大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定
细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选
微生物学实验报告大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选山东大学生命科学学院2010.6.10大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选摘要：营养缺陷型菌株或称异养型（auxotroph）菌株是许多微生物生理生化以及遗传研究的重要菌株材料。
此类菌株不仅在生物研究方面有着很重要的作用，而且在生物工程和生物技术上都有很重要的作用。
营养缺陷型菌株的筛选也成为了微生物科学工作者必备的基本实验技能之一。
本实验以大肠杆菌原养型菌株为材料，实验了营养缺陷型的诱变获得及筛选，从而了解细菌营养缺陷性的获得步骤，掌握氨基酸营养缺陷型的筛选方法和鉴别过程。
关键词：营养缺陷紫外诱变筛选生长谱测定大肠杆菌（E.coli）一、背景与原理营养缺陷型菌株指的是因自发突变或诱变丧失合成某些生活必需物质的能力的菌株。
营养缺陷型菌株不能在基本培养基上生长（增殖），必须补充一种或一种以上的营养物质才能生长。
此类突变体在理论研究和生产实践中都有重要意义，是作为研究代谢途径和遗传规律不可少的标记菌种，亦可直接用于生产氨基酸、核苷酸等代谢产物。
例如，顺反子概念的提出、基因工程转化结果的鉴定等，都是利用了营养缺陷型菌株。
.菌株自发突变为营养缺陷型的概率是很低的。
因此现代微生物遗传学实验中，为了有目的的获得营养缺陷型菌株，实验人员往往以人工诱变的方法来获得营养缺陷型。
实验中，以各种致突变因子（物理、化学等）处理待突变细胞，然后进行筛选和鉴定，获得营养缺陷型菌株。
能够用来进行诱变的物质很多，例如各种射线、紫外线、DNA染色剂、碱基类似物、强氧化剂等，但是一般实验室中最常见也最有效地史紫外线诱变法。
在紫外线照射下，DNA发生不同程度的损伤，而且会形成大量的嘧啶二聚体。
处理完细胞后，在防止光复活的前提下，细胞中DNA的损伤得不到有效修复或者只能得到SOS 修复，会形成大量的基因突变，在细胞总量较大的前提下，就有机会获得一定得目的菌株。
用于诱变处理的微生物一般处于对数生长期，那时的细菌对诱变剂的反应最灵敏。
营养缺陷型菌株的筛选和鉴定
营养缺陷型菌株的挑选和鉴定mutugenesis and isolation of auxotroph细菌革兰氏染色法gram stain酵母菌的形态构造观察yeast morphology培养基的配制和灭菌types of mddia and sterlization菌种保藏preservation of cultures细胞计数法conting of cell凝集反响agglutination reactions相差显微镜phase contrast microscope细胞交融cell fusion质粒DNA的提取isolation of plasmid DNA植物DNA的提取isolation of plant DNA多肽的末端分析analysis of terminal of polypeptidePCR扩增DNAPCR amplify DNA fragmentSDS-聚丙烯凝胶电泳SDS-polyacrylamide gel electrophoresis蛋白质的性质properties of protein植物组织培养plant tissue cultureBL-410生物机能实验系统简介the introduction of BL-410 biofunctional experiment system 青蛙坐骨神经-腓肠肌标本的制备preparation methods for nerve-muscle specimen of frog人ABO血型的鉴定Identification of humankind ABO blood group蟾蜍心室肌的期前收缩与代偿性间歇compensatory pause and ventricular extrasystole of ventricular muscle for toad 果蝇的两对因子的自由组合pair factors for free combination of Drosophila植物姊妹染色单体及染色体的区分sister chromatid of plant and differentiate of chromosomeβ-半乳糖苷酶基因〔lac-Z〕的定点突变site-directed mutagenesis of β-galactosidase gene〔lac-Z〕β-半乳糖苷酶的固定化及应用application and immobilization of β-galactosidase大肠杆菌感受态细胞的制备及转化the preparation and transformation of competent cells from Escherichia coli质粒DNA的提取及酶切extraction of plasmid DNA and its detection植物基因组DAN的提取extraction of plant genome DNA小鼠巨噬细胞吞噬实验的观察experimental observation of macrophage cell分小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能phagocytosis of mice peritoneal macrophage cell动物骨髓细胞染色体标本的制备preparation method of chromosomes for animal marrow cells细菌的形态观察bacteria morphology植物叶绿体色素含量的测定determination of chloroplast pigment in plant根的形态构造morphology of root茎的形态构造morphology of stem植物的各种组织tissus of plants氨基酸的别离鉴定-纸层析法the isolation and identification of amino acid- paper chromatography蛋白质的颜色反响coloration reaction of proteins白菜的组织培养tissue culture of cabbageHigh School Biology Experiment IdeasBy Jennifer Eblin, eHow Contributorupdated: April 28, 20211.One idea involves testing the effects of different substances on plants.High school level biology covers all aspects of biology, including animals, plant life and humans. That should mean it's easy to come up with ascience fair project or a classroom research project, but the amount oftopics sometimes makes it even harder. When you first start