组培室无菌化操作规程

无菌操作

一、接种室的消毒

1、每天开始工作前用75%酒精喷雾自己周围环境。

2、一天的工作结束后，值日、值班人员要对培养基储存间、三个接种室、两个培养室及风淋室进行紫外灯及臭氧灭菌20~30min。

3、风淋室两个门随时关紧，灭菌间和储存间之间的门除了放培养基外不得随意开门。风淋室与接种间之间的门要随时关闭！接种四人间对着的门绝对不允许开！

二、无菌操作要求

1、在一楼换各自的护士鞋。

1、进实验室首先要穿过风淋室吹风，换工作服，换拖鞋，戴好帽子、把头发全部包进去、不许有头发留在外面，之后进入实验室。

2、自己的工作服、帽子一周清洗一次。口罩要保持干净。

4、必须剪除长指甲，接种时用75%酒精擦洗。

5、接种时禁止谈话并戴上口罩。

6、接种过程尽量减少工作人员在接种室的走动。

三、接种前应做好相应的准备工作

1、超净台紫外灯灭菌20min，值日值班人员提前10min 开台子。

2、打开高温灭菌消毒器，温度达到200℃左右时可以使用。

3、此时将当天或某时间段所需要的原瓶苗、培养基、盘子、一瓶无菌水及放置瓶盖的空框子准备好，待紫外灯关闭5min后进入接种室，

4、将事先准备好的原瓶苗及其他物品放到医用小推车上（有条理的

摆放，便于在操作时使用）。

5、于8：20之前和14:50之前进入操作室超净台前进行接种工作。

四、具体的无菌操作步骤如下：

1、首先要拉下超净台挡风板，隔离人体和无菌苗，减少菌的发生。

2、操作前要用酒精喷壶喷洒超净台并用抹布擦干净。

3、将两把解剖刀和镊子放入灭菌消毒器内进行2~3min灭菌，之后放在灭菌支架上，冷却或不烫手的情况下使用。每做完一瓶无菌分化材料，都应将刀子镊子进行灭菌，否则会引起交叉污染。

3、器具及用品（盘子、培养基、原瓶苗）用酒精喷壶消毒之后，放在超净工作台面上待用（台内只放无菌器具和用品）。盘子在酒精消毒后，小心地打开报纸，反扣在台面上，手不要触碰碟子，否则碟子会积聚菌，导致瓶苗污染。

4、操作前要检查好所取苗子是否为无菌苗，在发生真菌性污染（在培养基表面有粉状、毛状菌）、细菌性污染（在培养基表面有油状、浓状菌斑）时要将瓶苗放在一边，不可以打开瓶盖，以免发生超净台环境污染。

5、用镊子夹无菌碟并小心放到酒精灯右前方（忌用手拿碟子）。

6、将消毒后的镊子（左）和刀子（右）架在无菌碟上

7、打开瓶盖对无菌分化苗瓶口进行火焰灭菌（打开的瓶盖右手扔进空框里），左手托着瓶身，瓶口斜对着酒精灯火焰，瓶身由里向外旋转2~3圈即可。

8、用镊子夹分化苗放入无菌碟中。分化苗多的情况下可以分两次放

入碟内切割。若不慎把分化苗掉到台面上，可以舍弃或者接入另外的培养瓶中，并做记号。有时，在接种过程中，不小心把镊子或刀子掉在台面，应进行灭菌后才可以使用。

9、分化苗切分。在切分过程中，接种刀和镊子始终与碟子呈45°以下夹角，不得大于45°，否则手上的杂菌会掉进无菌碟中引起污染。人体不和超净台桌面紧挨着，碟子在超净台里，不能到台边上。10、把切分后的苗接入新的培养基。打开瓶盖，注意瓶口始终倾斜对着酒精灯火焰，瓶盖倒放在桌面上，手尽量不要在瓶盖上边碰，否则杂菌掉在瓶盖上会引起污染。

11、盖瓶盖。把瓶盖放到酒精灯火焰上烘烤1~2S，盖上瓶口即可。

12、（1）接种完一瓶时若碟内还有剩余的分化苗，再将其接入新的培养瓶中。（2）若接不满一瓶时，拧紧瓶盖放置在超净台的一边，下次继续用。

13、完成一个接种过程后，右手把镊子刀子灭菌的同时，左手拿一瓶原瓶苗准备下一个接种环节。

14、接种完毕后清理工作台的废物，保持台面整洁。

15、接种结束后，拿出所有用具、容器，关闭超净台并关闭电源。