微生物检测基本技术 PPT课件
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《微生物检验技术》课件
食品中常见的微生物种类：细菌 、霉菌、酵母菌等。
微生物在食品中的分布特点：食 品的种类、加工方式、储存条件 等对微生物的分布有显著影响。
微生物的来源：食品生产、加工 、运输、储存等环节中可能引入
的微生物。
食品中微生物的检测方法与操作
01
02
03
04
传统检测方法
培养法、镜检法等。
现代检测技术
免疫分析法、PCR技术、生物 传感器等。
消毒灭菌效果的监测
对医院环境、医疗器械等进行 微生物学检测，评估消毒灭菌 效果，确保医疗安全。
抗菌药物敏感性试验
通过抗菌药物敏感性试验，指 导临床医生合理选用抗菌药物 ，降低耐药性的产生。
感染暴发调查
在发生医院感染暴发时，进行 流行病学调查和溯源分析，查 找感染源和传播途径，采取有
效控制措施。
疫苗的研究与开发
病原微生物的分离与鉴定
从患者体内分离出病原微生物，并进行鉴定，为疫苗的研制提供基础 资料。
疫苗株的筛选
通过微生物检验技术对病原微生物进行筛选，选择适合作为疫苗株的 菌株或病毒株。
疫苗制备过程的监控
在疫苗制备过程中，对原材料、半成品和成品进行质量检验和安全性 评估，确保疫苗的安全性和有效性。
疫苗效果评价
微生物的生长与繁殖
微生物的生长
微生物生长是指微生物细胞数目的增加和质量的增加。其生 长过程分为迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
微生物的繁殖
微生物繁殖是微生物生长的必然结果，繁殖方式包括二分裂 、出芽生殖、孢子生殖等。繁殖过程中，微生物的遗传物质 会复制并传递给后代。
微生物的生理生化特性
微生物的代谢
利用微生物降解污染物，处理废水、废气等，降低环境污染。
医学检验微生物ppt课件完整版x
个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
医学检验微生物ppt课件完 整版x
目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查
微生物检验7ppt课件
新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌可 初步诊断为淋球菌性结膜炎
4．分离培养与鉴定
选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML） ，或NYC
置于5%CO2气体条件下35~37℃孵育 每隔24h观察平板
（1）形态和生化学鉴定
可疑菌落
直径0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴 状凸起的菌落
血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、 透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰兰色菌
落 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落 在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜 脑膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培养基上发生自溶
3．生化特性
氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外） 对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合
革兰阴性球菌
奈瑟菌属（Neisseria） 布兰汉菌属（Branhamella）
概述
“伯杰鉴定细菌学手册”第9版
将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉 菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科
奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、脑 膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌属中的 卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。
告为阴性
（二）淋病奈瑟菌
1．检验程序
2．标本采集
阴道和宫颈分泌物
用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处 停留10~15秒时间，蘸取
采集尿道分泌物
弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本
尿液 直肠肛拭标本
废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物
新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物
目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论
第一节 奈瑟菌属
4．分离培养与鉴定
选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML） ，或NYC
置于5%CO2气体条件下35~37℃孵育 每隔24h观察平板
（1）形态和生化学鉴定
可疑菌落
直径0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴 状凸起的菌落
