分离，即除去脂质；方法有超滤、有机溶剂萃取、以及PEG、SDS 沉淀脂蛋白等，经粗提的上清液或水溶液中IgY含量占蛋白质的 15%；
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一、 生产技术
(一) IgY产生过程 (二) IgY转移时间、产量及影响产量的因素 (三）IgY结构特点 (四) IgY相对与IgG的优势 (五) IgY纯化、活性测
1.腔上囊是禽类特有的控制体液免疫的淋巴器官；
(一2.腔)上I囊g中YB产细胞生受过到抗程原刺激后分化成浆细胞，后者
2.免疫反应具有交叉性，血缘越近，交叉反应程度越高；由于结构 上差异，IgY 与IgG几乎没有交叉免疫反应，减少了非特异结合和 假阳性；减少非特异性结合使免疫学检测灵敏性提高（达50%）；
3. IgY具有较强的抗热、抗酸、抗离子强度和一定的抗酶分解能力 （相对于IgG），提纯后IgY在合适条件储存10年滴度没有损失 （Olovson等，1993），幼畜可以口服，经保护处理后成年动物也 可以口服，提纯后可以肌注（孙希琪，1995） ；
4.特异性抗体采用亲合色谱法纯化，离子交换层析法浓 缩；或用免疫亲合法直接从水溶液中提取。
5.普洛玛格公司的卵黄抗体纯化系统（Promega's EGGstract IgY）提供了快速和简易的IgY分离方法。 该系统能在约1小时内提取2～5mg/ml纯度75%的IgY。
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