药敏纸片的制备完整版
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
药敏学实验报告
一、实验目的1. 掌握药敏实验的基本原理和方法。
2. 学会正确操作药敏实验，提高实验技能。
3. 了解抗生素对细菌的敏感性，为临床合理用药提供依据。
二、实验原理药敏实验是利用抗生素对细菌生长抑制或杀灭作用的原理，通过观察细菌在含有不同浓度抗生素的培养基上生长情况，来测定细菌对不同抗生素的敏感性。
常用的药敏实验方法有纸片扩散法、微量稀释法等。
三、实验材料1. 细菌：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
2. 抗生素：青霉素、链霉素、氨苄西林等。
3. 培养基：营养琼脂、肉汤培养基等。
4. 实验仪器：无菌操作台、酒精灯、移液器、培养箱等。
四、实验方法1. 细菌培养：将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等分别接种于营养琼脂平板，置于37℃培养箱中培养18-24小时。
2. 制备药敏纸片：将抗生素粉末与无菌生理盐水按比例溶解，制成一定浓度的抗生素溶液。
用无菌移液器吸取适量抗生素溶液，滴加于无菌滤纸上，制成药敏纸片。
3. 药敏实验操作：将培养好的细菌菌落均匀涂布于营养琼脂平板上，用无菌镊子将药敏纸片贴于平板表面，距离菌落中心约15mm。
将平板置于37℃培养箱中培养18-24小时。
4. 观察结果：观察细菌在平板上的生长情况，测量抑菌圈直径，根据抑菌圈直径判断细菌对不同抗生素的敏感性。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、链霉素、氨苄西林的敏感性：青霉素抑菌圈直径为15mm，链霉素抑菌圈直径为20mm，氨苄西林抑菌圈直径为10mm。
结果表明金黄色葡萄球菌对青霉素、链霉素、氨苄西林均敏感。
2. 大肠杆菌对青霉素、链霉素、氨苄西林的敏感性：青霉素抑菌圈直径为10mm，链霉素抑菌圈直径为15mm，氨苄西林抑菌圈直径为20mm。
结果表明大肠杆菌对青霉素、链霉素、氨苄西林均敏感。
3. 分析：通过本次实验，我们可以了解到金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对青霉素、链霉素、氨苄西林均敏感，为临床合理用药提供了依据。
六、实验总结1. 本实验成功进行了药敏实验，掌握了药敏实验的基本原理和方法。
兽用药敏片的制作和应用
养殖场疾病控制的好坏，直接影响其场经济效益。
疾病控制踪疫苗接种外，药物治疗也十分重要，而做好药敏试验很关键。
市场上购买药敏片不方便，即使购买到药敏片，已用的药品与本场买到药品不是同一厂家生产，疗效也不一致。
我们一般多应用自制的药敏滤纸片，即实用又省钱，经临床实践，效果较好。
现介绍如下：1 制作方法1 穗纸片选用新华t号(或其他质量好的)定性滤纸片，用打孔机打成直径为6 1l"11"]1的小圆纸片，根据需要将数片包成一纸包，或放人带棉塞的小瓶或小平皿内，在160℃干热灭菌1 h或121 ℃灭菌l5 min．置60℃干燥箱内烘干备用。
1．2 药液的配制．1 稀释荆抗生素的稀释剂通常用蒸馏水，但有些抗生素可用其他溶剂作初步溶解。
如：呋喃西林，每片首先用l mo L／I，氢氧化钠1 ml 溶解，再用水稀释到所需浓度。
痢特灵先以二甲基酰胺或丙酮溶解。
1．2 2 药液浓度注射粉荆一般1 g药品加蒸馏水L000 mI稀释；注射针剂，用蒸馏水作100倍稀释。
其他药物按使用说明书上的配料或饮水舍量．换算按1 g需加多少毫升水或配多少毫克料，就相当于配制药液所加蒸馏水毫升数。
如10 g本品可拌50 kg饲料，其换算方法为：1 g本品加5 000 mI 蒸馏水。
1 3 配制方法在无菌条件下，准确称取药量， I g为一个基本单位．为了方便最好将药物先稀释成10 mI ，然后作倍比稀释，如lO0倍稀释药物，在1 g药物中加人l0mI 蒸馏水．然后取l mI 本液加人9 m1 蒸馏水即可。
