高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量 北京液相色谱仪分析案例
食品中氨基酸的测定方法
食品中氨基酸的测定方法
《食品中氨基酸的测定方法》
嘿，你知道吗？食品中的氨基酸可是非常重要的呢！那怎么才能知道食品里都有哪些氨基酸以及它们的含量呢？这就涉及到氨基酸的测定方法啦。
有一种常见的方法是高效液相色谱法。
这就像是个超级侦探，能把各种氨基酸都准确地找出来。
它利用特殊的柱子和流动相，让氨基酸在里面乖乖地按顺序跑出来，然后我们就能清楚地看到它们啦。
还有一种方法叫氨基酸自动分析仪法。
这个呀，就好像是个智能小助手，能快速又准确地分析出氨基酸的情况。
它可以把食品中的氨基酸一个一个地分辨出来，并且告诉我们它们的具体信息。
另外呢，还有一些其他的方法，比如茚三酮比色法。
它通过一种特别的反应，让氨基酸显示出颜色来，这样我们就能根据颜色的深浅判断氨基酸的多少啦。
总之，测定食品中氨基酸的方法有很多，每种方法都有它的特点和适用情况。
这些方法就像是我们了解食品营养的钥匙，能帮助我们更好地知道食物里都有什么好东西。
所以呀，学会这些方法真的很重要呢！
我觉得这些测定方法都很神奇，它们让我们能深入了解食品的本质，对于保障我们的健康和饮食安全有着至关重要的作用。
反相高效液相色谱法测定油料饼粕氨基酸含量
油 料 饼 粕 是 我 国重 要 的蛋 白质 资 源 ， 蛋 白 其 质 含 量 的 高 低 取 决 于 品 种 和 加 工 工 艺 ， ： 籽 如 菜 饼 粕 蛋 白质 含 量 在 ２ ％ ～４ ％ ， 豆 粕 在 ４ ％ ２ ４ 大 ２
ａ ｉ ｎ ｃ ｔｏ ｅ ｄ ｍ ｅ ｌｗｅ ｅ ｔ ｅ ｈｉｈ ｓ． ｃｄｓｉ ｏｔｎｓ ｅ ａ ｒ ｈ ｇ ｍｅ ｈ ｄ；ｏｌｅ ｄ ａ ；ａ ｎ ｃｄ；ａ ａｙ ｅ ＨＰ ｔ ｏ ｉｓ ｅ ｓ ｍｅ １ ｍｉ ｏ ａ ｉ ｎ ｌｚ
２ Ｃ ｌ ｇ ｆ ｎ ｌ ｃｅｃ ｎ ｅ ｈ ｏ ｇ ， ｏｔ ｅｔ ＆ ＦＵ ｉ ｒ ｔ， ｉｎＳ ａｎ ｉ ７ ２ ０ ） ． ｏ ｅｅｏ Ａ ｉ ｉ ｅａ ｄＴ ｃ ｎｌ ｙ Ｎ ｒ ｗ ｓ Ａ ｌ ｍａ Ｓ ｎ ｏ ｈ ｎｖ ｓ ｙ Ｘ ｈ ｈ ａｘ ｅｉ １ １ ０
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油 脂开发
粮 食 科 第１卷 ２ １ 第３ 油 品 技 ９ ０年 １ 期
反相高效液 相色谱法测定 油料饼 粕氨 基酸 含量
栾霞 初 雷 ， ， 李爱科 王瑛瑶 ，
（ ． 家粮食 局科 学研 究院 ， 京 １国 北 １０３ ０ ０ ７；
２ 西北农林 科技 大 学 动 物科技 学院 ， ． 陕西 杨 凌 摘
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｔｈ ｍｉｏ ａ ｉ ｓ ｉ ｉｓ ｅ ａ ｒ ｅ ｅｍｉ ｅ ｙ ｒ ｖ ｒｅ —ｐ ａ ｅ ｈ ｇ ｅ ｆｒ ａ ｅ ｌ ｕｉ ｓｒ ｃ ： ｅ ａ ｎ ｃ ｄ ｎ ｏ ｌｅ ｄ ｍｅ ｌｗｅ ｅ ｄ ｔｒ ｎ ｄ ｂ ｅ ｅ ｓ ｄ— ｈ ｓ ｉｈ ｐ ｒｏ ｍ ｎｃ ｉ ｄ ｑ
高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究
[检验医学]高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究仲岳桐,何彩,陈春晓摘要:目的 应用高效液相色谱法测定食品中氨基酸。
方法 使用带自动衍生功能的自动进样器进行在线衍生,梯度分离,利用二极管阵列-荧光检测器串联分析。
结果 在线衍生技术克服了离线手工衍生的偏差,双检测器联用技术能有效提高定性的可靠性和定量的准确性。
结论 研究的方法测定重复性好,灵敏度高,定性定量准确,结果满意。
关键词:高效液相色谱;氨基酸;食品中图分类号:TQ460.7 文献标识码:B 文章编号:1009-9727(2008)1-132-03Determination of amino acids in foods by high performance liquid chromatography.ZHONG Yue-tong,HE Cai,C HEN Chun-xiao.(Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen518020,Guangdong,P R China) Abstract:Objective To determine amino acids from foods by high performance liquid chromatography Methods Food samples were collected and determined by using autoinjector with online derivati on function,gradient elution program and tandem de tectin g technicque Results The online derivation technicque overcame the deviation arised from manual operating and serial de tectin g technicque could enhance both reliabili ty and accuracy of determinati on Conclusion The method is accurate,quati tativelyand qualitatively as well as a reproductive and satisfactory resultsKey w ords:High performance liquid chromatography;Amino acids;Foods氨基酸分析是食品成份分析的重要组成部分,其研究对象可分为生理体液和食品两大部分,检测方法一般可分为氨基酸分析仪法、离子色谱法、高效液相色谱法等。
高效液相色谱法氨基酸标样的分析实验
一、目的要求1、熟悉高效液相色谱仪的结构、分离原理和操作程序。
2、掌握氨基酸标样的分析方法、原理。
二、实验原理氨基酸与PITC发生反应生成的衍生物，在254nm处有最大吸光值。
氨基酸衍生物进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积可进行定性和定量。
该方法是柱前衍生法中的一种。
PITC方法的反应方程式如下图所示：三、实验仪器和试剂1、仪器：高效液相色谱仪（带紫外检测系统和记录系统）。
2、材料：氨基酸标样3、试剂：衍生液：异硫氰酸苯酯：甲醇：三乙胺：水（V/V）=1：7：1：1正己烷、乙腈、乙酸、乙酸钠以上试剂中乙腈为色谱醇，水为二次蒸馏水，其它为分析醇。