血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、 透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰兰色菌
落 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落 在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜 脑膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培养基上发生自溶
3．生化特性
氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外） 对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合
革兰阴性球菌
奈瑟菌属（Neisseria） 布兰汉菌属（Branhamella）
概述
“伯杰鉴定细菌学手册”第9版
将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉 菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科
奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、脑 膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌属中的 卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。
告为阴性
（二）淋病奈瑟菌
1．检验程序
2．标本采集
阴道和宫颈分泌物
用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处 停留10~15秒时间，蘸取
采集尿道分泌物
弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本
尿液 直肠肛拭标本
废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物
新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物
目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论
第一节 奈瑟菌属
《微生物检测》课件
检测与鉴定
形态观察
通过显微镜观察微生物的形态、 大小、染色等特征，初步判断微
生物种类。
生化试验
对微生物进行生化试验，检测其代 谢产物和酶活性，进一步确定微生 物种类。
分子生物学方法
采用分子生物学方法，如PCR、基 因测序等，对微生物进行分子水平 上的检测和鉴定。
结果报告
报告内容
包括采样时间、地点、样品来源、检测方法、结 果及结论等。
总结词：染色技术
详细描述：采用不同的染色技术对微 生物进行染色，以便更好地观察其形 态和结构。
培养分离技术
在此添加您的文本17字
总结词：培养基
在此添加您的文本16字
详细描述：选择适宜的培养基，根据微生物的生理特性进 行培养，促进微生物的生长繁殖。
在此添加您的文本16字
总结词：分离纯化
在此添加您的文本16字
详细描述：从样本中提取微生物的DNA或RNA，作为 后续检测的基础。
详细描述：利用PCR技术对提取的DNA或RNA进行扩 增，获得足够的目标片段。
详细描述：将扩增后的DNA或RNA进行电泳分离，通 过凝胶上的条带判断微生物种类。
03
微生物检测流程
采样
采样原则
根据检测目的和要求，选 择具有代表性的样品进行 采集。
临床样本中微生物检测案例
案例概述
临床样本中微生物检测是诊断感染性疾病 的重要手段，通过检测临床样本中的病原
微生物，为临床医生提供诊断依据。
案例分析
分析临床样本中微生物检测的难点和挑战 ，如微生物的多样性和变异，以及检测方
法的灵敏度和特异性。
案例内容
介绍临床样本中常见的病原微生物种类， 如细菌、病毒、真菌等，以及检测这些微 生物的方法和流程。
微生物检验技术培训PPT课件
17
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•无菌检查法包括
• 薄膜过滤法 • 直接接种法
•只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 •供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适 用性试验确认的方法相同。 •无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂 等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
3d
培养基
生孢梭菌
空白
1支
枯草芽孢杆菌
各2支 胰酪大豆胨液体
白色念珠菌 黑曲霉
培养基
20～25℃
5d
【10版：改良
马丁培养基】
结空果白判定:
1支
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏
度检查符合规定。
16
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二、无菌检查
3.方法适用性试验（方法验证试验）
