第3章 消毒与灭菌

液氮罐
液氮（-195.8 ºC) 常用来保存菌种、 细胞等。
2. 高温 高温对微生物具有致死作用，常用于 消毒和灭菌。高温对菌体蛋白质、核酸、酶系 统等产生破坏作用。导致菌体死亡。
高温灭菌法 分干热灭菌和湿热灭菌两类， 湿热传导性好、穿透力强灭菌效力大。
（1）干热灭菌法 包括火焰灭菌和热空气灭菌两类。 火焰灭菌法是以火焰直接烧灼杀死物体中微生
消毒 指杀灭物体中病原微生物的方法。用于消毒 的化学药品叫消毒剂或杀菌剂。
防腐 指阻止或抑制微生物生长繁殖的方法。用 于防腐的化学药品叫防腐剂或抑菌剂。
无菌 指在一定空间内没有活微生物的状态。防 止任何微生物进入动物机体或物体的方法，叫无菌 法。以无菌法进行的操作称无菌技术或无菌操作。
第一节 物理因素对微生物的影响
煮沸灭菌器
巴氏消毒法 以较低温度杀灭液态食品中病原菌或特定 微生物，尽量保持其营养成分和风味的消毒方法。主 要用于葡萄酒、啤酒、果酒及牛乳等食品的消毒。
巴氏消毒法具体方法有三种 低温维持巴氏消毒法（LTH） 63-65℃ 30min； 高温瞬时巴氏消毒法(HTST) 71-72℃ 15s； 超高温巴氏消毒法(UHT) 132℃ 1-2s。 消毒后均须迅速冷却至10℃以下，促进细菌死亡，
本章着重介绍物理、化学、生物学因素对微生物 的抑制或杀灭作用以及消毒灭菌方法。介绍几个基 本概念。
杀菌作用 指某些物质或因素具有的杀死微生物 的作用。
抑菌作用 指某些物质或因素所具有的抑制微生 物生长繁殖的作用。
抗菌作用 指某些药物所具有的抑制或杀灭微生物 的作用。
灭菌 指杀灭物体中所有微生物（包括芽孢和孢子） 的方法。
物的方法。分为灼烧和焚烧两种。
热空气灭菌指利用干热灭菌器以干热空气进行灭 菌的方法。用于耐高温物品。灭菌条件：160℃维持 l-2h，才能杀死所有微生物（芽孢、孢子）。
（2）湿热灭菌法 有煮沸灭菌、巴氏消毒、流通蒸 汽灭菌、高压有细菌繁殖体， 芽抱常需煮沸1-2h才被杀死。手术器械、注射器、 针头及食具等可用此法。
为了减少细菌在冷冻时的死亡，可于菌液内加入10 ％左右甘油、蔗糖、脱脂乳或5％二甲基亚砜作为保 护剂。
冷冻真空干燥（冻干）法 是保存菌毒种、疫 苗、补体、血清等的良好方法，可保存微生物及生 物制剂数月至数年不失活。其原理是迅速冷冻，不 形成冰晶，同时抽真空让固体冰中的水分子升华除 去，封闭瓶口保存。
常用于如培养基、溶液、器皿、器械、敷料、橡皮手套、 工作服和小实验动物尸体等的灭菌。
灭菌注意 须充分排除灭菌器内原有的冷空气。
高压蒸汽灭菌器
二、辐 射 包括电磁波辐射和粒子辐射，对微生物作用为：电
离辐射和非电离辐射。 电离辐射 放射性同位素射线（α β γ）和X射
线等可使被照射物质发生电离。 杀菌作用 X射线（波长0.06-13.6nm）、γ射线
对微生物影响较大的物理因素包括：温度、 辐射、干燥、声波、微波、滤过等。 一、温 度
适当的温度有利于微生物的生长发育，温 度过高或过低都会影响微生物的新陈代谢和 生长发育，甚至使之死亡。
各类微生物生长的温度范围
微生物 类型
高温型
最低温度 oC
30
最适温度 oC
45~55
最高温度 oC
60~75
中温型
2.阳光 直射日光有强烈杀菌作用，是天然杀菌因素， 紫外线是日光杀菌作用的主要因素。许多微生物在 直射日光下，半小时到数小时即可死亡。芽抱的抵 抗力强，经20h才死亡。
3.紫外线 紫外线中波长200-300nm部分具有杀菌作 用，其中以265-266nm段的杀菌力最强，这与DNA吸 收光谱范围一致。常用的紫外线杀菌灯波长为 253. 7nm，杀菌力强而稳定。
称为冷击法。超高温巴氏消毒的鲜乳在常温下，保存 期可达6个月。
流通蒸汽灭菌法 是利用蒸汽在流通蒸汽灭菌器 内进行灭菌的方法，100℃维持30min。
间歇灭菌法：100℃ 维持30min，37℃温箱过夜， 连续进行3次灭菌和2次保温，达到完全灭菌目的。 用于不耐高温的培养基的灭菌。
高压蒸汽灭菌法 即用高压蒸汽灭菌器进行灭菌的方法。 是应用最广、最有效的灭菌方法。
兽 医 微 生 物 学
第三章 消毒、灭菌及兽医微生物实验 室的生物安全
第一节 物理消毒灭菌法
第二节 化学消毒灭菌法
第三节 抗生素和细菌素的杀菌作用
第四节 兽医微生物实验室的生物安全
微生物的生命活动极易受外界环境条件影响。了 解外界环境因素对微生物的影响，以便控制外界因 素，达到利用或消灭微生物的目的。
原理 紫外线照射后，DNA分子吸收约260nm紫外线， 使同一条DNA链上相邻胸腺嘧啶产生共价结合成二聚 体，影响DNA复制与转录，引起致死性突变而死亡。 此外，紫外线可使空气中分子氧变为臭氧，臭氧放 出氧化能力强的原子氧，呈现杀菌作用。
原理 给高压蒸汽灭菌器加水、放入被灭菌物品、密闭、 加热，蒸汽产生压力，随压力的增大水的沸点升高，温度也 升至100℃以上，以提高灭菌的效果，缩短灭菌时间。
灭菌条件 常用1.02kg／cm2 （每平方英寸15磅）的压力， 在12l.3℃温度下，维持15-20min，即可杀死所有微生物，达 到完全灭菌的目的。
(波长0.00l-0.4nm) 的电离辐射微弱。α与β射线 的电离辐射作用较强，有抑杀菌作用。
用途 β与γ射线穿透力强。主要是X 、γ和β射 线，用于消毒、食品保藏和育种等方面。
非电离辐射包括可见光、阳光、紫外线。
1.可见光 指在红外线和紫外线之间，肉眼可见的光 线，波长400-800nm。可见光线只有微弱的杀菌作用。
5
25~37
45~50
低温型
0
10~15
20~30
温度对微生物生长速率影响的规律
1.低温 大多数微生物对低温具有 很强的抵抗力。当微生物处于最低 生长温度以下时，其代谢活动降低 到最低水平，生长繁殖停止，但仍 可长时间保持活力。常在低温下保 存微生物种
冷冻保存 冻存微生物种时，必须迅速降低温度， 起用时也应迅速融化。防止胞浆水分形成冰晶，破 坏胞浆胶体、胞浆膜和细胞壁。反复冷冻与融化对 微生物具有很大伤害，应尽力避免。