聚合物纳米微球分离纯化格尔德霉素方法研究

（ 生 物 药 物 国 家 工程 研 究 中 心 ， 北 省 工 业 微 生 物 代 谢 工 程 技 术研 究 中心 ， 微 河
华 北制 药集 团新 药研 究开发 有 限责任公 司， 河北 石 家庄 ０ ０ １ ） ５ ０ ５
摘 要 ： 究 了聚 合 物 纳 米 微 球 分 离 纯化 格 尔德 霉 素 的 方 法 。 通 过 聚 合 物 纳 米 微 球 型 号 、 脱 液 体 积 分 数 、 脱 速 研 洗 洗 度 、 样 量 的 选 择 ， 定 聚合 物 纳 米微 球 分 离 纯化 格 尔德 霉 素 工 艺 为 ： 用 Ｐ ３ Ｒ （ 型 聚 合 物 纳 米 微 球 作 为 层 析 填 料 ， 加 确 采 Ｓ Ｏ Ｐ
提 液 ，０℃ 减 压 浓 缩 至 基 本 无 乙 醇 流 出 ， 滤 ， 深 黄 ４ 过 得
过特异 性结 合并 抑制 热 休 克 蛋 白 ９ （ ｐ ０ ， 到 抑 ０ Ｈｓ ９ ） 起 制 肿瘤 细胞 和抗 病 毒 的作 用 。 。化 学 家 们 合 成 得 到
了一些 具有 较高抗 肿 瘤 活性 的格 尔 德 霉 素 衍 生物 ， 已
进 入 Ⅱ期 临床试 验 ， 望成 为新 的抗 肿瘤药 物 Ｉ 。 有 ４ ］
目前 已知 的格 尔德 霉 素 纯 化 方 法＿ ， 采 用 反 复 ５ 多 ］
提 取 、 脂 吸附 、 树 萃取 、 层析 、 晶等 过程 ， 结 步骤 繁琐 ， 收 率 低 。作者 采用 聚合 物纳 米微球 对格 尔德 霉 素发酵 菌 丝体 的浸提 浓缩 物 直接 进 行 层 析纯 化 ， 到高 纯 度 格 得
的 Ｎａ ＯＨ 溶 液浸 泡 ２ｈ 水洗 至 中性 ， 力沉 降法 装 柱 ， 重
（ ． ｍ ×３ ｍ） 用 ４ 乙 醇 平 衡 系 统 。 ２ ５ｃ ０ｃ ， ０
ｌ 实 验
１ １ 试 药 、 剂 与 仪 器 ． 试
１ ３ １ 聚合 物纳 米微 球型 号 的筛选 ． ． 分 别 用 型 号 为 Ｐ ３ ＲＰ Ｓ ０ Ｃ、ＮＭ— ＭＭ１ ０ Ｓ ０ 、Ｐ ／ Ｐ ３ ０的聚合 物纳 米微 球装 柱 ， ０ ８ｇ格尔德 霉素 ＶＢ ０ 取 ． 浸 提浓缩 物用 ９ 乙醇溶 解后 加 样 于层 析柱 ，用 １ ０ ５ ２
困 开发应用
２１ｏ ８ｏ 亿 与生物 互程 ０ ，ｌ ． Ｃ １Ｖ ２Ｎ ７ ｈ
ｅ ｓ ｒ ＆ Ｂｉｅ ｇ ｎ ｅｒ ｇ ｍｉｔｙ ｏ ｎ ｉｅ ｉ ｎ
聚 合 物 纳 米微 球 分 离 纯化 格 尔 德 霉 素 方 法研 究
李 宁 ， 雪霞 ， 张 李晓 露 ， 海燕 ， 王 林 毅， 蒋 沁
格 尔德 霉素 发酵 液 ， 北制 药新 药公 司 。 华
格 尔德 霉 素 对 照 品 ， ｉｍａ公 司 ； 合 物 纳 米 微 Ｓｇ 聚 球 ， 州 纳微 科 技公 司 ； 苏 乙腈 ， 谱 纯 ， ｒｋ公 司 ； 色 Ｍｅｃ 双