•当 进 行 产 品 无 菌 检 查 法 时 ， 应 进 行 方 法 适 用 性 试 验 ， 以 确 认 所 采 用 的 方 法 适 合 于 该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进 行方法适用性试验。 •验 证 时 ， 按 “ 供 试 品 的 无 菌 检 查 ” 的 规 定 及 下 列 要 求 进 行 操 作 。 对 每 一 试 验 菌 应 逐一进行验证。 •方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行 。
24
第24页/共80页
二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•结 果 判 断
• 当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效： • （1）无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果 不符合无菌检查法的要求。 • （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的 因素。 • （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌 试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•无菌检查法包括
• 薄膜过滤法 • 直接接种法
•只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 •供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适 用性试验确认的方法相同。 •无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂 等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
3d
培养基
生孢梭菌
空白
1支
枯草芽孢杆菌
各2支 胰酪大豆胨液体
白色念珠菌 黑曲霉
培养基
20～25℃
5d
【10版：改良
马丁培养基】
结空果白判定:
1支
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏
度检查符合规定。
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二、无菌检查
3.方法适用性试验（方法验证试验）
•当 进 行 产 品 无 菌 检 查 法 时 ， 应 进 行 方 法 适 用 性 试 验 ， 以 确 认 所 采 用 的 方 法 适 合 于 该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进 行方法适用性试验。 •验 证 时 ， 按 “ 供 试 品 的 无 菌 检 查 ” 的 规 定 及 下 列 要 求 进 行 操 作 。 对 每 一 试 验 菌 应 逐一进行验证。 •方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行 。
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•结 果 判 断
• 当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效： • （1）无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果 不符合无菌检查法的要求。 • （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的 因素。 • （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌 试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。
食品微生物检验技术PPT
分子生物学方法
基于核酸探针、PCR等分 子生物学技术，能够快速、 准确地检测出食品中的微 生物。
02
食品微生物检验技术方法
培养法
总结词
培养法是食品微生物检验中最传统的方法，通过培养基培养微生物，观察其生 长情况以确定微生物种类和数量。
详细描述
培养法具有简单易行、直观可靠的优点，适用于大多数微生物的分离、鉴定和 计数。但该方法耗时较长，且需要经验丰富的专业人员进行操作。
要点二
实时荧光定量PCR技术
利用实时荧光定量PCR技术，可实现快速、准确地检测食 品中特定微生物的数量，为食品安全控制提供科学依据。
THANKS
感谢观看
验结果的准确性。
国内食品微生物检验规范
食品安全国家标准食品微生物学检验总则
规定了我国食品微生物学检验的基本要求、抽样、检验方法及结果的判定等。
食品安全国家标准食品微生物学检验人员要求
规定了从事我国食品微生物学检验人员的资格要求、培训和考核等。
食品安全国家标准食品微生物学检验实验室设施和环境条件
规定了我国食品微生物学检验实验室的设施和环境条件，以确保检验结果的准确性。
05
食品微生物检验技术展望
新技术与新方法的发展
基因组学技术
利用基因组学技术，如全基因组测序，能够 更精确地鉴定微生物种类，提高检测的灵敏 度和特异性。
免疫学方法
新型免疫学方法如酶联免疫吸附法和胶体金 免疫层析法等，具有快速、简便、灵敏度高 等优点，适用于现场检测和快速筛选。
自动化与智能化技术的应用
肉类食品中的微生物检验
总结词
肉类食品中的微生物检验主要关注沙门氏菌、弯曲菌、志贺氏菌等常见致病菌，以确保 肉类食品的安全性。
微生物检验技术 PPT课件
菌种保藏的目的： 防止优良性状菌种的退化或变异。 注意：在实际工作中菌种的退化或变异是 难以避免的。微生物的遗传与变异是正常 的生物进化规律，变异是绝对的，稳定性 是相对的。
