克林霉素_过氧苯甲酰凝胶对皮肤刺激和过敏反应试验

克林霉素2过氧苯甲酰凝胶对皮肤刺激和过敏反应试验杜光1,宗凯1,聂建军2,袁春平3　(1.华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部,湖北武汉430030;2.河南省南阳医专附属医院药剂科,河南南阳473058;3.广东环球制药有限公司,广东顺德528303)[摘要]　目的:观察克林霉素2过氧苯甲酰凝胶对豚鼠皮肤的刺激性和过敏反应。

方法:用克林霉素2过氧苯甲酰凝胶多次接触豚鼠完整皮肤及破损皮肤,观察皮肤刺激性;对豚鼠皮肤重复接触,观察过敏反应。

结果:克林霉素2过氧苯甲酰凝胶对豚鼠完整皮肤及破损皮肤无刺激性,对豚鼠无皮肤局部过敏反应和全身过敏反应。

结论:克林霉素2过氧苯甲酰凝胶对皮肤无刺激性和过敏性作用,具有良好的皮肤用药安全性。

[关键词]　克林霉素2过氧苯甲酰凝胶;皮肤刺激性;过敏反应[中图分类号]R944.9 [文献标识码]A [文章编号]10012 5213(2007)1021484202 痤疮是一种毛囊皮脂腺的慢性炎症,好发于青年男女的面部、胸部、背部等皮脂分泌旺盛区,持续时间较长,而且容易反复发作。

克林霉素2过氧苯甲酰凝胶为克林霉素磷酸酯与过氧苯甲酰制成的复方制剂,临床用于寻常痤疮的治疗,[1]。

现对该药对皮肤的刺激性与过敏反应进行试验观察。

1　材料1.1　动物　健康白色豚鼠(300±50)g,♀♂各半(湖北省医学试验动物中心,动物合格证号:1920010)。

1.2　药物　克林霉素2过氧苯甲酰凝胶(克林霉素2过氧苯甲酰凝胶含12mg克林霉素磷酸酯,50mg过氧苯甲酰,武汉春天生物工程股份有限公司,批号20020101,规格1g);2,42二硝基氯代苯(DNCB)。

2　方法与结果2.1　皮肤刺激性试验2.1.1　方法　取健康白色豚鼠12只,♀♂各半,按性别、体质量随机分为2组,每组6只,即完整皮肤组和破损皮肤组。

分别在试验前24h用电动推剪将动物脊柱两侧去毛,去毛区约占体表面积的10%(约40cm2),24h后检查去毛区皮肤是否因去毛而受伤。

完整皮肤组采用完好皮肤豚鼠;破损皮肤组采用砂纸将去毛消毒皮肤划破,以擦伤表皮、不伤真皮、轻度渗血为度,左右两侧皮肤的破损程度基本一致。

在所有动物左侧去毛区按约每只1.0g涂布克林霉素2过氧苯甲酰凝胶,右侧涂相同剂量的生理盐水,qd,连续7d。

最后一次涂抹24h后用温水洗去残留物,并于1,24,48,72h至第7天肉眼观察皮肤红斑及水肿情况。

2.1.2　评价标准及试验结果　按《中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)》中皮肤刺激性反应评分标准进行评分[2],并计算平均值,按“皮肤刺激性强度”评价标准进行评价。

结果见表1。

表1　克林霉素2过氧苯甲酰凝胶豚鼠皮肤刺激反应分值表Tab1　The skin stimulus reaction of clindamycin2benzoyl peroxide gel in cavy组别样品刺激反应平均分值1h2h48h72h4d5d6d7d刺激性评价完整皮肤组样品组00000000无刺激性生理盐水组00000000无刺激性破损皮肤组样品组00000000无刺激性生理盐水组00000000无刺激性 观察结果表明,涂药后完整皮肤组及破损皮肤组左、右侧皮肤未见明显红斑及水肿现象,涂药部位无色素沉着及出血点。

2.2　皮肤过敏试验2.2.1　方法　取健康白色豚鼠30只,称重,于试验前24h 用电动推剪将动物脊柱左侧去毛(面积3cm×3cm)。

观察24h,验证脱毛区无红斑、水肿、破损后,将动物随机分为3组,每组10只。

第1组为样品组,第2组为阴性对照组,第3组为阳性对照组。

样品组和阴性对照组按每只1.0g涂布克林霉素2过氧苯甲酰凝胶和生理盐水,阳性对照组按每只0.2 mL分别均匀涂布1%DNCB于脱毛区左侧,各用纱布绷带固定,持续6h后,用温水洗去残留物,第7天和第14天,以同样方法各重复一次,共计3次。

末次后第13天,将动物右侧去毛,方法及面积同左侧,次日,以左侧给药相同方法、剂量,于右侧脱毛区分别涂以克林霉素2过氧苯甲酰凝胶、生理盐水、1%DNCB,6h后用温水清洗残留物,然后立即并于第24,48,72h后观察皮肤过敏反应情况。

2.2.2　评价标准及试验结果　按《中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)》中皮肤过敏反应程度的评分标准和皮肤致敏性评价标准进行评分和皮肤致敏性评价[2],同时观察动物是否有哮喘,站立不稳或休克等严重的全身性过敏反应,试验完后,称取体质量,结果见表2。

表2　克林霉素2过氧苯甲酰凝胶豚鼠过敏反应结果Tab2　The allergic response of Clindamycin2Benzoyl perox2 ide G el in cavy　组别动物数/只平均反应分值0h24h48h72h致敏率/%样品组1000000阴性对照组1000000阳性对照组105.06.54.03.0100 观察结果表明,样品组、阴性组动物在激发给药后的观察期内,皮肤反应正常,无红斑、水肿,致敏率为0%,按标准判定属于无致敏性物质,动物也无哮喘、站立不稳及休克等现象,各动物体质量增加明显;阳性组动物在各规定时间点,均表现有明显红斑、水肿等过敏反应,反应率为100%,个别动物有哮喘现象。

