第三章 消毒与灭菌
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微生物学第三章消毒与灭菌(共60张PPT)
介质的性质
细菌在非水介质中，比水作介质时对热 的抵抗力大
水分、2~4℃石炭酸、油类、干焦空气
不同介质对微生物抗热力的影响
2、低温抑菌法
低温可降低微生物代谢的速度。 大多数微生物对低温有很强的抵抗力 一般的：4-10℃ 淋球菌、脑膜炎球菌、流行感冒杆菌敏感，
伤寒杆菌、白喉杆菌耐低温 冷冻干燥：采用迅速冷冻和抽真空除水。
消毒（Disinfection）：杀灭物体上的病原微生物的方法，
叫消毒。消毒只要求达到消灭传染性的目的，而对非病原微 生物及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死。
防腐(Antisepsis)或抑菌：指阻止或抑制物品上微生物 生长繁殖的方法，微生物不一定死亡。
无菌（asepsis）：指没有活的微生物的状态。
夜培养，残余的芽孢发芽为繁殖体；
第三天：100℃-30分钟，杀死所有微生物。
巴氏消毒法
常用于牛乳及一些饮料
最大限度地消灭病原体，尽可 能少地损害食品的营养物质
•低温维持巴氏消毒法（LTH)： •63～65℃-30分钟； •高温短时间巴氏消毒法(HTST):
•71～72℃-15秒， •超高温巴氏消毒法(UHT): •132℃-1～2秒
•巴氏消毒法
•高压蒸气灭菌法
干热灭菌法
火焰灭菌法
以火焰直接灼烧杀死物 体中的全部微生物的方 法。
灼烧 焚烧
酒精灯
热空气灭菌法
适用于高温下不损坏、 不变质的物品，需在 160℃维持1－2小时，才
能达到杀死所有微生物 及其芽孢、孢子的目的。
干烤箱
湿热灭菌法
煮沸灭菌
100℃，煮沸10～20分钟，可杀死所有细 菌繁殖体，芽孢常需煮沸1－2h才能杀死。
噬菌体（phage）：是指寄生于微生物 （细菌、霉形体、螺旋体、放线菌以及 蓝细菌等）中的病毒。
第3章 消毒与灭菌
长。
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3.温度
温度升高可增强消毒剂的杀菌效果。温度每增高
l0℃，重金属盐类的杀菌作用约增加2～5倍，石炭酸的杀
菌作用约增加5～8倍。
4.酸碱度
消毒剂杀菌作用受pH影响。如新洁尔灭pH 9时
杀菌作用强。同时pH也影响消毒剂的电离度，一般说，未 电离的分子，较易通过细胞壁，杀菌效果好。 5.有机物 6.药物颉抗 7.其他因素 环境中有机物，可降低消毒剂效果。 两种消毒剂合用时，有的能相互颉抗。如阴 湿度、穿透力、表面张力等。
800nm。可见光线只有微弱的杀菌作用。 2.阳光 直射日光有强烈杀菌作用，是天然杀菌因素，紫外线是日光
杀菌作用的主要因素。许多微生物在直射日光下，半小时到数小时即 可死亡。芽抱的抵抗力强，经20h才死亡。
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3.紫外线 紫外线中波长200-300nm部分具有杀菌作用，其 中以265-266nm段的杀菌力最强，这与DNA吸收光谱范围一 致。常用的紫外线杀菌灯波长为 253.7nm，杀菌力强而稳定。
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（1）干热灭菌法 包括火焰灭菌和热空气灭菌两类。
火焰灭菌法是以火焰直接烧灼杀死物体中微生物的方 法。分为灼烧和焚烧两种。 热空气灭菌指利用干热灭菌器以干热空气进行灭菌的 方法。用于耐高温物品。灭菌条件：160℃维持 l-2h，才 能杀死所有微生物（芽孢、孢子）。
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高压蒸汽灭菌法 最有效的灭菌方法 121 ℃ 20~30分钟 煮沸消毒法 水煮100 ℃ 5分钟(繁殖体)~2小时(芽胞) 流通蒸汽消毒法 水蒸汽100 ℃ 15~30分钟(繁殖体) 巴氏消毒法 较低的温度（61 ℃ 30分钟）杀灭致病菌 间歇蒸汽灭菌法 反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌
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巴氏消毒法具体方法有三种
消毒与灭菌
烷化剂
蛋白质、核酸烷基化 环氧乙烷
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消毒剂的作用机理
使细胞膜通透性受损；
使菌体蛋白变性和凝固，失去生物活性， 导致细菌死亡；
破坏或改变蛋白质与核酸功能基团，使菌 体酶蛋白失去酶的活性。
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二、化学消毒灭菌法
（一）高效消毒剂 （high-level disinfectants） 1.含氯消毒剂；2.过氧化物消毒剂； 3.醛类消毒剂；4.环氧乙烷
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生物安全水平分级
生物安全防护水平（biosafety level，BSL）分 为4级，以表示实验室的相应生物安全防护水平。
BSL－1：防护水平最低,普通建筑物即可，每个 实验室应设洗手池。
BSL-2：实验室的门有可视窗。在实验室工作区 域外还应当有供长期使用的存储空间。在实验室 内使用专门的工作服；应戴乳胶手套。配备高压 蒸汽灭菌器，在实验室内配备生物安全柜。
间歇灭菌法
本法是利用反复多次的流通蒸汽灭菌，以达到 灭菌的目的。
只适用于不耐热（100℃以内）的营养物质如 某些培养基的灭菌。
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高压蒸汽法 Autoclaving
压力：1.05kg/cm2 温度：121.3℃ 时间：15～30min 效果
杀死一切微生物， 包括芽胞
（二）中效消毒剂 （intermediate-level disinfectants） 1.含碘消毒剂；2.醇类消毒剂
（三）低效消毒剂 （low-level disinfectants） 1.季铵盐类；2.氯已定；3.高锰酸钾
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第三章 消毒与灭菌
高压蒸汽灭菌锅构造
1、压力表 2、安全阀 3、放气阀 4、软管 5、紧固螺栓
6、灭菌桶
7、筛架
8、水
手提式高压蒸汽灭菌锅
高压蒸汽灭菌锅使用方法
1、加水至止水线；
2、灭菌物品包裹好；
3、开启放气阀； 4、加热排气； 5、达到预定表压，开始计时； 6、关闭热源，当压力降至 0.05MPa时，缓慢开启放气阀。
日光杀菌作用的原理 日光杀菌作用的主要因素是紫外线，紫 外线波长为200～300nm，而以260～ 265nm杀菌力最强。
实验室使用的紫外灯，其波长通常为 253.7nm。 紫外线的穿透力不强，仅限于照射物的 表面。
