超滤膜使用操作流程

超滤膜使用操作流程

1.超滤器使用前处理

1.1把超滤器各部件拆卸开，用过滤去离子水冲洗每个部件；

1.2 按照蛋白分子量及超滤目的选择所需规格的超滤膜并填写超滤膜使用记录；

1.3 用过滤去离子水冲洗滤膜后正面朝上（光面）装入超滤器中，同时用红色垫圈压住超滤膜；

1.4 按照说明书的安装方式依次安装下盖和搅拌器；

1.5 加入适量的过滤去离子水检查超滤器是否密封严实；

1.6 用1M NaCL冲洗超滤器10分钟；

1.7 用过滤去离子水冲洗3-5次去除残留的NaCL

2.超滤样品的准备

2.1 根据蛋白的浓度及澄清度确定蛋白是否需要离心，如有絮状或沉淀需离心；离心条件根据需要而定；

2.2 离心后样品经注射器用0.45um滤膜过滤去除悬浮颗粒；

3.样品的超滤

3.1把样品加入超滤杯中（一般不要装太满，防止搅拌时液体溅出）；装上超滤器上盖后放入超滤器框架中；

3.2把超滤器与液氮罐连接的管道连接，关闭超滤器上的黑色按钮，检查是否有漏气；

3.3把超滤器放在磁力搅拌器上调节磁力搅拌器转速；

3.4打开液氮罐阀门（顺时针扭动调节阀）至压力在0.2MP（10KD及以下的滤膜可以加压至0.3MP）以内，同时观察流出液速度；

3.5待样品浓缩到需要的体积及浓度后关闭液氮罐阀门（逆时针扭动调节阀）；同时打来超滤器上端压力调节阀放气；

3.6用移液枪或直接倒出超滤后样品（注意如用枪吸取时，千万不可让枪头触碰到膜，以防刮坏滤膜），如果体积太大可以按以上操作进行第二次浓缩；

4.超滤器的清洗

4.1取出样品后卸掉与液氮罐连接的管路，用过滤去离子水冲洗超滤杯3-5次；

4.2 用1.0M NaCL浸泡30分钟，同时打开磁力搅拌器充分洗涤；

4.3 再次用过滤水冲洗滤器清除残留NaCL；

4.4把超滤器每一部分拆开后对每一部分再进行清洗，防止有蛋白污染；

4.5去除超滤膜放入装有20%乙醇的培养皿中于4度保存（使用完毕标示使用情况、使用次数、蛋白名称等信息后统一收回）；其他部分晾干后装入超滤器盒中放回指定位置。