蒸 馏水 ， 自制 ； 乙醇 ， 国产分 析纯 。 中压层 析 系统 （ ６ １泵 ， 一 １ Ｃ一 ０ Ｃ ６ ５控 制 器 ， 一 １ Ｃ ６ ６收
ｍＬ ４ 乙醇洗 涤 ， Ｏ 然后用 不 同体 积 分数 乙醇 洗脱 ， 洗
脱 速 度 ５ ｍＬ ・ｍｉ ， 集 洗 脱 液 ， 管 １ ｎ 收 每 ０ ｍＩ。
ＨＰ Ｃ检测 分 离效 果 ， 格 尔 德 霉 素 含 量 （ 积 归 一 Ｌ 将 面 法 ， 同） 于 ９ ． 的接 收 液合并 ， 下 大 ８５ 计算 洗脱 收率 。 １ ３ ２ 洗脱 液 乙醇体 积分数 的选择 ．．
关 键 词 ： 合 物 纳 米 微 球 ； 尔德 霉 素 ； 化 聚 格 纯 中 图分 类 号 ： ０ Ｒ ９ ９ １ Ｑ５３ ７ ． 文 献标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ ２ ４ ５ ２ ¨ ） ７ ０ ４ ３ ｌ ７ —５ ２ （ ０ ０ ～０ ７ —０
格 尔 德 霉 素 （ ｅｄ ｎ ｍｙ ｉ） 于 苯 醌 安 莎 霉 素 Ｇ ｌａ ａ ｃｎ 属 类 ， 的 大 环 它 安 莎桥 相连口 。具 有抗 原虫 、 ］ 抗细 菌 、 真 菌 、 肿瘤 、 抗 抗 抗 病毒 以及 免疫 调节 等多 种生 物活性 。格 尔德 霉素 通
洗 脱液 乙醇 体 积 分 数 ６ 、 脱 速 度 ６ ０ ｍＬ ・ｒｉ＿。 加 样 量 （ 品 ：填 料 ， ：ｇ） ５ 洗 ． ａｎ 、 样 ｇ １：１ Ｏ 此 时 ， 均 层 析 收 率 为 Ｏ， 平
９ ． ％ 、 均 总 收 率 为 ８ ． 、 均 成 品 纯度 为 ９． 。该 分 离 纯化 方 法 简便 可 靠 ， 于工 业 化 生产 。 ２５ 平 １６ 平 ８７ 适
仪 （１ ５ ５泵 ，９ ６检 测器 ） 美 国 Ｗａｅｓ 司 。 ２９ ， ｔｒ 公
１ ２ 发 酵 液 预 处 理 ．
格 尔德 霉 素 存 在 于 菌 丝 体 内 。在 发 酵 液 中加 入
３ （ 质量 体 积 比 ， ｇ： ｍＬ） 珍 珠 岩 ， 拌 ３ ｉ 的 搅 ０ｒ ｎ后 ａ
尔德霉 素 ， 简化 了工 艺 过程 ， 高 了成 品收 率 ， 量 可 提 质
控 ， 于工 业化 生产 。 适
色 固体 ， 为格 尔德霉 素 浸提浓 缩 物 。 １ ３ 聚 合物 纳米 微球 层析 条件 的选择 ． 装柱 ： １０ ｇ聚 合物 纳 米微 球 用 ０ １ｔｏ ・Ｉ 取 ０ ． ！ ｏ
过滤 ， 洗 ， 格 尔 德 霉 素 菌 丝 体 。 向其 中 加 入 ３倍 水 得 （ 积质量 比 ， 体 ｍＬ： ， 同） ５ 乙醇 ， ｇ下 ９ 搅拌 浸 提 １ｈ ， 过滤 ， 浸 提 液 ； 浸 提 后 的 菌 丝 体 中 再 加 入 １倍 得 向 ９ 乙醇 ， 拌 浸提 １ｈ， 滤 ， 二 次 浸提 液 ； 并浸 ５ 搅 过 得 合