紫外线杀菌原理 紫外线照射细菌时，能使同一股 DNA上相邻的两个胸腺嘧啶通过共价键结 合成二聚体，以致影响DNA正常碱基的配 对，引起致死性突变而死亡。 还有人认为紫外线可使空气中的氧 分子转变为臭氧，臭氧再释放出氧化能 力强的原子氧而具有杀菌作用。
但也有些细菌对低温持别敏感，在冰箱内保 存比在室温下保存死亡更快。如禽多杀性巴 氏杆菌。
冷冻干燥法：将保存物置玻璃容器内，在
冷冻真空干燥器中迅速冷冻，然后抽去容器 内的空气，使冷冻物中的水分在真空下直接 升华而逐渐干燥，最后在真空下将玻璃容器 焊封严密。在这样的冻干状态下，细菌及生 物制剂可保存数月至数年而不丧失其活力。 冷冻干燥(冻干)法是保存菌种、疫苗等良 好方法。
3.流通蒸汽灭菌法 100℃的蒸汽维持30min (不能杀死芽胞） 4.高压蒸汽灭菌
在一个加有少量水的密闭的金属容器内，通
过加热来加大蒸汽压力，以提高温度，达到
在短时间内完全灭菌的效果。
①高压蒸汽灭菌时压力与温度的关系
10磅(磅/平方英寸），115 ℃ ， 15磅，121 ℃ ， 20磅，126 ℃ 。
消毒与灭菌
1、在液体培养基中 噬菌现象可使浑浊菌液变为 澄清. 澄清. 2、在固体培养基上 噬菌体裂解宿主菌细胞使相 应菌苔上形成的一个个透亮 不长菌的圆斑，称为噬菌斑 噬菌斑， 不长菌的圆斑，称为噬菌斑， 亦称空斑。 亦称空斑。 噬菌斑可用于细菌或噬菌 体的鉴定和纯种分离。 体的鉴定和纯种分离。
6.噬菌体的应用 噬菌体念
消毒 灭菌 防腐 无菌 无菌 操作
杀死物体上病原微生物的方法,并不 杀死物体上病原微生物的方法 并不 一定能杀死含芽胞的细菌或非病原 微生物 杀灭物体上所有微生物的方法。 杀灭物体上所有微生物的方法。 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法 不存在活菌的意思 在没有细菌和其他微生物存在的环 境下所从事的一切工作
细菌的鉴定
噬菌体与宿主菌的关系有高度特异性，具有种和型 的特异性。用于未知细菌的鉴定和分型。
细菌感染的诊断与治疗
应用噬菌体效价增长试验可检测标本中的相应细菌。 应用噬菌体效价增长试验可检测标本中的相应细菌。 在怀疑有某种细菌存在的标本中，加入一定数量的已 知噬菌体，37℃孵育6~8h，再测定该噬菌体的效价。 知噬菌体，37℃孵育6~8h，再测定该噬菌体的效价。 辅助治疗。
滤菌过程
微孔滤膜
第二节
化学因素对微生物的影响
一、化学消毒剂的种类 二、化学消毒剂的作用机制 三、影响消毒剂作用的因素
常用消毒剂种类
类别 酚类 醇类 氧化剂 重金属盐 表面活性剂 染料 酸 类 类
变
作用机制 蛋白变性，细胞膜损伤 蛋白变性 氧化、蛋白沉淀 氧化、蛋白酶变性 蛋白变性，细胞膜损伤 干扰氧化、抑制繁殖
1年~数年
温度越低保存时间越长 （2）真空冷冻干燥法 ） 在低温状态下真 空抽去水分
消毒与灭菌技术PPT课件
煮沸消毒法（boiling sterilization）
要求 适用 方法 注意
❖殖❖配可强防❖物❖橡▪▪▪▪经应 有 空 物煮将 的体成提杀锈取 将适如❖浸沸❖❖第品胶轴将腔品消间从间后轴碗应 置5前将消如出，1高菌。▪， ， 当碳用金没二根玻橡～节物导不类及冷为放节、毒用 于%物毒中海 水 延水据璃胶达沸作酸的管品宜于属在次消水入1或盆1时等无 无～0器制物拔 长0器须刷放的品时途毒或，盖不到点用氢～的耐、水水间菌 菌分2皿品品械洗先置高时温时沸打能1刷间加沸消达，钠煮%湿搪；中沸器 容5应用性钟或在干过间水间开重的点m点洗从入毒还1海加时的用纱质、瓷械 器，后带腔净多中为叠再i可地n受0也纱布决干水物拔内盖，将 内效可入浓放5，放耐 、5然重区杀气～低布 包定℃灌的大每入要入物净沸品果去水度高玻后新气1压灭包 好放水容小，，保水，增0品，后，。污中时温璃m压加计裹 ，入影煮器相繁需消证中高增及i全计则n好 待水、低，，应同响的和热时毒物后适时后 水的部算在时煮， 沸时
特点：紫外线穿透力较弱
紫外线可杀灭多种微生物，包括杆菌、 病毒、真菌、细菌繁殖体等。杀灭繁殖 体需3~5s；杀灭芽孢需10min以上。
杀菌机制
使菌体DNA失去转换能力而死亡； 破坏菌体蛋白质中的氨基酸，使菌体蛋白光解 变性； 降低菌体内氧化酶的活性，使氧化能力丧失； 使空气中的氧电离产生具有极强杀菌作用的臭 氧。
第三章 清洁、消毒与灭菌技术
一、基本概念 二、物品清洁法 三、物理方法 四、化学方法
一 基本概念
洁清消 毒灭菌防 腐
是切清 上清上污抑 与清除 的除的迹制 繁除或 一脂物病,微 殖如或杀 切品等原生尘杀灭 微上微物埃灭物生的生的,物品物油一物生品, 长 以杀灭芽孢为准
4 消毒灭菌
A． B． C． D． E. 核酸吸收紫外线的能量 破坏DNA DNA构型 破坏DNA构型 穿透力强 常用于空气消毒 刺激眼睛和皮肤
9. 能达到灭菌效果的方法
A．煮沸10分钟 煮沸10分钟 10 干烤160℃ 1～ B．干烤160℃ 1～2小时 C．巴氏消毒法 D．高压蒸汽灭菌 E. 滤菌器滤过除菌
（3）人工紫外线灯原理：将水银放入石 人工紫外线灯原理： 英玻管中通电气化而成。 英玻管中通电气化而成。 （4）紫外线的穿透能力弱，不能通过普 紫外线的穿透能力弱， 通玻璃、尘埃， 通玻璃、尘埃，只能用于消毒物体表面及 空气、手术室、 空气、手术室、无菌操作实验室及烧伤病 亦可用于不耐热物品表面消毒。 房，亦可用于不耐热物品表面消毒。 杀菌波长的紫外线对人体皮肤、 （5）杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼 睛均有损伤作用，使用时应注意防护。 睛均有损伤作用，使用时应注意防护。
第三章 消毒与灭菌
梅 雪
一 基本概念
消毒（Disinfection） 消毒（Disinfection）
杀灭物体上病原微生物的方法。 杀灭物体上病原微生物的方法。用以消毒的 药物称为消毒剂(Disinfectants) (Disinfectants)。 药物称为消毒剂(Disinfectants)。一般消毒剂 在常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。 在常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。对于芽胞 则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。 则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。
A． 杀灭物体上所有微生物的方法 B． 杀死物体上病原微生物的方法 C． 抑制微生物生长繁殖的方法 D．杀死细菌芽胞的方法 E. 物体中没有任何活的微生物存在
2．杀灭细菌芽胞最有效的方法是
A． 煮沸法 B． 流动蒸汽消毒法 C． 间歇灭菌法 D． 高压蒸汽灭菌法 E. 巴氏消毒法
9. 能达到灭菌效果的方法
A．煮沸10分钟 煮沸10分钟 10 干烤160℃ 1～ B．干烤160℃ 1～2小时 C．巴氏消毒法 D．高压蒸汽灭菌 E. 滤菌器滤过除菌
