薄层实验方法展开剂各项
薄层色谱中展开剂的选择
薄层色谱中睁开剂的选择2007-04-05 02:03（一）有机合成中睁开剂的选择做有机合成时走板子是常有的事,睁开剂的选择就至关重要了. 选择恰当的睁开剂是重要义务.一般经常运用溶剂按照极性从小到大的次序分列精确为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇运用单一溶剂,往往不克不及达到很好的分别后果,往往运用混杂溶剂平日运用一个高极性和低级性溶剂构成的混杂溶剂,高极性的溶剂还有增长区分度的感化,睁开剂的比例要靠测验测验.一般根据文献中报导的该类化合物用什么样的睁开剂,就起首测验测验运用该类睁开剂,然后不竭测验测验比例,直到找到一个分别后果好的睁开剂.睁开剂的选择前提：①对的所需成分有优越的消融性;②可使成分间离开;③待测组分的Rf 在0.2~0.8之间,定量测定在0.3～0.5之间;④不与待测组分或吸附剂产生化学反响;⑤沸点适中,黏度较小;⑥睁开后组分黑点圆且分散;⑦混杂溶剂最好用新颖配制. 一般来说,弱极性溶剂体系的根本两相由正己烷和水构成,再根据须要参加甲醇.乙醇,乙酸乙酯来调节溶剂体系的极性,以达到好的分别后果,合适于生物碱.黄酮.萜类等的分别;中等极性的溶剂体系由氯仿和水根本两相构成,由甲醇.乙醇,乙酸乙酯等来调节,合适于蒽醌.喷鼻豆素,以及一些极性较大的木脂素和萜类的分别;强极性溶剂,由正丁醇和水构成,也靠甲醇.乙醇,乙酸乙酯等来调节,合适于极性很大的生物碱类化合物的分别.许多时刻,睁开剂的选摘要靠本身不竭变换睁开剂的构成来达到最佳后果.我们在试验中,为了实现一个配体与其他杂质有用分别,曾测验测验了许多种的溶剂组合,最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混杂溶剂.一般把两种溶剂混应时,采取高极性/低极性的体积比为1/3的混杂溶剂,假若有离开的迹象,再调剂比例（或者参加第三种溶剂）,达到最佳后果;假如没有离开的迹象（黑点较“拖”）,最好是换溶剂.对于在硅胶中这种酸性物资上易分化的物资,在睁开剂里往往加一点点三乙胺,氨水,吡啶等碱性物资来中和硅胶的酸性.（选择所添加的碱性物资,还必须斟酌轻易从产品中除去,氨水无疑是较好的选择.）分别后果的利害和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：不合厂家临盆的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度,酸性强弱不合,从而导致产品在某个厂家的硅胶平分别后果很好,但在另一个厂家的就不成.溶剂的含水量和杂质含量对分别后果都有显著的影响.温度,湿度对分别后果影响也很显著,在试验中我们发明有时统一睁开前提,高低午的Rf截然不合 .睁开剂的选择重要根据样品的极性.消融度和吸附剂的活性等身分来斟酌,在进行薄层层析时,起首应当知道未知化学成分的类型,其极性的大致归属,从提取液或从色谱柱的流淌相极性可知,别的某样品里含多种化学成分先按极性不合大致分,然后细分,对于分别未知的化学物资,睁开剂的选择也是一个探索的进程,不该该仅仅从睁开剂斟酌,多身分分解权衡！溶剂：层析进程中溶剂的选择,对组分分别关系极大.在柱层析时所用的溶剂（单一剂或混杂溶剂）习惯上称洗脱剂,用于薄层或纸层析时常称睁开剂.洗脱剂的选择,须根据被分别物资与所选用的吸附剂性质这两者联合起来加以斟酌在用极性吸附剂进行层析时,当被分别物资为弱极性物资,一般选用弱极性溶剂为洗脱剂;被分别物资为强极性成分,则须选用极性溶剂为洗脱剂.假如对某一极性物资用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶）,则洗脱剂的极性亦须响应下降.在柱层操纵时,被分别样品在加样时可采取于法,亦可选一合适的溶剂将样品消融后参加.消融样品的溶剂应选择极性较小的,以便被分别的成分可以被吸附.然后渐增大溶剂的极性.这种极性的增大是一个十分迟缓的进程,称为“梯度洗脱”,使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱.假如极性增大过诀（梯度太大）,就不克不及获得满足的分别.溶剂的洗脱才能,有时可以用溶剂的介电常数（ε）来暗示.介电常数高,洗脱才能就大.以上的洗脱次序仅实用于极性吸附剂,如硅胶.氧化铝.对非极性吸附剂,如活性炭,则正好与上述次序相反,在水或亲水住溶剂中所形成的吸附感化,较在脂溶性溶剂中为强.被分别物资的性质被分别的物资与吸附剂,洗脱剂配合构成吸附层析中的三个要素,彼此慎密相连.在指定的吸附剂与洗脱剂的前提下,各个成分的分别情形,直接与被分别物资的构造与性质有关.对极性吸附剂而言,成分的极性大,吸附住强.当然,中草药成分的整体分子不雅是重要的,例如极性基团的数量愈多,被吸附的住能就会更大些,在同系物中碳原子数量少些,被吸附也会强些.总之,只要两个成分在构造上消失不同,就有可能分别,症结在于前提的选择.要根据被分别物资的性质,吸附剂的吸附强度,与溶剂的性质这三者的互相关系来斟酌.起重要斟酌被分别物资的极性.如被分别物资极性很小为不含氧的萜烯,或虽含氧但非极性基团,则需选用吸附性较强的吸附剂,并用弱极性溶剂如石油醚或苯进行洗脱.但多半中药成分的极性较大,则须要选择吸附机能较弱的吸附剂（一般Ⅲ～Ⅳ级）.采取的洗脱剂极性应由小到大按某一梯度递增,或可运用薄层层析以断定被分别物在某种溶剂体系中的分别情形.此外,可否获得满足的分别,还与选择的溶剂梯度有很大关系.现以实例解释吸附层析中吸附剂.洗脱剂与样品极性之间的关系.若有多组分的混杂物,象植物油脂系由烷烃.烯烃.舀醇酯类.甘油三酸醋和脂肪酸等组份.如对于C-27甾体皂甙元类成分,能因其分字中羟基数量标若干而获得分别：将混杂皂甙元溶于含有5％氯仿的苯中,加于氧化铝的吸附柱上,采取以下的溶剂进行梯度洗脱.如改用吸附性较弱的硅酸镁以替代氧化铝,因为硅酸镁的吸附性较弱,洗脱剂的极牲需响应下降,亦即采取苯或含5％氯仿的苯,即可将一元羟基皂甙元从吸附剂上洗脱下来.这一例子解释,同样的中草药成分在不合的吸附剂中层析时,需用不合的溶剂才干达到雷同的分别后果,从而解释吸附剂.溶剂和欲分别成分三者的互相关系.（二）簿层层析：薄层层析是一种轻便.快速.微量的层析办法.一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上,形成一薄层进行层析时一即称薄层层析.其道理与柱层析基底细似. 1．薄层层析的特色：薄层层析在运用与操纵方面的特色与柱层析的比较.2．吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析雷同.重要差别在于薄层层析请求吸附剂（支撑剂）的粒度更细,一般应小于250目,并请求粒度平均.用于薄层层析的吸附剂或预制薄层一般活度不宜过高,以Ⅱ～Ⅲ级为宜.而睁开距离则随薄层的粒度粗细而定,薄层粒度越细,睁开距离响应缩短,一般不超出10厘米,不然可引起色谱集中影响分别后果.3．睁开剂的选择：薄层层析,当吸附剂活度为必定值时（如Ⅱ或Ⅲ级）,对多组分的样品可否获得满足的分别,决议于睁开剂的选择.中草药化学成分在脂溶性成分中,大致可按其极性不合而分为无极性.弱极性.中极性与强极性.但在现实工作中,经常须要运用溶剂的极性大小,对睁开剂的极性予以调剂.实例谈薄层色谱睁开剂选择2007/12/08 12:18 P.M.实例谈薄层色谱睁开剂选择根据本身的几年薄层层析经验,参考药典等国度药品尺度和有关文献,将 2000版药典一部里部分有代表性的对比品的薄层层实例按睁开剂极性排序,并对其纪律做一些剖析.以下的剖析和介绍是总体描写性的,目标是快速.轻便地选择睁开剂.假如想懂得睁开剂选择的各类理论,请参考其他专著. #TfaMVME选择睁开剂,要根据溶剂极性和他们的混溶性,溶剂对被剖析物的消融性,以及被剖析物的构造.这里只评论辩论药典里平日运用的以硅胶为固定相主体的正相薄层,也不斟酌板的活性.列出溶剂极性参数表,便利以下比较睁开剂.环已烷 :-0.2.石油醚（Ⅰ类,30~60℃）.石油醚（Ⅱ类,60~90℃）.正已烷:0.0.甲苯:2.4.二甲苯:2.5.苯:2.7.二氯甲烷:3.1.异丙醇:3.9.正丁醇:3.9.四氢呋喃:4.0.氯仿:4.1.乙醇:4.3.乙酸乙酯:4.4.甲醇:5.1.丙酮:5.1.乙腈:5.8.乙酸:6.0.水:10.2 [1] .关于溶剂混溶性,一般根据类似相溶原则,须要留意,极性相差大的不混溶,比朴直己烷与甲醇.多元睁开剂,主体的两种溶剂不克不及混溶,就须要经由过程第三种溶剂来折衷.比方：石油醚.正庚烷.正已烷.戊烷.环已烷和甲醇.水之类的.一般正相色谱,固定相为极性,被剖析物资的极性越大,须要极性更大的睁开剂.懂得被剖析物的极性可以经由过程剖析其构造获得,很难获得它的极性指数.物资分子化学构造中,平日由较极性部分和非极性部分两部分.例如下面以苯丙烷为极性小部分,跟着极性基团部分的增长,总体的极性就增长,睁开剂极性也增长了., 依次为肉桂酸.阿魏酸.咖啡酸.菊苣酸.绿原酸.响应睁开剂分别为：正己烷—乙醚—冰醋酸 (5:5:0.1).苯－冰醋酸－甲醇(30:1:3).氯仿－甲醇－甲酸（9:1: 0.5）.石油醚－乙酸乙酯－甲酸（3:6: 1）.醋酸丁酯－甲酸－水(7:2.5:2.5).（因为薄层板.比移值不合的原因,睁开剂极性比较是相对的,并不是绝对的后者大于前者）.如今最重要的问题是,不合化合物,怎么定它的极性,又用什么尺度来定它对应的睁开剂呢？以下离开评论辩论不合化合物极性格形及其对应的睁开剂.起首是极性较小的挥发性物资.