【CN109735664A】一种水中诺如病毒的检测方法【专利】
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910216955.3
(22)申请日 2019.03.21
(71)申请人 梧州市食品药品检验所
地址 543000 广西壮族自治区梧州市万秀
区梧州西环路中段198号
(72)发明人 罗达龙 黄琳 覃蓝 李夷君
(74)专利代理机构 广州市越秀区海心联合专利
代理事务所(普通合伙)
44295
代理人 黄为
(51)Int.Cl.
C12Q 1/70(2006.01)
C12Q 1/6851(2018.01)
(54)发明名称
一种水中诺如病毒的检测方法
(57)摘要
本发明公开了一种水中诺如病毒的检测方
法，包括以下步骤：(1)水样处理与诺如病毒的富
集；(2)诺如病毒RNA的提取，得到纯化的病毒核
酸溶液；(3)配置RT -PCR反应液；(4)荧光定量PCR
仪检测；所述荧光定量PCR仪检测的程序为：50℃
30min；95℃5min；95℃15s、60℃30s采集信号；65
℃30s，循环45次，荧光通道检测选择FAM、VIC通
道。本发明的水中诺如病毒的检测方法，使用荧
光定量PCR仪进行检测，灵敏性和准确度较高，并
可定量分析。权利要求书1页 说明书9页 附图1页CN 109735664 A 2019.05.10
C N 109735664
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109735664 A
1.一种水中诺如病毒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)水样处理与诺如病毒的富集；
(2)诺如病毒RNA的提取，得到纯化的病毒核酸溶液；
(3)配置RT-PCR反应液；
(4)荧光定量PCR仪检测；
所述荧光定量PCR仪检测的程序为：50℃ 30min；95℃ 5min；95℃ 15s、60℃ 30s采集信号；65℃ 30s，循环45次；荧光通道检测选择FAM、VIC通道。
2.根据权利要求1所述的一种水中诺如病毒的检测方法，其特征在于，所述水样处理与诺如病毒的富集的步骤为：取水样，加入MgCl2溶液使其浓度达到0.03～0.05mol/L，调节水样使pH至
3.0～5.0，使水样通过混合硝酸纤维素膜，用牛肉膏-甘氨酸洗脱液震荡洗脱滤膜；去除滤膜，调节洗脱液pH至6.0～8.0，向洗脱液中加入PEG8000溶液放置过夜，离心保留沉淀；加入无RNA酶的超纯水溶解沉淀，离心后上清液为病毒粗提取物。
3.根据权利要求1所述的一种水中诺如病毒的检测方法，其特征在于，所述诺如病毒RNA的提取步骤为：取病毒粗提取物，加入裂解液，充分混匀，然后漂洗液漂洗数次，加入洗脱液，离心后得到纯化的病毒核酸溶液。
4.根据权利要求2所述的一种水中诺如病毒的检测方法，其特征在于，所述MgCl2溶液的浓度为2.5mol/L。
5.根据权利要求2所述的一种水中诺如病毒的检测方法，其特征在于，所述牛肉膏-甘氨酸洗脱液的配置方法为：将30.0g牛肉膏和3.75g甘氨酸搅拌溶解于超纯水中，调节pH至9.5，用超纯水定容至1000mL，分装，121℃高压灭菌15min。
6.据权利要求2所述的一种水中诺如病毒的检测方法，其特征在于，所述水样处理与诺如病毒的富集的步骤中，洗脱液与PEG8000溶液的体积比为1:0.25。
7.据权利要求2所述的一种水中诺如病毒的检测方法，其特征在于，所述PEG8000溶液的配置方法为：将400.0g PEG8000和87.0g氯化钠搅拌溶解于超纯水中，用超纯水定容至1000mL，分装，121℃高压灭菌15min。
8.根据权利要求3所述的一种水中诺如病毒的检测方法，其特征在于，所述加入裂解液的体积为600μL。
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