（3）人工紫外线灯原理：将水银放入石 人工紫外线灯原理： 英玻管中通电气化而成。 英玻管中通电气化而成。 （4）紫外线的穿透能力弱，不能通过普 紫外线的穿透能力弱， 通玻璃、尘埃， 通玻璃、尘埃，只能用于消毒物体表面及 空气、手术室、 空气、手术室、无菌操作实验室及烧伤病 亦可用于不耐热物品表面消毒。 房，亦可用于不耐热物品表面消毒。 杀菌波长的紫外线对人体皮肤、 （5）杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼 睛均有损伤作用，使用时应注意防护。 睛均有损伤作用，使用时应注意防护。
第三章 消毒与灭菌
梅 雪
一 基本概念
消毒（Disinfection） 消毒（Disinfection）
杀灭物体上病原微生物的方法。 杀灭物体上病原微生物的方法。用以消毒的 药物称为消毒剂(Disinfectants) (Disinfectants)。 药物称为消毒剂(Disinfectants)。一般消毒剂 在常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。 在常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。对于芽胞 则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。 则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。
A． 杀灭物体上所有微生物的方法 B． 杀死物体上病原微生物的方法 C． 抑制微生物生长繁殖的方法 D．杀死细菌芽胞的方法 E. 物体中没有任何活的微生物存在
2．杀灭细菌芽胞最有效的方法是
A． 煮沸法 B． 流动蒸汽消毒法 C． 间歇灭菌法 D． 高压蒸汽灭菌法 E. 巴氏消毒法
第三章 消毒与灭菌
耐热药品、手术敷料等。
手提式高压蒸汽灭菌器
二. 辐 射
辐射：能量通过空间传递的一种物理现象。按辐
射对微生物的灭活作用分：
1.非电离辐射: 可见光、日光、紫外线 2.电离辐射: 、、γ 、χ 射线以及高能质子、 中子等
(一)非电离辐射
1.可见光: 指在红外线和紫外线之间的肉眼可见的光线，
其波长400～800nm。可见光线对微生物一般无多大影 响，但长时间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁殖，故
4. 何谓细菌素？
5. 毒性噬菌体和温和噬菌体的概念。 6. PFU的概念。
(2)巴氏消毒法 :以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特定微生物，
而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法 . 1.低温维持巴氏消毒法 63～65℃30min 2.高温瞬时巴氏消毒法 71～72℃15s 3.超高温巴氏消毒法 132℃1～2s
（3）流通蒸汽灭菌法 ：是一种常压蒸汽消毒法，细
菌繁殖体15-30分钟可杀灭，但芽孢不全部被杀灭。
培养细菌和保存菌种，均应置于阴暗之处。
光感作用 :指可见光具有微弱的杀菌作用，若将某些染料 如结晶紫、美蓝、汞溴红、伊红、沙黄等加到培养基或涂 在外伤表面，能增强可见光的杀菌作用 。
2.阳光: 直射日光有强烈的杀菌作用，是天然的杀菌因
素。许多微生物在直射日光的照射下，半小时到数小 时即可死亡。芽胞对日光照射的抵抗力比繁殖体大得 多，往往需经20h才死亡。日光的杀菌效力因地、因
（二）植物杀菌素 ：某些植物中存在的杀菌物质。
如黄连、大蒜、板蓝根等。
（三）细菌素 ：某种细菌产生的一种具有杀菌作用的
蛋白质，只能作用于与它同种不同菌株的细菌 以及与它亲缘关系相近的细菌，如大肠菌素 。
医学微生物学 消毒灭菌
很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微
生物。肝炎病毒、CMV、EBV 第四类 是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。 如小鼠白血病病毒等。 第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。
二、病原微生物实验室的分级
级别 处理对象 一级 对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、 动植物致病的致病因子。 对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的 二级 致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危 害，具有有效的预防和治疗措施。 对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶 三级 胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物 和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施。 对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途 四级 径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有 预防治疗措施。
二、化学消毒灭菌法
化学消毒剂的作用机制
消毒剂的主要种类 消毒剂的应用
消毒剂杀菌机理：
1. 使菌体蛋白变性和凝固 ：
酚、醇、酸硷、醛类、 重金属盐类（高浓度）
2 . 干扰细菌的酶系统（酶失活）：
氧化剂、重金属盐类（低浓度）
3. 损伤细菌细胞膜 ：
酚类（低浓度）、表面活性剂
按杀菌能力又可将消毒剂可分
高压蒸气灭菌器 103.4Kpa 121.3º C×15-20 分 钟
品
灭菌
消毒
医疗器械
煮沸法
湿
饮水和食具
耐高温 耐湿物
灭菌
热
法
品
种类 巴氏消 毒法
方法
效果
用途
牛奶，酒类
湿
巴斯德创用，61.1消毒（杀死病 62.8℃×30分钟， 原菌，不破坏 71.7 ℃ ×30秒钟 营养成分） （常用）
临床微生物与检验 第3章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全
（4）环氧乙烷
作用机理：对细菌蛋白质和核酸的烷化作用。 特点：
①为杂环类化合物，沸点10.8℃，易蒸发。气体消毒剂。
②有穿透力，杀菌广谱高效，杀灭芽胞能力强。 ③对多数物品无损害作用。 ④易燃，对人有一定毒性。空气中浓度不得超过1ppm。 用途：现已有特制的环氧乙烷灭菌箱。使用安全方便。
2.中效消毒剂—能杀灭微生物的繁殖体，结核分枝杆菌、某些
辐射杀菌法
日晒和紫外线
[原理] 日光中杀菌的成分主要是紫外线。紫外线的波长在 200～300nm时，具有杀菌作用，其中以265～266nm杀菌 力最强，易被DNA吸收。细菌DNA吸收紫外线后，其生物学 活性发生改变，同时蛋白质也光解变性，导致细菌死亡。 [特点] 紫外线穿透力弱，玻璃、尘埃、纸张、水蒸气均能阻 挡紫外线。 [应用范围] 日晒是有效的杀菌方法，用于病人的衣服、被褥、 书报等的灭菌。紫外线仅适用于手术室、婴儿室、烧伤病房、 传染病房和无菌室的空气消毒，亦可用于不耐热物品的表面 消毒。