比方：冰片：石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯(17:3).厚朴酚：苯－醋酸乙酯(9:1.5).α-喷鼻附酮：苯－醋酯乙酯－冰醋酸(92:5:5).丹皮酚：环己烷－醋酸乙酯(3:1),这类化合物,以石油醚.正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂,平日起消融和分别化合物的感化,而用醋酸乙酯为调节Rf（比移值）的溶剂.为了削减拖尾之类其他类似相溶原则以外的影响,恰当参加添加剂,若有机酸或者有机碱.极性较小的不挥发性物资.比方：β -谷甾醇：环己烷－醋酸乙酯－甲醇(6:2.5:1)或者环己烷－丙酮(5:2) .熊果酸：甲苯－醋酸乙酯－冰醋酸(12:4:0.5).齐墩果酸：氯仿－甲醇(40:1).猪去氧胆酸：氯仿－乙醚－冰醋酸(2:2:1).大黄素：苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇 (8:1).丹参酮ⅡA：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4) .穿心莲内酯：氯仿-无水乙醇(9:1).靛玉红.靛蓝氯仿－乙醇(9:1)或者苯－氯仿－丙酮(5:4:1).这类物资睁开剂极性比极性较小的挥发性物资洗脱力强一些,因为这类物资极性小的母核大,而极性大的基团平日可以形成氢键,比方羧酸.羟基.以上物资,母核分子量减小.母核构造中不饱和健的增长（尤其是消失苯环）,极性基团的增长,都使极性增长,睁开剂极性也增大.这个规模内的物资许多,一般睁开剂大百分数的溶剂可以从环己烷—〉甲苯—〉二甲苯—〉苯—〉氯仿的次序,按照极性请求选择.这里留意,异丙醇.正丁醇极性指数也比较小,在这规模的化合物很罕用,因为粘性大.睁开慢,造成黑点集中;别的,羟基的氢键感化力也有晦气.调节Rf值的溶剂,从醋酸乙酯—〉甲醇—〉丙酮—〉乙醇.挥发性物资也有许多带羰基.羟基的,但从它的挥发性就可以明确,分子间感化力不强,别的,母核与石油醚.正构烷和苯的构造差别小,估量更轻易离开硅胶吸附,更快进入溶剂中,而不须要经由过程进步睁开剂的极性.皂苷类.人参皂苷：氯仿－甲醇－水(65:35:10)10℃以下放置的基层溶液或正丁醇－醋酸乙酯－水(4:1:5)的上层溶液或氯仿－醋酸乙酯－甲醇－水(15:40:22:10)10℃以下放置的基层溶液.芍药苷：氯仿－醋酸乙酯－甲醇－甲酸(40:5:10:0.2).黄芩苷：醋酸乙酯－丁酮－醋酸－水(10:7:5:3).橙皮苷：苯—醋酸乙酯—甲酸—水(1:12:2.5:3)的上层溶液.葛根素：氯仿－甲醇－水(14:5:0.5).芦丁：醋酸乙酯－甲酸－水(8:1:1).这类物资,因为消失糖的多羟基构造,苷元的构造影响变小.睁开剂中运用极性大的有机溶剂（氯仿.醋酸乙酯.甲醇.正丁醇）和水.乙酸和甲酸的运用,一方面增大睁开剂极性,别的也可以克制硅胶羟基的感化,削减拖尾.因为混溶性和硅胶耐酸才能的限制,水和酸的运用是有限度的.极性大的小分子有机酸.没食子酸：氯仿－醋酸乙酯－甲酸 (5:4:1).阿魏酸.咖啡酸.菊苣酸.绿原酸.异绿原酸.这类物资多半是苯乙烯母核的,这个构造的极性本身比较大,别的有酚羟基和羧酸基团,个体有多羟基配基.皂苷的睁开剂差不久不多,极性大.留意甲酸平日指的是浓度85%阁下的,含有水.含氮有机物.盐酸小檗碱：苯－醋酸乙酯－甲醇－异丙醇－浓氨试液(12：6：3：3：0.6)(氨蒸气饱和) 或正丁醇－冰醋酸-水(7:1:2).麻黄碱：氯仿－甲醇－浓氨试液(20:5:0.5)或正丁醇－冰醋酸－水(8:2:1).甘草酸铵：醋酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15:1:1:2).因为NH2硅醇基的感化很强,在强极性睁开剂加有机酸.有机碱收尾.对于极性化合物,运用正丁醇对黑点集中影响较小,因为化合物和硅胶的感化强. D B^}#kvL: 进行薄层剖析根本可以根据母核.基团,选择类似的化合物对号入座.当然,具体的前提优化则须要根据现实情形了.碰到较艰苦的分别,须要运用到设计优化办法的,已经不属于本文评论辩论规模了.关于睁开剂：分别的样品酸性比较大,一般在睁开剂中加酸加甲酸是因为该样品是酸性的,加酸的量和该物资的酸性成正比关系,加水可能是因为你的样品是苷类的用酸水做一下缓冲,目标就是让黑点油滑,不脱尾,展距优越.饱和也异常重要,边沿效应很轻微的无妨用下端浸在睁开剂中的滤纸贴在睁开缸的内壁,如许饱和后果会好一些1)在层析缸口涂适量凡士林,增长密封性;2)以睁开剂边沿效应的大小,肯定睁开剂均衡时光的长短,一般均衡时光在30分钟即可.有机溶剂的极性,甲醇>氯仿,是以在氯仿：甲醇：氨水（10:1:0.6）这个睁开剂中,假如极性略大,可恰当下降甲醇比例;如极性太小,可恰当增大甲醇比例.氯仿：甲醇：氨水 10:1:0.6 和20：2：1.2 极性肯定是雷同的,这有问题吗？别的还有一个问题,这个睁开剂中,甲醇用量较小,而甲醇又易挥发,轻易产生边沿效应,要特殊留意睁开剂的均衡和层析缸的密封.不合的睁开体系意思是个中至少应当有一种溶剂不合（最好是不合分类组的溶剂）,而不是比例不合.或者运用不合的固定相.关于睁开：TLC中样品拖尾现象是什么原因?该若何解决?2.TLC中样品跑成几乎为一条线,黑点没有清楚的分别,想就教一下这是什么原因造成的?一般情形下该若何解决?造成问题1的原因基底细同：a.对于一些具有酸碱性的化学成分,在溶液中部分电离,事实上睁开时消失分子.离子两种状况,以中性的有机试剂睁开必定会消失两种层析行动,造成脱尾甚至是一条线.b.睁开剂选择不当c.点样量过大,样品超载解决办法：a.在睁开剂中加几滴甲酸或冰醋酸;b.睁开时以氨水饱和c.削减点样量d.参考文献,调剂睁开剂种类.比例我想问问,关于TLC二次睁开,是在第一次睁开显色后再在持续第二次睁开,照样在第一次睁开后,换另一种睁开剂接着睁开啊？？请哪位大侠指导一下关于TLC的二次睁开.二次睁开是根据样品定的,但肯定要在第一次睁开后,将板晾干或吹干,再放入另一种睁开剂中睁开,有的样品二次睁开还要换睁开偏向,和原偏向垂直.所以要以现实分别样品须要而定.一般是因为样品成分多,极性不同有的大,有的关于显色：在工作中研讨过用硫酸乙醇显色作定量剖析的品种,但凡加了CMC 的板都易烘糊,尤其是温度高于100度时,后改用不加CMC辅的水板来作,就不会有烘糊现象,故也可推论CMC易于与硫酸起糊化反响.感到辅水板症结是硅胶G与水的比例要达1：3.5阁下,并且研磨后要尽快涂布,不克不及易于凝固而难于涂布,我是百思不得其解,岂非CMC还有类似稳固剂的感化2. “0.5%的板加热时光长了就会黑”,是在层析完,显色后吧,我也碰到过同样的情形,这只有严厉控制加热显色的时光.这个问题应当是如许答复：但凡加了CMC的板都易烘糊,尤其是温度高于100度时,若改用不加CMC辅的水板来作,就不会有烘糊现象,但不加CMC辅的板又太软,点样时轻易点出洞,有个好办法是将CMC的浓度调至0.1%,如许就不轻易烘黑的.不信你尝尝,我们这边药检所都如许做的3. 关于薄层板加热变黑的问题,其实很轻易解决：当喷完显色剂后不必在放烘箱里烘了,可以用电吹风在板子不和吹吹就能显色了．我们试验室里一般都采取此法,轻便.快洁．假如一非想运用烘箱烘的话,必定要用带玻璃窗的,当看到显色了就掏出,不然不好控制显色时光,时光过长,ＣＭＣ轻易碳化变黑4．列位楼主真是经验丰硕,我铺的0.5%的板加热时光长了就会黑,有什么好着吗？根据我的经验,薄层版变黑与CMC－Na的浓渡过大有关,假如你留心的话,你会发明,当显色剂中有浓硫酸时,加热时光稍长就会变黑（其他显色剂是没事的）,我先生说这是因为浓硫酸把CMC－Na炭化了,其实[color=blue=这种情形你只要恰当下降CMC-Na的浓度[/color]就可以了,当然假如不加CMC-Na的话轻易把板弄破.一般我都是显色后用电吹风吹的,要平均吹,电吹风离板的距离要远些,防止部分会黑.另还要留意显色剂,假如显色剂中含有硫酸,加热时光必定要控制好,不成太长.5．CP2000中277页苏氨酸的TLC的其它氨基酸检讨似乎有问题: ...以"正丁醇\丁酮\浓氨溶液\水"为睁开剂, 睁开后,晾干,喷以茚三酮的丙酮溶液(1-50),...茚三酮与浓氨溶液起显色反响, 弄得整块板都有色,茚三酮氧化苏氨酸后再与释放出的氨气起反响生成的点在整块板中尚能看到,其它氨基酸就别想看了.氨基酸类的薄层辨别进程中,显色前先将展完的板子在烘箱内烘一段时光,从而确保睁开剂挥清洁,后果不错关于裂板：板子会裂口,一则可能是因为硅胶的比例太大,二则可能是,板子要在常温下晾干后,再在烘箱中活化.假如铺完不久就在较高温度下,裂口的几率就比较高的.“晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了,有什么办法可以防止板子炸裂.” 你的板没有完整干透,概况看是干了,但是最中央的没有干,所以你直接放入105度的烘箱烘,当然会炸裂了,所以应当先用低温大约40度阁下烘30分钟阁下,再用105度活化,就可以解决这个问题了.关于活化消失裂板.爆板的问题.我从没有赶上过.活化我是如许处理不要等到温度达到100度,而是设好温度后就将板子放在湿润箱,然后再通电加热,达到最高温度后逗留5分钟阁下即可.如许水分是慢慢由内而外披发,而不是由外向内披发,防止了概况成膜,里面还在披发水气,岂有不裂.不爆的道理！.关于点样：1. 