researching, you'll find thousands of ideas and it's difficult to decide which one is best for your situation. Provided that you know what you want to do and what your teacher or judges are looking for, it's easy to come up with a greatbiology experiment.Effects on Plants2. Test the effects of different substances on plants. Place plants from thesame source in pots of the same size, then use different types of materials.You can test different types of potting soil against regular dirt or use the same type of potting soil and test other substances. Water the plants with different types of bottled water and tap water from your home and other homes or add a small amount of vinegar and other liquids to see how the plants react to those substances. Observe the effects of the differentsubstances on the plants and measure how quickly each plant grows in comparison to the others.Water Bottles3. Test the amount of germs and toxins found when you refill a water bottle.Start by taking a sample swab from the outside lip of the bottle and looking at the water under a microscope for any bacteria or impurities. Then drink from the bottle as you otherwise would and test the bottle each time you refill it with extra water. Student athletes can even use the same plasticwater bottles they carry with them to practice every day. Each time, you'll want to swab the inside lip of the bottle and look at the swab under amicroscope. Identify any bacteria or toxins by looking at the examplesfound in your textbook.Public Germs4. You might be surprised when you check different public areas for germs.Take swabs at public bathrooms, in your classroom, on the door handles at stores and even books at the public library. Look at the swabs under a microscope and see what types of germs you find. Then offer acomparison of the germs and explain your findings. Discuss which germs are harmful and what levels of germs you found.Hair5. Do a biology experiment focusing on how the hair reacts to differenttypes of products. Test shampoos, conditioners, hair gels, hair sprays and other products. Look for residue left behind by the product, but take a few sample hairs before you begin. Check the consistency and health of the sample hairs under a microscope and compare those results against hairs after using the products. Observe any changes you notice in the look or feel of your hair, as well. Then look for signs that the hair has becomemore damaged or healthier since you used the product. You'll need tonarrow it down to just a few products, but if you have more time, use one product for several days before switching to anotherRead more: High School Biology Experiment Ideas | eHow。
大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定
大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定关于菌株的几个概念：野生型菌株：从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始状态。
营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。
原养型：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上和野生型相同关于培养基：基本培养基（minimal medium，MM）：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，用[－]来表示。
完全培养基（complete medium，CM）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。
用[＋]来表示。
补充培养基（supplemental medium，SM）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组全培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成。