2.熏蒸
3.二氧化氯溶液 4mg/m3
4.中草药
三、手和皮肤的消毒
（一）肥皂和流动水经常正确洗手是预防多种病原微生物感染的有效方法。 （二）被病原微生物污染时
1. 75%酒精 2. 氯己定溶液 3. 过氧乙酸 4. 次氯酸钠溶液 5. 碘伏
四、黏膜的消毒
（一）口腔黏膜 3%H2O2 （二）冲洗尿道、阴道、膀胱0.1%~0.5%氯己定溶液；1g/L高锰酸钾溶液
（1）含氯消毒剂
次氯酸钠
常用种类
二氯异氰酸尿酸钠
漂白粉
作用机理：
这类制剂遇水可产生氯（Cl2）、次氯酸（HClO）及新生态氧。 氯可氧化细菌的-SH、次氯酸（HClO）可与胞质成分作用，形成氮 -氯复合物，干扰细胞代谢。 特 点：（1）具有强大的杀菌作用。
03第三章 消毒与灭菌
分类： 第一类：低温维持巴氏消毒法，在63-65℃保持 30min。
第二类：高温瞬时巴氏消毒法，在71-72℃保持15s。
第三类：超高温巴氏消毒法，在132℃ 保持1-2s。
加热消毒后需迅速冷却至10 ℃以下，称为冷击。
3）流通蒸汽灭菌法 ：利用蒸汽在蒸笼或 流通蒸汽灭菌器内进行灭菌的方法，也称 间歇灭菌法。灭菌后需保温过夜再灭菌， 以达到完全灭菌的目的。
髓、尾鞘、尾板、尾刺、尾丝组成。
不同的噬菌体示意图
（二）抗原性及抵抗力 1、抗原性：能刺激机体产生特异性抗体。
特性：该抗体能抑制相应噬菌体侵袭敏感 细菌，但对已吸附或已进入宿主菌的噬菌体 不起作用。 2、抵抗力：对理化因素的抵抗力较强，较 耐热、耐低温和冰冻，但对紫外线和Ｘ射线 敏感；大多数能抵抗乙醚、氯仿和乙醇，在 0.5%升汞或苯酚中经3—7天不丧失活性。在 饱和NaCl溶液中保持活力数年。
可见光线对微生物一般无多大影响，但长时 间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁殖，故培 养细菌和保存菌种，均应置于阴暗处。 （二）阳光：直射日光有强烈的杀菌作用，紫外 线是日光杀菌作用的主要因素。
（三）紫外线：紫外线中波长200-300nm部分具有 杀菌作用，以265-266nm波长段的杀菌力最强。一 般实验室常用253.7nm，杀菌力强而稳定，照射1015min即可。 特点：穿透力很差，即使是很薄的玻璃也不能透 过。 适用范围：常用于微生物实验室、无菌室、手术室、 传染病房、种蛋室等的空气消毒，或用于不能用高 温或化学药品消毒的物品表面消毒。
二、消毒剂的种类及其应用
消毒剂的种类很多，一般可根据用途与消毒剂特点选择使用。 理想的消毒剂 杀菌力强、无腐蚀性、能长期保存、对动 物毒性很小、无残留污染、价格低等。 消毒剂的分类 （1）使菌体蛋白质变性 如酚类、醇类、重金属盐类、酸碱类、 醛类； （2）损伤胞浆膜 如酚类(低浓度)、表面活性剂、醇类等脂 溶剂；
第二类：高温瞬时巴氏消毒法，在71-72℃保持15s。
第三类：超高温巴氏消毒法，在132℃ 保持1-2s。
加热消毒后需迅速冷却至10 ℃以下，称为冷击。
3）流通蒸汽灭菌法 ：利用蒸汽在蒸笼或 流通蒸汽灭菌器内进行灭菌的方法，也称 间歇灭菌法。灭菌后需保温过夜再灭菌， 以达到完全灭菌的目的。
髓、尾鞘、尾板、尾刺、尾丝组成。
不同的噬菌体示意图
（二）抗原性及抵抗力 1、抗原性：能刺激机体产生特异性抗体。
特性：该抗体能抑制相应噬菌体侵袭敏感 细菌，但对已吸附或已进入宿主菌的噬菌体 不起作用。 2、抵抗力：对理化因素的抵抗力较强，较 耐热、耐低温和冰冻，但对紫外线和Ｘ射线 敏感；大多数能抵抗乙醚、氯仿和乙醇，在 0.5%升汞或苯酚中经3—7天不丧失活性。在 饱和NaCl溶液中保持活力数年。
可见光线对微生物一般无多大影响，但长时 间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁殖，故培 养细菌和保存菌种，均应置于阴暗处。 （二）阳光：直射日光有强烈的杀菌作用，紫外 线是日光杀菌作用的主要因素。
（三）紫外线：紫外线中波长200-300nm部分具有 杀菌作用，以265-266nm波长段的杀菌力最强。一 般实验室常用253.7nm，杀菌力强而稳定，照射1015min即可。 特点：穿透力很差，即使是很薄的玻璃也不能透 过。 适用范围：常用于微生物实验室、无菌室、手术室、 传染病房、种蛋室等的空气消毒，或用于不能用高 温或化学药品消毒的物品表面消毒。
二、消毒剂的种类及其应用
消毒剂的种类很多，一般可根据用途与消毒剂特点选择使用。 理想的消毒剂 杀菌力强、无腐蚀性、能长期保存、对动 物毒性很小、无残留污染、价格低等。 消毒剂的分类 （1）使菌体蛋白质变性 如酚类、醇类、重金属盐类、酸碱类、 醛类； （2）损伤胞浆膜 如酚类(低浓度)、表面活性剂、醇类等脂 溶剂；
兽医微生物学 第三章 消毒与灭菌
第三章消毒与灭菌第一节物理因素对微生物的影响第二节化学因素对微生物的影响第三节生物因素对微生物的影响1、灭菌（sterilization）指杀死物体中所有微生物的过程。
经灭菌后物体内外不含有任何活的微生物及其细菌的芽胞、霉菌孢子等。
2、消毒（disinfection）指杀灭物体中的病原微生物的过程。
消毒只要求达到消除传染性的目的，而对非病原微生物及其细菌的芽胞、霉菌孢子等不做要求。
3、防腐（antisepsis）指阻止或抑制微生物生长繁殖。
4、无菌（asepsis）指没有活的微生物的状态。
采取防止或杜绝任何微生物进入动物机体或其它物体的方法，称为无菌法。
以无菌法进行的操作称为无菌操作。
无菌操作（如下图）第一节物理因素对微生物的影响一、温度(一)低温大多数微生物对低温具有很强的抵抗力。
低温下，代谢活动降低到最低水平，生长繁殖停止，但仍可长时间保持活力。
意义：保存菌种、毒种、疫苗等(二)高温：高温对微生物具有明显的致死作用热力灭菌法：干热灭菌和湿热灭菌两种方法。
二者比较：在同一温度下，后者效力比前者为大。
原因：（1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固，蛋白质的含水量与凝固所需的温度成反比；（2）湿热的穿透力比干热强；（3）湿热的蒸汽遇物体放出潜热进一步提高物体的温度。
1、干热灭菌法(1)火焰灭菌法: 分为灼烧和焚烧两种，灼烧主要用于耐烧物品，直接在火焰上烧灼，如接种针（环）、金属器具、试管口等的灭菌；焚烧常用于烧毁的物品，直接点燃或在焚烧炉内焚烧，如传染病畜禽及实验感染动物的尸体、病畜禽的垫料以其他污染的废弃物等的灭菌(2)热空气灭菌法干热灭菌器适用于高温下不损坏、不变质的物品，如玻璃器皿、瓷器等的灭菌。
灭菌温度需160-170℃维持1.5-2 h 。
2、湿热灭菌法(1)煮沸消毒法:煮沸10～20 min可杀死所有细菌的繁殖体，芽胞常需煮沸1～2 h 才被杀死。
用于饮水、一般手术器械如刀剪、注射器、针头的消毒。
第三章 消毒与灭菌
第三章 消毒与灭菌
前言
1.微生物种类多、数量大、繁殖速 度快、自我保护力差。
2. 外界环境因素经常变化。