将无菌滤纸片用无菌镊子摊布于无菌平皿中，每张滤纸片饱和吸水量为0．叭m1，计，每50张滤纸片加人药液0 5 mI ，不时翻动，使滤纸将药液均匀吸净，一般浸泡30 min即可。
然后取出含药纸片置于一纱布中放置37℃孵箱中烘干，烘烤的时间不宜过长．以免某些抗生素失效。
青霉素、金霉素宜在低温真空干燥。
烘干后立即装人无菌的小瓶中加塞置一20℃或家用冰箱中保存，少量供工作用的滤纸片从冰箱中取出后放置室温中1 h，使纸片温度和室温接近。
药敏实验流程
药敏实验流程（一）普通肉汤培养基的制作：1.NaCL5g, 牛肉膏3g，蛋白胨10g，蒸馏水1000ml，PH7.2~7.6, 2%琼脂粉20 g。
2.先称取NaCL,牛肉膏，蛋白胨易于潮解最后称取，放于烧杯中溶解，玻璃棒搅拌。
3.用PH试纸或PH校正仪调PH值，偏酸加1mol/L的NaOH,偏碱加1mol/L的HCL。
4.用量筒再量一次加入2%的琼脂粉玻璃棒搅拌溶解。
5.盖上硅胶塞，用8层纱布橡皮筋扎好，再用4层报纸包好，令用两层报纸包扎相应数量的平板，121°灭菌20分钟。
6.把已灭菌了的平板放于烘箱内使其干燥或拆开报纸倒放于无菌工作台内使上面的水珠蒸发。
7.做好无菌室的准备工作，待培养基的温度合适时开始倒平板，每个倒25~30ml，一般下午用时上午倒平板，第二天上午用时前一天下午倒平板，若用不完的培养基倒置于4°冰箱保存一周内用完。
（二）接种培养：1..用酒精棉球檫试要解剖的鱼的体表部位，解剖后用酒精棉球檫试要取的发病组织（肝脾肠）。
2.点燃酒精灯，用灭菌了的镊子取发病组织剖面涂抹于培养基一角，用着烧过的接种环在培养基内做三四划线或“之”子划线，做上标记，倒置于37°恒温培养箱内培养18~24h。
（三）贴药敏纸片：在无菌工作台内用接种环挑取优势菌落在培养基内做“米”字划线，用已灭菌了的有齿镊子贴药敏纸片于已经做“米”字划线的培养基，做上标记，10min后放于37°培养箱内培养18~24h. （四）观察结果：记录抑菌圈的大小并排序，填实验结果报告单。
药敏纸片制备流程一、实验所需仪器及试剂打孔器、小瓶、容量瓶、培养皿、10ml移液管、眼科镊、小烧杯等。
0.1M NaOH、0.85%生理盐水、200ml无菌水、恩诺沙星、盐酸土霉素、氟苯尼考。
二、制备流程1、取新华1号定性滤纸，用普通的打孔器打成直径为6mm的圆形小纸片，取出8只小瓶装入50片圆纸片（小瓶干燥洁净）用单层牛皮纸包扎好。
药敏纸片如何制作
药敏纸片如何制作
更新时间：2009-10-24 19:04:11 浏览次数：519
1、纸片的选择与制作
在医药公司购买新华1号定性滤纸，用打孔器把滤纸打成直径为6毫米的圆形纸片，装入干洁的青霉素小瓶内，每瓶装入5O只，将若干个装有纸片的小瓶放入高压锅内进行高压灭菌121度20分钟，冷却后置4～8℃条件下保存。
2 、药袖浓度的配比
选择现有的抗菌药物，根据药物的说明进行配比浓度，如规格为100克装的抗菌物，包装说明兑水400斤，即用天平称药物1克加50毫升的灭菌注射用水置于灭菌平皿内，充分溶解后吸出1毫升置于另一个灭菌容器中再加入39毫升的灭菌注射用水。
3 、纸片的浸泡与干燥
取配好的药物溶液放入盛有纸片的青霉素小瓶内 (药液的多少以最透纸片为宜)，浸泡24小时后，将多余的药液倒掉，放在无菌条件下晾干或放在37℃的恒温箱内烘干，而后加盖置4～8℃的冰箱中保存备用。
药敏片制作方法
药敏纸片的制作方法1、纸片的制作及灭菌选用质量较好的滤纸片(定量滤纸)，用打孔器打成直径为6毫米的圆片，每l00片放入一小瓶中，l60℃干热灭菌1-2小时或高压灭菌(15磅30分钟)后，在60℃条件下烘干备用。
2、抗菌药物浓度的配制2.1计算最小浓度值按药物使用说明上的配料或饮水比例换算成一个基本单位药量(以能准确称量药品的最小值为宜，如0.5克、l克、2克等)能配多少料或饮多少水，相当于配制浸泡药片的药品浓度时所加蒸馏水的毫升数。
例如，药品使用说明上标明5克本品可拌50千克饲料，其换算方法为l克本品可拌10千克饲料，也就是1克本品拌l0000克饲料，相当于药品浓度为l克本品加l0000毫升蒸馏水。