四、实验步骤1、柱前衍生步骤：（1）将100ul衍生液加入100ul氨基酸标样或样品中，震荡使混合均匀，室温放置1小时。
（2）反应液中加入200ul正己烷，充分震荡后放置使分层。
（3）取下层溶液用一次性滤膜过滤器（0.45ul）过滤。
（4）取滤液5ul注入HPLC。
2、分离条件的设定（1）色谱柱：Shim-pack VP-ODS 4.6mm x 15cm保护柱：Shim-pack GVP-ODS4.6 mm x 1cm（2）流动相：A液：0.1M乙酸钠pH6.50（用乙酸调整，500ml乙酸钠中约加2滴乙酸）。
B液：乙腈/水=4/1（3）流量：1ml/min柱温：36℃检测波长：254nm（4）梯度洗脱程序：TIME(min) FUNC VALUE0．01 BCONC 103 BCONC 1021 BCONC 3921.01 BCONC 8025 BCONC 8025.01 BCONC 1035 STOP STOP3、数据采集打开real-time CS analysis软件采集数据并对数据进行分五、实验数据及处理结果六、实验讨论：1、本次实验的注意事项有哪些？结果：①、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um 或更细的膜过滤)。
高效液相色谱法测定废毕赤酵母中氨基酸成分
Ｏ １ ７ ２ ４ ３ ２ ３ ４ ３ ５ ３ ７
３８ ４５
１ ００ ０ ． ９ ． １０ ８ ． ００ ６ ． ８０ ６ ． ８０ ００ ． Ｏ０ ．
几 百种 蛋 白在 该 系统 中得 到 பைடு நூலகம்表 达。 随着部 分蛋 白逐 渐被 应用到 工业 生产 中， 生产 中产 生的废 毕赤 酵 其
母 的处理将越 来越 受到人 们的重视 。 文对 实验研 究产 生的废毕 赤酵母 中的氨 基 酸成分进 行 了分析 ， 本 为 废毕赤 酵母 的综合 处理提供 了一条 重要 思路 。 关键 词 ： 毕赤 酵母 高效液相 色谱 氨 基酸 成分 分析
朦
第 ３ ９卷第 ２期
２１ 年４ ０ ０ 月
发 酵 科 技 通 讯
精 氨 酸 苏 氨酸
丙 氨 酸 脯 氨 酸
Ｃｕｒｅ ｖ
５ ｎ用 ｌ０ ｃＱ Ｔ ｇ 动相 Ａ平衡 柱 １ｍｉ， ｍｉ， Ｏ ％Ａ ｃ － ａ 流 ０ ｎ 流动相梯 度见 下表 ， 运行 一次 空 白梯 度 ， 先 再进 标
滤 ； 动相 Ｂ： 流 乙腈 ； 流动相 Ｃ： 超纯水
失 等缺 陷［ 经 过二 十几 年 的发 展 ， ２ １ 。 巴斯德 毕赤 酵 母 表达 系统 在 国内外 已经引 起 了高 度重 视 ， 已基
本成 为可 以生产 多种 融合 蛋 白的高效 表 达 系统 ， 到 ２０ ０ ５年止 ，已经 有 ５ ０多 种 蛋 白在该 系统 中 ０ 进行 了表 达［ １ 潜 力之 大 ， 对 今后 基 因工 程产 ３其 ， ４ 将 品 的开发 和生物 技术 的发 展产生 重要 作用 。随着 毕赤 酵母 被广 泛应 用 到工 业 生产 中 ， 何处 理毕 如 赤 酵母 工 业 生产 后 产 生 的废 酵母 将 成 为摆 在 人
高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸含量
高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸含量一、本文概述本文旨在探讨高效液相色谱法（HPLC）在大豆中游离氨基酸含量测定中的应用。
作为一种重要的植物蛋白来源，大豆中的氨基酸组成对于其营养价值及食品工业应用具有重要意义。
游离氨基酸作为大豆蛋白质水解的产物，其含量直接反映了大豆的蛋白质质量和营养价值。
因此，准确测定大豆中游离氨基酸的含量对于评估大豆品质及开发高附加值产品至关重要。
高效液相色谱法作为一种高效、准确的分离分析技术，在氨基酸分析领域具有广泛应用。
本文将详细介绍高效液相色谱法的基本原理、样品处理方法、色谱条件优化以及结果计算与分析等方面的内容，并通过实验验证该方法的可行性和准确性。
本文还将讨论高效液相色谱法在大豆游离氨基酸含量测定中的优势及局限性，以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
二、实验材料与方法（1）大豆样品：选择新鲜、无病虫害、无杂质的大豆作为实验材料，经过清洗、烘干、破碎后备用。
（2）试剂：实验所需试剂包括高效液相色谱仪用流动相（如乙腈、甲醇等）、衍生化试剂（如OPA、FMOC等）、标准品氨基酸等，均为分析纯或更高纯度。
（3）仪器：高效液相色谱仪（配备紫外检测器或荧光检测器）、离心机、涡旋混合器、水浴锅、移液枪等。
（1）样品处理：称取适量大豆样品，加入适量的水或缓冲液，进行匀浆处理。
然后，将匀浆液进行离心，取上清液作为游离氨基酸提取液。
（2）衍生化处理：取一定体积的游离氨基酸提取液，加入适量的衍生化试剂，进行衍生化反应。
衍生化反应的目的是将氨基酸转化为易于检测的衍生物，提高检测灵敏度和准确性。
（3）高效液相色谱分析：将衍生化后的样品进行高效液相色谱分析。
选择合适的流动相和色谱柱，设置合适的检测波长或激发/发射波长，记录色谱图和峰面积。
（4）数据处理：根据标准品氨基酸的色谱图和峰面积，绘制标准曲线。
然后，根据样品的色谱图和峰面积，结合标准曲线，计算样品中游离氨基酸的含量。
本实验采用高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸的含量，通过样品处理、衍生化处理、高效液相色谱分析和数据处理等步骤，实现对大豆中游离氨基酸的快速、准确测定。
高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸
高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸1氨基酸氨基酸是类似于蛋白质的有机化合物，也是人体代谢过程中不可或缺的物质，具有重要的生理功能，人们发现它对人体健康有重要作用。
氨基酸分为线粒体氨基酸和细胞质氨基酸，它们可以通过液相色谱（HPLC）和其他技术进行测定。
2高效液相色谱化学发光检测法高效液相色谱化学发光检测法(HPLC-FLD)是一种非常常用的检测方法，是在液相色谱的基础上添加了化学发光探测器。
它具有高灵敏度、高分离度和快速分析等优势，得到了广泛应用。
在研究氨基酸中，HPLC-FLD可以较为准确地检测和分离氨基酸，从而实现对氨基酸浓度的准确测定及调整。
3工作原理HPLC-FLD工作过程是：在分析柱内，将水，乙腈，乙醇等溶剂混合，氨基酸将在柱中混有不同的动力学行为。
当氨基酸离开柱时，经测量氨基酸在化学发光探测器上发出的发光信号，可以计算出它们的相对浓度，从而判断氨基酸含量。
4检测步骤（1）样品准备：样品中含有氨基酸的各种溶液，需经过提取，稀释或洗脱处理等，以便于之后的检测。
（2）色谱层析：把样品按照一定的色谱层析方式，分离不同的成分，从而使不同的成分分离出来。
（3）发光测定：在这一步，人们可以利用HPLC-FLD测定氨基酸。