点样我本身没有什么技能,导师教了我一招挺好用,写出来大家分享,就是在点样时食指放在点样管的上端,当点样管的下端与硅胶板接触的刹时轻轻松动上端的食指,溶液天然从点样管出来,敏捷提起点样管,就如许重复操纵点出的黑点既小又平均.但要提出样品溶液不克不及太浓,浓度太大,点下的样品不克不及被硅胶很好的接收,晦气于分别.2. 关于点样,我上学的时刻,先生用比较便宜的进样器（大约10几块钱吧,10μl即可）,将针尖打磨油滑,先生似乎是用锉一点一点锉的,如许点样的时刻样品溶液不轻易沿针尖上行（甲醇溶液都如许）,并且针尖不会刺破已经铺好的薄层板.如今,我和师兄都是实施的这个办法,照样比较实用的,点样量可以准确到0.5µl.当然,点样的时刻手不克不及发抖,动作要轻,这些方法在于领悟,逐渐锤炼,信任你会领会到个中的快感.3. 要磨平微量进样器的针尖,简略的办法就是,在展缸的盖子上轻磨（当然是接近中央部分）,就很快能解决问题 ,且很腻滑.薄层色谱小常识1. 如何进步点样效力?点样是造成TLC定量误差的重要起源.试验证实：定量毛细管更合适较小体积的点样;微量打针器更合适较大体积的点样.这主如果因为微量打针器受吝啬泡.溶液回爬现象的影响较大.为防止不合定量毛细管间的点样误差.建议一块薄层板上最好用统一只定量毛细管.但应留意改换样品时,应将毛细管用超声波或不合极性溶剂清洗清洁.在制备样品时,溶样溶剂黏度不克不及过高,以便于点样;溶剂沸点过低则进样体积易变,过高则会转变睁开剂构成;对样品消融渡过高会使样点产生空心现象;经常运用的溶剂为甲醇.乙醇.丙酮.经典TLC样点原点一般为直径3mm点间距1--2cm 底边距;HPLC样点原点一般为直径1mm点间距5mm 底边距1cm.2.睁开剂的选择TLC与HPLC比拟,一个凸起的长处就是流淌相的选择具有更大的灵巧性.流淌相的选择的目标是使绝大部分样品的RF值位于0.1--0.7之间并达到较好的分别,与此对应的是流淌相要有恰当的强度和构成.流淌相强度越大,溶质RF值越大,但很可能下降分别才能;别的单一溶剂很难分别较庞杂的混杂物,根据类似相溶道理,要运用多元溶剂体系.一般睁开剂体系选择如下：根据分别样品性质.薄层色谱板性质选择一个二元溶剂体系,经由过程调节溶剂比例以追求合适RF值,合适的RF值找到后,再追求极性参数雷同的二元溶剂体系两个,以这三个构成为三点构成一个三角形,则可看到：三角形极点是二元体系,边是三元体系,三角形内是四元体系,并且极性一致,可根据几何道理得出任一点构成.这种办法。
薄层层析中展开剂的选择
2 .点样应注意的问题
（1）点样量：一般为0． 5 ～ 10 μl，样品的浓 度通常为0． 5 ～ 2 mg，太浓时展开剂从原点外 围绕行，使斑点脱尾或重叠。点样量太小，不能 检出清晰的斑点影响判断。点样量太多，展开剂 不能全部负载，容易产生脱尾现象。
（2）样品的溶剂：原则上应选择对被测成分可 以溶解但溶解度不是很大的溶剂。
③ 改变多元展开剂的组成和比例，使待测组分 的Rf 值在0.2～0.8 之间，定量测定应在0.3～ 0.5 之间，能使各组分之间有效地分离
（3）展开剂的配制应严格控制其比例准确度， 如遇到比例很小的溶剂时，应尽量满足其精 确度要求。展开剂配好后如果浑浊不清，待 其静置分层取其上层( 或下层) 液进行展开。
TLC 操作方法
TLC 操作方法包括薄层板的选用、点样、展开、 显色、检视与记录五个步骤。
1. 选用——常采用硅胶G 型板 硅胶表面的pH 值约为5，比较适合于酸性和 中性物质的分离，如有机酸、酚类、醛类等。 碱性物质能与硅胶作用，展开时易被吸附于 原点不动或出现斑点脱尾现象。在自制薄层 板时可用稀碱溶液制备薄层使其变为碱性， 或用碱性展开剂展开。
b. 展开剂中比例较小的溶剂极性应大， 对被分离的组分有较强的洗脱能力，帮助化 合物在薄层上移动，可增大Rf 值，可称之为 极性调节剂。
➢ 调节剂的选择
a. 加入的调节剂与被分离物质应有相同或相似 的官能团；
b. 被分离物质具有两种或者两种以上的官能团 时，加入一种调节剂，调节剂的官能团与被分离 物质中一种官能团相同或相似，当加入第二种调 节剂时，调节剂官能团与被分离组分的各种官能 团相同或相似均可；
④ 沸点和挥发性集中。展开后能快速地在薄层上 挥发样品，不影响显色和定量。
薄层色谱的展开剂和显色剂
薄层色谱展开剂与显色剂展开剂的选择：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：< p>Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Eth er,Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性;②可使成分间分开;③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中，黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开的迹象(斑点较“拖”)，最好是换溶剂。
薄层色谱中展开剂的选择
薄层色谱中展开剂的选择之宇文皓月创作2007-04-05 02:03（一）有机合成中展开剂的选择做有机合成时走板子是常有的事，展开剂的选择就至关重要了。
选择适当的展开剂是首要任务.一般经常使用溶剂依照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不克不及达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，展开剂的比例要靠测验考试.一般根据文献中报导的该类化合物用什么样的展开剂，就首先测验考试使用该类展开剂，然后不竭测验考试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分黑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不竭变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾测验考试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采取高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（黑点较“拖”），最好是换溶剂。
薄层实验方法展开剂各项
1.方法原理薄层色谱是一种微量分析的分离过程，它将样品点在以玻璃板或铝、塑料等片材为载体的多孔吸附剂薄层的固定相上,利用流动相在特定的展开室中将混合物中的组份推移到不同距离处，在色谱展开整个过程中，样品的成份受到正反不同的力的作用。
(1) 流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。
(2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 - （诱导） - 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。
由于样品组份与流动相和固定相之间的相互作用力程度不同，整个毛细管流动过程中分离运动都在进行。
基于这点，TLC系统（流动相和固定相）必须与样品很好地匹配。
用显色试剂处理，许多组份可在日光或紫外灯光下检视。
色谱可用肉眼或使用光密度计和照相机记录或影像系统方法来评价。
2. 薄层板2.1手工自制板2.1.1玻璃板的要求:用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁、平整，最好使用厚薄1~2mm的优质平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄层板，玻璃板需洗净至不挂水，晾干，贮存于干燥洁净处备用。
玻璃板反复使用时，应注意经常用洗液及碱液清洗，保持玻璃板面的光洁是保证薄层板质量的最基本要求2.1.2制作方法:除另有规定外，将1份吸附剂加适量的水（如1份硅胶G一般加3份水），在研钵中用研杵沿一个方向小心研磨至成均匀的有适当粘稠度的胶浆,立即倾入涂布器中,均匀地向前推进涂布在玻璃板上;或按照不同涂布器的规定操作涂布;涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干,再在规定的温度(一般为105℃~110℃)下烘约30分钟活化,贮于干燥器中备用。
薄层板的厚度一般为0.25~0.5mm.。
2.2 商品化供应的预制板和高效板2.2.1板的尺寸20x20cm 10x20cm 20x10cm 10x10cm图1 不同的板尺寸TLC/HPTLC预制板有不同的规格供应。
常用的尺寸为20 x 20，10 x 20，20 x 10，或10 x 10 cm。
薄层色谱三种展开方式方法
总的来讲平面色谱的展开有三种几何形式即线性、环形及向心，见图7-3-12。
此外，为提高分离效率及检测灵敏度进行的展开方式的改进，设计了多种相应的展开室，现分别介绍如下。
（一）线性展开1.上行展开将点样后的纸或薄层的底边置于盛有展开剂的直立型的多种规格的平底或双槽展开室中，展开剂由纸或薄层下端借毛细管作用上升至前沿。
这种展开方式适合于含粘合剂的硬板展开，是薄层色谱中最常用的展开方式。
平底及双槽展开室均有三种规格，即带不锈钢或玻璃盖的20cm×20cm，20cm×10cm及10cm×10cm三种。
见图7-3-13。
在使用平底展开室时，可将展开室一端垫高，使展开剂集中在薄层板点有样品的一端，这样可以节省展开剂；如果薄层板需用展开剂饱和，可以将薄层板放在垫高的一端，饱和后展开时可将另一端垫高，薄层板就可以接触展开剂进行展开，见图7-3-14。