（一）菌种保藏的目的和意义
菌种保藏的意义： 微生物菌种是珍贵的自然资源，通过 分离纯化得到的微生物纯培养物，还必须 通过各种保藏技术使其在一定时间内不死 亡，不会被其他微生物污染，不会因发生 变异而丢失重要的生物学性状，否则就无 法真正保证微生物研究和应用工作的顺利 进行。因此，菌种或培养物保藏是一项最 重要的微生物学基础工作，具有重要意义。
（四） 菌种的衰退与复壮
2、菌种衰退的实质
菌种的衰退是发生在细胞群体中的一个由量 变到质变的逐步演变过程。 注意：开始时，在一个大群体中仅个别细胞发生 负变，这时如不及时发现并采取有效措施，而 一味移种传代，则群体中这种负变个体的比例 逐步增大，最后让它们占了优势，从而使整个 群体表现出严重的衰退。 所以，在开始时所谓“纯”的菌株，实际上其中 已包含着一定程度的不纯因素；同样，到了后 来，整个菌种虽已“衰退”了，但也是不纯的， 即其中还有少数尚未衰退的个体存在着。
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现 2、菌种衰退的实质 3、菌种的复壮
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现
（1）生长速度缓慢，产孢子越来越少。 （2）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下 降。 （3）其他原有的典型性状变得不典型，如：最易 觉察到的是菌落和细胞形态的改变。 （4）对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。 （5）抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能 力的减弱等。
Байду номын сангаас
（三）菌种保藏的方法
2、冷冻干燥保藏法 将微生物或孢子冷冻，然后在减压情 况下利用升华现象除去水分，使细胞的代 谢、生理等生命活动处在停止状态下进行 长期保藏。
（一）菌种保藏的目的和意义
菌种保藏的意义： 微生物菌种是珍贵的自然资源，通过 分离纯化得到的微生物纯培养物，还必须 通过各种保藏技术使其在一定时间内不死 亡，不会被其他微生物污染，不会因发生 变异而丢失重要的生物学性状，否则就无 法真正保证微生物研究和应用工作的顺利 进行。因此，菌种或培养物保藏是一项最 重要的微生物学基础工作，具有重要意义。
（四） 菌种的衰退与复壮
2、菌种衰退的实质
菌种的衰退是发生在细胞群体中的一个由量 变到质变的逐步演变过程。 注意：开始时，在一个大群体中仅个别细胞发生 负变，这时如不及时发现并采取有效措施，而 一味移种传代，则群体中这种负变个体的比例 逐步增大，最后让它们占了优势，从而使整个 群体表现出严重的衰退。 所以，在开始时所谓“纯”的菌株，实际上其中 已包含着一定程度的不纯因素；同样，到了后 来，整个菌种虽已“衰退”了，但也是不纯的， 即其中还有少数尚未衰退的个体存在着。
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现 2、菌种衰退的实质 3、菌种的复壮
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现
（1）生长速度缓慢，产孢子越来越少。 （2）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下 降。 （3）其他原有的典型性状变得不典型，如：最易 觉察到的是菌落和细胞形态的改变。 （4）对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。 （5）抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能 力的减弱等。
Байду номын сангаас
（三）菌种保藏的方法
2、冷冻干燥保藏法 将微生物或孢子冷冻，然后在减压情 况下利用升华现象除去水分，使细胞的代 谢、生理等生命活动处在停止状态下进行 长期保藏。
实验四、环境中微生物的检测PPT课件
谢谢观看
03
实验步骤
样品采集
采集环境中的水样、 土壤样、空气样等， 确保采集的样品具有 代表性。
记录采集时间、地点、 环境条件等信息，以 便后续分析。
使用无菌容器或薄膜 采集样品，避免交叉 污染。
样品处理
将采集的样品进行稀释，使微生物分 散。
对样品进行富集培养，提高微生物的 数量。
对样品进行过滤或离心，使微生物与 杂质分离。
结果应用
环境监测
实验结果可以为环境监测提供依 据，了解环境中微生物的分布和
数量，评估环境质量。
公共卫生
实验结果可以为公共卫生领域提 供参考，了解环境中微生物的种 类和数量，评估其对人类健康的
风险。
科学研究
实验结果可以为科学研究提供数 据支持，深入探究环境中微生物
的生态学和生物学特性。
05
实验总结
实验不足与改进
实验不足
在实验过程中，我发现自己在操作显微镜时还不够熟练，有 时会出现观察不准确的情况。此外，我在实验数据处理方面 也存在一些问题，如数据记录不准确、分析不全面等。
改进方法
为了提高实验的准确性和可靠性，我计划在课后多加练习使 用显微镜，提高自己的操作技能。同时，我也要加强学习数 据处理和分析方面的知识，掌握更多的统计方法和软件应用 技巧。
实验四、环境中微生物的检测ppt 课件
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验总结
01
实验目的
掌握微生物检测的基本原理
01
微生物检测是利用特定的方法和 技术对环境中的微生物进行检测 和计数，以评估环境卫生状况和 潜在的健康风险。
02