2.2浓度配制准确称取上述基本单位药量(片剂要研磨成粉末后再行称量)，在无菌条件下，按下列分列顶用蒸馏水进行倍比稀释。
根据以上换算l克本品加10000毫升蒸馏水，即l克本品加10×l0×10×l0毫升蒸馏水。
如出现l克本品拌321克饲料等情况，可改成1克本品拌320克饲料，即加l0×4×8毫升蒸馏水。
这样改动易形成分列项，并不影响实际效果，因为在配料时可按纸片浓度l克本品拌320克饲料进行拌料。
如所加蒸馏水量较少或现场蒸馏水充足，可不按上述倍比稀释法稀释，而直接按配料或饮水比例一次稀释而成。
3、药敏纸片的浸泡及保存取l毫升已配制好的药液注入已灭菌的含l00片纸片的小瓶中，置冰箱内浸泡1-2小时后取出烘干，并置冰箱中保存备用(可保存6个月)。
如何制作药敏纸片1、先用打孔器打出制作药敏纸片的小片若干；2、在高压锅内，高温120度，高压0.15帕斯卡，15-20分钟消毒所需器具，如培养皿或玻璃小瓶、玻璃棒、微量吸管、镊子、滤纸片等；3、在烘干箱或恒温箱内烘干24小时直至烘干；4、在培养皿中用不同的抗生素制成不同浓度的药液，抗生素可交叉应用，每1ml 药液可浸透50个药敏片，按此比例把配置好的药液倒入培养皿或小瓶中，并用玻璃棒搅拌均匀，使药液浸透药敏片；5、把作好的药敏片放入小瓶或培养皿中，盖一层消毒后的滤纸，在恒温箱内37度，24-36小时烘干，烘干后分装备用；6、药敏片保存时间，常温下3-6个月。
医学检验药敏实验报告
一、实验名称药敏试验二、实验目的1. 了解本次实验所选细菌对多种抗生素的敏感性。
2. 为临床合理用药提供依据。
三、实验原理药敏试验是指在体外条件下，测定抗生素对细菌的抑制作用，以判断细菌对某一种或几种抗生素的敏感性。
实验原理主要基于抗生素对细菌生长的抑制作用，通过观察细菌生长情况，确定抗生素的最小抑菌浓度（MIC）。
四、实验材料1. 细菌菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗生素：氨苄西林、头孢噻肟、阿莫西林、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星等。
3. 琼脂平板、无菌棉签、移液器、酒精灯、培养箱等。
五、实验方法1. 将细菌菌种接种于琼脂平板上，培养至适宜生长。
2. 在琼脂平板上均匀涂布抗生素纸片，用无菌镊子轻轻压紧。
3. 将平板倒置放入培养箱，培养24小时。
4. 观察并记录细菌生长情况，确定抗生素的抑菌圈直径。
六、实验步骤1. 菌种培养：将细菌菌种接种于琼脂平板，培养24小时。
2. 药敏纸片制备：将抗生素纸片用无菌镊子取出，均匀涂布于琼脂平板上。
3. 观察与记录：将平板倒置放入培养箱，培养24小时后观察并记录抑菌圈直径。
七、实验结果1. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
2. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
八、讨论与分析1. 本次实验结果显示，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌对多种抗生素的敏感性存在差异。
2. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗大肠杆菌感染的首选药物。
3. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药，提示金黄色葡萄球菌感染需选用其他抗生素。
4. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗肺炎克雷伯菌感染的首选药物。
药敏片实训报告
一、引言药敏片是一种用于检测细菌对药物敏感性的药物，是临床用药的重要依据。
为了更好地了解药敏片的应用和检测方法，提高我们的实践能力，我们参加了药敏片实训。
以下是本次实训的详细报告。