如果需要用与展开剂不同的溶剂蒸气（如挥发性酸或碱等）饱和薄层板时，可在平底展开室中放置盛有某种挥发性溶剂的小杯，效果也非常理想。
双底展开室的优点是节省展开剂，便于预饱和以及放置展开剂于一侧槽中，另一侧槽可放置另一种饱和蒸气用的溶剂，特别是代替在展开剂中互溶程度低，容易分层的混合展开剂。
另一种上行展开方式是夹心式展开，由于展开室的体积大小及饱和程度影响薄层分离而设计的，见图7-3-15。
将点样后的薄层板的两边垫以玻璃窄条，上面覆盖一块同样大小的玻璃盖板，并使其稍短于薄层板2cm，以便使展开剂浸到薄层的边缘，两片玻璃板用不锈钢夹子固定，放入展开剂中展开，这种方式不需饱和。
小孔线形薄层技术，即将部分硅胶从薄层上除去，形成线性小孔以控制展开速度，从而增加塔板数，改善分离状况，提高呈色灵敏度。
具体作法是在距离薄层底边1cm处，用一头接水泵的玻璃吸管将硅胶一点一点地吸去，使呈一排圆形小孔或长圆形小孔（径约2mm，孔间距离约1mm），见图7-3-16。
薄层层析展开剂的选择
做有机合成时走板子是常有的事，展开剂的选择就至关重要了。
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。
对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。
薄层色谱中展开剂的选择
薄层色谱中展开剂的选择2007-04-05 02:03（一）有机合成中展开剂的选择做有机合成时走板子是常有的事，展开剂的选择就至关重要了。
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。
薄层色谱展开剂选择(仅供参考)
薄层色谱展开剂选择选择展开剂，要依据溶剂极性和他们的混溶性，溶剂对被分析物的溶解性，以及被分析物的结构。
这里只讨论药典里通常使用的以硅胶为固定相主体的正相薄层，也不考虑板的活性。
关于溶剂混溶性，一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶，比如正己烷与甲醇。
多元展开剂，主体的两种溶剂不能混溶，就需要通过第三种溶剂来调和。
比如：石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、环已烷和甲醇、水之类的。
一般正相色谱，固定相为极性，被分析物质的极性越大，需要极性更大的展开剂。
了解被分析物的极性可以通过分析其结构获得，很难获得它的极性指数。
物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。
例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。
，依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。
相应展开剂分别为：正己烷—乙醚—冰醋酸(5:5:0.1)、苯－冰醋酸－甲醇(30:1:3)、氯仿－甲醇－甲酸（9:1: 0.5）、石油醚－乙酸乙酯－甲酸（3:6: 1）、醋酸丁酯－甲酸－水(7:2.5:2.5)。
（由于薄层板、比移值不同的原因，展开剂极性比较是相对的，并非绝对的后者大于前者）。
现在最重要的问题是，不同化合物，怎么定它的极性，又用什么标准来定它对应的展开剂呢？以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。
首先是极性较小的挥发性物质。
比如：冰片：石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚：苯－醋酸乙酯(9:1.5)、α-香附酮：苯－醋酯乙酯－冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚：环己烷－醋酸乙酯(3:1)，这类化合物，以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常起溶解和分离化合物的作用，而用醋酸乙酯为调节Rf（比移值）的溶剂。
为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响，适当加入添加剂，如有机酸或者有机碱。
极性较小的不挥发性物质。
比如：β -谷甾醇：环己烷－醋酸乙酯－甲醇(6:2.5:1)或者环己烷－丙酮(5:2) 、熊果酸：甲苯－醋酸乙酯－冰醋酸(12:4:0.5)、齐墩果酸：氯仿－甲醇(40:1)、猪去氧胆酸：氯仿－乙醚－冰醋酸(2:2:1)、大黄素：苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇(8:1)、丹参酮ⅡA：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4) 、穿心莲内酯：氯仿-无水乙醇(9:1)、靛玉红、靛蓝氯仿－乙醇(9:1)或者苯－氯仿－丙酮(5:4:1)。
薄层色谱中展开剂的选择
薄层色谱中展开剂得选择20070405 02:03(一)有机合成中展开剂得选择做有机合成时走板子就是常有得事,展开剂得选择就至关重要了。
选择适当得展开剂就是首要任务、一般常用溶剂按照极性从小到大得顺序排列大概为:石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂,往往不能达到很好得分离效果,往往使用混合溶剂通常使用一个高极性与低级性溶剂组成得混合溶剂,高极性得溶剂还有增加区分度得作用,展开剂得比例要靠尝试、一般根据文献中报道得该类化合物用什么样得展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分离效果好得展开剂。
展开剂得选择条件:①对得所需成分有良好得溶解性;②可使成分间分开;③待测组分得Rf在0、2~0、8之间,定量测定在0、3～0、5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中,黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说,弱极性溶剂体系得基本两相由正己烷与水组成,再根据需要加入甲醇、乙醇,乙酸乙酯来调节溶剂系统得极性,以达到好得分离效果,适合于生物碱、黄酮、萜类等得分离;中等极性得溶剂体系由氯仿与水基本两相组成,由甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于蒽醌、香豆素,以及一些极性较大得木脂素与萜类得分离;强极性溶剂,由正丁醇与水组成,也靠甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于极性很大得生物碱类化合物得分离。
很多时候,展开剂得选择要靠自己不断变换展开剂得组成来达到最佳效果。
我们在实验中,为了实现一个配体与其她杂质有效分离,曾经尝试了很多种得溶剂组合,最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH(5、5:3、5:0、1)混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性得体积比为1/3得混合溶剂,如果有分开得迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开得迹象(斑点较“拖”),最好就是换溶剂。
薄层色谱中展开剂的选择
薄层色谱中睁开剂的选择之杨若古兰创作2007-04-05 02:03（一）无机合成中睁开剂的选择做无机合成时走板子是常有的事，睁开剂的选择就相当次要了. 选择适当的睁开剂是首要任务.普通经常使用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，常常不克不及达到很好的分离后果，常常使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂构成的混合溶剂，高极性的溶剂还有添加区分度的感化，睁开剂的比例要靠测验考试.普通根据文献中报导的该类化合物用什么样的睁开剂，就首先测验考试使用该类睁开剂，然后不竭测验考试比例，直到找到一个分离后果好的睁开剂.睁开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥睁开后组分黑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新颖配制. 普通来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水构成，再根据须要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂零碎的极性，以达到好的分离后果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相构成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、喷鼻豆素，和一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水构成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离.很多时候,睁开剂的选摘要靠本人不竭变换睁开剂的构成来达到最好后果.