基本原理包括微生物培养法、免 疫学方法、分子生物学方法等， 这些方法基于不同原理，能够对 不同类型的微生物进行检测。
微生物检验ppt课件
微生物检验ppt课件
目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
课件：环境检测微生物技术
ห้องสมุดไป่ตู้
rfa pKM1 pAQ1 △uvr 诊断
01
B 试验
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（三）Ames试验的应用
分子水平微生物监测技术
• 一、DNA扩增技术
PCR技术的基本原理
模板 引物 PCR反应
典型的PCR操作 试剂 操作程序
PCR技术检测环境微生物的步骤
从环境样品中提取DNA或RNA PCR扩增 PCR反应产物的检测与分析
PCR在环境微生物检测中的应用
应用PCR技术检测环境中的致病菌与指示菌 应用PCR技术检测环境中的基因工程菌株 PCR技术在环境微生物基因克隆中的应用
• 微生物酶监测技术
• （一）酶活性检测 • 三磷酸腺苷酶(ATPase)作为多种污染物胁
迫的指标
• 抗氧化剂防御系统与污染物的作用
• 细菌脱氢酶
第四章 环境监测微生物技术
分子水平的微生物监测技术 细胞水平的微生物监测技术 微宇宙的微生物监测技术 环境质量的微生物监测技术
环境质量的微生物监测技术
水质的细菌学检验技术 细菌总数
（一）原理 大肠菌群
总大肠菌群 粪大肠菌群
（二）方法
初发酵试验
多管发酵法 平板分离 复发酵试验
膜滤法
滤膜和滤器的灭菌和安装 过滤水样 培养 计数，涂片，染色观察 再培养
rfa pKM1 pAQ1 △uvr 诊断
01
B 试验
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（三）Ames试验的应用
分子水平微生物监测技术
• 一、DNA扩增技术
PCR技术的基本原理
模板 引物 PCR反应
典型的PCR操作 试剂 操作程序
PCR技术检测环境微生物的步骤
从环境样品中提取DNA或RNA PCR扩增 PCR反应产物的检测与分析
PCR在环境微生物检测中的应用
应用PCR技术检测环境中的致病菌与指示菌 应用PCR技术检测环境中的基因工程菌株 PCR技术在环境微生物基因克隆中的应用
• 微生物酶监测技术
• （一）酶活性检测 • 三磷酸腺苷酶(ATPase)作为多种污染物胁
迫的指标
• 抗氧化剂防御系统与污染物的作用
• 细菌脱氢酶
第四章 环境监测微生物技术
分子水平的微生物监测技术 细胞水平的微生物监测技术 微宇宙的微生物监测技术 环境质量的微生物监测技术
环境质量的微生物监测技术
水质的细菌学检验技术 细菌总数
（一）原理 大肠菌群
总大肠菌群 粪大肠菌群
（二）方法
初发酵试验
多管发酵法 平板分离 复发酵试验
膜滤法
滤膜和滤器的灭菌和安装 过滤水样 培养 计数，涂片，染色观察 再培养
微生物限度检验PPT课件
- 表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及 对微生物的生长和存活无影响。
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
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稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
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验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
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验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
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稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
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验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
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验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件
食品微生物检测PPT培训课件
食品微生物检测PPT
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二、糖醇类代谢试验
（一）糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（Methyl Red）试验 MR （五）七叶苷水解试验 （六）甘油品红试验
2/7/2021
食品微生物检测PPT
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（一） 糖醇类发酵试验
1.原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及 所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种 糖醇），有的只能分解1~2种糖醇 ，有的分 解糖醇能产酸产气，有的分解糖醇只产酸不 产气，根据这些特点，可鉴别细菌。
2/7/2021
食品微生物检测PPT