3　讨论痤疮是一种青春期常见的毛囊皮脂腺的慢性炎症性疾病,表现为粉刺、丘疹、脓疱、结节、囊肿和瘫痕,该病为临床常见的皮肤病,病程缓慢,易于复发,多见于青少年,给患者带来较大的不便;其致病因素中,细菌感染是主要原因之一,而痤疮丙酸杆菌则是主要的致病菌[3]。

克林霉素2过氧苯甲酰凝胶剂是两种冶疗痤疮的有效药物———克林霉素磷酸酯和过氧苯甲酰的复方制剂。

克林霉素磷酸酯渗透性好,对寻常痤疮的致病菌有较好的抗菌作用[4],过氧苯甲酰通过分解出新生态氧而发挥杀菌除臭作用,可用于治疗皮脂腺分泌过多而引起的痤疮[5]。

在治疗痤疮的过程中二者可发挥协同作用,同时克服了克林霉素口服制剂的不足。

以卡波姆为主要材料制得的凝胶基质具有水溶性基质的特点,释药迅速、无油腻性、易于涂展、对皮肤及黏膜无刺激性,能与水溶液混合并能吸收组织渗出液,有利于分泌物的排除[6]。

本实验结果表明卡波姆为材料制备的克林霉素2过氧苯甲酰凝胶局部毒性小,对皮肤无刺激性和致敏作用,符合皮肤用药的安全性要求。

参考文献:[1]　阮健,方征远,肖志梅.痤疮外用凝胶治疗研究进展[J].中南药学,2006,4(3):2282230.[2]　中华人民共和国卫生部药政管理局编写.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)[3]　杨骥,张毅.痤疮的现代研究进展[J].皮肤病与性病,2005,27(2):9211.[4]　东星月,徐强.克林霉素磷酸酯外用治疗痤疮的临床疗效观察[J].中国麻风皮肤病杂志,2004,20(3):278.[5]　K orkut C,Piskin S.Benzoyl peroxide,adapalene,and t heircombination in t he treat ment of acne vulgaris[J].J Dermatol,2005Mar,32(3):1692173.[6]　王彦,王子娟.卡波姆在药剂学中的应用[J].中国药事,2005,19(6):3612365.[收稿日期]2007201208高效液相色谱法测定五酯分散片中五味子酯甲含量肖刚,熊富良,张良,张雪琼,许可　(武汉理工大学化学工程学院,湖北武汉430070)[摘要]　目的:建立高效液相色谱法测定五酯分散片中五味子酯甲含量测定方法,以控制该制剂的质量。

方法:采用HPL C方法测定五酯分散片中五味子酯甲的含量,色谱柱: Kromosil C18(4.6mm×200mm,5μm);流动相:甲醇2乙腈2水(60∶10∶30);检测波长:254nm;柱温:30℃;流速:1.0 mL・min-1;进样量:20μL。

结果:五味子酯甲在47.6～476 ng范围内呈良好的线性关系,r=0.9992,平均回收率98.30%,RSD为0.72%。

结论:本法结果准确,可靠,可用于五酯分散片中五味子酯甲的质量控制。

[关键词]　高效液相色谱法;含量测定;五味子酯甲[中图分类号]R927.2 [文献标识码]A [文章编号]10012 5213(2007)1021485202 五酯分散片是降低血清谷丙转氨酶的良药,可用于慢性,迁延性肝炎谷丙转氨酶升高患者。

本品处方由单味药材南五味子组成,南五味子为木兰科植物华中五味子(Schisan2 d ra s phenant hera Rehd.Et Wills.)的干燥成熟果实,具有敛肺生津、益胃养心、收敛固涩、滋补强壮等功效,是常用中药之一[1]。

南五味子主要成分为木脂素类化合物,其中五味子酯甲含量较高,本实验采用高效液相色谱法测定五味子酯甲的含量,并进行了方法学考察。

该方法操作简单,准确度高,重现性好,能更有效的控制产品质量[224]。

1　材料高效液相色谱仪Agilent1100,包括四元泵,柱温箱,DAD 紫外检测器,KQ5200台式超声清洗器(巩义市予华仪器有限责任公司);五味子酯甲对照品(中国药品生物制品检定所,批号1115292200302),甲醇、乙腈为色谱纯,水为二次纯化水。

样品:取南五味子经90%乙醇提取,经纯化后,以浸膏和相应辅料压制成五酯分散片。

2　方法与结果2.1　色谱条件　色谱柱:Kromosil C18(4.6mm×200mm,5μm);流动相:甲醇2乙腈2水(60∶10∶30);检测波长:254nm;柱温:30℃;流速:1.0mL・min-1;进样量:20μL。

2.2　溶液的配制2.2.1　对照品储备液　精密称取五味子酯甲对照品11.9 mg,置50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(C=0.238mg・L-1)。

2.2.2　对照品溶液　精密量取储备液1mL,置25mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(C=0.00952mg・L-1)。

2.2.3　供试品溶液　取本品5片,研细,取约0.15g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,密塞,称定质量,超声处理(功率100W,频率40k Hz)30min,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液1 mL,置10mL量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

2.3　专属性试验　分别精密吸取对照品溶液,供试品溶液和阴性对照品溶液各20μL(照供试品溶液制备方法制备)在上述色谱条件下进样,测定,结果表明,在与五味子酯甲峰相同保留时间处,空白对照无吸收,即空白无干扰(见图1)。