病原微生物应急检测

流行性病原微生物应急检测制度

一、病原微生物引起的传染病

我国传染病法规定的法定报告传染病分类：甲、乙、丙3类，从数量上共有39种，主要由病毒、细菌和寄生虫引起。

（一）甲类传染病主要鼠疫和霍乱。

（二）乙类传染病

（1）病毒引起的：传染性非典型肺炎、人感染高致病性禽流感、新型甲型H1N1流感、麻疹、病毒性肝炎、艾滋病、脊髓灰质炎、流行性出血热、狂犬病、流行性乙型脑炎。

（2）细菌引起的：伤寒和副伤寒、淋病、梅毒、百日咳、白喉、流行性脑脊髓膜炎、猩红热、钩端螺旋体病、布鲁氏菌病、炭疽、肺结核、新生儿破伤风。

（3）寄生虫和细菌：疟疾、血吸虫病、细菌性和阿米巴性痢疾。

（三）丙类传染病

（1）病毒引起的主要有：流行性感冒、流行性腮腺炎、急性出血性结膜炎、手足口病、风疹及除霍乱、痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻病。

（2）细菌和寄生虫引起的：麻风病、流行性和地方性斑疹伤寒、黑热病、丝虫病、包虫病。

（四）病原微生物引起的综合征

1、急性腹泻综合征

（1）细菌性腹泻：霍乱弧菌、志贺氏菌、大肠杆菌（肠毒素性和肠出血性）、沙门菌、空肠弯曲菌、小肠结肠耶尔森菌、艰难梭菌等。

（2）病毒性腹泻：轮状病毒、诺如病毒、腺病毒、埃博拉和其他出血热病毒等。

（3）寄生虫性腹泻：痢疾阿米巴、隐孢子虫、贾迪鞭毛虫等。

2、急性出血热综合征

登革热病毒、汉坦病毒、克里米亚-刚果热病毒、埃博拉病毒、拉萨热病毒、马尔堡出血热病毒、裂谷热病毒、南美沙粒病毒、蜱传播的黄病毒、黄热病病毒等。

3、急性黄疸综合征

A，B，E型肝炎病毒、钩端螺旋体、黄热病病毒等、

4、急性神经性综合征

(1)细菌性脑膜炎：脑膜炎奈瑟氏菌、钩体、肺炎链球菌、嗜血流感杆菌、大肠杆菌、李斯特菌等。

(2)病毒性脑炎：乙型脑炎病毒、脊髓灰质炎、狂犬病毒、肠道病毒、蜱传播的脑炎病毒等

(3)寄生虫性脑炎：锥形虫、疟原虫等。

5、急性呼吸综合征

（1）细菌性：炭疽杆菌、鼠疫杆菌、百日咳杆菌、白喉杆菌、A群链球菌、TB、军团菌、支原体、衣原体等。

（2）病毒性：冠状病毒、流感和禽流感病毒、肺综合征汉坦病毒和腺病毒等。

6、急性皮肤综合征

水痘病毒、麻疹病毒、风疹病毒、肠道病毒71、柯萨奇病毒A组16型、斑疹伤寒立克次氏体、炭疽杆菌、猴豆病毒、细小病毒B19、基孔肯雅热病毒等。

7、急性眼综合征

腺病毒、肠道病毒、沙眼衣原体

8、急性全身性综合征

炭疽杆菌、鼠疫杆菌、布氏菌、伤寒沙门菌、钩体、HIV、登革病毒、汉坦病毒、疟原虫莱姆病螺旋体。

二、应急检测的目的和意义

应急检测的目的和意义是

1、识别暴发、确定病因

2、确定传染来源

3、确定传播链和流行范围

4、发现新的病原微生物

5、提供仲裁依据

三、病原微生物的特点及其应急检测

病毒不是完整的生物体，结构简单，需要再电子显微镜下才能看清楚。

电镜是研究病毒和细胞相互作用的重要工具，但是在诊断实验室的使用却非常有限。要想直接用电镜观察检测病毒，样品必须含有高滴度的病毒颗粒（106到107个/ ml）但也可通过样品浓缩和使用标记抗体提高敏感性。电镜主要用于不可培养的病毒检测，特别是病毒性胃肠炎病原体检测。