我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质无效分离，曾测验考试了很多种的溶剂组合，最初才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂.普通把两种溶剂混合时,采取高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最好后果；如果没有分开的迹象（黑点较“拖”），最好是换溶剂.对于在硅胶中这类酸性物资上易分解的物资，在睁开剂里常常加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物资来中和硅胶的酸性.（选择所添加的碱性物资，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择.）分离后果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：分歧厂家生产的硅胶可能含水量和颗粒的粗细程度，酸性强弱分歧，从而导致产品在某个厂家的硅胶平分离后果很好，但在另一个厂家的就不成.溶剂的含水量和杂质含量对分离后果都有明显的影响.温度，湿度对分离后果影响也很明显，在实验中我们发现有时同一睁开条件，上下战书的Rf截然分歧 .睁开剂的选择次要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等身分来考虑，在进行薄层层析时，首先应当晓得未知化学成分的类型，其极性的大致归属，从提取液或从色谱柱的流动相极性可知，另外某样品里含多种化学成分先按极性分歧大致分，然后细分，对于分离未知的化学物资，睁开剂的选择也是一个摸索的过程，不该该仅仅从睁开剂考虑，多身分综合衡量！溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大.在柱层析时所用的溶剂（单一剂或混合溶剂）习气上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称睁开剂.洗脱剂的选择，须根据被分离物资与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被分离物资为弱极性物资，普通选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物资为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂.如果对某一极性物资用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须响应降低.在柱层操纵时，被分离样品在加样时可采取于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入.溶解样品的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以被吸附.然后渐增大溶剂的极性.这类极性的增大是一个十分缓慢的过程，称为“梯度洗脱”，使吸附在层析柱上的各个成分逐一被洗脱.如果极性增大过诀（梯度太大），就不克不及获得满意的分离.溶剂的洗脱能力，有时可以用溶剂的介电常数（ε）来暗示.介电常数高，洗脱能力就大.以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附剂，如硅胶、氧化铝.对非极性吸附剂，如活性炭，则正好与上述顺序相反，在水或亲水住溶剂中所构成的吸附感化，较在脂溶性溶剂中为强.被分离物资的性质被分离的物资与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素，彼此紧密相连.在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下，各个成分的分离情况，直接与被分离物资的结构与性质有关.对极性吸附剂而言，成分的极性大，吸附住强.当然，中草药成分的全体分子观是次要的，例如极性基团的数目愈多，被吸附的住能就会更大些，在同系物中碳原子数目少些，被吸附也会强些.总之，只需两个成分在结构上存在不同，就有可能分离，关键在于条件的选择.要根据被分离物资的性质，吸附剂的吸附强度，与溶剂的性质这三者的彼此关系来考虑.首先要考虑被分离物资的极性.如被分离物资极性很小为不含氧的萜烯，或虽含氧但非极性基团，则需选用吸附性较强的吸附剂，并用弱极性溶剂如石油醚或苯进行洗脱.但多数中药成分的极性较大，则须要选择吸附功能较弱的吸附剂（普通Ⅲ～Ⅳ级）.采取的洗脱剂极性应由小到大按某一梯度递增，或可利用薄层层析以判断被分离物在某种溶剂零碎中的分离情况.此外，能否获得满意的分离，还与选择的溶剂梯度有很大关系.现以实例说明吸附层析中吸附剂、洗脱剂与样品极性之间的关系.如有多组分的混合物，象植物油脂系由烷烃、烯烃、舀醇酯类、甘油三酸醋和脂肪酸等组份.如对于C-27甾体皂甙元类成分，能因其分字中羟基数目的多少而获得分离：将混合皂甙元溶于含有5％氯仿的苯中，加于氧化铝的吸附柱上，采取以下的溶剂进行梯度洗脱.如改用吸附性较弱的硅酸镁以替代氧化铝，因为硅酸镁的吸附性较弱，洗脱剂的极牲需响应降低，亦即采取苯或含5％氯仿的苯，即可将一元羟基皂甙元从吸附剂上洗脱上去.这一例子说明，同样的中草药成分在分歧的吸附剂中层析时，需用分歧的溶剂才干达到不异的分离后果，从而说明吸附剂、溶剂和欲分离成分三者的彼此关系.（二）簿层层析：薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法.普通将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上，构成一薄层进行层析时一即称薄层层析.其道理与柱层析基底细似. 1．薄层层析的特点：薄层层析在利用与操纵方面的特点与柱层析的比较.2．吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂与其选择准绳和柱层析不异.次要区别在于薄层层析请求吸附剂（撑持剂）的粒度更细，普通应小于250目，并请求粒度均匀.用于薄层层析的吸附剂或预制薄层普通活度不宜过高，以Ⅱ～Ⅲ级为好.而睁开距离则随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细，睁开距离响应缩短，普通不超出10厘米，否则可惹起色谱扩散影响分离后果.3．睁开剂的选择：薄层层析，当吸附剂活度为必定值时（如Ⅱ或Ⅲ级），对多组分的样品能否获得满意的分离，决定于睁开剂的选择.中草药化学成分在脂溶性成分中，大致可按其极性分歧而分为无极性、弱极性、中极性与强极性.但在实际工作中，经常须要利用溶剂的极性大小，对睁开剂的极性予以调整.实例谈薄层色谱睁开剂选择2007/12/08 12:18 P.M.实例谈薄层色谱睁开剂选择根据本人的几年薄层层析经验，参考药典等国家药品尺度和有关文献，将 2000版药典一部里部分有代表性的对照品的薄层层实例按睁开剂极性排序，并对其规律做一些分析.以下的分析和介绍是整体描述性的，目的是快速、简便地选择睁开剂.如果想了解睁开剂选择的各种理论，请参考其他专著. #TfaMVM E选择睁开剂，要根据溶剂极性和他们的混溶性，溶剂对被分析物的溶解性，和被分析物的结构.这里只讨论药典里通常使用的以硅胶为固定相主体的正相薄层，也不考虑板的活性.列出溶剂极性参数表，方便以下比较睁开剂.环已烷 :-0.2、石油醚（Ⅰ类，30~60℃）、石油醚（Ⅱ类，60~90℃）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2 [1] .关于溶剂混溶性，普通根据类似相溶准绳，须要留意，极性相差大的不混溶，比方正己烷与甲醇.多元睁开剂，主体的两种溶剂不克不及混溶，就须要通过第三种溶剂来调和.比方：石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、环已烷和甲醇、水之类的.普通正相色谱，固定相为极性，被分析物资的极性越大，须要极性更大的睁开剂.了解被分析物的极性可以通过分析其结构获得，很难获得它的极性指数.物资分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分.例如上面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的添加，整体的极性就添加，睁开剂极性也添加了.，顺次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸.响应睁开剂分别为：正己烷—乙醚—冰醋酸 (5:5:0.1)、苯－冰醋酸－甲醇(30:1:3)、氯仿－甲醇－甲酸（9:1:0.5）、石油醚－乙酸乙酯－甲酸（3:6: 1）、醋酸丁酯－甲酸－水(7:2.5:2.5).（因为薄层板、比移值分歧的缘由，睁开剂极性比较是绝对的，并不是绝对的后者大于前者）.此刻最次要的成绩是，分歧化合物，如何定它的极性，又用什么尺度来定它对应的睁开剂呢？以下分开讨论分歧化合物极脾气况及其对应的睁开剂.首先是极性较小的挥发性物资.比方：龙脑：石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚：苯－醋酸乙酯(9:1.5)、α-喷鼻附酮：苯－醋酯乙酯－冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚：环己烷－醋酸乙酯(3:1)，这类化合物，以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常起溶解和分离化合物的感化，而用醋酸乙酯为调节Rf（比移值）的溶剂.