首先，样品将通过有机溶剂组合作用，激活发光反应，然后将样品通过化学发光探头的发光状态记录下来，并计算概率密度，最终得出样品中氨基酸的含量和比例。
5优势HPLC-FLD在检测氨基酸中有很多优势：（1）可以快速准确地检测氨基酸；（2）可实现高灵敏度和高分离度；（3）化学发光探头具有长寿命、可靠以及易于操作等优势；（4）可克服外界因素对分析结果的影响；（5）可以长时间连续检测，勤奋节约成本。
6结论HPLC-FLD是一种高效的技术，在检测氨基酸方面具有较高的准确性和效率，它不但能够用于氨基酸的检测，还可用于其他有机物分离和测定，在生物和药物领域都有广泛应用。
高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量
河 北 医 科 大 学 学 报JO U RN A L OF HEBEI M ED ICA L U NI VER SI T YV o 1.17 No .3 1996高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量许彦芳 许新民 王永利药理教研室(050017) 摘 要 本文利用高效液相色谱(HP L C )柱前邻苯二甲酝酿(OP A )自动衍生、自动进样程序测定脑组织中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸和r -氨基丁酸含量。
该法的最低检出限为10nmol /ml ,5种氨基酸峰面积测定值的变异系数平均为2.0±1.3%,线性相关系数平均为0.97±0.03。
关键词 HPL C;氨基酸;OP A ;自动衍生;自动进样HPLC -PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC DETERMINATION OFAMINO ACIDS BY AUTOMATIC PRECOLUMN DERIVATIZATIONXu Yan fang Xu Xinmin Wang YongliDep artment of Ph armacologyABSTRACT Glutamate,asparate,glycine,taurine and GABA in brain w ere seperated and determined by HPLC system of the autom atic processes of precolum n o -phthaldialdehydeder iv atization and injection .Average co efficient o f variatio n for peak areas of 5amino acids w as 2.0±1.3%w ith the detectio n lim it o f 50ng.Av erag e line co orelatio n coefficient w as 0.97±0.03.KEY WORDS HPLC ;o -phthaldialdehyde ;amino acids ;automatic derivatizatio n ;au-tom atic injection 生物样品中的微量氨基酸测定在医学领域中占重要地位。
高效液相色谱法测定氨基酸
脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国）1.2 药品与试剂16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。
脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。
批号：2013、2013、2013.乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。
2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。
）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。
2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。
取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。
高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸
高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸一、本文概述随着现代生物技术和分析化学的飞速发展，对于生物体内复杂化学成分的分析和测定要求越来越高。
氨基酸作为生物体内蛋白质的基本构成单元，其种类、数量及代谢状态的检测对于理解生命活动的本质、疾病的诊断与预防等方面具有重要意义。
高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）作为一种高灵敏度、高分辨率的分析技术，已被广泛应用于生物样品中氨基酸的定量分析。
本文旨在探讨利用高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸的方法。
文章将首先介绍氨基酸的重要性及其在人体内的代谢过程，随后详细阐述HPLC-MS/MS技术的基本原理及其在氨基酸分析中的优势。
接着，文章将重点描述样品的采集与处理、色谱条件的优化、质谱条件的设定以及数据分析方法等实验步骤。
文章还将对实验结果的可靠性进行验证，并讨论该方法在临床医学、营养学及药物研发等领域的应用前景。
通过本文的阐述，读者可以对高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸的方法有一个全面、深入的了解，为相关领域的研究提供有益的参考和借鉴。
二、实验原理高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）是一种先进的分析技术，结合了高效液相色谱（HPLC）的高分离能力和质谱（MS/MS）的高灵敏度和高选择性，从而实现对复杂生物样品中多种氨基酸的高效、快速和精确测定。
在HPLC-MS/MS分析中，样品首先通过高效液相色谱进行分离。
高效液相色谱利用不同氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数差异，将它们从复杂的生物样品中分离出来。
然后，分离后的氨基酸被引入质谱系统进行进一步的分析和检测。
在质谱系统中，氨基酸分子被离子化并产生带电离子，这些离子在电场的作用下被加速并通过一个或多个质量分析器。
质量分析器根据离子的质荷比（m/z）将它们分离，形成质谱图。
通过对比标准品的质谱图，可以确定样品中氨基酸的种类。
通过选择特定的母离子和子离子对，可以实现多重反应监测（MRM）模式，进一步提高方法的特异性和灵敏度。