基本概念
1. 灭菌：指杀灭物体中所有病原微生物和非病原微生物 及其芽孢、霉菌孢子的方法。
2. 抑菌作用：指某些物质或因素所具有的抑制微生物生 长与繁殖作用。
3. 杀菌作用：指某些物质或因素所具有的在一定条件下 杀死微生物的作用。
1．概念： (1)抗菌素：某些微生物在代谢过程中产生的一类能抑 制或杀死另一些微生物的物质称为抗菌素。 (2)植物杀菌素：某些植物中存在的杀菌物质。 (3)细菌素：是某种细菌产生的一种具有杀菌作用的蛋白 质，只能用于与它同种不同菌株的细菌以及与它亲缘关 系相近的细菌。
第三节电生物因素对微生物的影响
第一节 物理因素对微 生物的影响
一、温度
热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两类。
干热灭菌包括火焰灭菌和热空气灭菌。
（1）火焰灭菌法：以火焰直接烧灼杀死物体中的全 部微生物的方法。分为灼烧和焚烧两种，灼烧 主要用于耐烧物品。焚烧常用于烧毁的物品。
（2）热空气灭菌法：利用干热灭菌器干热空气进行 灭菌的方法。适用于高温下不损坏、不变质的 物品。
（2）学习温度对微生物的影响应重点掌握各种消毒、灭 菌方法的概念、方法、用途。
（3）常见的消毒灭菌方法有火焰、热空气、高压蒸汽灭 菌法，巴氏消毒法、煮沸消毒法和间歇灭菌法。
（4）辐射、干燥、滤过、微波、超声波等物理因素以不 同的机制影响微生物的生长和繁殖。
（5）学习化学因素和生物学因素对微生物的影响有助于 了解化学药物消毒灭菌方法和微生态的相关内容。
第一节 物理因素对微 生物的影响
一、温度
湿热灭菌法
（1）煮沸灭菌：煮沸10～20min可杀死所有细菌 的 繁殖体，芽孢常需煮沸1～2h才被杀死。
前言
1.微生物种类多、数量大、繁殖速 度快、自我保护力差。
2. 外界环境因素经常变化。
基本概念
1. 灭菌：指杀灭物体中所有病原微生物和非病原微生物 及其芽孢、霉菌孢子的方法。
2. 抑菌作用：指某些物质或因素所具有的抑制微生物生 长与繁殖作用。
3. 杀菌作用：指某些物质或因素所具有的在一定条件下 杀死微生物的作用。
1．概念： (1)抗菌素：某些微生物在代谢过程中产生的一类能抑 制或杀死另一些微生物的物质称为抗菌素。 (2)植物杀菌素：某些植物中存在的杀菌物质。 (3)细菌素：是某种细菌产生的一种具有杀菌作用的蛋白 质，只能用于与它同种不同菌株的细菌以及与它亲缘关 系相近的细菌。
第三节电生物因素对微生物的影响
第一节 物理因素对微 生物的影响
一、温度
热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两类。
干热灭菌包括火焰灭菌和热空气灭菌。
（1）火焰灭菌法：以火焰直接烧灼杀死物体中的全 部微生物的方法。分为灼烧和焚烧两种，灼烧 主要用于耐烧物品。焚烧常用于烧毁的物品。
（2）热空气灭菌法：利用干热灭菌器干热空气进行 灭菌的方法。适用于高温下不损坏、不变质的 物品。
（2）学习温度对微生物的影响应重点掌握各种消毒、灭 菌方法的概念、方法、用途。
（3）常见的消毒灭菌方法有火焰、热空气、高压蒸汽灭 菌法，巴氏消毒法、煮沸消毒法和间歇灭菌法。
（4）辐射、干燥、滤过、微波、超声波等物理因素以不 同的机制影响微生物的生长和繁殖。
（5）学习化学因素和生物学因素对微生物的影响有助于 了解化学药物消毒灭菌方法和微生态的相关内容。
第一节 物理因素对微 生物的影响
一、温度
湿热灭菌法
（1）煮沸灭菌：煮沸10～20min可杀死所有细菌 的 繁殖体，芽孢常需煮沸1～2h才被杀死。
第三章 消毒与灭菌
2.煮沸法在1个大气压下，水的煮沸温度为100℃，一般细菌的繁殖体5min能被杀死，细菌芽胞常需煮沸1～2h才被杀灭。此法常用于消毒食具、刀剪、注射器等。水中加入2％碳酸钠，既可提高沸点达105℃，促进芽胞的杀灭，又可防止金属器皿生锈。
3. 流动蒸气消毒法又称常压蒸气消毒法，是利用一个大气压下100℃的水蒸气进行消毒。细菌繁殖体经15～30min可被杀灭，但芽胞常不被全部杀灭。该法常用的器具是Arnold消毒器，我国的蒸笼具有相同的原理。
三、滤过除菌法
滤过除菌法（filtration）是用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以达到无菌目的。所用的器具是滤菌器（filter），滤菌器含有微细小孔，只允许液体或气体通过，而大于孔径的细菌等颗粒不能通过。滤过法主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。滤菌器的除菌性能，与滤器材料的特性、滤孔大小、静电作用等因素有关。滤菌器的种类很多，目前常用的有薄膜滤菌器、素陶瓷滤菌器、石棉滤菌器（亦称Seitz滤菌器）、烧结玻璃滤菌器等。
二、消毒剂的应用
病人排泄物与分泌物 粪、尿、脓、痰等，一般多用等量的20％漂白粉、5％石炭酸或2％来苏，搅拌均匀，作用2h再倾去。
皮肤2.5%碘酒、70％乙醇、2％红汞均可应用。
粘膜新生儿预防淋病奈瑟菌性眼结膜炎可用1％硝酸银或2％蛋白银滴眼；口腔粘膜消毒可用3％过氧化氢；冲洗尿道、阴道、膀胱等可用0.01%～0.1%洗必泰或0.1％高锰酸钾。
表面活性剂又称去污剂，易溶于水，能减低液体的表面张力，使物品表面油脂乳化易于除去，故具清洁作用。并能吸附于细菌表面，改变胞壁通透性，使菌体内的酶、辅酶、代谢中间产物逸出，呈现杀菌作用。表面活性剂有阳离子型、阴离子型和非离子型三类。因细菌带阴电，故阳离子型杀菌作用较强。阴离子型如烷苯磺酸盐与十二烷基硫酸钠解离后带阴电，对革兰阳性菌也有杀菌作用。非离子型对细菌无毒性，有些反而有利于细菌的生长，例如吐温80（tween 80）对结核分枝杆菌有刺激生长、并有使菌分散的作用。常用于消毒的表面活性剂有新洁尔灭、杜灭芬等。
3. 流动蒸气消毒法又称常压蒸气消毒法，是利用一个大气压下100℃的水蒸气进行消毒。细菌繁殖体经15～30min可被杀灭，但芽胞常不被全部杀灭。该法常用的器具是Arnold消毒器，我国的蒸笼具有相同的原理。
三、滤过除菌法
滤过除菌法（filtration）是用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以达到无菌目的。所用的器具是滤菌器（filter），滤菌器含有微细小孔，只允许液体或气体通过，而大于孔径的细菌等颗粒不能通过。滤过法主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。滤菌器的除菌性能，与滤器材料的特性、滤孔大小、静电作用等因素有关。滤菌器的种类很多，目前常用的有薄膜滤菌器、素陶瓷滤菌器、石棉滤菌器（亦称Seitz滤菌器）、烧结玻璃滤菌器等。
二、消毒剂的应用
病人排泄物与分泌物 粪、尿、脓、痰等，一般多用等量的20％漂白粉、5％石炭酸或2％来苏，搅拌均匀，作用2h再倾去。
皮肤2.5%碘酒、70％乙醇、2％红汞均可应用。
粘膜新生儿预防淋病奈瑟菌性眼结膜炎可用1％硝酸银或2％蛋白银滴眼；口腔粘膜消毒可用3％过氧化氢；冲洗尿道、阴道、膀胱等可用0.01%～0.1%洗必泰或0.1％高锰酸钾。