二、实训目的1. 掌握药敏片的制作方法；2. 熟悉药敏片的检测原理；3. 了解药敏片在临床用药中的应用；4. 提高我们的实践操作能力。
三、实训内容1. 药敏片的制作（1）材料：药敏纸片、无菌生理盐水、无菌棉签、细菌培养皿、细菌接种环等。
（2）方法：①将药敏纸片放入无菌生理盐水中浸泡30分钟；②用无菌棉签蘸取细菌培养皿中的菌液，均匀涂布在药敏纸片上；③将药敏纸片放置在37℃恒温培养箱中培养24小时；④观察药敏纸片上的抑菌圈大小，判断细菌对药物的敏感性。
2. 药敏片的检测原理药敏片检测原理基于纸片扩散法。
当细菌与药物接触时，药物在纸片上扩散，抑制细菌的生长。
抑菌圈的大小反映了细菌对药物的敏感性。
3. 药敏片在临床用药中的应用药敏片检测结果可指导临床医生选择合适的抗生素进行治疗，避免抗生素滥用和细菌耐药性的产生。
四、实训过程1. 实训前，我们了解了药敏片的制作方法和检测原理，并熟悉了实训所需的材料。
2. 实训过程中，我们严格按照操作规程进行药敏片的制作和检测。
首先，将药敏纸片浸泡在无菌生理盐水中，然后涂布菌液。
接着，将药敏纸片放置在恒温培养箱中培养24小时。
最后，观察药敏纸片上的抑菌圈大小，判断细菌对药物的敏感性。
3. 在实训过程中，我们遇到了一些问题，如菌液涂布不均匀、药敏纸片放置不稳定等。
通过查阅资料和请教老师，我们解决了这些问题。
五、实训结果与分析1. 通过本次实训，我们掌握了药敏片的制作方法，熟悉了药敏片的检测原理。
2. 实训过程中，我们观察到抑菌圈大小与细菌对药物的敏感性呈正相关。
抑菌圈越大，表明细菌对药物的敏感性越高。
3. 实训结果还显示，部分细菌对常用抗生素表现出耐药性。
这提示我们在临床用药中，应合理选择抗生素，避免滥用。
药敏纸片制备方法
药敏纸片制备方法嘿，咱今儿就来唠唠药敏纸片的制备方法，这可真是个有意思的事儿呢！药敏纸片，就像是医生手里的秘密武器，能帮咱找到对付细菌的最佳办法。
那怎么制备呢？首先，咱得有优质的药敏纸片原材料，这就好比做饭得有好食材一样。
然后就是调配，这可不能马虎，得精确再精确，就跟调鸡尾酒似的，比例不对可不行。
把药液均匀地涂在纸片上，这可不是随便涂涂就行的，得有耐心，得细致，不然这药敏纸片可就不灵光啦。
想象一下，要是涂得不均匀，那结果能准吗？那肯定不行呀！接着呢，得让这些涂好药液的纸片好好地干燥一下。
这就像是让它们去晒晒太阳，把水分都赶跑。
但可别晒过头了，不然它们可能就变得脆脆的，一碰就碎了。
等干燥好了，还得把它们好好保存起来。
这保存也有讲究呢，得放在合适的环境里，不能太潮湿，也不能太干燥，就像咱人得待在舒服的环境里一样。
不然，这些药敏纸片可能就失效啦。
你说这药敏纸片制备是不是挺有意思的？就好像在打造一件件小小的艺术品。
咱得用心，得认真，才能做出好用的药敏纸片来。
这可不是随便搞搞就能行的事儿呀！在这个过程中，每一步都很关键呢。
从选择材料到最后的保存，哪一个环节出了问题，都可能让药敏纸片失去作用。
这就跟盖房子一样，一块砖没砌好，可能整座房子都不牢固。
咱做药敏纸片制备的时候，可不能偷懒，不能敷衍。
这可是关系到能不能准确找到对抗细菌的方法呢！要是因为咱没做好，导致结果不准确，那可就麻烦啦。
所以啊，大家一定要认真对待药敏纸片制备这个事儿。
这不仅是一项技术活，更是一份责任呢！咱要为了能更好地对抗细菌，为了大家的健康，把药敏纸片制备得妥妥当当的。
总之呢，药敏纸片制备方法虽然听起来有点复杂，但只要咱用心去做，就一定能做好。
这就像生活中的很多事情一样，只要我们有决心，有耐心，就没有做不到的。
大家加油吧！让我们一起把药敏纸片制备这件事儿做得漂漂亮亮的！。
药敏试验的实验步骤及结果判定方法
药敏试验的实验步骤及结果判定方法一、实验准备在进行药敏试验之前，需要准备以下物品：1. 抗菌药物纸片。
2. 药敏试验培养基（如MH琼脂）。
3. 待测菌株。
4. 无菌棉签。
5. 吸管或微量加样器。
6. 手套、口罩和实验服。
7. 药敏试验记录表。
二、菌株接种1. 使用无菌棉签蘸取待测菌株，轻轻涂布在MH琼脂表面，确保菌株分布均匀。