AQC柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中游离氨基酸
AQC柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中游离氨基酸王亚超;曹玲;王玉【摘要】Purpose A pre-column derivatization method by HPLC was established for the determination of free amino acids in Weilening Tablets. Methods The sample was mixed with 2-amino butyric acid as the internal standard, then derivatized with 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate (AQC) and analyzed on a Kromasil C18 column(250 mm × 4.6 mm ,5 μm) ,with ammonium acetate solution( pH 5.10) and acetonitrile solution as mobile phase,using gradient elution with detection at 248 nm. Results The correlation coefficients between the ratios of peak area of amino acid to those of the internal standard and the amino acid concentrations were above 0.999. The average recoveries of amino acids added were 91.5％ -107.0％ and RSD was 0.63％ -3.79％. Conclusion The method could be used for determination of content of free amino acids in Weilening Tablets.%目的:建立柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中各种游离氨基酸的方法.方法:以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试荆,采用Kromasil C(18)(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,醋酸铵缓冲液(pH5.10)和57%乙腈水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为248nm,同时分离测定胃乐宁片中21种游离氨基酸.结果:21种氨基酸在0.01-0.5 mmoL/L浓度范围内有良好的线性关系.r均不小于0.999,平均加样回收率为91.5%-107.O%,RSD为0.63%-3.79%.结论:建立的方法可用于检测胃乐宁片中游离氨基酸含量,测定的结果为胃乐宁片质量研究和评价提供了依据.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2011(032)004【总页数】4页(P300-303)【关键词】胃乐宁片;6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯;柱前衍生;氨基酸;含量测定【作者】王亚超;曹玲;王玉【作者单位】中国药科大学,江苏南京,210009;江苏省食品药品检验所,江苏南京,210008;中国药科大学,江苏南京,210009;江苏省食品药品检验所,江苏南京,210008【正文语种】中文【中图分类】R927.1猴头菌[Hericium erinaceus(Rull ex F.)Pers.]又名猴头菇、剌菌或猬菌，是最早加工成中成药的药用菌之一，因用子实体作原料成本较高，生产中多用固体培养的菌丝体代替子实体作原料。
高效液相色谱仪测定发酵液中的氨基酸含量
高效液相色谱仪测定氨基酸的含量1 L--色氨酸含量的测定1.1实验仪器与试剂色氨酸样品，甲醇，高效液相色谱仪，0.03%KH2PO4溶液1.2 HPLC色谱分析条件流动相为0.03%KH2PO4溶液（A）-甲醇（B），线性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm。
1.2标准溶液的配制精密称取色氨酸标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
1.3标准直线的制作精密称取色氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml 中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以色氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。
1.4发酵液中样品中色氨酸含量的测定取发酵液，稀释配制成约500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
2L-精氨酸含量的测定2.1实验仪器与试剂L-精氨酸标准样品，乙腈，高效液相色谱仪，磷酸二氢铵。
PH计，磷酸，2.2HPLC色谱分析条件流动相: 以磷酸二氢铵溶液( 称取磷酸二氢铵1.15g, 加水800m 溶解后, 用磷酸调节pH 值至2.0±0.1, 加水稀释至1000ml ) - 乙腈为流动相，线性梯度淋洗; 柱温为30℃检测波长为206nm；进样量：25μl。
2.2标准直线的制作精密称取精氨酸标准标准品50mg，置100ml 容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
精密称取精氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml 中含精氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以精氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。
2.3发酵液中样品中精氨酸含量的测定取发酵液，稀释配制成约500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl 进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
柱前衍生化-超高效液相色谱法快速测定酱油中的18种氨基酸