表面活性剂又称去污剂，易溶于水，能减低液体的表面张力，使物品表面油脂乳化易于除去，故具清洁作用。并能吸附于细菌表面，改变胞壁通透性，使菌体内的酶、辅酶、代谢中间产物逸出，呈现杀菌作用。表面活性剂有阳离子型、阴离子型和非离子型三类。因细菌带阴电，故阳离子型杀菌作用较强。阴离子型如烷苯磺酸盐与十二烷基硫酸钠解离后带阴电，对革兰阳性菌也有杀菌作用。非离子型对细菌无毒性，有些反而有利于细菌的生长，例如吐温80（tween 80）对结核分枝杆菌有刺激生长、并有使菌分散的作用。常用于消毒的表面活性剂有新洁尔灭、杜灭芬等。
消毒与灭菌复习题
第三章消毒与灭菌复习题〔一〕单项选择题1．消毒是指〔〕A、杀灭物体上的全部微生物B、杀死物体上的病原微生物C、杀死细菌芽胞D、抑制微生物生长繁殖的方法2．对血清培养基的灭菌，应选用〔〕。
A、煮沸法B、巴氏消毒法C、间歇灭菌法D、高压蒸汽灭菌法3．杀灭芽胞最常用和最有效的方法是〔〕。
A、紫外线照耀B、煮沸5 minC、高压蒸汽灭菌法D、流通蒸汽灭菌法4．乙醇消毒剂常用的浓度是〔〕。
A、100%B、95%C、75%D、50%5．血清及药物等除菌，可采取以下哪种方法？A、化学消毒剂B、高压蒸汽灭菌法C、紫外线照耀D、滤过除菌法6．高压蒸汽灭菌的温度和时间是：〔〕Ａ、121.3℃,20′Ｂ、160℃，2hＣ、100℃，10′D、110℃，30′7．杀灭包含芽胞在内的全部微生物的方法称〔〕。
A、防腐B、无菌C、灭菌D、消毒8．高压蒸汽灭菌法通常在103.4 kPa的压力下维持〔〕。
A、5分钟B、10分钟C、15～20分钟D、60分钟9．低温〔4℃〕对一般细菌的作用是〔〕。
A、使毒力减弱B、使代谢减慢C、加速代谢D、杀灭细菌10．推断彻底灭菌的依据是〔〕。
A、细菌繁殖体被完全杀死B、细菌菌毛蛋白变性C、芽胞被完全杀死D、鞭毛蛋白被破坏11．紫外线杀菌的最正确波长为〔〕。
A、200 nmB、265 nmC、300 nmD、560 nm12．外科敷料使用前宜采纳的灭菌方法是〔〕。
A、干烤B、紫外线照耀C、巴氏消毒法D、高压蒸汽灭菌〔二〕填空题1．高压蒸汽灭菌法的蒸汽压力为103.4 kPa〔1.05 kg/cm2〕，温度为121.3℃，维持时间是15～20 min。
2．紫外线杀菌最强的波长为265～266 nm，常用于无菌室空气的消毒。
3．常用的湿热消毒灭菌法主要有煮沸法、巴氏消毒法、流动蒸汽消毒法、间歇蒸汽灭菌法。
压蒸汽灭菌法〔5选4〕4．手术室空气消毒一般采纳紫外线照耀法。
5．通常以是否杀灭芽胞作为推断灭菌的效果的指标。
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第三章 消毒与灭菌
介绍几个基本概念
1．灭菌：应用物理或化学方法杀灭物体中所有的病 原微生物、非病原微生物以及芽胞和霉菌孢子的方 法。 2．消毒：应用物理或化学方法杀灭物体中的病原微 生物，而对非病原微生物及芽胞，孢子不要求全部 杀死。 3．防腐：应用物理或化学方法阻止和抑制微生物的 生长繁殖的方法。 4．无菌操作法：防止或杜绝一切细菌进入动物体或 其他物体的方法。 5．滤过除菌：液体或气体通过滤过作用除去其中所 存在的细菌。一般用0.22微米滤膜，但不能除去病 毒，霉形体及L型细菌。
滤菌器:用物理阻留的方法，将液体或空气中
的细菌除去,以达到除菌目的。含有微细小孔
<0.22微米,只允许液体或气体通过，而大于孔
径的细菌等颗粒不能通过。
适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等
的除菌。
滤菌器
六 、其他物理因素
超声波
超声波是由超声波发生器产生的，对细胞 有破坏作用，能使大多数细胞裂解死亡。
大肠杆菌T4噬菌体构造
（二）、噬菌体(phage)的繁殖
噬菌体并没有个体的生长过程，而只有其基本成 分的合成和装配，即首先将各个部件合成出来， 然后装配，所以一般将噬菌体的繁殖称做复制。 根据噬菌体与宿主的关系： 烈性噬菌体：指感染宿主细胞后，能够使宿主细 胞裂解的噬菌体. 温和噬菌体（或溶源性噬菌体）：噬菌体感染细 胞后，将其核酸整合（附着）到宿主的核DNA上， 并且可以随宿主DNA的复制而进行同步复制，在 一般情况下，不引起寄主细胞裂解的噬菌体。
取样人为裂解处理（每5min） 样品中加入氯仿裂解细胞
裂解液加入敏感菌液中 适当稀释混合液
涂布于琼脂培养基上
24-48h
计数噬菌斑
噬菌斑: 概念：将少量噬菌体与大量敏 感菌混合培养在营养琼脂中， 在平板表面布满宿主细胞的 菌苔上,可以用肉眼看到一 个个透明的不长菌的小圆斑， 称为噬菌斑。(每个噬菌斑 一般是由一个噬菌体粒子形 成的。) 应用: 噬菌斑可用于检出、 分离、纯化噬菌体和进行噬 菌体的计数。
第三节
生物因素
共生：两种或多种生物生活在一起时，彼此并不损 害而相互有利，称为共生。 寄生：一种生物从另一种生物获得所需的营养，赖 以为生，并对后者呈现伤害作用者，称为寄生。 拮抗：当两种微生物生活在一起时，一种微生物能 抑制或杀死另一种微生物，此现象称为拮抗。
协同：两种或多种生物在同一环境中，互相协助， 共同完成某种作用，而为其任何一种所不能单独达 到。
一步生长曲线
1. 实验设计依据：1个菌体被1个噬菌体感染,避免二 次吸附；细菌群体被噬菌体同步感染。 2. 实验过程: 敏感菌10ml Phage 1ml
混匀，5min,使之吸附
离心或用抗phage血清处理, 去除过量phage 高倍稀释,吸附phage的菌悬液(避免多次吸附) 37℃培养,定时取样
1、烈性噬菌体的繁殖
烈性噬菌体的繁殖过程一般分为五个阶段： 即吸附、侵入、复制、装配和释放。
①吸附：噬菌体和宿主细胞上的特异 性吸附部位进行特异性结合，噬菌体 以尾丝牢固吸附在受体上后，靠刺突 “钉”在细胞表面上。 ②侵入：核酸注入细胞的过程。噬菌 体尾部所含酶类物质可使细胞壁产生 一些小孔，然后尾鞘收缩，尾髓刺入 细胞壁，并将核酸注入细胞内，蛋白 质外壳留在细胞外。 ③复制 ：包括核酸的复制和蛋白质 合成。噬菌体核酸进入宿主细胞后， 会控制宿主细胞的合成系统，然后以 噬菌体核酸中的指令合成噬菌体所需 的核酸和蛋白质。
一、抗生素与细菌素
（一）抗生素
是某些微生物在代谢过程中产生的能抑制或杀灭 其他微生物的一种化学物质。它主要来源于放线菌、 某些真菌和细菌等。
抗生素的作用机理：
a.干扰细菌细胞壁的合成 b.影响细胞膜的通透性 c.阻碍菌体蛋白质的合成 d.改变核酸代谢
（二）细菌素
大肠杆菌产生的细菌素称大肠菌素；葡萄 球菌产生的称葡萄球菌素；霍乱弧菌产生的称 弧菌素等，每类细菌素又可分为不同的型别； 细菌素仅对近缘细菌有作用。
c)
D、巴氏消毒法(pasteurization) a) 是食品（牛奶）酿造（啤酒）工业中常用的 方法。 b) 具体做法是63－65℃处理30min或71～72℃度 处理15 s,速冷却至10℃下。 c) 这样即可杀死病原微生物。又不致损坏营养， 可保留食品饮料原有风味。 d) 为节省时间，又达到巴氏消毒的效果，现多 用高温瞬时灭菌132℃下1-2 s。
碘液 乙醇 石炭酸
酚类 来苏尔 表面活性剂 酸碱类 新洁尔灭 生石灰
染料
龙胆紫