细菌的诊断相对容易，培养也较方便。

（一）病原微生物及其抗原和核酸的检测方法和初步结果报告时限

1、分离培养（细菌：48～72小时，病毒14～28天）

2、免疫荧光法（4～8小时）

3、固相免疫分析胶体金法（30～60分钟）

4、酶联免疫分析（ELISA) （4～8小时）

5、核酸扩增聚合酶链式反应（PCR）（4～8小时）

6、实时荧光PCR （3～4小时）

7、核酸序列分析（16～24小时）

8、形态学诊断（24～72小时）

二）血清学抗体检测方法和初步结果报告时限

1、ELISA检测感染早期IgM抗体（4～8小时）

2、ELISA检测感染急性期和恢复期IgG抗体（4～8小时）

3、病毒抗体中和试验测定急性期和恢复期中和抗体（7天）

4、血球凝集抑制检测病毒抗体（4～8小时）

5、试管凝集试验检测细菌抗体（4～8小时）

6、间接血球凝集抑制试验检测病毒抗体（4～8小时）

7、补体结合试验（24～48小时）

（三）选择检验方法需考虑的因素

1、疑似病原微生物感染的病理学知识

2、病人感染的病程和采样时间

3、各种方法对疑似病原微生物感染的适用性

4、可用于检测标本类别

（四）实验室结果的意义和解释

1、病原微生物感染的实验室诊断需要多方面的信息，包括：对可疑病原体的致病机理的理解，对感染阶段的认识，被感染者的年龄和免疫状况等。

2、病原微生物分离培养的成功与多个因素有关，包括：选择适当的标本，仔细收集标本以最大限度收集到致病因子，标本的运输必须尽量保持病原体活性，减少污染菌的增殖等。

3、如果从疑似病人的标本中分离到目标细菌和病毒，可以确诊。

4、如果在疑似病人的标本中检测到目标细菌和病毒核酸，可以确诊。

5、如果目标病原微生物感染的中和抗体或IgG抗体或其他方法测定的抗体滴度稳定维持在高水平，或者出现阳转血清抗体滴度，或是恢复期血清的抗体滴度比急性期有4倍或4倍以上的增长，则表明病人确有感染相应病原体。

6、如病人血清或脑脊液标本中检测到目标病原微生物感染的IgM抗体阳性，表示有近期感染、

7、如果脑脊髓液标本或血清IgM抗体检测阴性，可能是因为患者体内的抗体还没达到可被检测的浓度，需结合发病和采样日期，进一步对患者的血清标本进行检测。

三、应急检测标本的采集和运输

（一）标本的选择

1、为了说明病原体与某种特殊疾病的关系，标本应尽可能取自靶器官

2、许多病原微生物感染的临床症状可以用来确定靶器官，以取得适当的标本

3、分离立克次氏体的标本种类有限，主要是血液和内脏组织

（二）采样器材

1、无菌、耐低温、密闭带螺口盖的容器。包括尿杯和一次性离心管（15～50ml），适于盛装2～4mlVTM的标本收集管，2～5ml血清收集管

2、无菌棉签和专用采样拭子

3、无菌玻珠(直径5mm)每管加3～4个玻璃珠，以便于将结合在拭子上的细胞释放出来

4、注射器配26和27号针头，用于吸取囊泡液

5、含抗凝剂的血液收集管

（三）病毒运输液（VTM）

1、运输液可以防止标本干燥，在标本收集和接种的间隔期内有助于保持病毒活性，同时延缓污染菌的增殖。

2、使用的VTM有多种配方，VTM既可在实验室自行配制，也可以购买商品化的，尽管综合性的研究不多，但使用不同的VTM对选择的病毒的回收检测结果没有显著影响。

（四）细菌运送培养基

1、维持活力，不增菌的非营养性半固体培养基

2、四种主要运送培养基：Stuarts、Cary-Blair、Amies、STGG

（五）标本收集

1、出现临床症状后尽可能早地采集标本，最好在没有进行抗病毒和抗生素治疗之前采集。

2、最易分离到病毒的时间是发病后3天内，5天以后分离到病毒的机会将大大降低。病例死亡后应尽快采集尸解标本。

3、收集立克次氏体培养标本应尽量无菌。

4、详细询问病史，包括发病日期、临床表现、近期暴露史、动物和节肢动物接触史和叮咬史、近期到流行区的旅行史和疫苗接种史。

5、用于细菌血培养的标本应尽早采集，并注意无菌操作。

（六）标本的运送、接收与保存

1、专人负责标本运输

2、新鲜的临床采集标本应在4℃条件下24小时内运送至实验室；未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或