柱前衍生化-超高效液相色谱法快速测定酱油中的18种氨基酸陈丽梅;尚艳芬;赵孟彬;刘虎威【摘要】建立了一种6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生,超高效液相色谱(UPLC)对酱油中18种氨基酸进行快速分离检测的方法.采用BEH C18色谱柱分离,在260 nm波长下检测,以乙酸铵-乙酸-乙腈-水和乙腈-乙酸为流动相,将流动相梯度和流速梯度相结合,在12 min内实现了18种氨基酸衍生物的分离.方法的线性回归系数(r2)均大于0.999,检出限为0.032～0.12 mg/L,日间相对标准偏差(RSD)为0.72% ～4.05% ,在酱油中18种氨基酸的加标回收率为90.2% ～103.7% .该方法前处理过程简单,分离时间短,是检测酱油中氨基酸的有效手段,可用于酱油的质量评定.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2010(028)012【总页数】4页(P1154-1157)【关键词】柱前衍生;超高效液相色谱;6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯;氨基酸;酱油【作者】陈丽梅;尚艳芬;赵孟彬;刘虎威【作者单位】北京大学化学与分子工程学院,北京,100871;北京锦绣大地农业股份有限公司,北京,100049;北京锦绣大地农业股份有限公司,北京,100049;北京锦绣大地农业股份有限公司,北京,100049;北京大学化学与分子工程学院,北京,100871【正文语种】中文【中图分类】O658酱油是烹饪和食品加工中的重要调味料,是以大豆、小麦为原料,经过天然晾晒或发酵制成。
在酱油酿造过程中,原料中的蛋白质经蛋白酶作用逐渐分解成氨基酸等人体需要的主要营养物质。
氨基酸含量是评价酱油品质的重要指标,同时氨基酸种类及含量也影响着酱油的风味[1]。
目前酱油品质的分级主要是根据其中氨基酸态氮的含量进行。
用于氨基酸检测的色谱方法主要有液相色谱法(LC)[2-4]、气相色谱法 (GC)、毛细管电泳法 (CE)、离子交换色谱法 (IEC)[5,6]及液相色谱-质谱 /质谱法 (LC-MS/MS)[7,8]。
高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化及应用
高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化及应用一、前言氨基酸是构成生物体蛋白质的基本单元，具有重要的生物学功能，如构建细胞结构、参与免疫反应以及转运、储存等多种生命活动。
而测定氨基酸含量的方法有很多种，其中，高效液相色谱法（HPLC）具有高灵敏度、高分辨率、快速分离、定量准确、重现性好等特点，因此被广泛应用于氨基酸分析领域。
本文重点介绍了高效液相色谱法测定氨基酸含量的原理、优化及应用。
二、方法原理高效液相色谱法是利用固体相、液相以及流动相间相互作用的分离技术，它通过改变固体相和液相的化学性质和物理性质，通过不同流动相的渗透能力与氨基酸分子的分子量、极性、结构特征等因素的相互作用，实现对氨基酸化合物分离、检测和定量的目的。
三、优化方案1.色谱柱的选择色谱柱的选择直接影响着 HPLC 法测定氨基酸含量的敏感度和分离效果。
常用的色谱柱有离子交换柱、反相柱、手性柱。
2.氨基酸样品的制备氨基酸的提取方法主要有：硫酸-氯化氢法、热酸解法和酶切法。
其中前两种方法操作简单，容易控制，常用于高精度测定。
3.流动相的优化流动相中添加适量的酸或碱，有利于提高分离度和氨基酸的稳定性。
同时加入有机物质类的前处理，在未来进行样品的提取、清洗等操作，有助于减少基础样品产生。
4.色谱条件的优化尽量缩短柱温度，降低流速，减少相互扰动，提高分辨率。
通常，正向向柱洗液的浓度可逐渐提高，也可采用反向洗液以加速洗脱。
四、实验结果分析实验结果显示，优化后的 HPLC 法测定氨基酸含量其灵敏度、准确度、重现性等指标均有了明显的提高，特别是样品前处理及流动相的优化方案都有利于提高样品的稳定性和可检出性。
五、应用展望高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化方案在氨基酸分析领域具有广泛的应用前景。
在临床医学、食品安全、环境污染等领域，测定氨基酸含量对于人类健康与生产活动具有重要意义，因此优化后的 HPLC 法测定氨基酸含量将被广泛应用于相关领域。
总之，高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化方案既有理论指导又有实验可行性，为实现准确测定氨基酸含量提供了新思路和新途径。
高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量 北京液相色谱仪分析案例
食物中氨基酸含量的高效液相色谱法测定一、简介测定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析仪，柱后衍生测定，但氨基酸分析仪价格昂贵，分析时间长，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技术的广泛应用。
七十年代以来，柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定。
液相色谱通用性强，检测灵敏度高,可用于多种物质的分析。
南京科捷应用研究所采用柱前衍生紫外检测的方法对几种食物中的16种氨基酸进行了测定。
二、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置LC-10Tvp高压恒流泵：2台SPD-10Tvp紫外检测器：1台SCL-10Tvp 系统控制器：1台7725i手动进样阀： 1套色谱工作站：1套（VI2010、N2000、N3000选用）液相色谱柱：1支（C18 4.6*250mn,5um）微量进样器：1支（50ul/100ul）进样支架：1只（进样阀用）三、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美国先进技术开发设计，国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话，可实时对仪器的运行状态进行监控，并可对潜在和已出现的故障做出判断，同时提供在线解决方案。
该仪器也全面实现了远程的准无人操作，大大提高了仪器的使用效率，同时通过高精度的AS1000自动进样系统，实现自动化进样，最大程度抑制了样品的交叉污染，提供样品分析精度。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。
主要特点丰富的功能——符合客户对分析的不同需求硬件具有VP功能，记录维护信息和操作记录，符合GLP/GMP要求；系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。