摘要：本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发大肠杆菌突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，获得100#大肠杆菌菌株，最后经生长谱法鉴定出该菌株为xxx缺陷型。
关键词：大肠杆菌紫外线营养缺陷型青霉素逐个测定法生长谱法一、目的1、了解营养缺陷型突变株选育的原理。
2、学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变、筛选与鉴定方法。
二、原理筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节：诱变处理、营养缺陷性的浓缩、检出、鉴定缺陷型。
本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。
三、器材离心机，紫外线照射箱，冰箱，恒温箱，高压灭菌锅；三角烧瓶，试管，离心管，移液管，培养皿，接种针四、材料(一)菌种E.coli(二)培养基、1LB培养液(Luria-Bertani 培养基,这个名字来源于英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。
是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。
加入抗生素的LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。
大肠杆菌营养缺陷型
大肠杆菌营养缺陷型菌株的筛选陈瑞州201110424108一.实验原理以微生物为材料的遗传学研究中，用某些物理因素或化学因素处理细菌，使基因发生突变，丧失合成某一物质（如维生素）的能力，因而它们不能在基本培养基上生长，必须补充某些物质才能生长。
这样从野生型经诱变筛选得到的菌株称为营养缺陷型。
常用的诱变法是紫外线照射诱变法。
但是，经处理后的细菌，缺陷型还是相当少的，必须设法淘汰野生型细菌。
因为抗生素能杀死生长的细菌而对不生长的细菌没影响，而缺陷型菌株在基本培养基中不能生长，由此通过含有抗生素的基本培养基即可淘汰野生型细菌，保留缺陷型细菌。
把经过浓缩的缺陷型菌液接种在完全培养基上，待长出菌落后，将每一菌落分别接种在基本培养基和完全培养基上，凡是在基本培养基上不长，而在完全培养基上生长的菌落就是营养缺陷型。
二.实验材料大肠杆菌K12的野生型菌株大肠杆菌三.实验器具和药品1.用具：灭菌培养皿（9cm），灭菌三角瓶（150ml），灭菌离心管。
2.培养基1)肉汤液体培养基：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，蒸馏水100ml，Ph7.2，高压灭菌15磅/英寸2 15分钟。
2)肉汤液体培养基（2E）：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，蒸馏水50ml，Ph7.2，高压灭菌锅15磅/英寸215分钟。
3)基本液体培养基：葡萄糖2g，蒸馏水98ml，pH7.0，高压灭菌8磅/英寸2 30分钟4)基本固体培养基：琼脂2g，基本液体培养基100ml，pH7.0，高压灭菌8磅/英寸2 30分钟。
5)无N基本液体培养基：K2HPO40.7g，KH2PO40.3g，柠檬酸钠·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.01g，葡萄糖2g，蒸馏水100ml，Ph7.0，高压灭菌8磅/英寸230分钟。
6)2N基本液体培养基：K2HPO40.7g，KH2PO40.3g，柠檬酸钠·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O0.01g，(NH4)2SO4 0.2g，葡萄糖2g，蒸馏水100ml，Ph7.0，高压灭菌8磅/英寸2 30分钟。
紫外诱变选育大肠杆菌营养缺陷型菌株的研究
物技术、微生物代谢等领域的研究中均具有重要作用，另外它还是研究基因的结构与功能的常用材料。该研
究以大肠杆菌（Escherichia coli）菌株 DH5α为实验材料，利用紫外线（UV）对其进行诱变，并且采用青霉素法浓
缩营养缺陷型细菌，采用逐个测定法检出营养缺陷型，利用生长谱法对缺陷型菌株进行鉴定、分析，得到了 4
株稳定的营养缺陷型突变株，分别为赖氨酸、组氨酸、精氨酸和嘧啶营养缺陷型菌株。
关键词：大肠杆菌；营养缺陷型；紫外诱变
中图分类号 Q311
文献标识码 A
文章编号 1007-7731（2016）15-0033-03
Study on Selection of Auxotrophic Strain of Escherichia coli by UV Mutation
安徽农学通报，Anhui Agri.Sci.Bull.2016，22（15）
33
紫外诱变选育大肠杆菌营养缺陷型菌株的研究
宁 祎 李基丽 道吉吉 王春台 刘新琼*
（中南民族大学生命科学学院，湖北武汉 430074）
摘 要：营养缺陷型是一种生化突变株，它的出现是由基因突变引起的。营养缺陷型菌株在遗传学、食品生
Ning Yi et al. （College of Life Science，South-central University For Nationalities，Wuhan 430074，China） Abstract：The auxotrophic strain，which is caused by the gene mutation，is a kind of mutant strain of biochemistry. It plays an mportant role in the study of genetics，food biotechnology，microbial metabolism，and so on，besides， the auxotrophic strain has been always used to study the structure and function of genes. The steps of screening are inducing mutation，after culturing，eliminating the wild types，detecting the deficit types and identifying the deficit types.The ultraviole（t UV）was used to mutate the strain of Escherichia coli—DH5α，and then by the use of penicil⁃ lin method，the auxotrophic bacteria were concentrated and tested respectively to find out the auxotroph.Finally，the auxotrophies were identified and analyzed by growth chart of nutritional need，and four auxotrophic strains were suc⁃ cessfully obtained. Key words：Escherichia coli；Auxotrophy；UV-induced mutation