为了减少拖尾之类其他类似相溶准绳之外的影响，适当加入添加剂，如无机酸或者无机碱.极性较小的不挥发性物资.比方：β -谷甾醇：环己烷－醋酸乙酯－甲醇(6:2.5:1)或者环己烷－丙酮(5:2) 、熊果酸：甲苯－醋酸乙酯－冰醋酸(12:4:0.5)、齐墩果酸：氯仿－甲醇(40:1)、猪去氧胆酸：氯仿－乙醚－冰醋酸(2:2:1)、大黄素：苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇 (8:1)、丹参酮ⅡA：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4) 、穿心莲内酯：氯仿-无水乙醇(9:1)、靛玉红、靛蓝氯仿－乙醇(9:1)或者苯－氯仿－丙酮(5:4:1).这类物资睁开剂极性比极性较小的挥发性物资洗脱力强一些，因为这类物资极性小的母核大，而极性大的基团通常可以构成氢键，比方羧酸、羟基.以上物资，母核分子量减小、母核结构中不饱和健的添加（特别是出现苯环），极性基团的添加，都使极性添加，睁开剂极性也增大.这个范围内的物资很多，普通睁开剂大百分数的溶剂可以从环己烷—〉甲苯—〉二甲苯—〉苯—〉氯仿的顺序，按照极性请求选择.这里留意，异丙醇、正丁醇极性指数也比较小，在这范围的化合物很少用，因为粘性大、睁开慢，形成黑点扩散；另外，羟基的氢键感化力也有晦气.调节Rf值的溶剂，从醋酸乙酯—〉甲醇—〉丙酮—〉乙醇.挥发性物资也有很多带羰基、羟基的，但从它的挥发性就可以明白，分子间感化力不强，另外，母核与石油醚、正构烷和苯的结构差别小，估计更容易离开硅胶吸附，更快进入溶剂中，而不须要通过提高睁开剂的极性.皂苷类.人参皂苷：氯仿－甲醇－水(65:35:10)10℃以下放置的基层溶液或正丁醇－醋酸乙酯－水(4:1:5)的上层溶液或氯仿－醋酸乙酯－甲醇－水(15:40:22:10)10℃以下放置的基层溶液、芍药苷：氯仿－醋酸乙酯－甲醇－甲酸(40:5:10:0.2)、黄芩苷：醋酸乙酯－丁酮－醋酸－水(10:7:5:3)、橙皮苷：苯—醋酸乙酯—甲酸—水(1:12:2.5:3)的上层溶液、葛根素：氯仿－甲醇－水(14:5:0.5)、芦丁：醋酸乙酯－甲酸－水(8:1:1).这类物资，因为存在糖的多羟基结构，苷元的结构影响变小.睁开剂中使用极性大的无机溶剂（氯仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇）和水.乙酸和甲酸的使用，一方面增大睁开剂极性，另外也能够按捺硅胶羟基的感化，减少拖尾.因为混溶性和硅胶耐酸能力的限制，水和酸的使用是无限制的.极性大的小分子无机酸.没食子酸：氯仿－醋酸乙酯－甲酸 (5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸、异绿原酸.这类物资多数是苯乙烯母核的，这个结构的极性本人比较大，另外有酚羟基和羧酸基团，个别有多羟基配基.皂苷的睁开剂差不多，极性大.留意甲酸通常指的是浓度85%摆布的，含有水.含氮无机物.盐酸小檗碱：苯－醋酸乙酯－甲醇－异丙醇－浓氨试液(12：6：3：3：0.6)(氨蒸气饱和) 或正丁醇－冰醋酸-水(7:1:2)、麻黄碱：氯仿－甲醇－浓氨试液(20:5:0.5)或正丁醇－冰醋酸－水(8:2:1)、甘草酸铵：醋酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15:1:1:2).因为NH2硅醇基的感化很强，在强极性睁开剂加无机酸、无机碱扫尾.对于极性化合物，使用正丁醇对黑点扩散影响较小，因为化合物和硅胶的感化强. DB^}#kvL:进行薄层分析基本可以根据母核、基团，选择类似的化合物对号入座.当然，具体的条件优化则须要根据实际情况了.碰到较困难的分离，须要使用到设计优化方法的，曾经不属于本文讨论范围了.关于睁开剂：分离的样品酸性比较大，普通在睁开剂中加酸加甲酸是因为该样品是酸性的，加酸的量和该物资的酸性成反比关系，加水可能是因为你的样品是苷类的用酸水做一下缓冲，目的就是让黑点油滑，不脱尾，展距良好.饱和也非常次要，边沿效应很严重的不妨用下端浸在睁开剂中的滤纸贴在睁开缸的内壁，如许饱和后果会好一些1)在层析缸口涂适量凡士林，添加密封性；2)以睁开剂边沿效应的大小，确定睁开剂平衡时间的是非，普通平衡时间在30分钟即可.无机溶剂的极性，甲醇>氯仿，是以在氯仿：甲醇：氨水（10:1:0.6）这个睁开剂中，如果极性略大，可适当降低甲醇比例；如极性太小，可适当增大甲醇比例.氯仿：甲醇：氨水 10:1:0.6 和20：2：1.2 极性肯定是不异的，这有成绩吗？另外还有一个成绩，这个睁开剂中，甲醇用量较小，而甲醇又易挥发，容易发生边沿效应，要特别留意睁开剂的平衡和层析缸的密封.分歧的睁开零碎意思是其中至多应当有一种溶剂分歧（最好是分歧分类组的溶剂），而不是比例分歧.或者使用分歧的固定相.关于睁开：TLC中样品拖尾景象是什么缘由?该如何解决?2.TLC中样品跑成几乎为一条线,黑点没有清晰的分离,想请教一下这是什么缘由形成的?普通情况下该如何解决?形成成绩1的缘由基底细同：a、对于一些具有酸碱性的化学成分，在溶液中部分电离，事实上睁开时存在分子、离子两种形态，以中性的无机试剂睁开必定会出现两种层析行为，形成脱尾甚至是一条线.b、睁开剂选择不当c、点样量过大，样品超载解决法子：a、在睁开剂中加几滴甲酸或冰醋酸；b、睁开时以氨水饱和c、减少点样量d、参考文献，调整睁开剂品种、比例我想问问，关于TLC二次睁开，是在第一次睁开显色后再在继续第二次睁开，还是在第一次睁开后，换另一种睁开剂接着睁开啊？？请哪位大侠指导一下关于TLC的二次睁开.二次睁开是根据样品定的，但肯定要在第一次睁开后，将板晾干或吹干，再放入另一种睁开剂中睁开，有的样品二次睁开还要换睁开方向，和原方向垂直.所以要以实际分离样品须要而定.普通是因为样品成分多，极性不同有的大，有的关于显色：在工作中研讨过用硫酸乙醇显色作定量分析的品种，但凡加了CMC的板都易烘糊，特别是温度高于100度时，后改用不加CMC辅的水板来作，就不会有烘糊景象，故也可推论CMC易于与硫酸起糊化反应.感觉辅水板关键是硅胶G 与水的比例要达1：3.5摆布，而且研磨后要尽快涂布，不克不及易于凝固而难于涂布，我是百思不得其解，难道CMC还有类似波动剂的感化2. “0.5%的板加热时间长了就会黑”，是在层析完，显色后吧，我也碰到过同样的情况，这只要严酷控制加热显色的时间.这个成绩应当是如许回答：但凡加了CMC的板都易烘糊，特别是温度高于100度时，若改用不加CMC辅的水板来作，就不会有烘糊景象，但不加CMC辅的板又太软，点样时容易点出洞，有个好法子是将CMC的浓度调至0.1%，如许就不容易烘黑的.不信你试试，我们这边药检所都如许做的3. 关于薄层板加热变黑的成绩，其实很容易解决：当喷完显色剂后不必在放烘箱里烘了，可以用电吹风在板子反面吹吹就能显色了．我们实验室里普通都采取此法，简便、快洁．如果一非想使用烘箱烘的话，必定要用带玻璃窗的，当看到显色了就取出，否则欠好控制显色时间，时间过长，ＣＭＣ容易碳化变黑4．各位楼主真是经验丰富，我铺的0.5%的板加热时间长了就会黑，有什么好着吗？根据我的经验，薄层版变黑与CMC－Na的浓度过大有关，如果你留意的话，你会发现，当显色剂中有浓硫酸时，加热时间稍长就会变黑（其他显色剂是没事的），我老师说这是因为浓硫酸把CMC－Na炭化了，其实[color=blue=这类情况你只需适当降低CMC-Na的浓度[/color]就可以了，当然如果不加CMC-Na的话容易把板弄破.普通我都是显色后用电吹风吹的，要均匀吹，电吹风离板的距离要远些，防止部分会黑.另还要留意显色剂，如果显色剂中含有硫酸，加热时间必定要把握好，不成太长.5．CP2000中277页苏氨酸的TLC的其它氨基酸检查似乎有成绩: ...以"正丁醇\丁酮\浓氨溶液\水"为睁开剂, 睁开后,晾干,喷以茚三酮的丙酮溶液(1-50),...茚三酮与浓氨溶液起显色反应, 弄得整块板都有色,茚三酮氧化苏氨酸后再与释放出的氨气起反应生成的点在整块板中尚能看到,其它氨基酸就别想看了.氨基酸类的薄层鉴别过程中，显色前先将展完的板子在烘箱内烘一段时间，从而确保睁开剂挥干净，后果不错关于裂板：板子会裂口，一则可能是因为硅胶的比例太大，二则可能是，板子要在常温下晾干后，再在烘箱中活化.如果铺完不久就在较高温度下，裂口的几率就比较高的.“晾干的板子放在烘箱里如何全炸裂了，有什么方法可以防止板子炸裂.” 你的板没有完整干透，概况看是干了，但是最两头的没有干，所以你直接放入105度的烘箱烘，当然会炸裂了，所以应当先用低温大约40度摆布烘30分钟摆布，再用105度活化，就可以解决这个成绩了.关于活化出现裂板、爆板的成绩.我从没有赶上过.活化我是如许处理不要等到温度达到100度，而是设好温度后就将板子放在干燥箱，然后再通电加热，达到最高温度后停留5分钟摆布即可.如许水分是慢慢由内而外散发，而不是由内向内散发，防止了概况成膜，里面还在散发水气，岂有不裂、不爆的道理！.关于点样：1. 点样我本人没有什么技巧，导师教了我一招挺好用，写出来大家分享，就是在点样时食指放在点样管的上端，当点样管的下端与硅胶板接触的瞬间轻轻松动上端的食指，溶液天然从点样管出来，敏捷提起点样管，就如许反复操纵点出的黑点既小又均匀.但要提出样品溶液不克不及太浓，浓度太大，点下的样品不克不及被硅胶很好的接收，晦气于分离.2. 