卓越的性能——满足客户对仪器的严格要求检测器采用进口氘灯、光电池以及1200条/mm凹面光栅组成的双光束单色器；精密加工的双透镜流通池，控制波长调节的高精度微处理器以及双路高速的采样频率，确保了低噪声、低漂移及超高灵敏度等特点。
食品中氨基酸含量的测定虚拟仿真实验报告
食品中氨基酸含量的测定[实验目的]1、熟悉高效液相色谱的各组成部分及应用。
2、了解高效液相色谱的分离原理。
3、掌握标准曲线定量方法。
[实验原理]1、液相色谱的特点高效液相色谱和其它液相色谱技术一样，其基本原理：利用欲分离的组分在固定相和流动相间的分配差异（即有不同的分配系数），当两相作相对运动时，这些组分在两相中反复进行分配，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动相移动却可以有明显的差距，最后使这些组分得到分离。
高效液相色谱法是常用的分析方法，由于组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，导致组分在固定相上的保留程度不一样。
按分离原理可将HPLC分为分配色谱、离子交换色谱、离子色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱等。
高效液相色谱与经典液相色谱的工作原理相同，但其使用效能却远大于经典的液相色谱，为了突出与经典液相色谱的区别，高效液相色谱又被称为现代液相色谱，高效液相色谱的技术优势主要表现在一下几点：（1）高柱效：由于新型高效微粒固定相填料的使用，柱效可达30000块/理论塔板数。
（2）高灵敏度：在高效液相色谱中常使用的紫外吸收检测器的最小检测量可达10-9，而荧光检测器的灵敏度可达10-11 g。
（3）分析速度快：由于使用了高压输液泵，输液压力可达10 MPa，流动相流速大大加快，完成一个样品分析，仅需几分钟至几十分钟，与经典的液相色谱相比，分析时间大大缩短。
（4）高选择性：不仅可分析有机化合物的同分异构体，使用手性固定相还可分析性质上极为相似的光学异构体。
但与气相色谱相比，高效液相色谱还存在如下不足：（1）缺少像气相色谱法使用的热导检测器、氢火焰离子化检测器那样的通用性检测器。
（2）使用多种溶剂，成本比气相色谱法高，而且易引起环境污染；当进行梯度洗脱操作时，比气相色谱的程序升温操作复杂。
（3）不能像气相色谱那样完成柱效在10万块理论塔板数以上的、组成复杂的样品分析，也不能代替中低压柱色谱去分析受压易分解、变性的样品。
AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量
AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量韩粉丽1,2，韩 飞2，李爱科2，陈曦2，宋歌2，范柳萍1,*，余治权3（1.江南大学食品学院，江苏无锡 214122；2.国家粮食局科学研究院，北京 100037；3.内蒙古燕谷坊生态农业发展（集团）有限公司，内蒙古呼和浩特 010000）摘 要：用AccQ-Tag法测定不同谷物及食糜中氨基酸的含量，并优化原料与酸解剂的比例。
采用内标法定量，6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯为柱前衍生剂，用反相高效液相色谱仪，2475荧光检测器（激发波长250 nm、发射波长395 nm），Waters AccQ-Tag Nova-Pak TM C18柱（3.9 mm×150 mm，4 μm），柱温37 ℃，以醋酸钠（pH 4.95）缓冲液为流动相A，纯乙腈为流动相B，水为流动相C进行梯度洗脱，进样量为10 μL。
结果发现，5 mg原料的最优酸解剂为500 μL；17 种氨基酸线性回归方程在25～500 μmol/L范围内线性良好（胱氨酸（Cys）浓度在12.5～250 μmol/L之间），相关系数r为0.999 6～0.999 9，测定的平均回收率为97.56%～103.92%（n=3），相对标准偏差为0.31%～2.75%（n=3）。
本法快速简便，能够适用于谷物及食糜中氨基酸含量的测定。
关键词：反相高效液相色谱法；AccQ-Tag柱前衍生；谷物；食糜；氨基酸Determination of Amino Acid Contents in Cereals and Ileal Digesta by Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography with AccQ-Tag Pre-column Derivatization MethodHAN Fenli1,2, HAN Fei2, LI Aike2, CHEN Xi2, SONG Ge2, FAN Liuping1,*, YU Zhiquan3(1. School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China;2. Academy of State Administration of Grain, Beijing 100037, China;3. Inner Mongolia Oats House Ecological Agriculture Development (Group) Co. Ltd., Hohhot 010000, China)Abstract: The contents of amino acids in different cereals and ileal digesta were determined by reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) according to the AccQ-Tag method. The ratio of material to acidolysis agent was optimized in this paper. Quantification was performed using an internal standard method after pre-column derivatization with 6-aminoquinolinyl-N-hydroxysuccinimidate (AQC). The analysis procedure was carried out using a Waters 2695 HPLC system fitted with a Waters AccQ-Tag Nova-Pak TM C18 column (3.9 mm × 150 mm, 4 μm) and a Waters 2475 fluorescence detector (Waters Corp., USA) at an excitation wavelength of 250 nm and emission wavelength