细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选
细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选摘要[目的]通过诱变处理，获得并筛选细菌营养缺陷型菌株。
[方法]以大肠杆菌E.coli K12SF+为实验菌株，通过紫外线诱发突变，并用青霉素法淘汰野生型菌株，经过缺陷型菌株的检出、划线复证、生长谱鉴定，最终确定得到菌株的营养缺陷型类型。
[结果]经过诱变处理后，检出了营养缺陷型，经过划线复证发现该菌株并非营养缺陷型；用其他组复证后的营养缺陷型菌株进行生长谱法鉴定，显示没有菌落形成，即没有预期的营养缺陷型菌株出现。
关键词诱变；紫外线；营养缺陷型；生长谱法鉴定；筛选前言随着微生物遗传学及其在生产实践中的不断发展，迫切的需要建立更多的新菌种为科学研究和生产所用。
其中获得微生物菌种的突变菌株就是获得新菌种的一种方法。
通过一定措施，诱发菌种发生突变，改变菌种的性能并选育，得到具有新性能的菌种。
在诱变剂选择时，首先应从诱变剂的普遍性出发，然后再考虑由于不同的生物的DNA碱基排列、GC的含量、细胞生理特性等，对诱变剂表现敏感强弱的差别。
一定剂量的紫外线照射，可以导致细胞发生突变，而且紫外线的安全性较高，易于操作，方便使用。
本实验采用紫外线诱发突变，紫外诱变机理如下：DNA和RNA的嘌呤和嘧啶吸收紫外光后，DNA分子形成嘧啶二聚体，即两个相邻的嘧啶共价连接，二聚体出现会减弱双键间氢键的作用，并引起双链结构扭曲变形，阻碍碱基间的正常配对，从而有可能引起突变或死亡。
另外二聚体的形成，会妨碍双链的解开，因而影响DNA的复制和转录。
总之紫外辐射可以引起碱基转换、颠换、移码突变或缺失，即是所谓的诱变。
在使用紫外诱变时，应注意防止光复活，紫外线照射结束后，要用黑布包裹暗箱培养。
此外，使用任何诱变剂均需考虑其剂量问题。
在计算某一诱变剂对微生物作用的最适剂量时，必须考虑到一切诱变剂都有杀菌和诱变的双重效应。
当杀菌率不高时，诱变率常随剂量的提高而提高，剂量提高到一定的浓度后，诱变率反而下降了。
如果以产量性状为标准，则诱变率的高低还有两种情况：一是产量提高的诱变率，称为正向突变；一是产量降低的诱变率，称为负向突变。
营养缺陷型菌株的筛选
CM
MM
３、夹层法
先在培养皿上倒一层基本琼脂培养基， 凝固后涂上一层含菌的MM，凝固后再倒 一 薄 层 MM 琼 脂 培 养 基 ， 培 养 24h ， 将 出 现的菌落标记，然后倒上一层CM琼脂培养 基，再培养。这时第二批长出的菌落就可 能是缺陷型。
此法缺点是，结果有时不明确，而且将
（4）将CM和MM在恒温箱中培 养。
（5）二平皿相同方位进行比较， 即 可 发 现 在 MM 平 皿 上 长 出 的 菌落少于CM平板上的。MM上 未长而相应于CM上长出的那几 个菌落就可能是缺陷型。
此法要求平皿上菌落不能太多，
菌落之间应有一定间隔。
CM
MM
２、点种法
用接种针或牙签将CM上长出的菌 落在MM和CM两副平板上接种，依 次在相应位置点种，然后一起培养， 观察其生长情况。
MM
MM+F
无营养缺陷
CM
其他营养 缺陷
１、影印法
将一较平皿直 径小1cm的金 属圆筒蒙上一 层灭菌的丝绒， 用金属夹夹住， 灭菌。
完全培养基上 长出的全部菌 落在丝绒上轻 轻一压，使之 成为印模，标 记方位。
将基本培养基 平皿和完全培 养基平皿在标 记的同一方位 上先后轻轻一 压，此菌印模 即复印于上。
1、野生型菌株（wild type strain） 2、营养缺陷型（auxotroph）：
指通过诱变而产生的缺乏合成某些营养物质如 氨基酸、维生素和碱基等的能力，必须在其基 本培养基中加入相应的营养成分才能正常生长 的变异株。 3、原养型（prototroph）：
营养缺陷型菌株经回复突变或重组变异后产生 的菌株，其营养要求在表型上相同。
与之有关的培养基有三类
细菌营养缺陷型的诱变和筛选
微生物大实验细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选摘要用某些物理因素或是化学因素，使基因发生突变，丧失合成某一物质的能力，因而它们在基本培养基上不能生长，必须补充某些物质才能生长，这样从野生菌经诱变筛选到的菌株，称为营养缺陷型。
紫外线可以诱导细菌发生突变，产生营养缺陷型菌株。
筛选营养缺陷型菌株必须经过如下几个步骤：诱变处理、营养缺陷型的检出、划线复证、生长谱鉴定、缺陷型菌株纯化。
又因处理的细菌所得到的突变菌仍然是很少的部分，因此必须采用有效的筛选方法，才能分离到突变型。
关键词紫外诱变营养缺陷型营养缺陷型的检出划线复证生长谱鉴定引言营养缺陷型：需要在基本培养基中补加某种营养成分（如氨基酸、维生素、核苷酸等）才能生长的微生物突变体，通过基因突变产生。
微生物细胞本身能吸收周围环境中的简单营养物，经过自身代谢合成生长所需的各类营养物质。
如果发生基因突变，则细胞失去合成与这些基因有关营养物质的能力，只有在培养基中补加这类营养物质后，突变细胞才能生长，故又名营养缺陷型突变体。
此类突变体在理论研究和生产实践中都有重要意义，是研究代谢途径和遗传规律必不可少的标记菌种，亦可直接用于生产氨基酸、核苷酸等代谢产物。
为了获得营养缺陷型菌株，需从诱变处理后的菌液中认真筛选，以便检出突变体，常用的方法有：影印接种法、夹层培养法和青霉素浓缩法等。
影印接种法：将待测的浓缩菌悬液涂在完全培养基平板上，待其长好后作为母平板。
用一小块灭菌的丝绒固定在直径较平板略小的圆柱形木块上，作为接种工具。
用它在母平板上轻轻印一下，再在基本培养基平板上印一下，经培养后，影印平板上长出的菌落与母平板上的菌落位置对应，比较二个平板上菌落的生长状况，即可从相应位置的母平板上选出待测的营养缺陷型菌株。
夹层培养法：先在培养皿中倒一层不含菌的基本培养基，待冷凝后，加一层含菌的基本培养基，冷凝后，再加一层不含菌的基本培养基，经培养出现菌落后，在培养皿底的相应位置做上标记，然后再加一层完全培养基。
实验5-营养缺陷型菌株筛选及鉴定
实验五、营养缺陷型菌株筛选及鉴定1、实验名称营养缺陷型菌株筛选及鉴定2、实验操作人3、实验过程简述3.1 营养缺陷型菌株诱变3.1.1培养基的配制配置两种类型的培养基，营养丰富培养基（YPD）和基本培养基（SC），其中营养丰富的培养基在诱变的过程中用来培养菌株，在基本培养基中选择性的加入氨基酸来进行筛选，分别标记为：SC5 (SC+His+Trp+Leu+Lys+Ura)；SC5-Lys (SC+His+Trp+Leu+Ura) SC5-Leu (SC+His+Trp+Lys+Ura)；SC5-Trp (SC+His+Leu+Lys+Ura)；SC5-His (SC+Trp+Leu+Lys+Ura)；SC5-Ura(SC+His+Trp+Leu+Lys)。
3.1.2稀释涂布在超净台，取0.1 ml菌悬液转接到0.9 ml无菌水中，混匀后，取0.1 ml 稀释液转接到0. 9 ml无菌水中，混匀后，继续进行10倍的梯度稀释，稀释到10-6；取0.1 ml稀释度分别为10-4、10-5、10-6的菌悬液，加入到YPD固体平板上，用涂布棒涂布均匀，每个稀释度涂5块平板；3.1.3紫外诱变每个稀释度各取一块平板，培养皿底部标记好组号-稀释度-紫外处理时间，将平板适当垫高，防止诱变不充分，用紫外照射分别诱变处理0、30、45、60、120秒，黑布包好，置于30℃培养箱培养48h；记录各平板上的菌落数，计算不同处理的细胞致死率。