2. 将涂布好的培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
三、药物稀释1. 根据抗菌药物的说明书，配置好所需浓度的药物溶液。
2. 使用吸管或微量加样器，将药物溶液按比例稀释。
四、药敏片制备1. 准备抗菌药物纸片，根据说明书要求进行剪裁。
2. 将抗菌药物纸片放在无菌平皿中，每片纸片标记对应的药物名称。
五、药敏试验1. 在培养基上标记好菌株的名称和实验日期。
2. 使用无菌棉签或吸管，将菌株涂布在药敏试验培养基上，确保菌株分布均匀。
3. 用无菌镊子取抗菌药物纸片，轻轻贴在培养基表面，每个药物纸片间隔15-20mm。
4. 将培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
六、结果判定1. 在规定时间内观察并记录每个抗菌药物纸片周围的抑菌圈大小。
2. 根据抑菌圈大小，参照抗菌药物的敏感度判定标准，判断菌株对药物的敏感度（如敏感、中介或耐药）。
3. 综合不同抗菌药物的敏感度结果，给出最终的药敏试验报告。
七、结果记录将实验步骤和结果详细记录在药敏试验记录表中，以便后续分析和报告编写。
记录内容包括：菌株名称、实验日期、药物名称、药物浓度、抑菌圈大小、敏感度判断和实验员等信息。
八、结果解读根据药敏试验结果，临床医生可以了解菌株对不同抗菌药物的敏感性和耐药性，从而选择合适的药物进行治疗。
药敏试验结果也是抗菌药物合理使用的重要依据，有助于减少耐药性的产生和抗生素的滥用。
同时，实验室可以通过药敏试验结果的统计分析，了解地区或医院内常见病原菌的耐药情况，为抗菌药物的研发和使用提供科学依据。
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
药敏试验操作
药敏试验操作实验步骤一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦康凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1药敏片的准备：购买或自制2.1.1制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
2.2药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。
此稀释液即为用于做药敏试验的药液。
三、实验操作方法3.1药敏片法3.1.1在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密）3.1.2将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。
为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。
为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。
药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药敏实验
打孔器
改善人类生活品质 成就世界水产品牌
Page 2
2、药量计算：每张直径6毫米纸片可 以吸收0.01ml药液，则25张纸片,需要 0.25ml药液,50张纸片需要0.5ml药液 。为了方便计算和称量,可配制2ml药 液。药液浓度的确定,需根据相应药品 的相关数据来确定。如诺氟沙星,纸片 含药量为10ug/片,则配制2ml药液所需 诺氟沙星的重量为 2ml×10ug/0.01ml=2000ug=0.002g
改善人类生活品质 成就世界水产品牌
Page
9
2、固体培养基：
a、取锥形瓶，按照说明书称取所需营 养琼脂粉，加入相应量的蒸馏水， 加热，使沸腾1~2次。