2～4
表浅创伤消毒
二、影响消毒剂作用的因素
消毒剂的性质 消毒剂的浓度与作用时间
微生物的类型及数量
环境中有机物的存在
三、选择适当的消毒剂
杀菌谱广、有效浓度低、作用快。 性质稳定、易溶于水、不易受酸碱影响。 无腐蚀性、无毒；不易残留。 价格低、便于运输，可长期保存。
干热灭菌(dry
heat sterilization )
焚烧灭菌法：常用于废弃物动物尸体等处理。
烧灼灭菌法：是直接火焰灭菌，如接种环灭菌。
烘烤灭菌法；实验室用干燥箱烘。一般是160℃2 小时即可达到灭菌目的。
湿热灭菌(mosist
heatsterilization)
在同温度下，湿热灭菌的效果比干热 灭菌好；因为：
（2）中效消毒剂 除细菌芽孢外，可杀灭各种微 生物。如乙醇、酚、含氯消毒剂和碘消毒剂等。
（3）低效消毒剂 可杀灭细菌繁殖体、真菌和 有囊膜病毒，但不能杀灭细菌芽孢、结核杆菌和无 囊膜病毒。如新洁尔灭、洗必太等。
一、常用消毒剂的实用性能 见下表
消毒剂类别
重金属盐
名称
红汞 硫柳汞 高锰酸钾
浓度(%)
（一）噬菌体的形态结构与组成
1、组成：主要由蛋白质和核酸组成。 2、基本形态：蝌蚪形、微球形和纤丝形。
3、蝌蚪形噬菌体的构造
以大肠杆菌T4噬菌体为例 头部：廿面体对称结构，由蛋白 质衣壳构成，内含一条DNA。 颈部：薄盘状，附颈须。 尾鞘：长95nm, 衣壳粒螺旋对称； 可伸缩。 尾髓:中空，DNA可由此进入细胞。 基板: 六角形盘状物，其上有刺 突、尾丝。 刺突: 有吸附功能。 尾丝: 有识别吸附功能。
噬菌斑
以培养时间为横坐标,以 噬菌斑数为纵坐标,绘 制成的曲线为一步生 长曲线。
可分以下阶段：
潜伏期
裂解期
稳定期
一步生长曲线
潜伏期：从噬菌体吸附细菌到细菌细胞释放 新的噬菌体之前的这段时期.曲线平行于 横轴，噬菌体数无变化.样品中无游离的 噬菌体。(潜伏期前的噬菌斑数是噬菌体 数,也就是感染噬菌体的细菌数). 裂解期：曲线直线上升,子代噬菌体不断释放 到培养基中,直到达到一个极限. 稳定期:感染细胞后复制的子代噬菌体全部释 放，噬菌斑数稳定，一次感染结束。
三、渗透压
细菌处于低渗液中，细胞会吸水膨胀乃至 破裂，称胞浆压出。
细胞处于高渗液中会脱水，引起细胞质和
细胞壁分离，称质壁分离，导致死亡。
等渗溶液对微生物生长有利
四、辐射
辐射是能量通过空间传递的一种物理现象。
可见光线
肉眼可见的光线是在红外线和紫外线之间， 波长为400～800nm。
日光
利用日光暴晒是常用的简易消毒方法，许 多细菌繁殖体在日光直射下2h很易死亡。
第一节
物理因素
温度 干燥 渗透压 辐射 过滤 其他物理因素
一、温度
（一）高温对微生物的影响
高温对微生物有明显的致死作用，其主要原因是高温能 使菌体蛋白质变性或凝固，酶失去活性，核酸结构遭到 破坏等，从而导致其死亡。 多数细菌，酵母菌和霉菌的营养细胞和病毒在50-65 º Ｃ 10 min可以致死。 细菌芽孢，在121 º Ｃ下５－20min才能致死， 同种微生物老龄菌比幼菌耐热。
1928年A.Fleming发现青霉素
澳大利亚病理学家霍华 德.弗罗里与弗莱明
1940提纯出青霉素。
共同获得1945年诺贝尔 生理学和医学奖.
三、 噬菌体
病毒种类很多，根据病毒寄生的对象来分，有植 物病毒、动物病毒和微生物病毒。 噬菌体：是病毒中的一种，一般把侵染细菌、放 线菌的病毒叫噬菌体。（把侵染真菌的病毒叫噬 真菌体） 噬菌体在自然界广泛存在，在1995年发表的ICTV 的病毒分类与命名第六次报告中共报道了4000余 种，分别划归为49个病毒科. 据Bradley(1967)归纳，噬菌体共有六类形态。
2 0.01 0.1 3 0.2～0.5 2.5 70～75 3～5 3～5 0.1 10～20
用途
皮肤、粘膜、小创面消毒 生物制品防腐 皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒 皮肤、粘膜、创伤消毒 塑料、玻璃、人造纤维消毒 皮肤消毒 皮肤、体温计消毒 地面、器皿表面和排泄物消毒 同上、也常用于手及皮肤消毒 手术器械消毒 排泄物、地面消毒
a比干热更易使菌体蛋白凝固。 b湿热穿透力强； c湿热可以释放大量潜热。
A.
B.
C.
D.
E.
湿热灭菌法 高压蒸汽灭菌法 煮沸消毒法 流通蒸汽消毒法 间歇蒸汽灭菌法 巴氏消毒法
A.
高压蒸汽灭菌法
是湿热灭菌中最好的方法， 通常1.05kg/cm2,的压力下面 （此时温度121ºＣ）处理15 －30min。要排冷空气，否则 会形成假压力，虽然压力达 到要求，温度却达不到相应 温度，而影响灭菌效果。
（二）低温对微生物的影响
①
常温冰箱保存细菌和病毒：（细菌4～0℃； 病毒－20℃～－70℃）。 低温保存食品应迅速冷冻，否则扰乱细胞胶 体状态，使水分形成结晶，冰结晶还能机械 地刺伤菌体胞膜，胞壁。 冷冻真空干燥法：采取迅速冷冻和抽真空除 水原理；如冻干疫苗和冻干菌种。
介绍几个基本概念
1．灭菌：应用物理或化学方法杀灭物体中所有的病 原微生物、非病原微生物以及芽胞和霉菌孢子的方 法。 2．消毒：应用物理或化学方法杀灭物体中的病原微 生物，而对非病原微生物及芽胞，孢子不要求全部 杀死。 3．防腐：应用物理或化学方法阻止和抑制微生物的 生长繁殖的方法。 4．无菌操作法：防止或杜绝一切细菌进入动物体或 其他物体的方法。 5．滤过除菌：液体或气体通过滤过作用除去其中所 存在的细菌。一般用0.22微米滤膜，但不能除去病 毒，霉形体及L型细菌。
滤菌器:用物理阻留的方法，将液体或空气中
的细菌除去,以达到除菌目的。含有微细小孔
<0.22微米,只允许液体或气体通过，而大于孔
径的细菌等颗粒不能通过。
适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等
的除菌。
滤菌器
六 、其他物理因素
超声波
超声波是由超声波发生器产生的，对细胞 有破坏作用，能使大多数细胞裂解死亡。
大肠杆菌T4噬菌体构造
（二）、噬菌体(phage)的繁殖
噬菌体并没有个体的生长过程，而只有其基本成 分的合成和装配，即首先将各个部件合成出来， 然后装配，所以一般将噬菌体的繁殖称做复制。 根据噬菌体与宿主的关系： 烈性噬菌体：指感染宿主细胞后，能够使宿主细 胞裂解的噬菌体. 温和噬菌体（或溶源性噬菌体）：噬菌体感染细 胞后，将其核酸整合（附着）到宿主的核DNA上， 并且可以随宿主DNA的复制而进行同步复制，在 一般情况下，不引起寄主细胞裂解的噬菌体。
取样人为裂解处理（每5min） 样品中加入氯仿裂解细胞
裂解液加入敏感菌液中 适当稀释混合液
涂布于琼脂培养基上
24-48h
计数噬菌斑
噬菌斑: 概念：将少量噬菌体与大量敏 感菌混合培养在营养琼脂中， 在平板表面布满宿主细胞的 菌苔上,可以用肉眼看到一 个个透明的不长菌的小圆斑， 称为噬菌斑。(每个噬菌斑 一般是由一个噬菌体粒子形 成的。) 应用: 噬菌斑可用于检出、 分离、纯化噬菌体和进行噬 菌体的计数。
第三节
生物因素
共生：两种或多种生物生活在一起时，彼此并不损 害而相互有利，称为共生。 寄生：一种生物从另一种生物获得所需的营养，赖 以为生，并对后者呈现伤害作用者，称为寄生。 拮抗：当两种微生物生活在一起时，一种微生物能 抑制或杀死另一种微生物，此现象称为拮抗。