致死率（%）=1-（特定时间点平板上菌落数X稀释倍数）/（0时平板上菌落数X 稀释倍数）X100%3.2 营养缺陷型菌株初筛3.2.1选取单菌落小组内部四人分别标号为A/B/C/D（本人标号为A）,本次实验选用了两种敏感性不同的菌株，选取两种菌株内生长较好的平板，每个平板每人取3个单菌落（每人2菌×3个单菌落），用记号笔圈出标记为A1/A2/…A6防止重复挑取；取1.5ml离心管装入1ml无菌水，用接种环从YPD平板上挑取单菌落，转接到无菌水中，摇匀，室温静置2h；3.2.2点板在准备好的YPD、SC培养基平板底部做标记（培养基名称-组号）,将小组成员点菌位置画好格子；分别取一接种环菌悬液对应点于SC和YPD培养基平板上（每人1行，做好标记）；将培养皿倒置于30℃培养箱中，培养48h，注意无论涂板、还是点板，一定等菌液被培养基吸收后，再挪动或倒置；记录各单菌落在不同培养基上生长情况（生长记“+”，不生长记“-”），并拍照；根据生长情况，判断本实验各菌株是否为营养缺陷型菌株。
大肠杆菌营养缺陷型菌株的筛选
大肠杆菌营养缺陷型菌株的筛选一、实验原理在以微生物为材料的遗传学研究中，用某些物理因素或化学因素处理细菌，使基因发生突变，丧失合成某一物质(如氨基酸、维生素、核苷酸等)的能力，因而它们不能在基本培养基上生长，必须补充某些物质才能生长。
这样从野生型经诱变筛选得到的菌株，称为营养缺陷型。
筛选营养缺陷型菌株必须经过以下几个步骤:诱变处理、淘汰野生型、检出缺陷型、鉴定缺陷型。
由于本实验是以大肠杆菌为材料，所以根据细菌的特性分别说明筛选的步骤。
诱变剂的作用主要是提高突变频率，它分为物理和化学的二类。
物理诱变剂常用的有X射线、紫外线、快中子、γ射线等诱变处理首先是选择诱变剂，微生物诱变中最常用的物理诱变剂是紫外线。
诱变剂所处理的微生物，一般要求呈单核的单细胞或单孢子的悬浮液，分布均匀，这样可以避免出现不纯的菌落。
用于诱变处理的微生物一般处于对数生长期，那时的细菌对诱变剂的反应最灵敏。
2诱变处理必须选择合适的剂量，剂量的表示有二种，绝对剂量和相对剂量。
绝对剂量的单位以尔格/cm表示，一般用相对剂量。
相对剂量与三个因素有关，这三个因素是:诱变源和处理微生物的距离，诱变源(紫外灯)的功率，以及处理的时间。
前二个因素是固定的，所以通过处理时间控制诱变剂量。
各种微生物的处理最适剂量是不同的，须经预备实验确定。
经处理以后的细菌，缺陷型还是相当少的，必须设法淘汰野生型细胞，提高营养缺陷型细胞所占比例，以达到浓缩缺陷型的目的。
细菌中常用的浓缩法是青霉素法。
青霉素是杀菌剂，它只杀死生长的细胞，对不生长的细胞没有致死作用。
所以在含有青霉素的基本培养基中野生型能长而被杀死，缺陷型不能长被保存得以浓缩。
检出缺陷型的方法有逐个测定法、夹层培养法、限量补给法、影印培养法。
这里主要以逐个测定法为例进行说明。
把经过浓缩的缺陷型菌液接种在完全培养基上，待长出菌落后将每一菌落分别接种在基本培养基和完全培养基上。
凡是在基本培养基上不能生长而在完全培养基上能长的菌落就是营养缺陷型。
大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选
大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选生命科学学院09级生物技术1班余振洋200900140156指导老师：林建群同组者：潘红芳摘要营养缺陷型菌株是微生物遗传学研究中重要的选择标记和育种的重要手段，在发酵工业上有广泛用途。
本实验以大肠杆菌原养型菌株为材料，计划通过诱变得到并筛选出营养缺陷型，从而了解细菌营养缺陷性的获得步骤并掌握氨基酸营养缺陷型的筛选方法和鉴别过程。
关键词营养缺陷，诱变，生长谱测定，大肠杆菌（E.coli）1．引言1.1 营养缺陷型营养缺陷型是指缺乏合成某种对自身生长繁殖所必须的营养物质（氨基酸、维生素、碱基等）的能力的突变型，只能从周围环境或培养基中获得这些物质或其前体物才能正常生长。
由于营养缺陷型不能合成某种末端产物，解除了合成代谢的反馈抑制作用，限量添加所需生长因子克服生长障碍后，可选择性大量合成积累所需的中间代谢产物。
因此，营养缺陷型在工业上有重要的应用价值。
营养缺陷型是由野生型突变产生，营养缺陷型经回复突变恢复野生表型得原养型。
1.2 紫外线诱变紫外线是一种短波光，波长介于100-400nm之间。
紫外线是一种非电离辐射诱变剂，照射物体时可使原子的内层电子能级提高，但不能使原子失去电子。
紫外线是微生物育种中最常用的诱变剂之一。
由于碱基间电子的相互作用，DNA分子在260nm处有最大的紫外吸收峰，因此决定了紫外线诱导细胞发生突变的有效波长为260nm。
15W紫外灯产生的紫外线中，80%集中在260nm左右，诱变效应良好。
低剂量紫外线可诱变获得较多的正突变，高剂量紫外线则易产生大量负突变，但可获得特性明显改变的突变菌株。
紫外线诱发突变的原理是使DNA同一链上的两相邻胸腺嘧啶之间发生交联，形成胸腺嘧啶二聚体。
在DNA复制时，相应核苷酸无法与胸腺嘧啶二聚体配对形成碱基对，DNA复制中断，引起突变。
当细胞中的DNA分子含有大量胸腺嘧啶二聚体时，SOS修复机制被激活，DNA被修复，但包含大量错配的碱基对，从而导致基因突变。
营养缺陷型菌株实验报告
一、实验目的1. 理解细菌营养缺陷型突变株的选育原理。
2. 学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变和筛选方法。
3. 通过实验，提高微生物学实验操作技能。
二、实验原理细菌的营养缺陷型是由于基因突变导致细菌丧失合成某些物质（如氨基酸、维生素、核苷酸等）的能力，因而它们不能在基本培养基上生长，必须补充相应的物质才能生长。
本实验以大肠杆菌为材料，通过紫外线诱变处理，筛选出氨基酸营养缺陷型突变株。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：大肠杆菌野生型菌株。
2. 试剂：牛肉膏-蛋白胨培养基、基本培养基、紫外线照射装置、无菌水、青霉素、氨基酸（L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-苏氨酸等）。
四、实验方法1. 诱变处理：将野生型大肠杆菌接种于牛肉膏-蛋白胨培养基中，37℃培养过夜。
取适量菌液，以无菌水稀释至一定浓度，置于紫外线照射装置下，分别照射10S、20S、30S、40S、50S、60S。
照射过程中，注意控制紫外线强度，避免过强或过弱。
2. 培养：将照射后的菌液分别涂布于牛肉膏-蛋白胨培养基上，37℃培养过夜。
3. 筛选：配置基本培养基，添加L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-苏氨酸等氨基酸，使其浓度分别为0.1g/L、0.2g/L、0.5g/L。
将培养过夜的菌落分别接种于上述培养基上，37℃培养过夜。
4. 挑取：观察菌落生长情况，挑取在基本培养基上不生长，而在添加相应氨基酸的培养基上生长的菌落，即为氨基酸营养缺陷型突变株。
五、实验结果与分析1. 诱变处理：经过紫外线照射，部分菌落出现变异，生长形态、大小等发生变化。
2. 筛选：在添加L-亮氨酸的培养基上，部分菌落生长不良；在添加L-异亮氨酸的培养基上，部分菌落生长良好；在添加L-苏氨酸的培养基上，部分菌落生长不良。
这说明部分菌落具有氨基酸营养缺陷。
3. 挑取：挑取在基本培养基上不生长，而在添加L-异亮氨酸的培养基上生长的菌落，进行进一步鉴定。
六、实验结论1. 通过紫外线诱变处理，成功筛选出大肠杆菌的氨基酸营养缺陷型突变株。
紫外诱变选育大肠杆菌营养缺陷型菌株的研究