b、分装（制备斜面培养基）：取试管 若干，用移液管移取营养琼脂液 2.5~3ml加入每支试管中。盖上棉 塞，包扎，放入高压灭菌锅 121.5℃灭菌15~30分钟后，取出倾 斜为30°左右放置至营养琼脂冷却 凝固呈斜面。放入36.5℃培养箱中 培养18h~24h，观察，如没有长菌 ，取出放入4℃冰箱中保存备用。 用时应提前半小时取出，恢复常温 。
改善人类生活品质 成就世界水产品牌
Page
3
3、药液制备：配制药液时，如药物 是水溶性的，可以直接加入2ml水，如 药物是非水溶性的，应先用一定量的 对应溶剂对药物进行预溶（详细见下 表），再加入无菌蒸馏水至溶液为2ml 。如诺氟沙星为碱溶性，称取0.002g 诺氟沙星，先用500ul的2%NaOH将其溶 解，再加入1.5ml水。）如药品所需量 很少，不利于称量或称量误差大，可 将其扩大十倍称量，使用时再进行对 应的十倍稀释即可。如诺氟沙星，仅 需0.002g,可称取0.02g,用2mlNaOH溶 解，取200ul加入1.8ml无菌蒸馏水中 即得所需药液。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
自家药敏纸片制备方法的建立及应用效果观察
表 １ 不 同方 法制 备 药 敏 纸 片 的抑 菌 效 果 表
其 它 治 疗 量 的 试 验 药 物 的 抑 菌 效 果 具 有 不 同 的 针 对 性 ， 可 应 用 于 临 床 用 药 参考。
３ 讨 论
治 疗 量
２７
２ ５
３Ｏ
２馈 治疗薰
４倍 治疗 量
３ ０ ３ １
∞
喘 速 治
∞ ｍ
勰
＂ ｏ ｏ ＂ Ｈ Ｏ 拍
加
（ ）利 用 兽 医 临 床 常 用 抗 菌 药 物 ３
所 制 作 的 药 敏 纸 片 ．能 解 决 人 用 抗 菌 Ｈ 佗 ＂ 药 物 标 准 药 敏 纸 片 的 药 敏 试 验 的 结 果
对 兽医ｌ 临床 的 指 导 性 不 强 的 难 题 ．方
生 较 理 想 的 抑 菌 效 果 ， 与 喘 速 治 成 份
为 复 方 北 里 霉 素 可 溶 性 粉 的 抗 菌 特 性
…驾 一 一 黼 漕 一 鲥 雠 —徽
＂
呼 奇 灵
竹 ” 觋 加 ＂
拢 埒
＂
加 ＂
勰 觞
有 关 【。本 研 究 应 用 两 种 不 同 的 培 养 ９ ＝ Ｉ 】 ｏ
庆 大 霉 素
４ ２ ｌ ４ ２ １ ４ ２ １ ４ ２ ｌ ４ ２ ｌ ４ ２ ４ ２ ｌ ４ ２ ｌ ４ ２ ｌ
抑 菌效 果 上 升 而 引 起试 验误 差 。
× × × × × × × ×
垫 底 的 平 皿 中烘 干 ，密 封 备 用 。 （ ） 细 菌 学 检 查 ： 在 无 菌 条 件 下 ３ 取 烘 干 后 的 药 敏 纸 片加 人 到 灭 菌 的 肉
药敏实验器材及操作步骤
药敏实验器材及操作步骤
操作步骤：
一、药敏试纸片的制备:
1. 取定性滤纸,用打孔机打成直径6毫米的圆形小纸片.
2. 取圆纸片50片防入清洁干燥的青霉素空瓶中,瓶口以单层牛皮纸包扎.经15-20分钟121℃高压消毒后,
3. 放在37度恒温箱中数天,使其完全干燥.
二、药敏片的制备(商品药):
1. 按商品药的使用治疗量的比例配制药液.
2. 在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,翻动纸片时不能将纸片捣烂.同时在瓶口或瓶身记录药物名称,放37度温箱内过夜,干燥后即密盖。
3. 如有条件可真空干燥.切勿受潮,置阴暗干燥处存放,有效期3-6个月.
三、培养基的制备：
1. 取16.5g营养琼脂至500ML三角烧瓶中，加蒸馏水至485ML于三角烧瓶。
放置电子万用火炉上，不断搅拌至营养琼脂完全融化。
2. 瓶口以单层牛皮纸包扎.经15-20分钟121℃高压消毒,同时把清洗洁净的培养皿一起高压消毒。
3. 然后，每个培养皿中灌入18-20ML，室温凝固保鲜备用。
四、药敏操作：
1. 在净化工作台上，用动物肝脏或心脏的横断面置于培养基上均匀涂布。
2. 然后把七个不同的药敏片均匀分布在培养基上。
3. 置于恒温培养箱中37℃培养24H，然后观察结果。
药物敏感判定标准:
20以上极敏,15-20高敏,10-14中敏,10以下低敏,0不敏.