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（3）快速法：
将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中，挑取产酸 反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化 接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化 钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。 不产酸的培养物不能使用。
2/7/2021
食品微生物检测PPT
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3、结果观察与记录
（1）发酵管出现红色者，为阳性， 记V-P+ （2）发酵管为黄色或铜绿色者，为阴性，记 V-P-
2/7/2021
食品微生物检测PPT
Hale Waihona Puke 19（四）甲基红试验（MR）
1、原理 细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，由于代谢的途 径不同，有的细菌可使丙酮酸转化生成乳酸、琥珀酸、醋 酸和甲酸等大量酸性产物，使培养基PH值下降至pH4.5 以下，使甲基红指示剂变红色，为甲基红试验阳性 ；有 的细菌使丙酮酸脱羧后形成酮、醇类中性产物，培养液 pH＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性。
产碱型 不产酸（绿色） 不产酸（绿色）
2/7/2021
食品微生物检测PPT
病原微生物检测方法 27页PPT文档
直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧 光标记的抗血清,经洗涤后在荧光显微镜下观 察结果。间接法是在检测样品上滴加已知的细 菌特异性抗体,待作用后经洗涤,再加入荧光标 记的第二抗体。
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酶联免疫技术
酶联免疫技术是根据抗原- 抗体的免疫反应与 酶的高效催化作用原理有机结合,通过酶催化 底物进而发生一系列的化学反应,使溶液呈现 出颜色变化,从而显示抗原抗体特异性反应的 存在。
可以分析得出SARS与非SARS 病人血清中的 蛋白质成分变化。该技术不是利用单独的蛋白 质峰的出现和消失来判断SARS ,而是用5 个蛋 白质峰的出现和消失来判断,好比刑侦破案中 甄别5 个手指的指纹,故此称为“指纹图谱”。
8
八，LAMP技术
环介导等温扩增(loop—mediated isothermal amplification，LAMP)技术是近年来发展出的一 种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传 统PCR方法相比，LAMP不需要热循环，为等温 扩增。且由于LAMP反应中产生大量的副产物一 白色焦磷酸钾沉淀，扩增产物可不经过电泳，通 过肉眼观察或浊度计即可判定结果。
2
二，血清免疫学方法
免疫学技术是利用特异性抗原抗体反应,观察和研究 组织细胞、特定抗原(抗体)的定性和定量技术。为了 显示和观察这种抗原抗体反应,需要预先将某种标记 物结合到抗体上,借标记物的荧光或酶的有色反应、 放射性或高电子密度,在光镜或电镜下进行定性、定 位或定量研究。
荧光抗体技术 酶联免疫技术
用于检测：丙型肝炎病毒(HCV) 、严重急性呼吸 综合征冠状病毒(SARS—CoV) 、乙脑病毒(JEV) 、 甲型流感病毒(AIV) 、 腮腺炎病毒(MV)等。
9
谢谢
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酶联免疫技术
酶联免疫技术是根据抗原- 抗体的免疫反应与 酶的高效催化作用原理有机结合,通过酶催化 底物进而发生一系列的化学反应,使溶液呈现 出颜色变化,从而显示抗原抗体特异性反应的 存在。
可以分析得出SARS与非SARS 病人血清中的 蛋白质成分变化。该技术不是利用单独的蛋白 质峰的出现和消失来判断SARS ,而是用5 个蛋 白质峰的出现和消失来判断,好比刑侦破案中 甄别5 个手指的指纹,故此称为“指纹图谱”。
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八，LAMP技术
环介导等温扩增(loop—mediated isothermal amplification，LAMP)技术是近年来发展出的一 种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传 统PCR方法相比，LAMP不需要热循环，为等温 扩增。且由于LAMP反应中产生大量的副产物一 白色焦磷酸钾沉淀，扩增产物可不经过电泳，通 过肉眼观察或浊度计即可判定结果。
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二，血清免疫学方法
免疫学技术是利用特异性抗原抗体反应,观察和研究 组织细胞、特定抗原(抗体)的定性和定量技术。为了 显示和观察这种抗原抗体反应,需要预先将某种标记 物结合到抗体上,借标记物的荧光或酶的有色反应、 放射性或高电子密度,在光镜或电镜下进行定性、定 位或定量研究。
荧光抗体技术 酶联免疫技术
用于检测：丙型肝炎病毒(HCV) 、严重急性呼吸 综合征冠状病毒(SARS—CoV) 、乙脑病毒(JEV) 、 甲型流感病毒(AIV) 、 腮腺炎病毒(MV)等。
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