紫外诱变选育大肠杆菌营养缺陷型菌株的研究作者：宁祎李基丽道吉吉王春台刘新琼来源：《安徽农学通报》2016年第15期摘要：营养缺陷型是一种生化突变株，它的出现是由基因突变引起的。
营养缺陷型菌株在遗传学、食品生物技术、微生物代谢等领域的研究中均具有重要作用，另外它还是研究基因的结构与功能的常用材料。
该研究以大肠杆菌（Escherichia coli）菌株DH5a为实验材料，利用紫外线（uv）对其进行诱变，并且采用青霉素法浓缩营养缺陷型细菌，采用逐个测定法检出营养缺陷型，利用生长谱法对缺陷型菌株进行鉴定、分析，得到了4株稳定的营养缺陷型突变株，分别为赖氨酸、组氨酸、精氨酸和嘧啶营养缺陷型菌株。
关键词：大肠杆菌；营养缺陷型；紫外诱变微生物是遗传学研究中常用的材料，常用多种方法诱发其基因突变进行遗传育种，并且突变频率远远超过自发突变。
诱变剂主要包括物理诱变剂和化学诱变剂两大类，物理诱变剂有紫外线、X-射线、γ射线、a射线，微生物诱变中常用紫外线（uv）进行物理诱变。
DNA对紫外线有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，紫外线能使同链DNA分子的相邻嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体，结构发生改变，阻碍碱基正常配对，阻碍DNA的复制或引起碱基排列顺序的变化，导致遗传基因发生变异，从而产生突变或死亡。
大肠杆菌由于其结构简单，遗传背景已研究清楚，是遗传学和分子生物学研究的极好材料。
大肠杆菌紫外诱变和营养缺陷型菌株的选育，是遗传学实验中的一个重要实验，通常情况下在本科生课堂开设该实验，按照传统的方法，很难得到理想的实验结果。
为此，笔者在多年教学的实践基础上，摸索出了一套成熟的实验方法，能够得到稳定的营养缺陷型菌株。
1.材料与方法1.1出发菌种大肠杆菌（Escherichia coli）菌株：DH5a。
1.2培养基肉汤液体培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，超纯水1 000mL，pH7.2，0.103 5mPa高压灭菌15min。
营养缺陷型菌株的检出方法
营养缺陷型菌株的检出方法
营养缺陷型菌株是指由于缺乏一定的营养物质而在培养基上无法生长的微生物菌株。
营养缺陷型菌株通常需要添加特定的营养物质才能够在培养基上生长，因此对这类菌株的检出是非常重要的。
下面将介绍一些常见的营养缺陷型菌株的检出方法。
1.培养基筛选法
培养基筛选法是最常用的检出营养缺陷型菌株的方法之一。
该方法通过设计特定的培养基，只有符合特定营养要求的菌株才能够生长。
例如，对于缺乏特定氨基酸的菌株，可以设计一种缺乏该氨基酸的培养基，只有含有相应营养物质的菌株才能在该培养基上生长。
2.生化特性检测法
生化特性检测法是通过检测菌株的生化特性来区分不同类型的菌株。
对于营养缺陷型菌株，可以通过检测其在缺乏特定营养物质的条件下的代谢特性来确定其是否为营养缺陷型菌株。
例如，缺乏一种氨基酸的菌株在培养基上生长会产生特定的代谢产物，通过检测这些产物就可以确定该菌株是否为营养缺陷型菌株。
3.分子生物学方法
分子生物学方法在检出营养缺陷型菌株方面也具有重要的应用价值。
通过对菌株的基因组进行测序分析，可以发现其缺乏特定代谢途径的基因或者具有特定缺陷型基因的特征。
通过分析这些基因的表达情况可以确定菌株是否为营养缺陷型菌株。
总的来说，对于营养缺陷型菌株的检出需要综合运用培养基筛选法、生化特性检测法和分子生物学方法的手段。
通过综合应用这些方法可以快速、准确地检出营养缺陷型菌株，为菌株的鉴定和分类提供重要的帮助。
同时，对于一些工业应用、食品安全和环境监测等领域也有重要的意义。
营养缺陷型菌株的筛选
营养缺陷型菌株的筛选采用辐射，化学试剂等因素处理细菌，以提高其变异几率，关键步骤是进行营养缺陷型微生物的筛选工作，营养缺陷型是指通过诱变产生的，由于发生了丧失某酶合成能力的突变，因而只能在加有该酶合成产物的培养基中才能生长的突变株。
营养缺陷型的筛选与鉴定涉及下列几种培养基：基本培养基（MM，符号为[-]）是指仅能满足某微生物的野生型菌株生长所需的最低成分的合成培养基。
完全培养基(CM，符号为[+])是指可满足某种微生物的一切营养缺陷型菌株的营养需要的天然或半合成培养基。
补充培养基（SM，符号为[A]或[B]等）是指在基本培养基中添加某种营养物质以满足该营养物质缺陷型菌株生长需求的合成或半合成培养基。
营养缺陷型菌株不仅在生产中可直接作发酵生产核苷酸、氨基酸等中间产物的生产菌，而且在科学实验中也是研究代谢途径的好材料和研究杂交、转化、转导、原生质融合等遗传规律必不可少的遗传标记菌种。
营养缺陷型的筛选一般要经过诱变、淘汰野生型、检出和鉴定营养缺陷型四个环节。
现分述如下：第一步，诱变剂处理：与上述一般诱变处理相同。
第二步，淘汰野生型：在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例一般较低。
通过以下的抗生素法或菌丝过滤法就可淘汰为数众多的野生型菌株即浓缩了营养缺陷型。
抗生素法有青霉素法和制霉菌素法等数种。
青霉素法适用于细菌，青霉素能抑制细菌细胞壁的生物合成，杀死正在繁殖的野生型细菌，但无法杀死正处于休止状态的营养缺陷型细菌。
制霉菌素法则适合于真菌，制霉菌素可与真菌细胞膜上的甾醇作用，从而引起膜的损伤，也是只能杀死生长繁殖着的酵母菌或霉菌。
在基本培养基中加入抗生素，野生型生长被杀死，营养缺陷型不能在基本培养基中生长而被保留下来。
菌丝过滤法适用于进行丝状生长的真菌和放线菌。
其原理是：在基本培养基中，野生型菌株的孢子能发芽成菌丝，而营养缺陷型的孢子则不能。
通过过滤就可除去大部分野生型，保留下营养缺陷型。
第三步，检出缺陷型：具体方法很多。
实验七营养缺陷型菌株的筛选优质文档
与营养要求有关的3种遗传型关系
培养基的基本概念 （按营养需求成分分）
与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养 基：
基本培养基（MM）：仅能满足某微生物的 野生型菌株生长所需要的最低成分的组合 培养基。——不同菌株的要求不同，此试 验要先确定，非常重要。
完全培养基（CM）：凡可满足一切营养缺 陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。
本次实验利用紫外线进行诱变处理（主要是形成嘧啶二聚体，引起后续DNA复制错误，达到诱变的目的）。
实验培养基：肉汤液体培养基（CM） ；
养皿中。置于37℃恒温培养箱内，避光培养 第四步：鉴定营养缺陷型（此步因时间关系不再进行）
1、是作为研究代谢途径和遗传规律及育种技术不可少的标记菌种；
12小时以上。——诱变后DNA复制形成纯合 子过程。
注意紫外线防护（不要长时间暴露在其下）。
3、淘汰野生型，浓缩缺陷型 （第二天）
（1）吸5毫升紫外线处理过并重新培养的菌 液，放入已灭菌的15mL离心管，3500转/分 离心10分钟。
（2）倒去上清液，加入5mL生理盐水，打 散混匀沉淀，如此重复离心洗涤三次，加 生理盐水到原体积（5mL）。
补充培养基：凡只能满足相应的营养缺陷 突变株生长需要的组合或半组合培养基。
营养缺陷型的用途
营养缺陷型在生产上和科学研究上用途 很大，主要有两方面应用：
1、是作为研究代谢途径和遗传规律及 育种技术不可少的标记菌种；
2、可直接用于生产氨基酸、核苷酸等 代谢产物——目的在于切断某些代谢途径 以积累中间代谢产生或切断一条代谢途径 而积累另一分支途径的末端产生。 ——解除代谢途径中的反馈抑制和阻遏。