关于点样，我上学的时候，老师用比较廉价的进样器（大约10几块钱吧，10μl即可），将针尖打磨油滑，老师好像是用锉一点一点锉的，如许点样的时候样品溶液不容易沿针尖上行（甲醇溶液都如许），而且针尖不会刺破曾经铺好的薄层板.此刻，我和师兄都是实行的这个法子，还是比较实用的，点样量可以精确到0.5µl.当然，点样的时候手不克不及抖动，动作要轻，这些方法在于领悟，逐步锻炼，信任你会体会到其中的快感.3. 要磨平微量进样器的针尖，简单的方法就是，在展缸的盖子上轻磨（当然是靠近两头部分），就很快能解决成绩，且很平滑.薄层色谱小常识1、如何提高点样效力?点样是形成TLC定量误差的次要来源.实验证实：定量毛细管更适合较小体积的点样；微量打针器更适合较大体积的点样.这主如果因为微量打针器受吝啬泡、溶液回爬景象的影响较大.为防止分歧定量毛细管间的点样误差、建议一块薄层板上最好用同一只定量毛细管.但应留意更换样品时，应将毛细管用超声波或分歧极性溶剂清洗干净.在制备样品时，溶样溶剂黏度不克不及过高，以便于点样；溶剂沸点过低则进样体积易变，过高则会改变睁开剂构成；对样品溶解度过高会使样点发生空心景象；经常使用的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮.经典TLC样点原点普通为直径3mm 点间距1--2cm 底边距；HPLC样点原点普通为直径1mm点间距5mm 底边距1cm.2、睁开剂的选择TLC与HPLC比拟，一个突出的长处就是流动相的选择具有更大的灵活性.流动相的选择的目的是使绝大部分样品的RF值位于0.1--0.7之间并达到较好的分离，与此对应的是流动相要有适当的强度和构成.流动相强度越大，溶质RF 值越大，但很可能降低分离能力；另外单一溶剂很难分离较复杂的混合物，根据类似相溶道理，要使用多元溶剂体系.普通睁开剂体系选择如下：根据分离样品性质、薄层色谱板性质选择一个二元溶剂体系，通过调节溶剂比例以追求适合RF值，适合的RF值找到后，再追求极性参数不异的二元溶剂体系两个，以这三个构成为三点构成一个三角形，则可看到：三角形顶点是二元体系，边是三元体系，三角形内是四元体系，而且极性分歧，可根据几何道理得出任一点构成.这类方法较为直观，也较简单.3、TLC的通用显色方法。
薄层色谱中展开剂的选择
薄层色谱中展开剂的选择2007-04-05 02:03（一）有机合成中展开剂的选择做有机合成时走板子是常有的事，展开剂的选择就至关重要了。
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。
有机化学薄层色谱展开剂的选择
EtOAc/Hexanes
Ch2Cl2（EtOAc）/MeOH， 0-1% TEA o
分离的样品酸性比较大，一般在展开剂中加酸
加甲酸是因为该样品是酸性的，加酸的量和该物质的酸性成正比关系，加水可能是因为你的样品是苷类的用酸水做一下缓冲，目的就是让斑点圆滑，不脱尾，展距良好。
我一般用氯仿打底，根据化合物的极性、第二溶剂的极性、RF值等来考察配比及溶剂种类.当然是最便宜，最安全，最环保的了。所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。文献中有写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因为极性很小，有时还是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升的塑料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。当然过原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消耗一定的人工。这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了。在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了我的处理方法是在点板前，取一点要点板的液体稀释，只要足够稀则可．同意，前几天点板时没有稀释，还被老板训了一下。
实验二薄层色谱
实验二薄层色谱法分离挥发油
一、实验目的：掌握薄层色谱法的基本操作。
二、实验器材及药品
吸附剂：硅胶
展开剂：石油醚/乙酸乙酯=85/15
显色剂：香草醛-硫酸试剂
样品：薄荷油10%的乙醇溶液
三、实验方法
1.配制展开剂：分别量取石油醚42ml、乙酸乙酯7ml,倒入色谱缸中，
混合均匀。
2.点样：在离色谱板底边1.5cm处用铅笔轻轻画一条起始线，并标记
4个原点。
分别用毛细管点上适量样品。
3.展开：把点好样的色谱板放在色谱缸中展开，至展距约10cm左右，
取出，用铅笔标记溶剂前沿，挥干溶剂。
4.显色：向薄层板上喷香草醛-硫酸试剂显色，用电吹风加热，并标
记色斑位置。
5.计算比移值：计算主斑点的Rf值。
四、绘制薄层色谱图。
并讨论，本实验中为什么用混合展开剂，如果
单用石油醚或乙酸乙酯作展开剂，对各斑点的Rf值有何影响？。
薄层色谱中展开剂的选择
薄层色谱中展开剂的选择2007—04—05 02:03（一)有机合成中展开剂的选择做有机合成时走板子是常有的事，展开剂的选择就至关重要了。
选择适当的展开剂是首要任务。
一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯〈乙醚〈THF<乙酸乙酯<丙酮〈乙醇〈甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果,往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂.展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0。
2～0.8之间,定量测定在0。
3~0。
5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中,黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成,再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性,以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成,由甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候，展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中,为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合,最后才找到石油醚—EtOAc-HCOOH(5。
5:3。
5：0。
1）混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时，采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂)，达到最佳效果;如果没有分开的迹象（斑点较“拖"),最好是换溶剂。
薄层色谱中展开剂的选择
薄层色谱中展开剂的选择2007-04-0502:03（一）有机合成中展开剂的选择做有机合成时走板子是常有的事，展开剂的选择就至关重要了。
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。
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1.方法原理薄层色谱是一种微量分析的分离过程，它将样品点在以玻璃板或铝、塑料等片材为载体的多孔吸附剂薄层的固定相上,利用流动相在特定的展开室中将混合物中的组份推移到不同距离处，在色谱展开整个过程中，样品的成份受到正反不同的力的作用。
(1) 流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。
(2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 - （诱导） - 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。
由于样品组份与流动相和固定相之间的相互作用力程度不同，整个毛细管流动过程中分离运动都在进行。
基于这点，TLC系统（流动相和固定相）必须与样品很好地匹配。
用显色试剂处理，许多组份可在日光或紫外灯光下检视。
色谱可用肉眼或使用光密度计和照相机记录或影像系统方法来评价。
2. 薄层板2.1手工自制板，最好使用厚薄1~2mm的优质平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄层板，玻璃板需洗净至不挂水，晾干，贮存于干燥洁净处备用。
玻璃板反复使用时，应注意经常用洗液及碱液清洗，保持玻璃板面的光洁是保证薄层板质量的最基本要求，将1份吸附剂加适量的水（如1份硅胶G一般加3份水），在研钵中用研杵沿一个方向小心研磨至成均匀的有适当粘稠度的胶浆,立即倾入涂布器中,均匀地向前推进涂布在玻璃板上;或按照不同涂布器的规定操作涂布;涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干,再在规定的温度(一般为105℃~110℃)下烘约30分钟活化,贮于干燥器中备用。
薄层板的厚度一般为0.25~0.5mm.。