of 395 nm at 37 ℃. Sodium acetate (pH 4.95), acetonitrile and water were used respectively as mobile phases A, B and C for gradient elution and the injection volume was 10 μL. The results showed that the optimum ratio of material to acidolysis agent was 1:100 (mg/μL).The calibration curves of 17 amino acids were linear within the range of 25‒500 μmol/L (12.5–250 μmol/L for cystine) with correlation coefficients (r) of 0.999 6‒0.999 9. The average recoveries were in the range of 97.56%–103.92% with relative standard deviation (RSD) of 0.31%‒2.75% (n = 3). This method is rapid, simple and accurate for the determination of amino acids in cereals and ileal digesta.Keywords: reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC); AccQ-Tag pre-column derivatization;cereals; ileal digesta; amino acidsDOI:10.7506/spkx1002-6630-201804025中图分类号：TS201.4 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2018）04-0165-06引文格式：韩粉丽, 韩飞, 李爱科, 等. AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量[J]. 食品科学, 2018, 39(4): 165-170. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201804025. 收稿日期：2017-01-04基金项目：公益性行业（粮食）科研专项（201513003-8）第一作者简介：韩粉丽（1989—），女，硕士研究生，研究方向为粮油营养。
高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法分析
T logy科技分析与检测随着我国经济能力的不断提升，健康饮食已经成为了我国民生话题的重要组成部分。
目前，人们正在由“吃得饱”向“吃得好”转变。
通过食物摄入人体必需的各类营养成分是健康饮食的重要基础。
氨基酸作为人体成长的重要物质，其吸收和补充一直是饮食领域的重要研究内容。
为了保证人们能够摄入足够量的氨基酸，需要对不同食品中的氨基酸含量进行检测。
经过多年发展，我国逐步建立了比较成熟的食品氨基酸检测体系。
由于相关技术发展的限制，现有的食品氨基酸检测方法存在着一定的问题和不足。
高效液相色谱法是氨基酸检测的重要方法之一。
在现有技术的基础上，推动高效液相色谱法在食品中氨基酸的检测中的应用具有重要意义[1]。
1 实验准备高效液相色谱法的应用对食品氨基酸含量的检测有着重要的意义[2]。
为了推动 高效液相色谱法的应用发展，本文分析了检测过程中需要应用到的仪器与试剂，并对其预处理方法进行了总结研究。
1.1 检测仪器与试剂的准备高效液相色谱法是一种常用的色谱检测方法[3]。
其基本工作原理是采用液体作为流动相，将不同的溶剂等输入到装有固定相的色谱柱中。
在完成待检测物的成分分离后，利用相关设备进行检测，完成对试样的分析。
目前，高效液相色谱法已经在化学、医学等诸多领域中得到了广泛的应用。
随着高效液相色谱法的广泛应用，其技术设备等也在不断更新。
目前常用的高效液相色谱法设备包括Agilent1100 型高效液相色谱仪、赛多利斯天平 TB-215D等。
这些设备应用灵活，精确度也比较高，能够满足日常检测的需求。
目前高效液相色谱法常用的试剂主要包括含10 mg/mL的邻苯二甲醛溶液，浓度为0.4 N、pH为10.4的硼酸缓冲溶液。
这些试剂配置比较简单，也能够满足人们的日常检测需求。
此外，还需要准备三乙胺等试剂用品，该用品是目前常用的试剂溶剂和催化剂之一，在高效液相色谱法的应用中发挥着重要的作用。
1.2 样品预处理方法分析在利用高效液相色谱法检测之前，需要进行必要的预处理活动，以保证检测工作的顺利进行和结果的有效性。
高效液相色谱测定莲子_苡仁米中17种氨基酸
高效液相色谱测定莲子_苡仁米中17种氨基酸贵州工学院学报V o l. 25 N o. 5 第25卷第5期1996年10月 O c to be r. 1996 JOU RN A L O F GU IZHOU IN ST ITU T E O F T ECHN OL O GY 高效液相色谱测定莲子、苡仁米中17种氨基酸周欣钟世江() 贵州工学院理化分析研究中心要采用柱后反应离子交换高效液相色谱法测定莲子、苡仁米中氨基酸摘成份及含量。
色谱分离分别测定出莲子、苡仁米的十七种氨基酸, 其总含量分别是24. 1% 和16. 9% 。
关键词莲子; 苡仁米; 氨基酸; 高效液相色谱中图法分类号651. 72 656. 35Ξ O O言 0 引莲子、苡仁米是贵州省的主要农副产品之一, 由于其味鲜、营养价值高而广受欢迎,并有一定的药用价值。
将莲子、苡仁米中蛋白质水解成它们的组成物—氨基酸,利用柱后反应高效液相色谱对其氨基酸进行了定性定量分析, 从而对莲子、苡仁米的营养价值及药用价值提供科学的依据。
1 原理简述〔1〕根据文献的基本原理, 在我中心现有条件下通过实验确定了用柱后反应离子交换色谱( ) 法测定氨基酸的最佳条件。
在该条件下用十八种标准氨基酸上海康达氨基酸厂生产, 在 570测量衍生物的吸收值, 建立校准曲线, 然后在同样条件下对莲子、苡仁米样品进行定Εnm性、定量测定。
本实验采用的高效液相色谱仪, 其梯度淋洗方式、流速、数据的贮存、定量计算等复杂操作均由计算机指令控制自动进行工作, 氨基酸的测定从分离到定量实现了微量、准确。
2 样品将新鲜的莲子、苡仁米干燥后用玛瑙研钵磨细, 分别称取一定量磨细, 分别称取一定量磨细的莲子、苡仁米样品, 置于20安瓶中, 加156盐酸, 将安瓿口融封, 在110?水解24小 m l m l M + () 时, 然后置水浴上慢慢将蒸发, 用0. 2缓冲液 = 3. 00溶解残渣, 过滤后配成H CL M N apH25. 00溶液。