基本培养基（MM）：仅能满足某微生物的野生型菌株生长所需要的最低成分的组合培养基。
筛选营养缺陷型菌株的方法
工业微生物菌种的选育——营养缺陷型菌株的筛选来源：青岛海博关于菌株的几个概念：野生型菌株：从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始状态。
营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。
原养型：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上和野生型相同。
关于培养基：基本培养基（minimal medium，MM）：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，用[－]来表示。
完全培养基（complete medium，CM）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。
用[＋]来表示。
补充培养基（supplemental medium，SM）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组全培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成。
（一）、营养缺陷型菌株的分离和筛选一般经诱变后，再经中间培养、淘汰野生型、检出营养缺陷型、确定生长谱等。
1、营养缺陷型的诱发营养缺陷型的诱变方法和诱变因子与普通诱变育种基本相同。
2、淘汰野生型在诱变后的存活菌体中营养缺陷型菌株的数量很少，一般仅占存活菌体的百分之几或千分之几，而野生型细胞却大量存在，因而要采取一些措施，尽量淘汰野生型细胞，使缺陷型菌株得以富集，以利于检出。
淘汰野生型菌株的方法有：抗生素法、菌丝过滤法、差别杀菌法和饥饿法等。
（1）抗生素法：细菌用青霉素法：细菌细胞壁的主要成分为肽聚糖，而青霉素能抑制细胞壁肽聚糖链之间的交链，阻止合成完整的细胞壁。
处在生长繁殖过程的细菌对青霉素十分敏感，因而被抑制或杀死，但不能抑制或杀死处休止状态的细菌。
将诱变处理后的菌悬液分离加有抗生素的基本培养基上，培养后野生型细胞由于正常生长繁殖而被杀死，营养缺陷型细胞因不能生长而被保留下来，达到富集目的。
酵母菌用制霉素法：制霉素作用于真菌细胞膜上的甾醇，引起细胞膜的损伤，杀死生长繁殖过程的真菌，起到富集营养缺陷型的作用。
大肠杆菌营养缺陷型菌株的筛选
三、实验过程
1 菌液制备：实验前14－16小时开始在肉汤 培养基中培养－离心取沉淀－用生理盐水 制成菌液。 2 诱变处理：将菌液置于培养皿中，紫外线 照射处理，再用肉汤培养基培养12小时。 3 青霉素淘汰野生型：离心洗涤洗去培养基 －制成菌液－无N培养12小时－在2N培养基 中用青霉素淘汰野生型－分别接入肉汤培 养基和基本培养基。实验十Biblioteka 大肠杆菌营养缺陷型 的筛选
一、实验原理
大肠杆菌因受到紫外线强烈照射而发生突 变，其中有一些突变类型是营养缺陷型， 通过特定的方法，可将有关的营养突变型 筛选出来。然后在通过对这些性氧缺陷型 进行营养生长谱法，可以鉴定有关突变的 营养缺陷种类。
实验材料
1 菌种：大肠杆菌K12SF+ 2 工具：培养皿，三角烧瓶，吸管，离心管 3 培养基：肉汤液体培养基，肉汤液体培养 基ZE，基本液体培养基，基本固体培养基， 无N基本液体培养基，2N基本液体培养基， 混合氨基酸，混合维生素和核酸 4 生理盐水
营养缺陷型的检出
1 取差异最大的一组，在完全培养基上选取 80个菌落，分别对应接种在完全培养基和基 本培养基上。 2 37℃培养12小时。 3 选在基本培养基上不长，完全培养基上生 长的菌落，即是营养缺陷型。
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大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定关于菌株的几个概念：野生型菌株：从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始状态。
营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。
原养型：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上和野生型相同关于培养基：基本培养基（minimal medium，MM）：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，用[－]来表示。
完全培养基（complete medium，CM）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。
用[＋]来表示。
补充培养基（supplemental medium，SM）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组全培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成。
摘要：本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发大肠杆菌突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，获得100#大肠杆菌菌株，最后经生长谱法鉴定出该菌株为xxx缺陷型。
关键词：大肠杆菌紫外线营养缺陷型青霉素逐个测定法生长谱法一、目的1、了解营养缺陷型突变株选育的原理。
2、学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变、筛选与鉴定方法。
二、原理筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节：诱变处理、营养缺陷性的浓缩、检出、鉴定缺陷型。
本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。
三、器材离心机，紫外线照射箱，冰箱，恒温箱，高压灭菌锅；三角烧瓶，试管，离心管，移液管，培养皿，接种针四、材料(一)菌种E.coli(二)培养基、1LB培养液(Luria-Bertani 培养基,这个名字来源于英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。
是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。
加入抗生素的LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。
)：酵母膏，0.5g；蛋白胨，1g；NaCl，0.5g；水，100ml，pH7.2 121℃灭菌15min22×LB培养液：其它不变，水，50ml。
3基本培养基：葡萄糖0.5 g，(NH4)2SO4 0.1 g，柠檬酸钠0.1 g，MgSO4·7H2O 0.02 g，K2HPO4 0.4 g，KH2PO4 0.6 g，重蒸水100 mL，pH 7.2，110℃灭菌20 min。
配固体培养基时需加2%洗涤处理过的琼脂。
全部药品需用分析纯，使用的器皿需用蒸馏水或重蒸水冲洗2~3 次。