培养基:应根据实验菌的营养需要进行配制,倾注平板时,厚度合适,约5-6毫米,不可太薄,一般90毫米直径的培养皿,倾注培养基18-20毫升.。
纸片扩散法测大肠杆菌对几种抗生素的敏感性
纸片扩散法测大肠杆菌对几种抗生素的敏感性1 实验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后便不断的向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。
该抑菌圈表示药物对该种细菌的生长繁殖具有抑制作用。
通过测定抑菌圈的直径大小，可以判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。
并且，经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定相应的菌株得到的抑菌直径之间大致呈直线相关，因此将两种方法相对应地测试各种据菌株所得数据，进行统计学的相关回归分析处理，可得到一条回归线，依此可推断该菌株的MIC，两者呈负相关关系，即MIC 愈小，抑菌圈直径愈大。
2 实验材料2.1 菌液江山大农庄拉稀的猪仔肠道黏膜物中提取的大肠杆菌。
2.2药品链霉素、四环素、多粘菌素B、万古霉素、庆大霉素、红霉素、氨苄青霉素、新霉素、利福平、青霉素、菌必治、羧苄青霉素。
3 实验步骤3.1药敏纸片的准备纸片内抗菌药物含量3.2细菌的制备从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面上移种至3～5mLMH肉汤培养液中37℃培养2～8h，以待生长至轻微或中等浊度。
为保证药敏试验的准确度和精度，必须对接种菌液的浓度做相应的控制。
因此，将菌液稀释并校正浊度至0.5麦氏标准浓度，稀释时使用无菌肉汤或生理盐水，此时菌液的浓度约为1.5×108个/L。
3.3 接种平板制备好的接种菌液必须在15min内使用。
用灭菌好的棉试子蘸取菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉过多的菌液。
然后用试子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60°，最后沿平皿周边绕两圈，保证涂布均匀。
3.4 粘贴药敏试纸待平板上的水分被琼脂完全吸收后开始贴纸片。
用镊子取纸片一张，贴在琼脂平板表面，用镊子尖轻压，使其贴平，纸片一旦贴上就不能再拿起，因为纸片中的药物已经扩散到琼脂中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
药敏纸片的制备
HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】
药敏纸片的制备及药敏试验方法
抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备
1.材料
抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等
2．方法
PBS的配制
A.制备L储备液
LNa
2HPO
4
： +1000 mL蒸馏水
或 +1000 mL蒸馏水
L NaH
2PO
4
: +1000 mL蒸馏水
或 +1000 mL蒸馏水
B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用
L磷酸缓冲液的配制
抗菌药物原液的配制和保存期限
－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度
（?g/mL）
青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周
PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸
盐
PBS 12803个月2周林可或氯林可霉
素
12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再
用 PBS
1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再
用 PBS
12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用
PBS
万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周
12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺
溶解，再用蒸馏水
1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸
馏水稀释
各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期
配制方法
A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
例：要配制１２８０?g/mL 的庆大霉素５０毫升，所需要的纯抗菌药物质量为１２８０×５０＝６４０００ ?g
B.根据纯抗菌药物的重量和抗菌药物原粉的百分比计算出所需抗菌药物原粉的重量，方法是：纯抗菌药物的质量÷抗菌药物原粉的百分含量。