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食物中氨基酸含量的高效液相色谱法测定
一、简介
测定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析仪，柱后衍生测定，但氨基酸分析仪价格昂贵，分析时间长，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技术的广泛应用。
七十年代以来，柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定。
液相色谱通用性强，检测灵敏度高,可用于多种物质的分析。
南京科捷应用研究所采用柱前衍生紫外检测的方法对几种食物中的16种氨基酸进行了测定。
二、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置
LC-10Tvp高压恒流泵：2台
SPD-10Tvp紫外检测器：1台
SCL-10Tvp 系统控制器：1台
7725i手动进样阀： 1套
色谱工作站：1套（VI2010、N2000、N3000选用）
液相色谱柱：1支（C18 4.6*250mn,5um）
微量进样器：1支（50ul/100ul）
进样支架：1只（进样阀用）
三、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点
LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美国先进技术开发设计，国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话，可实时对仪器的运行状态进行监控，并可对潜在和已出现的故障做出判断，同时提供在线解决方案。
该仪器也全面实现了远程的准无人操作，大大提高了仪器的使用效率，同时通过高精度的AS1000自动进样系统，实现自动化进样，最大程度抑制了样品的交叉污染，提供样品分析精度。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。
主要特点
丰富的功能——符合客户对分析的不同需求
硬件具有VP功能，记录维护信息和操作记录，符合GLP/GMP要求；系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。
卓越的性能——满足客户对仪器的严格要求
检测器采用进口氘灯、光电池以及1200条/mm凹面光栅组成的双光束单色器；精密加工的双透镜流通池，控制波长调节的高精度微处理器以及双路高速的采样频率，确保了低噪声、低漂移及超高灵敏度等特点。
VI2010工作站符合多种法规要求。
可靠的结果——满足客户对结果的准确要求
与进口仪器做对比试验,分析结果具有高度的一致性。
简便的操作——便于客户对软件的熟练操作
软件采用多窗口模式，操作方便。
精美的外观——满足客户对仪器的视觉要求
外形精美，带来视觉上的享受。
技术指标
LC-10Tvp高压恒流输液泵
输液方式微体积串联双柱塞
最大输液压力0～9999Psi
流量设定范围0.001～9.999ml/min （以0.001ml/min步长调节流量）
流量设定值误差≤0.5%
流量稳定性误差≤0.2%RSD
压力脉动小于15Psi （流量1mL/min，压力600～1600Psi 。
）
泵密封性压力为5400Psi，时间为10min，压降小于400Psi 。
时间程序功能有
尺寸W260×H130×D420mm
重量11kg
使用环境温度范围4～40℃
SPD-10Tvp紫外可见可变波长检测器
波长范围190nm～700nm
波长示值误差≤±1nm
波长重复性误差≤±0.1nm
动态噪声≤ ±0.75×10-5AU （甲醇，1ml/min，254nm，20℃ 。
）
静态噪音≤ ±0.5×10-5AU （空池，响应时间1秒，20℃ 。
）
动态基线漂移≤±1×10-4AU/h （甲醇，1ml/min，254nm，20℃ 。
）
静态基线漂移≤0.5×10-4 （空池，响应时间1秒，20℃ 。
）
线性范围≥104
最小检测浓度≤1×10-9g/mL （萘/甲醇溶液）
定性重复性RSD6≤ 0.1%
定量重复性RSD6≤ 0.5%
光谱带宽6nm
流通池体积8μL
光程10mm
时间程序功能有
尺寸W260×H130×D420mm
重量11kg
使用环境温度范围4～40℃
四、食物中氨基酸含量的检测方法
1、试剂
浓盐酸（优级纯），苯酚（分析纯），混合氨基酸标准液，含17种蛋白水解氨基酸，天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、胱氨酸、酪氨酸、撷氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸，除胱氨酸浓度为1.25mmol/L外，其余16种氨基酸浓度各为2.5mmol/L 流动相A,磷酸盐缓冲液用1：10双蒸水稀释，pH4.95。
亦可自行配制，流动相B：乙睛，流动相C：双蒸水,硼酸盐缓冲液衍生试剂6一氨基喹琳基一N一羟基琥珀酞亚氨基甲酸酯，用时加入1mL乙睛,混匀于55℃烘箱加热10min至溶解
2、仪器
高效液相色谱仪：LC-10Tvp,
紫外检测器：SPD-10Tvp
真空泵
超声波清洗器
涡旋混合器。
3、色谱条件色谱柱,
色谱柱：高效C18色谱柱
柱温：37℃
检测波长：248nm
进样量：10uL
梯度洗脱条件,如表
4、实验方法
4.1衍生反应
衍生试剂（AQC）与氨基酸迅速反应生成在248nm有紫外吸收的高稳定性的脲和羟基琥珀酰亚胺（NHS），过量的试剂可在慢反应中完全水解，过程如下
4.2氨基酸衍生步骤
用微量注射器移取10uL稀释的氨基酸标准液或样品水解液放人6 (50mm样品
管底部加人70uL硼酸盐缓冲液,涡旋混合10s)，边涡旋混合边加入20uL衍生试剂溶液，用封口膜密封样品管,置于55℃烘箱中加热10min，从烘箱中取出样品管冷却至室温,供分析用。
此衍生样品于4℃保存两周。
4.3样品水解
精密称取适量样品约0.5-1.0g于水解管中,加入6mol/L盐酸10-15ml，加入少量新蒸馏的苯酚，抽真空，充高纯氮气，重复3次。
迅速将已充好氮气的水解管拧紧盖子，放入110℃烘箱中水解22h。
水解完毕，将水解液过滤，定容。
取适量，于55℃减压干燥至干，再用适量二次蒸馏水复溶，备用。
工作曲线制作将氨基酸标准液配制成浓度分100,200,400,600,800,1000umol/L 的溶液，每一标准液取10uL依上法衍生后进行测定，色谱分离见图1
4.4结果与讨论
回归方程根据工作曲线，以峰面积（A）与浓度（C）进行回归分析，回归方程结果见表2。
各氨基酸的检测限为0.54umol/L
五、结果
南京科捷研发的采用柱前衍生高效液相色谱法测定氨基酸含具有准确，快速，灵敏度高等优点，此方法简便可行,无需购买昂贵的专用
氨基酸分析仪器即可对氨基酸进行分析。