4无N基本液体培养基：K2HPO4,0.7g；KH2PO4,0.3g; 柠檬酸钠3H2O,0.5g；MgSO4 7H2O,0.01g; 葡萄糖2g；水100ml，pH7.0 110℃灭菌20min52N基本培养基：K2HPO4,0.7g；KH2PO4,0.3g; 柠檬酸钠3H2O,0.5g；MgSO4 7H2O,0.01g; (NH4)2SO4,0.2g;葡萄糖2g；水100ml，pH7.0 110℃灭菌20min6完全培养基同LB培养基，配置固体培养基，需加2%的琼脂。
7混合氨基酸和混合维生素五、步骤1 菌悬液制备1) 取E.coli K12 一环加入到10ml LB培养液中在37℃下过夜培养；2) 取0.3μl 菌液转接到10ml LB培养液中，在37℃摇床上振荡培养4—6小时，使细胞处在对数生长期；3) 取适量菌液加入到5ml离心管中，7000rpm离心3到4 min，离心2次，弃上清液，打匀沉淀，各加入4ml无菌生理盐水，充分振荡混匀。
2 诱变处理1) 取3ml菌悬液，加入到7cm小皿内，轻轻震荡使其均匀在皿底形成一薄层。
平放在灭菌的超净工作台上，盖盖灭菌1min，然后打开皿盖照射2min(15W)。
2) 诱变后处理取3ml诱变后菌液加入到离心管中，7000rpm离心3到4分钟，弃上清，加入4ml 生理盐水离心洗涤2次，重悬于3ml生理盐水中，取0.2 μl加入到5ml 2LB基本培养基内,37℃培养过夜（后培养）。
3检出缺陷性菌株1）初筛：从培养12、16、24h的菌液中，各自取100μl，分别在LB完全培养基和基本培养基上涂布2个平板，做好标记，在37℃下培养36h。
2）复筛：签挑取完全培养基上长出的菌落200个，分别点种在基本培养基和完全培养基上，37℃过夜培养。
4 复证挑取LB完全培养基上有而基本培养基上没有的菌落，在基本培养基上划线复证，并在完全培养基上保留备份，37℃过夜培养。
24小时后仍不长的为缺陷型。
5 生长谱鉴定1) 营养缺陷型浓缩（淘汰野生型）3th day，延迟处理：吸菌液5ml于离心管中，3500rpm离心10min，弃上清。
离心洗涤两次（加生理盐水至原体积，打匀沉淀，离心，弃上清，重复一次），最后加生理盐水制成5ml菌悬液。
取0.1ml菌液于5ml无N培养基中，37℃培养12h。
（消耗体内的N素，使停止生长，避免缺陷型被以后加入的青霉素杀死）4th day，按1:1比例加入2N基本培养液5ml，加5万U/ml青霉素钠盐溶液100ul，使青霉素在溶液中的最终浓度约为500U/ml，再放入37℃培养。
（野生型利用氮大量生长，细胞壁不能完整合成而死亡，缺陷型因不长避免被杀死）。
5th day，从培养12、14、16、24小时（根据实际情况，选择2-3个时间段）的菌液中分别取0.1ml菌液到基本及完全培养基两个培养皿中，涂布，37℃培养。
2) 营养缺陷型检出7th day，检出营养缺陷型。
上述平板培养36－48h后，进行菌落计数。
选取完全培养基上长的菌落数大大超过基本培养基的那一组，用灭菌牙签挑取完全培养基上长出的菌落100个分别点种于基本培养基和完全培养基上（先基本，后完全），37℃培养。
9th day，选在基本培养基上不长，完全培养基上生长的菌落在基本培养基上划线，37℃培养24h，仍不长的是营养缺陷型。
3)营养缺陷型鉴定在同一平皿上测定一种缺陷型菌株对许多种生长因子的需求情况为生长谱法。
单一生长因子：鉴定氨基酸或维生素的营养缺陷型，较为简便的方法是分组测定法。
将21种氨基酸，组合6组，每6种不同氨基酸归为一组。
如果以15种维生素进行测定，则把5种维生素归为一组，共5个组合。
组别氨基酸组合组1 赖氨酸精氨酸蛋氨酸胱氨酸亮氨酸异亮氨酸2 缬氨酸精氨酸苯丙氨酸酪氨酸色氨酸组氨酸3 苏氨酸蛋氨酸苯丙氨酸谷氨酸脯氨酸天冬氨酸4 丙氨酸胱氨酸酪氨酸谷氨酸甘氨酸丝氨酸5 鸟氨酸亮氨酸色氨酸脯氨酸甘氨酸谷氨酰胺6 胍氨酸异亮氨酸组氨酸天冬氨酸丝氨酸谷氨酰胺组别维生素组合组1 维生素A 维生素B1 维生素B2 维生素B6 维生素B122 维生素C 维生素B1 维生素D2 维生素E 烟酰胺3 叶酸维生素B2 维生素D2 胆碱泛酸钙4 对氨基苯甲酸维生素B6 维生素E 胆碱肌醇5 生物素维生素B12 烟酰胺泛酸钙肌醇10th day，生长谱的测定：将检出的营养缺陷型菌落接种于5ml LB液试管中，37℃培养14－16h。
11th day，培养16h的菌液离心。
3500rpm，10min，弃上清，加生理盐水，打匀沉淀，再次离心。
加5ml生理盐水制成菌悬液。
取其1ml于培养皿中，加入融化后冷却到40－50℃的基本培养基，混匀，平放，共二皿。
（平板表面分别沾上沾有混合氨基酸(或酪素水解液)的滤纸片，30℃培养 24h ，经培养后营养物质周围有生长圈，即表明为氨基酸的营养缺陷型菌株）。
将皿底分成分格用接种环依次放入少许混合氨基酸等，37℃培养24h ，观察生长情况，确定是哪种氨基酸营养缺陷型。
生长谱鉴定点样图示六、实验结果与分析1、营养缺陷型检出点植对照时每平皿点30株菌，最后在基本培养基上没有长出的菌株，而在是完全培养基上长出菌落的，即为筛选出的营养缺陷型菌株。
2、营养缺陷型鉴定通过如图1生长谱鉴定，得到如图2结果：生长谱鉴定结果图叶酸嘧啶 B 组维生素 腺嘌呤 12 3 5 4 右图中1、2、3、4、5均为氨基酸组合图1图2分析：如图中，1,2,3,4,5任意区域有生长圈生成即对应为相应氨基酸营养缺陷型菌株。
七、结论与讨论结论：本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发大肠杆菌突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，获得100#大肠杆菌菌株，最后经生长谱法鉴定出该菌株为XXX缺陷型。
讨论：1、注意事项：紫外线对皮肤和眼睛有很大伤害，实验中应避免人体暴露在紫外线中。
各种器具、培养基及需加入培养基中的试剂均需灭菌。
2、本实验中的突变型是氨基酸缺陷型，我们是可以检测的，如果是与N元素代谢有关的其他缺陷型，我们无法通过这个实验检测。
3、本实验中经紫外线照射后，诱变率较低，可能是因为照射时间短，诱变剂量小，或者是黑暗培养不完善导致光复活作用，可将诱变后的菌体进行后培养。
八. 注意事项实验过程中要严格控制无菌，在菌落的选取、划线培养、菌悬液的吸取、接种等环节都要进行严格的无菌操作，任何一部的杂菌污染都会对最终的实验结果造成严重影响。
在用牙签筛选点种的时候要注意牙签不能将培养基戳破，这样不利于菌落的生长，也不利于观察，另外还要注意点样的顺序是先基本培养基后完全培养基。
在基本培养基上的点接量一定要少，以防止细胞过多及细胞老化而导致自溶现象的发生，从而引起缺陷型突变体也可以在基本培养基上生长的现象。
在倾注平板时培养皿必须在使用之前严格的无菌，培养基的温度要严格控制，否则容易烫死加入的细菌或者由于凝固而使混匀失败。
在最后一步鉴定营养缺陷型时要注意氨基酸的点样不能过多，要用牙签蘸取氨基酸后轻轻抖动即可。
如果点样过多会造成氨基酸在培养基中的扩散，从而对实验结果产生影响。
拓展讨论倾注培养法进行生长谱的鉴定有其优点。
由于氨基酸没有经过灭菌处理，而且在氨基酸点样过程中很容易发生受杂菌污染，这样就很有可能导致培养基的表面有杂菌菌落产生。
比如这时候采用涂布法，那极有可能引发实验的干扰，产生假阳性。
而用倾注法的菌落不容易扩散，能够将菌落限定在特定的区域，细菌可以利用外来的氨基酸，那么菌落生长圈就会出现在培养基内部，这样我们只观察透明培养基的内部的生长圈情况就可以了。
而对于倾注法存在的问题，第一，它还是没能更高程度地避免染菌，因此也要求我们的无菌操作精度要高。
第二，倾注平板时容易将菌杀死，而对于这个情况的掌控，只能依靠人为的感觉。
第三：倾注平板容易造成平板不平，或者不均，影响菌的生长和观察。