协同：两种或多种生物在同一环境中，互相协助， 共同完成某种作用，而为其任何一种所不能单独达 到。
一步生长曲线
1. 实验设计依据：1个菌体被1个噬菌体感染,避免二 次吸附；细菌群体被噬菌体同步感染。 2. 实验过程: 敏感菌10ml Phage 1ml
混匀，5min,使之吸附
离心或用抗phage血清处理, 去除过量phage 高倍稀释,吸附phage的菌悬液(避免多次吸附) 37℃培养,定时取样
1、烈性噬菌体的繁殖
烈性噬菌体的繁殖过程一般分为五个阶段： 即吸附、侵入、复制、装配和释放。
①吸附：噬菌体和宿主细胞上的特异 性吸附部位进行特异性结合，噬菌体 以尾丝牢固吸附在受体上后，靠刺突 “钉”在细胞表面上。 ②侵入：核酸注入细胞的过程。噬菌 体尾部所含酶类物质可使细胞壁产生 一些小孔，然后尾鞘收缩，尾髓刺入 细胞壁，并将核酸注入细胞内，蛋白 质外壳留在细胞外。 ③复制 ：包括核酸的复制和蛋白质 合成。噬菌体核酸进入宿主细胞后， 会控制宿主细胞的合成系统，然后以 噬菌体核酸中的指令合成噬菌体所需 的核酸和蛋白质。
一、抗生素与细菌素
（一）抗生素
是某些微生物在代谢过程中产生的能抑制或杀灭 其他微生物的一种化学物质。它主要来源于放线菌、 某些真菌和细菌等。
抗生素的作用机理：
a.干扰细菌细胞壁的合成 b.影响细胞膜的通透性 c.阻碍菌体蛋白质的合成 d.改变核酸代谢
（二）细菌素
大肠杆菌产生的细菌素称大肠菌素；葡萄 球菌产生的称葡萄球菌素；霍乱弧菌产生的称 弧菌素等，每类细菌素又可分为不同的型别； 细菌素仅对近缘细菌有作用。
c)
D、巴氏消毒法(pasteurization) a) 是食品（牛奶）酿造（啤酒）工业中常用的 方法。 b) 具体做法是63－65℃处理30min或71～72℃度 处理15 s,速冷却至10℃下。 c) 这样即可杀死病原微生物。又不致损坏营养， 可保留食品饮料原有风味。 d) 为节省时间，又达到巴氏消毒的效果，现多 用高温瞬时灭菌132℃下1-2 s。
碘液 乙醇 石炭酸
酚类 来苏尔 表面活性剂 酸碱类 新洁尔灭 生石灰
染料
龙胆紫
2～4
表浅创伤消毒
二、影响消毒剂作用的因素
消毒剂的性质 消毒剂的浓度与作用时间
微生物的类型及数量
环境中有机物的存在
三、选择适当的消毒剂
杀菌谱广、有效浓度低、作用快。 性质稳定、易溶于水、不易受酸碱影响。 无腐蚀性、无毒；不易残留。 价格低、便于运输，可长期保存。
干热灭菌(dry
heat sterilization )
焚烧灭菌法：常用于废弃物动物尸体等处理。
烧灼灭菌法：是直接火焰灭菌，如接种环灭菌。
烘烤灭菌法；实验室用干燥箱烘。一般是160℃2 小时即可达到灭菌目的。
湿热灭菌(mosist
heatsterilization)
在同温度下，湿热灭菌的效果比干热 灭菌好；因为：
（2）中效消毒剂 除细菌芽孢外，可杀灭各种微 生物。如乙醇、酚、含氯消毒剂和碘消毒剂等。
（3）低效消毒剂 可杀灭细菌繁殖体、真菌和 有囊膜病毒，但不能杀灭细菌芽孢、结核杆菌和无 囊膜病毒。如新洁尔灭、洗必太等。
一、常用消毒剂的实用性能 见下表
消毒剂类别
重金属盐
名称
红汞 硫柳汞 高锰酸钾
浓度(%)
（一）噬菌体的形态结构与组成
1、组成：主要由蛋白质和核酸组成。 2、基本形态：蝌蚪形、微球形和纤丝形。
3、蝌蚪形噬菌体的构造
以大肠杆菌T4噬菌体为例 头部：廿面体对称结构，由蛋白 质衣壳构成，内含一条DNA。 颈部：薄盘状，附颈须。 尾鞘：长95nm, 衣壳粒螺旋对称； 可伸缩。 尾髓:中空，DNA可由此进入细胞。 基板: 六角形盘状物，其上有刺 突、尾丝。 刺突: 有吸附功能。 尾丝: 有识别吸附功能。
噬菌斑
以培养时间为横坐标,以 噬菌斑数为纵坐标,绘 制成的曲线为一步生 长曲线。
可分以下阶段：
潜伏期
裂解期
稳定期
一步生长曲线
潜伏期：从噬菌体吸附细菌到细菌细胞释放 新的噬菌体之前的这段时期.曲线平行于 横轴，噬菌体数无变化.样品中无游离的 噬菌体。(潜伏期前的噬菌斑数是噬菌体 数,也就是感染噬菌体的细菌数). 裂解期：曲线直线上升,子代噬菌体不断释放 到培养基中,直到达到一个极限. 稳定期:感染细胞后复制的子代噬菌体全部释 放，噬菌斑数稳定，一次感染结束。
三、渗透压
细菌处于低渗液中，细胞会吸水膨胀乃至 破裂，称胞浆压出。
细胞处于高渗液中会脱水，引起细胞质和
细胞壁分离，称质壁分离，导致死亡。
等渗溶液对微生物生长有利
四、辐射
辐射是能量通过空间传递的一种物理现象。
可见光线
肉眼可见的光线是在红外线和紫外线之间， 波长为400～800nm。
日光
利用日光暴晒是常用的简易消毒方法，许 多细菌繁殖体在日光直射下2h很易死亡。
第一节
物理因素
温度 干燥 渗透压 辐射 过滤 其他物理因素
一、温度
（一）高温对微生物的影响
高温对微生物有明显的致死作用，其主要原因是高温能 使菌体蛋白质变性或凝固，酶失去活性，核酸结构遭到 破坏等，从而导致其死亡。 多数细菌，酵母菌和霉菌的营养细胞和病毒在50-65 º Ｃ 10 min可以致死。 细菌芽孢，在121 º Ｃ下５－20min才能致死， 同种微生物老龄菌比幼菌耐热。
1928年A.Fleming发现青霉素
澳大利亚病理学家霍华 德.弗罗里与弗莱明
1940提纯出青霉素。
共同获得1945年诺贝尔 生理学和医学奖.
三、 噬菌体
病毒种类很多，根据病毒寄生的对象来分，有植 物病毒、动物病毒和微生物病毒。 噬菌体：是病毒中的一种，一般把侵染细菌、放 线菌的病毒叫噬菌体。（把侵染真菌的病毒叫噬 真菌体） 噬菌体在自然界广泛存在，在1995年发表的ICTV 的病毒分类与命名第六次报告中共报道了4000余 种，分别划归为49个病毒科. 据Bradley(1967)归纳，噬菌体共有六类形态。
2 0.01 0.1 3 0.2～0.5 2.5 70～75 3～5 3～5 0.1 10～20
用途
皮肤、粘膜、小创面消毒 生物制品防腐 皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒 皮肤、粘膜、创伤消毒 塑料、玻璃、人造纤维消毒 皮肤消毒 皮肤、体温计消毒 地面、器皿表面和排泄物消毒 同上、也常用于手及皮肤消毒 手术器械消毒 排泄物、地面消毒
a比干热更易使菌体蛋白凝固。 b湿热穿透力强； c湿热可以释放大量潜热。
A.
B.
C.
D.
E.
湿热灭菌法 高压蒸汽灭菌法 煮沸消毒法 流通蒸汽消毒法 间歇蒸汽灭菌法 巴氏消毒法
A.
高压蒸汽灭菌法
是湿热灭菌中最好的方法， 通常1.05kg/cm2,的压力下面 （此时温度121ºＣ）处理15 －30min。要排冷空气，否则 会形成假压力，虽然压力达 到要求，温度却达不到相应 温度，而影响灭菌效果。
（二）低温对微生物的影响
①
常温冰箱保存细菌和病毒：（细菌4～0℃； 病毒－20℃～－70℃）。 低温保存食品应迅速冷冻，否则扰乱细胞胶 体状态，使水分形成结晶，冰结晶还能机械 地刺伤菌体胞膜，胞壁。 冷冻真空干燥法：采取迅速冷冻和抽真空除 水原理；如冻干疫苗和冻干菌种。