2.2 商品化供应的预制板和高效板20x20cm 10x20cm 20x10cm 10x10cm图1 不同的板尺寸TLC/HPTLC预制板有不同的规格供应。
常用的尺寸为20 x 20，10 x 20，20 x 10，或10 x 10 cm。
使用的规格取决于TLC或HPTLC的类别和样品的数目。
2.2.3 TLC/HPTLC板的预洗及活化一般来说，色谱板应用溶剂如氯仿-甲醇(8:2)，甚至用更强的洗脱溶剂的混合物进行预洗。
具体操作可通过空白色谱展开来实现。
色谱板预洗完后,应在105°C加热1小时进行干燥，再在室温下置放至少2小时（需采取保护措施以防止实验室空气中的污染物重新附着在其上面，如放置在空的干燥器中）。
3. 样品点样3．1点状点样和条带状点样每次点样前，TLC/HPTLC板应在正常光线下和紫外灯下用肉眼检查薄层的损伤情况和杂质，只有无损伤、清洁的TLC/HPTLC板方可使用。
样品可进行点状或条带状点样。
要想获得最佳的薄层分辨率，必须保证移行方向中的起点要小，常规的TLC薄层点状点样每次点0.5至5微升，相比之下，HPTLC薄层最大点样量为1微升。
点样量较大的样品可使用自动化装置点样，喷雾成条带状是一种可以点样量大而同时又能促成最有效分离的点样方法。
在常规操作过程中，人工点样一般使用微量毛细管（0.5/1/2/3和5 µl），点样时毛细管必须完全充满和完全排空，要以垂直方向小心接触TLC/HPTLC板面，不要损伤薄层，受损的薄层会导致溶剂不规律地流动而在色谱上产生失真的TLC谱带。
人工点样建议使用Nanomat。
它点样位置精确并安全，使薄层免于受损。
用适当的介质干燥Nanomat也可用作单个量的多次点样。
样品体积大于5 µl，通常用如Linomat或Automatic TLC Sampler III的方法用氮气喷雾成窄条。
若（就是）要求点状样品点样，Linomat 和Automatic TLC Sampler III应将条长度设定在1至2 mm。
3.2 样品点样位置起点的最佳位置如图2和3所示。
起点下缘的最小距离b取决于溶剂量。
两个起点之间的距离c必须令平行移行的主成份不会相互触及。
点状点样时原点的直径应小于或等于3mm（高效板原点的直径应更小）,条带的长度d由点样样品体积或样品的种类和相对于板的尺寸点样的数目来决定。
到板侧边的距离a必须足够大以避免分离区失真变形（见图2和3）。
图2：斑状样品点样的一般点样位置（a = 20mm, b = 10mm, c =两起点之间的距离。
）图3：条状样品点样的一般点样位置（a = 20mm, b = 10mm, c = 两起点之间的距离，d = 条的长度）。
4.层析4.1展开室具有节省溶剂、便于预平衡、可控制展开箱内的湿度等优点。
4.1.2 水平展开室可以从薄层板的两侧向中间水平地展开，这样可使一块薄层板所承受的样品个数比常规上行展开的薄层板增加一倍。
4.1.3 自动展开室(AMD) 可使用五种溶剂对同一薄层进行多次展开，自动控制预饱和、展开方式、展开距离和干燥条件，分离效率比传统方式提高三倍（可在80mm之内分离40种成分），符合GLP/GMP要求。
4.2. 溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇 - 冰乙酸 - 水 = 4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml甲苯 + 2 ml甲醇）。
其总量应足以使TLC/HPTLC板的浸入深度约为5mm。
展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。
在双槽展开室中，对每种类型和规格和层析板，每槽通常注入的溶剂数量如表3。
表3：板的规格板的尺寸（宽×高）溶剂量预制板20×20cm20×10cm10×10cm 25ml15ml8ml高效板20×10cm10×10cm 10ml5ml（1）硫酸（sulphuri acid）通用显色剂。
试液：a、5%浓硫酸乙醇或乙酐溶液b、浓硫酸与甲醇或乙醇等体积混合c、15%浓硫酸正丁醇溶液方法：用以上任一试液喷洒或浸湿晾干，于110摄氏度加热至呈色，或达最强荧光。
（2）碘（iodine）通用显色剂。
试液：a：0.5%碘的氯仿溶液。
喷后处理：待薄层上过量碘挥散，喷1%淀粉溶液，斑点转为兰色，如有过量碘留在薄层上，则背景也呈兰色。
b：碘蒸气：将少许碘晶体放入一密闭的容器内，使之充满饱和碘蒸气，将薄层放入容器片刻或数分钟即显色。
有时在容器内放一小杯水增加湿度，可提高显色的灵敏度，可提高显色的灵敏度。
在化合物斑点处显黄-棕色。
（3）磷钼酸（molybdophosphoric acid）用于还原性化合物、类脂、甾体化合物等。
试液：5%或10%磷钼酸乙醇溶液喷或浸后处理：于120摄氏度加热至最佳颜色形成，如将薄层放入含25%氢氧化铵溶液的容器内，可使背景颜色消退。
（4）香草醛-硫酸（vanillin-sulphuric acid）用于精油、高级醇、酚等试液：香草醛1g溶于100ml硫酸或香草醛0.5g溶于100ml硫酸-乙醇（1：1）溶液。
喷或浸后处理：于120摄氏度加热至颜色最深。
（5）三氯化铁（ferric chloride）用于酚类、羟酰胺酸。
试液：1%~5%三氯化铁的0.5mol/L盐酸溶液。
注：酚类呈兰色或绿色，羟酰胺酸呈红色。
（6）三氯化铝（aluminium chloride）用于黄酮类化合物。
试液：1%三氯化铝乙醇溶液，紫外光长波下斑点显黄色荧光。
（7）碘化铋钾试剂（dragendorff reagent)用于生物碱和某些含氮化合物。
试液：a：次硝酸铋0.85g溶于10ml冰乙酸与40ml水中。
b：碘化钾8g溶于20ml水中。
方法：试液a和b等量混合，置棕色瓶保存试液。
用前将试液1ml加2ml冰乙酸和10ml水混合。
注：显色斑点呈橙红色。
（8）茚三酮（ninhydrin）用于氨基酸、胺与氨基糖类试液：茚三酮0.2g溶于乙醇100ml或溶于100ml正丁醇，加乙酸3ml。
喷或浸后处理：于110摄氏度加热至最佳颜色出现。
（9）邻苯二甲酸苯胺用于还原糖。
试液：苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml以水饱和的正丁醇中。
喷或浸后处理：于105摄氏度加热10min，醛己糖及甲基戊糖呈棕色，醛戊糖呈樱桃红色（10）硫酸铈：用于生物碱配制方法：10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液（11）桑色素(羟基黄酮) 通用显色剂, 有荧光活性配制方法：0.1% 桑色素+甲醇（13）二硝基苯肼(DNP) 用于醛和酮配制方法：12g二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸+ 80mL 水+ 200mL 乙醇（14）高锰酸钾用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛配制方法：1.5g KMnO4+ 10g K2CO3+ 1.25mL 10% NaOH + 200mL 水. 使用期3个月（15）溴甲酚绿用于羧酸，pKa<=5.0配制方法：在100ml乙醇中，加入0.04g溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH水溶液，刚好出现蓝色即至。
（16）钼酸铈通用显色剂配制方法：235mL 水+ 12g 钼酸氨+ 0.5g 钼酸铈氨+ 15mL 浓硫酸（17）茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1 通用显色剂配制方法：135乙醇+ 5mL 浓硫酸+ 1.5mL of 冰醋酸+ 3.7mL 茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2 用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine)配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80)（18）醋酸改良碘化铋钾试液的配制：A．取次硝酸铋0.52g加冰醋酸6ml，纯化水24ml；B．取碘化钾12g加纯化水3 0ml。
将A、B两液混合，再加纯化水120ml，冰醋酸160ml即得。
实例谈薄层色谱展开剂选择根据本人的几年薄层层析经验，参考药典等国家药品标准和有关文献，将2000版药典一部里部分有代表性的对照品的薄层层实例按展开剂极性排序，并对其规律做一些分析。
以下的分析和介绍是总体描述性的，目的是快速、简便地选择展开剂。
如果想了解展开剂选择的各种理论，请参考其他专著。
选择展开剂，要依据溶剂极性和他们的混溶性，溶剂对被分析物的溶解性，以及被分析物的结构。
这里只讨论药典里通常使用的以硅胶为固定相主体的正相薄层，也不考虑板的活性。
E( 5LQ3Y列出溶剂极性参数表，方便以下比较展开剂。
环已烷:-0.2、石油醚（Ⅰ类，30~60℃）、石油醚（Ⅱ类，60~90℃）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2 [1] 。
关于溶剂混溶性，一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶，比如正己烷与甲醇。
多元展开剂，主体的两种溶剂不能混溶，就需要通过第三种溶剂来调和。