微生物实验

实验一 显微镜的使用

一、实验原理

微生物学研究用的显微镜通常有低倍物镜(16mm ，10⨯)高倍物镜(4mm ，40-45⨯)

和油镜(1.8mm ，95-100⨯)三种。油镜常标有黑圈或红圈，它是三者中放大倍数最

大的。

使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空

气，而是隔一层油质，称为油浸系。这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n

＝1.52，与玻璃基本相同。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而

不发生折射。如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系；当光线通过玻

片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样视野的照明度就

减低了(图Ⅰ-1)。

利用油镜不但能增加照明度；更主要的是能增加数值口径。因为显微镜的

放大效能由其数值孔径决定的。所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度

(称镜口角)的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公

式表示： 2sin α

⋅=⋅n A N

式中 数值孔径=⋅A N

介质折射率=n

最大入射角，即镜口角=α

数值孔径的大小又是衡量一台显微镜分辨力强弱的依据；分辨力是指显微镜

能辨别物体两点间最小距离的能力。 A N ⋅=2λ

能辨别两点间最小距离

式中 λ=光波波长

由上述可知若n 值和α角越大则N ·A 越大或光波波长越短，则显微镜的分辨

力越大(图Ⅰ-2)。

一些物质的折射率：

水 1.33 玻璃 1.52 空气 1.0 香柏油 1.515。

二、实验器材

1、 仪器 显微镜；

2、 材料 香柏油，二甲苯，擦镜纸。

三、操作步骤

显微镜构造见图Ⅰ-3

图Ⅰ-3 光学显微镜的构造

1. 物镜转换器

2. 接物镜

3.游标卡尺

4.载物台

5.聚光器

6. 彩

虹光阑 7.光源 8. 镜座 9. 电源开关 10. 光源滑动变阻器 11.

粗调螺旋 12. 微调螺旋 13. 镜臂14.镜筒 15.目镜 16.标本移动螺旋

1、取镜

显微镜是光学精密仪器，使用时应特别小心。从镜箱中取出时，一手握镜臂，一手托镜座，放在实验台上。在使用时要特别小心。使用前首先要熟悉显微镜的结构和性能，检查各部零件是否完全合用，镜身有无尘土，镜头是否清洁。做好必要的清洁和调整工作。

2、调节光源

1) 将低倍物镜旋到镜筒下方，旋转粗调螺旋，使镜头和载物台距离约为0.5厘米左右。

2) 上升聚光器，使之与载物台表面相距1毫米左右。

3) 左眼看目镜调节反光镜镜面角度(在天然的光线下观察，一般用平面反光镜；若以灯光为光源，则一般多用凹面反光镜)。开闭光圈，调节光线强弱，直至视野内得到最均匀最适宜的照明为止。

一般染色标本油镜检查对，光度宜强，可将光圈开大，聚光器上升到最高，反光镜调至最强；未染色标本，在低倍镜或高倍镜观察时，应适当地缩小光圈，下降聚光器，调节反光镜，使光度减弱，否则光线过强不易观察。

3、低倍镜观察

低倍物镜(8⨯或10⨯)视野面广，焦点深度较深，为易于发现目标确定检查位置，故应先用低倍镜观察为宜。操作步骤：

1) 先将标本玻片置于载物台上(注意标本朝上)，并将标本部位处于物镜的正下方、转动粗调螺旋，上升载物台使物镜至距标本约0.5厘米处。

2) 左眼看目镜，同时反时针方向慢慢旋转粗调节螺旋使载物台缓慢上升，至视野内出现物象后，改用细调节螺旋，上下微微转动，仔细调节焦距和照明，直至视野内获得清晰的物象，及时确定需进一步观察的部位。

3) 移动推动器。将所要观察的部位置于视野中心，准备换高倍镜观察。

4、高倍镜观察将高倍物镜(40⨯)转至镜筒下方(在转换物镜时，要从侧面注视。以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞)，调节光圈和聚光镜，使光线亮度适中，再仔细反复转动微调螺旋，调节焦距，获得清晰物象，再移动推

动器选择最满意的镜检部位将染色标本移至视野中央，待油镜观察。

5、油镜观察

1) 用粗调螺旋提起镜筒，转动转换器将油镜转至镜筒正下方。在标本镜检部位滴上一滴香柏油。右手顺时针方向慢慢转动粗调螺旋，上升载物台，并及时从侧面注视使油浸物镜浸入油中，直到几乎与标本接触时为止(注意切勿压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头)。

2) 左眼看目镜，右手反时针方向微微转动粗调螺旋，下降载物台(注意：此时只准下降载物台，不能向上调动)，当视野中有模糊的标本物象时，改用细调螺旋，并移动标本直至标本物象清晰为止。

3) 如果向上转动粗调螺旋已使镜头离开油滴又尚未发现标本时，可重新按上述步骤操作直到看清物象为止。

4) 观察完毕，下降载物台，取下标本片。先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾少量二甲苯擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。切忌用手或其他纸擦镜头，以免损坏镜头，可用绸布擦净显微镜的金属部件。

5) 将各部分还原，反光镜垂直于镜座，将接物镜转成八字形，再向下旋。罩上镜套，然后放回镜箱中。

四、注意事项

1、显微镜镜头的保护和保养。

2、使用显微镜时应根据不同的物镜而调节光线。

实验二细菌的形态结构观察

一、实验目的与要求

观察细菌、放线菌的个体形态，学会绘制微生物的形态结构图。

二、实验材料和用具

大肠杆菌、葡萄球菌。

香柏油、二甲苯、无菌水；显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、吸水纸、小滴管。

三、操作步骤