如:某庆大霉素原粉的含水量为％，则需要庆大霉素原粉的质量为64000÷（1－％）＝×104 ?g==
C.各种抗菌药物按上述表进行溶解后定容。
D.无菌条件下过滤，4℃保存备用。
药敏纸片的制备
用打孔机将制作直径为6毫米左右的圆形滤纸，按50张一份，将制作好的滤纸分装到小西林瓶里，用牛皮纸封瓶口进行高压（121℃，15min）,烘干备用。
抗菌药纸片的制备
不同细菌对不同抗菌药纸片的药物含量要求标准
菌种抗微生物药纸片含药量（?g）肠杆菌科氨苄西林10
美洛西林75
哌拉西林100
替卡西林75
头孢唑啉30
头孢噻吩30
庆大霉素10
阿米卡星30
卡那霉素30
奈替米星30
链霉素10
四环素30
多西环素30
米诺环素30
环丙沙星或左氧氟沙星 5
吉米沙星 5
诺氟沙星10
氧氟沙星 5
西诺沙星100
奈啶酸30
磺胺药250或300
甲氧苄啶 5
A.根据不同药物药敏纸片的药物含量要求，计算出50片药敏纸片需要的药物总含量，方法是：５０×每张药敏纸片的含药量。
如：制备一份（５０片）含药量为１０?g的庆大霉素，所需的抗菌药物总质量为５０×１０＝5００ ?g
B.药物总含量除以抗菌药物原液的浓度，得出50片药敏纸片需要的抗菌药物原液的总体积，抗菌药物总质量÷抗菌药物原液浓度。
如：制备一份庆大霉素药敏纸片所需的抗菌药物原液的体积是5００÷１２８０＝０．390625mＬ即?Ｌ
C.在无菌条件下，将各抗菌原液加入装有纸片的小西林瓶中，用纸密封瓶口。
D.置西林瓶37℃烘箱，将含药物的纸片烘干。
E.在无菌条件下，取一片烘干后的药敏纸片加入到灭菌的肉汤中，检查是否有细菌污染，并用西林瓶盖将西林瓶密封，并置4℃保存。
小时后观察是否有细菌污染，将有污染的药敏纸片剔除，并重新再做；无污染的可用作纸片扩散法。
3.注意事项
⑴配抗菌药物原液前要清楚抗菌药物原粉的百分含量、批号和生产厂家。
⑵配制抗菌药物原液时，可能会遇到抗菌药物难溶的现象，这就要求用相应的助溶剂溶解。
⑶抗菌药物原液的终体积要用容量瓶定容。
⑷单位的换算（如强力霉素，含量887IU/mg，计算配制１２８０?g/mL 的强力霉素５０毫升，需要多少克强力霉素原粉？）
抗生素的效价通常以重量或国际单位（IU)来表示。
青霉钠1mg=1667 IU或1 IU＝ ?g
青霉素钾1mg=1559 IU或1 IU＝ ?g
制霉菌素1mg=3700 IU
其他抗生素多以重量为单位或1mg=1000 IU
⑸抗菌药物原液的终浓度可增大到5120?g/mL，这可缩减加入纸片中的抗菌药物原液的体积。
⑹根据标准，有时要求纸片的抗菌药物含量较低，加入的抗菌药物原液的量过少，不足以将50片纸片全部润湿时，应将抗菌药物原液用相应的灭菌PBS稀释到，混匀后再加入西林瓶内。
⑺制作纸片时，要多做几份进行高压，以备试验失败重做时，节约时间。
⑻药敏纸片在37℃烘干，可能需要一到两天的时间，切勿将纸片放入高温中烘干，以防药物失效。
⑼密封纸片后，可放入4冰箱保存或置阴暗干燥处保存，切勿受潮。
二. 药敏试验方法
常用的药物敏感试验有纸片法，试管法、挖洞法、挖沟法、琼脂稀释法和泡沫塑料片法，纸片法是生产中常用的药敏试验方法，具有简便、易行、出结果快的特点，适合于基层实验室开展。
1材料
普通琼脂、营养肉汤、药敏纸片（自制）、灭菌试管、灭菌棉拭和镊子、被试细菌、灭菌生理盐水
2 方法
A.挑取单菌落接种于3mL营养肉汤中，37℃培养16小时。
B.用无菌生理盐水将培养好的菌液做1:20稀释。
C.用无菌棉拭蘸取稀释过的菌液，在试管壁上挤去多余液体，涂于营养琼脂表面，每次旋转平板60度，共涂3次，使整个平板涂布均匀，分别涂布两块平板。
D.平板放置3～5分钟后，用无菌镊子取药敏纸片，贴于一平板表面，并轻压一下纸片，使其贴平，纸片间相距3mm左右。
E.于另一平板上，平均划分为6个区域，并在每个区域中贴同样的药敏纸片。
培养16～18小时，用尺子量取抑菌圈的直径3次，计算其平均值即为试验结果。
另一方面，量取贴有同样纸片的平板上的抑菌圈的直径，看直径大小是否一致，检查所做的药敏纸片的含药量是否一致。
3 结果判断
结果判定可参照以下标准
抗微生物药抑菌圈直径（mm）
耐药中介敏感氨苄西林≤13 14-16 ≥17
美洛西林≤17 18-20 ≥21
哌拉西林≤17 18-20 ≥21
替卡西林≤14 15-19 ≥20
头孢唑啉≤14 15-17 ≥18
头孢噻吩≤14 15-17 ≥18
庆大霉素≤12 13-14 ≥15
阿米卡星≤14 15-16 ≥17
卡那霉素≤13 14-17 ≥18
奈替米星≤12 13-14 ≥15
链霉素≤11 12-14 ≥15
四环素≤14 15-18 ≥19
多西环素≤12 13-15 ≥16
米诺环素≤14 15-18 ≥19
左氧氟沙星≤13 14-16 ≥17
环丙沙星≤15 16-20 ≥21
吉米沙星≤15 16-19 ≥20
诺氟沙星≤12 13-16 ≥17
氧氟沙星≤12 13-15 ≥16
西诺沙星≤14 15-18 ≥19
奈啶酸≤13 14-18 ≥19
磺胺药≤12 13-16 ≥17
甲氧苄啶≤10 11-15 ≥16
4.注意事项
⑴严格控制细菌培养的时间，以防过多的细菌而影响试验结果的可靠性。
⑵涂布已稀释的菌液时，切勿将棉拭挤压过干，要保证有足够的菌量。
⑶涂布前，可用记号笔将平板平分为六个区域，以便进行涂布。
⑷涂布时，注意用力不能太大，切勿将琼脂破坏。
⑸把纸片平贴于培养基后，应将平板倒置放入培养箱中培养。